从环境中分离放线菌
放线菌筛选的一般方法
放线菌筛选的一般方法1.放线菌样本的收集：可以从自然环境中收集土壤、植物、水体等样本，也可以从实验室中保存的菌种库中选取菌种作为筛选对象。
2.放线菌的分离：将收集到的样本通过稀释涂布、均匀涂布等方法进行分离。
将分离出的放线菌菌落定植于选择性培养基上，利用差异营养需求、抗生素抑制等原理，筛选出纯培养基。
3.放线菌培养：将分离出的纯净菌株接种到适宜的培养基上进行培养，包括液体培养和固体培养。
液体培养可以用于代谢产物的筛选，固体培养主要用于菌株保存和鉴定。
4.代谢产物的筛选：通过对放线菌培养液或菌体提取物的分离、纯化和结构鉴定，筛选出具有生物活性的代谢产物。
常用的筛选方法包括生物测定法、波谱分析法等。
其中，生物测定法是通过对目标活性的生物测定，如抗菌活性、抗肿瘤活性、抗炎活性等，筛选出具有生物活性的化合物。
5.进一步筛选与优化：在获得具有初步生物活性的代谢产物后，可以进一步对其进行筛选与优化。
可以通过改变培养条件（如培养基、温度、pH值等）、发酵工艺等方式提高活性代谢产物的产量和纯度。
6.结构鉴定：对优选的生物活性代谢产物进行结构鉴定，通常使用核磁共振谱、质谱、红外光谱等波谱技术进行分析。
结构鉴定有助于揭示生物活性物质的药理作用机制，为后续研究提供基础。
7.生产量扩大与优化：当获得了具有潜在药用价值的放线菌菌株和代谢产物后，可以进行大规模的发酵生产以提高产量。
在此过程中，需要不断优化发酵工艺、培养基成分和培养条件，以提高产量和纯度。
综上所述，放线菌筛选的一般方法包括放线菌样本的收集、放线菌的分离、放线菌培养、代谢产物的筛选、进一步筛选与优化、结构鉴定和生产量扩大与优化。
这些方法的应用能够帮助科学家发现新的放线菌菌株和生物活性化合物，并为新药研发提供重要的基础信息。
放线菌的概念
放线菌的概念放线菌（Actinobacteria）是细菌界中的一个重要类群，它们属于革兰氏阳性菌，通常具有分枝杆状的菌丝和分枝状的孢子体，因此得名“放线菌”。
放线菌广泛分布于自然界中，主要存在于土壤、水体、植物及动物体内等环境中。
它们是一类非常重要的微生物资源，具有巨大的应用潜力。
放线菌是许多药物的重要来源，被誉为“微生物的黄金矿井”。
已有超过70%的广谱抗生素、40%的抗肿瘤药物以及多种抗寄生虫、抗痨和免疫抑制剂等药物，都是由放线菌产生的。
放线菌的菌丝通常为分枝杆状，菌丝之间对角交织，形成复杂的菌丝网络。
这种特殊的菌丝结构使放线菌对外界环境和共生体有更广泛的适应性。
与此同时，放线菌的菌丝表面覆盖有黏液层，形成了一种粘附能力强的结构，能够黏附于植物根部和其他微生物表面，与它们形成复合体，发挥共生作用。
放线菌生命周期通常包括孢子体阶段和菌丝体阶段。
放线菌的孢子体通常是通过产生分枝状的孢子来繁殖的，这些孢子具有很强的耐受力，可以在极端的环境条件下存活很长时间。
当环境条件适宜时，孢子体会发芽生长为菌丝体，菌丝体通过不断延伸分枝，形成一个庞大的菌丝网络。
菌丝体生长阶段是放线菌进行代谢活动和产生各种代谢产物的主要阶段。
在菌丝体的一些末端会出现一些特殊的培养体，如分枝芽膨大，形成一种“分枝型”的生长类型，这种类型被认为是放线菌产生细胞内二次代谢产物的重要时期。
放线菌具有极强的代谢途径多样性，拥有一个庞大的基因组，其中包含了大量的代谢途径相关基因。
放线菌的这种多样性使其能够合成许多特殊的二次代谢产物，如抗菌素、生物活性化合物和酶等。
放线菌常常通过激活特定的基因表达来产生这些代谢产物。
此外，放线菌的基因组还具有一些调控模块的特征，这些模块能够调控菌丝的生长与分化、激活代谢途径等，使其具有更强的适应性。
放线菌对人类社会的影响远不止于药物产生。
放线菌参与了许多生物地质和生态学过程，如土壤有机质分解、养分循环等。
放线菌还参与了微生物间的相互作用，与其他微生物形成共生体，在共生体内发挥重要的生物防御作用。
环境中的微生物(放线菌)
单细胞，大多由分枝发达的菌丝(mycelium)组成；
菌丝直径与杆菌类似，约1mm； 细胞壁组成与细菌类似，绝大多数 革兰氏染色阳性； 细胞的结构与细菌基本相同
菌丝按形态和功能可分为三种 营养菌丝(substrate mycelium )
气生菌丝(aerial mycelium )
孢子丝 (sporophores)
第三节 古 细 菌
一、古细菌的特点 二、产甲烷古细菌群 三、还原硫酸盐古细菌群 四、极端嗜盐古细菌群 五、无细胞壁古细菌群 六、极端嗜热的代谢元素硫古细菌群
一、古细菌的特点
– 染色：革兰氏阳性或是革兰氏阴性 – 形态：球形、杆状、螺 旋形、耳垂形、不规则形状 – 一些为单细胞，也有形成丝状体或多聚体。大小：直 径0.1至15 µm以上，有些丝状体能夠生长至200 µm – 增殖：可以用二分裂、出芽、裂殖或其他机制 – 氧气：好氧性、兼性厌氧性或绝对厌氧性 – 营养：化学无机自养性生物到有机营养性生物 – 温度：有些是嗜温，另一些超嗜热生物 – 常存在于厌气、高盐或高温环境中
β-胡萝卜素 两种兰色素：红光下含量高 藻胆蛋白 一种红色素：绿光下含量高 有效地利用光源
气泡：存在于细胞质中。 功能：利于菌体漂浮水面进行光合作用
3、蓝细菌的主要生理特点
(1) 进行放氧光合作用(有氧条件下) (2)部分具有固N能力（热带地区、水稻田）
异形胞
蓝藻主要类群
蓝藻门约有150属，1500种，根据形态不同分为三个纲： 1、色球藻纲：包括所有单细胞体和单细胞群体种类。
主要古生物类群的特征 类群 一般特征
代表属
极端嗜盐 类球狀或不规则杆状，革兰氏阴 盐杆菌属、盐球 古生菌 性或革兰氏阳性，主要为好气有 菌属 机化学营养型，生长需要高浓度 NaCI (≧1.5 M)。菌落呈淡紅色， 嗜中性或嗜碱性。嗜溫或微嗜热。 有些种有细菌视紫质并利用光合 成ATP
实验四 细菌、真菌、放线菌的分离与培养
实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。
二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。
在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。
为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。
通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。
挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。
1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。
2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。
用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
用途一般多用于筛选菌株。
广东沿海原生态红树林环境放线菌分离及抗分枝杆菌活性评价
ｆ ｍ ｔｅｓｉｏ ｖｒ ｕ ｉ ｓ ｆ ｕｎ ｄｎ ｔｃ ｍａｇｏｅａ Ｙ ｎ ｊｎ ， ｕｚｏ ，Ｓ ｅｚｅ ｎ ｈｈ ｉ Ａ ｔ ａ ｏ ５ ｒ ｏ ｆ ａｉ ｓ ｔ ａｇ ｏｇｉ ａｔ ｎ ｒ ｔ ａ ｇａ ｇＨ ｉ ｕ ｈ ｎｈｎａｄＺ ｕ ａ ｏ ｈ ｌ ｏ ｓｅ ｏ Ｇ ｎ ｖ ｉ ｈ ． ｔ ｆ ｏｌ ４
第 ３卷 第 ３ １ 期 ２ １ ６月 ０ ２年
海
洋
通
报
Ｖｏ ．３ ． Ｎｏ １ １ ．３
ＭＡＲｌ Ｅ ＣＩ Ｎ Ｓ ＥＮＣ ＬＬ Ｔ Ｎ Ｅ ＢＵ Ｅ Ｉ
Ｊｎ ０ ２ ｕ ．２ １
广东沿海原生态红树林环境放线菌分离及 抗分枝杆菌活性评价
梁碧怡 ，陆羽 ，王军 ｚ 翔 ２ ，周 ７刘岚 ｓ 林 永 成 ｓ ，
ａｅ ｃ （ ２： ，／ ｖ ， ｎ ｓｄｆ ｃｅｎｎ ａｔｒ ｓ ｔ ｃ ｖｙａａ ｓ Ｍｙｏ ａｔｒ ｍ． ｃｂｃ ｒ ｍ ｓ ｇ ａ ｓ ｃｔ ３： １ｖ ，） ａ ｄｕｅ ｒｓｒｅｉｇｂ ｅ ｉ ｔｉ ａｔｉ ｇｉ ｔ ｃｂｃｅｉ Ｍｙｏａｔ ｉ ｍｅｍ ｔ ｉ ｖ ｏ ｅｏ ａｅ ｉｔ ｎ ｕ ｅｕ ｉ
（． １佛山市中医院，广东 佛山 ５ ８０ ；２ 中山大学 药学 院，广东 广州 ２００ ． ５０ ０ ； １０ ６
３ 中山大学 化学 与化学工程学院 ，广东 ．
广州
５０７） １２ ５
摘
要：为 了寻找新型抗 结核药物先导 ，从广东沿海 阳江 、惠州 、珠海 、深圳等原生态红树林保护区采集 了 ４ ５份土壤样 品，
Ａｂ ｔ ａ ｔ ｎ ｏｄ ｒｔ ｅ ｒ ｈ ｎ ｖ ｌ ｉ ｈｂ ｔ ｒ ｆＭｙ ｏ ａ ｔ ｒ ｍ ｕ ｅ ｃ ｌ ｓ ． ｉ ｅ ｓｔ ｏ ｃｉ ｏ ｃ ｔ ｓ ｗａ ｓ ｌｔ ｄ ｓｒ ｃ ：Ｉ ｒ ｅ ｏ ｓ ａ ｃ ｏ ｅ ｎ ｉ ｉ ｓ ｏ ｅ ｂ ｅｅ ｉ ｏ ｕ ｔ ｂ ｒ ｕ ｏ ｉ ａ ｄ ｖ ｒｉ ｆ ａ ｔ ｍｙ ｅ ｅ ｓ ｉｏａ ｅ ｓ ｙ ｎ
环境微生物学2-3放线菌
图 2-33 钩端螺旋体
5
在废水活性污泥法处理中，出现过由诺卡氏菌属的某些种引 起的活性污泥丝状膨胀和起泡沫现象。
一、放线菌的个体形态、大小和结构
放线菌的菌体由纤细的、长短不一的菌丝组成，菌 丝分枝，为单细胞，在菌丝生长过程中，核物质不断复 制分裂，不形成横隔膜，也不分裂，无数分枝的菌丝组 成很细密的菌丝体。
一、放线菌的个体形态、大小和结构
三、放线菌的繁殖
放线菌的生活史包括孢子的萌发，菌丝的生长、发育及繁 殖等过程（图 2－28）。
放线菌是通过分生孢子或孢囊孢子繁殖，也可以一段营养 菌丝繁殖。
各种放线菌的菌落形态特征
链霉菌的生活史
图 2－28 链霉菌的生活史 A.孢子萌发 B.基内菌丝 C.气生菌丝
D.孢子丝 E.孢子丝分化为孢子
分布：在土壤、污水、垃圾、昆虫、脊椎动物及人体中。
三、衣原体
衣原体隶属于衣原体门（BXⅥ门）衣原体目衣原体科的 衣原体属（Chlamydia）见图 2-32。呈球形，直径0.2～ 1.5μm。为革兰氏染色阴性反应，细胞化学组分和结构与 革兰氏染色阴性细菌相似，其细胞壁为含胞壁酸的外膜， 含RNA和 DNA。
72～73
好氧
菌 丝 常 平 行 排 列 ， 彩 色 ， ⅡD 型 细 胞 壁 ， 在土壤和植物腐败物中生活，营养菌丝 发达，菌丝呈各种颜色，产生各种色素， 没有气生菌丝或不发达，在营养菌丝上 长出孢囊柄，在其尖端长孢子囊
直 径 0.5 ～ 2.0 ， 营养菌丝分枝无 气生菌丝体；形 成多腔孢囊
66～71
菌丝体分三类：
① 营养(基内)菌丝：摄取培养基内营养，菌丝宽度为 0.2μm～0.80μm，长度为50μm～600μm之间，有无色的、 有的产色素 (黄、橙、红、紫、蓝、绿、褐、黑)。
细菌、放线菌及古菌在环境工程中的作用
细菌、放线菌及古菌在环境工程的应用细菌、放线菌及古菌在环境工程或水处理工程中的应用细菌在环境工程或水处理工程中的应用（1）细菌在水处理中的作用1、污（废）水生物处理的工作主体是曝气池活性污泥中的细菌活性污泥法、生物膜法、稳定塘法等人工生物处理技术对有机物的降解起主要作用的都是细菌。
好氧活性污泥（绒粒）的结构和功能中心是能起絮凝作用的细菌形成的细菌团块——菌胶团。
活性污泥的主体细菌来源与土壤、河水、下水道污水和空气中的微生物。
它们多数是革兰氏阴性菌。
如动胶菌属和从毛单细胞属，可占70%。
好氧活性污泥的细菌能迅速稳定污（废）水中的有机物，有良好的自我絮凝能力和沉降能力。
在处理废水的过程中吸附能力很强的菌胶团将废水中的杂质和游离细菌等吸附在其上，形成了活性污泥的絮凝体。
作为絮凝体主体骨架的菌胶团细菌在废水处理过程中起到了非常重要的作用。
菌胶团在水处理中的作用：1>有很强的生物絮凝、吸附能力和氧化分解有机物的能力。
提供了良好的生存环境。
2>菌胶团对有机物的吸附和分解，为原生动物和微型后生动物提供了良好的生存环境。
3>具有指示作用：通过菌胶团的颜色、透明度、数量、颗粒大小及结构的松紧程度可衡量好氧活性污泥的性能。
如新生菌胶团颜色浅、无色透明、结构紧密，则说明菌胶团生命力旺盛，吸附和氧化能力强，即再生能力强。
此外，活性污泥中还辅以少量丝状细菌作为骨架而组成结构紧密的大絮体，也是活性污泥的重要组成部分。
丝状菌在活性污泥中可交叉穿织在菌胶团之间，或附着在絮凝体的表面。
当废水中的丝状细菌的数量超过菌胶团时，会使活性污泥沉降性变差，严重时引起活性污泥的膨胀，使出水水质下降。
2、光合细菌处理高浓度有机废水BOD５在10000m g/L以上的高浓度有机废水（浓粪便水、豆制品废水、食品加工废水、屠宰废水等）可用有机光合细菌处理。
什么是放线菌
什么是放线菌引言放线菌（Actinobacteria）是一类广泛存在于自然环境中的细菌，也是一类非常重要的微生物资源。
它们具有丰富的代谢能力和生物活性产物，对于农业、药物开发、环境保护等领域具有重要的应用价值。
放线菌的研究和应用已经成为微生物学和生物技术领域的热点之一。
本文将从分类特征、生物特性、应用领域等方面对放线菌进行详细介绍。
一、分类特征1. 形态特征放线菌是革兰氏阳性细菌，其细胞多为直杆状，长为0.2-2.0μm，直径为0.5-1.0μm。
有的放线菌细胞会形成分枝或丝状结构，使得其菌落呈现放射状生长。
2. 细胞壁特征放线菌的细胞壁主要由多肽聚糖组成，其中N-乙酰葡萄醣胺和N-乙酰半乳葡萄糖胺是其特征性成分。
这些特殊的细胞壁结构使得放线菌对抗生物膜、抗药物和耐酸碱有一定的能力。
3. 分类系统放线菌属于细菌界放线菌纲（Actinobacteria），目前已知的放线菌约有50个属。
根据形态特征、生理和生态习性等分类指标，放线菌可以进一步分为不同的科、属和种。
二、生物特性1. 生长环境放线菌广泛存在于土壤、水体和植物表面等自然环境中。
它们对土壤质地、pH值、湿度和养分含量等因素有一定的适应性，因此在地球生态系统中分布十分广泛。
2. 代谢能力放线菌具有丰富的代谢能力，可以利用多种有机物和无机物作为碳源、氮源和能源。
许多放线菌具有优良的降解能力，能够降解有机污染物和农药，对环境保护具有重要的意义。
3. 生物活性产物放线菌是许多重要天然产物的产生者，其中包括抗生素、抗肿瘤活性物质、抗氧化物质等。
这些生物活性产物对细菌、真菌和肿瘤细胞等具有显著的抑制或杀灭作用，对人类的健康和医疗具有重要意义。
三、应用领域1. 农业应用放线菌具有优良的土壤分解和降解能力，可以降解农药残留、处理农业废弃物等。
此外，放线菌还能够产生一些具有生物肥料作用的物质，可以促进植物的生长和发育。
2. 药物开发放线菌是抗生素的重要来源之一，许多著名的抗生素如链霉素、土霉素等都是由放线菌产生的。
放线菌
实验步骤：
一：高氏一号培养基的制作 1、称量和溶化。按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并 用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中， 继续加热，使可溶性淀粉完全融化。再称取其他各成分依次逐 一加入融化。 2、调pH值、分装、包扎、灭菌。
二：土壤中放线菌的分离、纯化
1、制备土壤稀释液 称取土样0.1g，加入到一个盛有99ml无菌水的 三角瓶中。震荡后静置5min，即成10-3土壤稀释液。 2、分离 将土壤稀释液稀释10倍为10-4，然后用无菌移液管依次分 别吸取1ml10-3、10-4土壤稀释液于相应编号的无菌培养皿内，用高氏 1号培养基倒平板。 3、培养 冷凝后，将平板倒置于28℃恒温 4、挑菌及培养 用接种环以无菌操作挑取单一的放线菌落，在高 氏一号培养基中进行划线，划线完毕，将培养皿倒置于28摄氏度恒温 箱中培养。
实验原理：
放线菌是原核生物，是重要的抗生素产生菌，在土壤中的数量仅 次于细菌，尤其在有机质丰富、透气性好的中性到微碱性土壤中 的数量较多，土壤颗粒的分散程度对于分离放线菌也有影响。本 实验以土壤中的放线菌为实验对象，经过对土壤中的放线菌的分 离纯化从而获得纯种的放线菌，要想获得放线菌的纯培养，还需 提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件，最后对 它的抑菌性进行研究。放线菌是重要的抗生素产生菌，放线菌所 产生得抗生素，能抑制多种细菌的生长，故可用金黄色葡萄球菌 （G+） 和大肠杆菌（G-）作指示菌鉴别放线菌
环境中放线菌的提取、分离、鉴定以 及生物活性的研究
2014级生物技术本科一班
小组成员：王念瑶 王超 沈亚北 董兰梁
前言 因其菌落呈放射状而得名。大多有基内菌丝和气生菌丝， 少数无气生菌丝，多数产生分生孢子，有些形成孢囊和孢囊孢 子。依靠孢子繁殖。表面上和属于真核生物的真菌类似，从前 被分类为“放线菌目” 。但因为放线菌没有核膜，且细胞壁由 肽聚糖组成，和其它细菌一样。目前通过分子生物学方法，放 线菌的地果：
微生物学实验 课题设计方案
海南师范大学从环境中分离放线菌实验设计方案专业：生物科学班级：2010级一班组长：陈丽娟组员：李万蕊、曹露露、朱嘉宁时间：2012年5月24日一、实验目的1、学习从土壤中分离放线菌的方法。
2、练习、掌握微生物接种、移植和培养的基本技术。
掌握无菌操作技术。
3、掌握无菌操作技术。
二、实验原理放线菌是原核生物，是重要的抗生素产生菌，在土壤中的数量仅次于细菌，尤其在有机质丰富、透气性好的中性到微碱性土壤中的数量较多[1]。
土壤颗粒的分散程度对于分离放线菌也有影响。
钱恒段等[2]报道，用胆酸钠处理土壤悬液后土壤分散效果较好，且优于纯蒸馏水。
这可能是因为胆酸钠对土壤腐殖质具有较强的结合能力从而有利于破坏土壤团聚结构。
据杨宇容等[3]报道,重铬酸钾对土壤真菌、细菌的抑制作用较明显，然而对放线菌并无抑制作用。
而且其价格低廉，如安德荣等[4]报道其可作为理想的放线菌分离抑制剂。
徐成勇等[5]实验证明酵母膏、SDS（十二烷基硫酸钠）也有抑菌的作用。
本实验所用方法为综合徐成勇等[5]及钱恒段等[2]实验结果所得。
三、实验材料1、样品干燥的营养基质丰富的苗圃土2、仪器铲子、牛皮纸、搪瓷杯、锥形瓶、玻璃棒、烧杯、小试剂瓶、标签纸、移液管、接种环、试管、记号笔、酒精灯、电子天平、电炉、恒温培养箱、加压蒸汽灭菌锅、电热干燥烘箱3、培养基及试剂配制（1）培养基（高氏一号琼脂+重酪酸钾培养基)配制:配方：可溶性淀粉20g、K2HPO4 0.5g、1mol/LNaOH、MgSO4•7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4•7H2O 0.01g、琼脂20g、蒸馏水1000ml、250mg重酪酸钾、PH7.2~7.4。
步骤：用搪瓷杯先量取500ml自来水在电炉上加热。
根据配方，依次称取各种药品加入搪瓷杯中，搅拌均匀。
可溶性淀粉称入烧杯中，加入50ml 自来水调成糊状，待培养液煮沸时加入淀粉糊，边加边搅拌，防止糊底。
之后，加入琼脂煮沸至完全溶化，补足1000ml水量。
实验四 细菌、真菌、放线菌的分离与培养
实验报告课程名称：环境微生物学实验实验类型：综合实验实验项目名称：微生物的分离与培养与菌落观察学生姓名：专业：环境工程学号：同组学生姓名：指导老师：实验地点：实验日期：2018 年 10月16日一、实验目的和要求1.掌握微生物接种培养技术2.掌握微生物分离纯化技术3.学习并掌握放菌落形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。
二、实验内容和原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现具有重要价值微生物的主要菌源。
在不同土壤中，各类微生物的数量千差万别。
为了分离获得某种微生物,需要预先制备不同稀释度的菌悬液，并添加相应的抗生素抑制不需要的微生物，例如，添加链霉素25~50U/mL抑制细菌;添加0.5%重铬酸钾液或制霉素50 U/mL 抑制霉菌。
通过10倍稀释以及平板分离、平板涂布和平板划线等操作，微生物可在平板上分散成单个的个体，经过适宜条件培养，单个个体可形成单个菌落。
挑取单个菌落转接至新鲜平板上，即可使目的菌种纯化。
1.菌种的分离纯化：从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“单一性”，防止其他微生物的混入。
2.平板涂布法：因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。
用途上，一般多用于从菌种的纯化;优点是可以观察菌落特征，对混合菌进行分离;但不能计数3.平板划线法：最简单的分离微生物的方法是平板划线法，其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。
用途一般多用于筛选菌株。
琼脂块法筛选放线菌的分离流程
琼脂块法筛选放线菌的分离流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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放线菌分类1
70年代后开展化学分类，分类的范围也扩大到稀有放线菌。
阎逊初1992年出版的《放线菌分类和鉴定》集我国放线菌
分类之大成，是放线菌分类工作者的必备参考书之一。
2004年，刘志恒、姜成林等编著的《放线菌现代生物学与 生物技术》较全面的阐述了放线菌生物学的基本问题，对 我国放线菌生物学科的建立奠定了基础。
分子生物学研究表明，之所以绝大多数包括放线菌 在内的微生物未被发现，主要原因在于收分离条件 和技术的限制，因此，分离技术仍然是放线菌生物
学研究中的重大课题，同时也是扩大菌种来源必须
要解决的问题。
四、放线菌资源的开发与利用
（一）放线菌生物多样性 1、陆生放线菌的多样性 2、海洋放线菌的多样性 3、植物内生放线菌
（二）分子生态学 伴随着放线菌分类学的发展，放线菌生态学的研究 由萌芽时期、发展时期进入到分子生物学时期，产 生了放线菌分子生态学。 放线菌分子生态学的研究内容目前主要是采用分子 生物学技术，研究不同自然环境中放线菌的多样性、 分布状况、及它们的数量动态。 应用于放线菌分子生态学研究的方法大致分两类： 全程rRNA分析法和DNA指纹分析法
言，韩国也可算是一个大国。
2、国外放线菌分类研究的特点： （1）仍有新的放线菌分类单位不断被发现 （2）一些实验室把工作重点放在利用综合手段搞清 已有菌种的归属以及各属、各种之间关系，从更高 层次理清放线菌本身，放线菌与其他细菌的关系。
二、国内概况
放线菌分类学奠基人——阎逊初院士。70年代前对放线菌 的研究几乎都集中在中科院微生物研究所，集中在链霉菌 属。
在1989年出版的《伯杰氏系统细菌学手册》，放线菌被划分在
放线菌菌种筛选的一般流程
菌种筛选的一般步骤________、_________、________。
答案：菌种的分离和筛选一般步骤分为采样、富集、分离、目的菌的筛选四个步骤。
知识拓展：
放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中。
分离和纯化土壤中放线菌的实验流程如下：土壤取样→系列稀释→涂布平板→恒温培养→观察菌落→菌种纯化。
回答下列问题：（1）取样时应选择有机物含量丰富且疏松的土壤，可判断大多数放线菌属于____（填“需氧菌”或“厌氧菌”）。
将1g土样放入盛有99mL无菌水的锥形瓶中混合均匀，再取1 mL 土壤悬液注入盛有9 mL无菌水的试管中，则该试管中稀释液的稀释倍数为____倍。
（2）高氏1号培养基是培养放线菌的常用培养基，该培养基含有的营养物质主要包括____。
（3）在分离土壤中的放线菌时，为减少细菌和真菌的干扰，提高放线菌的分离效率，在培养基中要加入一定量的重铬酸钾，重铬酸钾在培养基中所起的作用是____。
（4）放线菌的培养温度一般应____（填“低于”或“高下”）细菌的培养温度。
（5）筛选放线菌可根据菌落特征进行判断，菌落特征主要包括____（答两点）等方面。
（6）分离得到土壤中的放线菌后，可利用____法对菌种进行纯化。
答案：(1). 需氧菌(2). 103（或1000）(3). 碳源、氮源、水和无机盐(4). 抑制细菌和真菌的生长（或选择作用）(5). 低于(6). 形状、大小、颜色和隆起程度(7). 平板划线或稀释涂布平板。
放线菌的平板划线分离和常见微生物的菌落特征观察
3、菌落特征观察
湿润，正反面、中央 与边缘颜色一致（毛 细管作用吸水，没有 个体形态的分化）
干燥，正反面、中 央边缘颜色不一致 （有菌丝，菌丝相 互分离，没有毛细 管水；菌丝分化）
小而扁平 小而隆起
细菌
大而扁平 大而隆起
酵母
小而致密 放线菌
大而稠密 大而疏松
2017年本科生学习最终结果
专著划线结果
教材划线结果
2018年春环境科学本科生第一次划线结果
2017年秋生命科学本科生第一次划线结果
1、平板平板（5块/人，其中一块略厚，用于插片） 冷凝彻底（硬一些较好） 平板划线
皿盖上标明组号，姓名和日期
28 ℃倒置、培养7 天
细菌、放线菌、酵母菌和霉菌
• 细菌：原核生物中一大类群，特点是细胞细而短（径比小于 10），结构简单，细胞壁坚韧，多以二分裂方式繁殖，水生 性较强；
细菌：
金黄葡萄球菌
藤黄微球菌
化脓性泛菌
枯草芽孢杆菌
沙雷氏菌
大肠杆菌
胶质芽孢杆菌
RGB颜色对照表
形状、边缘和隆起高度
细菌、放线菌、酵母菌和霉菌
实验2 放线菌的平板划线分离和常见 微生物的菌落特征观察
• 四区划线分离 • 斜面接种 • 已知菌菌落观察 • 未知菌菌落观察
• 上周实验—环境微生物检测结果
原理
平板划线 用带菌的接种环在平板表面上作多次磨擦划线，将环 上的菌种逐级稀释，得到较多独立分布的单个细胞（孢子），这 些单个细胞经培养后形成单菌落。 四区平板划线法 是将一个平板分成四个面积不等的小区进行划 线。A区、B区、C区和D区这四个区面积逐渐增大，而菌量逐渐 减少，最终在D区（有时在C区）形成大量的单菌落。
土壤中放线菌的分离与应用
土壤中放线菌的分离与应用作者：詹庆曹雅丽来源：《现代园艺·综合版》2017年第02期摘要：放线菌是一类具有发展前景的新微生物资源，放线菌的产物除了常用的抗生素除青霉素和头孢霉素类外，绝大多数都是它的产物。
筛选的放线菌的代谢产物分类方式有很多，但按功能分类，大致可分为抑菌、杀虫、植物生长调节、抗肿瘤活性及其他多种重要的活性类型。
本文主要从放线菌的分离，应用两大方面进行研究，从而筛选出优质、纯种、功效强的放线茵。
关键词：放线菌；筛选；分离；应用放线菌是广泛分布于土壤中的优势微生物类群，其分枝状的菌丝体能够产生各种胞外水解酶，降解土壤中的各种不溶性有机物质，以获得细胞代谢所需的各种营养，对有机物的矿化有着重要作用，从而参与自然界物质循环，净化环境，改良土壤。
而现如今，人们对放线菌的应用远不及此，放线菌更多地被应用到医学治疗，减少农产品病虫害等各个领域中。
1放线菌在农业当中的应用近年来，随着人们对食品和环境中化学农药安全性的普遍关注，对一些危险性化学农药使用的谈虎色变情况，促使人们寻求其它安全有效的植物病害控制新途径。
而近年来微生物发展迅速，让人们去除植物病虫害的途径逐渐从化学农药的使用向微生物方法转变，利用有益微生物防治植物病害。
它既可以改善，维持植物自然生态系统，又可通过微生物之间的相互作用达到防病之目的。
自20世纪60年代Umezawa研究微生物产生的酶抑制剂以来，对由微生物产生的非抗生素的生物活性物质研究逐步拓宽，此类物质在控制人类非感染性疾病方面发挥了很大的作用。
这些活性物质有70%～80%是由放线菌产生的，这说明放线菌作为药物产生者具有巨大价值。
1.1抗生素的使用放线菌与人类关系极为密切，绝大部分属有益菌，放线菌的产品多种多样，特别突出的是抗生素，对人类健康作出重要贡献。
至今已报道通过的近10000种抗生素中，约70%有放线菌产生，如链霉菌、土霉素、多黏霉素、庆大霉素、井冈霉素等。
放线菌有效成分分析
放线菌有效成分分析研究进展摘要：植物内生放线菌是一类具有巨大开发潜力的新微生物资源，且是数量众多，都分布于没有外部感染症状的健康植物体内，并与植物协同进化，具有促进植物生长，增强植物抗逆性的作用。
目前从许多活体植物组织内分离到的植物内生放线菌中，已有的研究表明，植物内生放线菌在植物病害生物防治中具拮抗机制及其生防作用。
因此，研究放线菌已成为一个十分活跃并具有巨大应用前景的领域。
关键词：放线菌；有效成分；拮抗机制；研究现状Actinobacteria effective composition analysis and research progress Abstract: plant endogenous actinomycetes is a kind of great development potential new microorganism resources, and is numerous, are distributed in no external infection symptoms plant body health, and cooperative coevolution with plant, have promote plant growth, and strengthen the function of plant resistance. At present many living plants from within the organization to plant endogenous actinomyces separation, the existing research shows that endophytic actinomyces can produce antibiotic material, plant growth promoters, plant growth inhibitors, and with new features of the enzymes physiological activity such as material. Therefore, the actinobacteria has become a very active and has great application fields. (plant endogenous actinomyces and physiological activity material research progress)Keywords: actinomycosis; active ingredient; antagonistic mechanism;Research前言：放线菌(Actinomycete)是一类重要的微生物资源，广泛地分布于土壤、湖泊、河流、海洋等不同的自然生态环境中，有的也共生或寄生于动植物宿主上。
放线菌筛选的一般方法
放线菌筛选的一般方法放线菌筛选是一种从大自然中寻找新的抗生素和其他有用化合物的方法。
放线菌是一类革兰氏阳性细菌，与其他细菌存在显著区别，它们具有许多生物活性代谢产物的天然合成能力。
因此，放线菌筛选被广泛应用于寻找新的抗生素和其他有活性的化合物。
1.采集样本：首先，需要在大自然环境中采集到放线菌的样本。
放线菌广泛分布于土壤、水体、植物等各种环境中，因此可以从这些环境中采集到样本用于筛选。
样本的采集可以通过在目标环境中收集土壤或其他样品，并将其置于合适的容器中保存。
2.预处理：采集到的样本通常含有大量不同种类的微生物，因此需要进行预处理步骤。
预处理的目的是去除其他微生物，只留下放线菌。
常用的预处理方法包括加热处理、酸碱处理、稀释等。
3. 筛选培养基的选择：放线菌的生长需要适宜的培养基，因此在筛选之前需要选择合适的培养基。
常用的培养基包括Mannitol-Soya agar （MSA）、Glycerol Yale agar（GYA）、Starch Casitone-Nitrate agar （SCN）等。
4.筛选培养条件的优化：放线菌的生长条件可以通过培养条件的优化来改善。
常用的优化参数包括温度、pH、培养时间和培养基成分等。
优化培养条件可以提高放线菌生长的速度和产生生物活性物质的能力。
5.放线菌分离：在筛选培养基上，可以观察到放线菌的集落。
这些集落可以单独分离，得到纯种的放线菌菌株。
分离放线菌的常用方法包括传代分离和扩散板法等。
6.放线菌菌株的筛选：得到纯种的放线菌菌株后，可以进行生物活性物质的筛选。
常用的筛选方法包括抗菌活性测定、抗肿瘤活性测定和酶活性测定等。
这些方法可以通过测量抑菌圈直径、细胞生存率和酶催化能力来评估放线菌菌株的活性。
7.活性物质的提取和纯化：经过筛选得到有活性的放线菌菌株后，还需要将其产生的活性物质进行提取和纯化。
常用的提取方法包括溶剂提取法、胶体微滤法和萃取法等。
而纯化方法则包括柱层析、薄层层析和高效液相层析等。
稀有放线菌分离方法_姜怡
放线菌研究专栏编者按语:放线菌是一类重要的微生物资源。
近年来,用分子生物学方法证明自然界实际存在的绝大部分放线菌仍然难以纯培养。
如何获得这些未知放线菌是资源利用的重要前提。
这就涉及到放线菌分离及分类。
本专栏将本着先进、实用的原则,有选择地介绍这方面的最新进展和研究供参考。
稀有放线菌分离方法*姜 怡1,2 段淑蓉1 唐蜀昆1 陈华红1 李文均1 徐丽华1**(微生物药物国家工程研究中心 云南省微生物研究所 昆明 650091)1(Lei bn i z Ins tit u t f rM eeres w i ssen s ch aft en an der Un i versit t K i e,l D sternb rook erW eg 20,D 24105K i e,l Ger m any)2 *国家973项目(N o 2004CB719601)国家自然科学基金项目(No 30270004,30560001)**通讯作者 Te:l 0871 *******,Fax :0871 *******,E m ai :lli hxu @ynu edu cn 收稿日期:2005 11 15,修回日期:2005 12 26摘要:稀有放线菌是生物活性物质的重要来源。
从样品预处理,抑制剂的选择,噬菌体的使用,碳源的选择及培养基的设计等各个方面介绍了稀有放线菌分离方法及作者的经验。
关键词:稀有放线菌,分离方法中图分类号:Q 93 文献标识码:A 文章编号:0253 2654(2006)01 0181 03稀有放线菌是指除常见的链霉菌以外的其他放线菌,而不是一个具体的分类学单元。
稀有放线菌能产生众多生物活性物质,包括红霉素,利富平、马杜拉霉素、洋红霉素等抗生素,酶类、维生素等。
其中一些抗生素已商业化,产生巨大的社会效益和经济价值。
研究结果表明,环境中只有极少一部分放线菌得到纯培养。
因此,分离那些未知放线菌是利用这类资源的首要前提之一。
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三、实验材料
• 1、样品 • 干燥的营养基质丰富的苗圃土 • 2、仪器 • 铲子、牛皮纸、搪瓷杯、锥形瓶、玻璃棒、烧杯、小试剂瓶、标 签纸、移液管、接种环、试管、记号笔、酒精灯、电子天平、电 炉、恒温培养箱、加压蒸汽灭菌锅、电热干燥烘箱
3、培养基及试剂配制
• 1）培养基（高氏一号琼脂+重酪酸钾培养基)配制: • 配方：可溶性淀粉20g、K2HPO4 0.5g、1mol/LNaOH、MgSO4•7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、 FeSO4•7H2O 0.01g、琼脂20g、蒸馏水1000ml、250mg重酪酸钾、PH7.2~7.4。 • 步骤：用搪瓷杯先量取500ml自来水在电炉上加热。根据配方，依次称取各种药品加入搪瓷 杯中，搅拌均匀。可溶性淀粉称入烧杯中，加入50ml自来水调成糊状，待培养液煮沸时加 入淀粉糊，边加边搅拌，防止糊底。之后，加入琼脂煮沸至完全溶化，补足1000ml水量。 接着，缓慢加入NaOH液，边加入边搅匀培养液，然后用PH试纸测其酸碱值，调PH至7.2~7.4。 • 趁热分装于8个三角瓶中，塞好棉塞。用牛皮纸包扎好，贴好标签。最后，高压蒸汽灭菌， 121℃灭菌30min. • （2）试剂配制：
加热已制备并灭菌好的高氏合成1号琼脂+重酪酸钾培养基，在无菌条件下倒10个平板贴好标 签，冷却。
用平板稀释法（稀释度从10-3到10-5浓度）将菌种接种在高氏合成1 号琼脂+重酪酸钾的平板培养基上
• 4、纯化 • （1）方法：5~7天后，加热培养基，倒斜面。选择挑取效果较好 的菌落用接种环接种于高氏1号斜面，28℃培养5~7d。 • （2）原理：放线菌的群体特征：小型、干燥、不透明、与培养 基连接紧密，难以挑取，表面呈致密的丝绒状，上有一薄层彩色 “干粉”，正反面颜色不一致，边缘琼脂平面有变形。 • （3）注意：实验过程要做好标记。
• 蒸汽灭菌制备无菌水。
• 干热灭菌9个锥形瓶、平皿10个、玻璃棒3个、移液管3个、10个试管
土壤的采集及处理过 程
• 3、分离 • （1）方法：将处理后的土壤悬浮液稀释100倍备用。加热已制备 并灭菌好的高氏合成1号琼脂+重酪酸钾培养基，在无菌条件下倒 10个平板然后，贴好标签，冷却。用平板稀释法[6]（稀释度从 10-3到10-5,浓度设置见）将菌种接种在高氏合成1号琼脂+重酪酸 钾的平板培养基上,28℃培养5~7d。 • （2）原理：见上文实验原理。 • （3）注意：稀释样品时要在无菌条件下进行；每个稀释度做2~3 个培养皿，并做好标记；实验中要留一个空白对照；注意划线时 的操作。
五、实验预期结果
• 于时间有限，不能对土样进行风干，可能会影响分离得到的放线 菌的纯度。 • 而且可能实验进行不到纯化这一步，仅停留在分离就必须终止实 验。但是由于预先对土样进行的充分的处理，培养时也选用了针 对放线菌的培养基并且加入了有效的抑制剂，即使没有纯化，分 离后也可达到实验目的。
•
1mol/LNaOH、6%酵母膏和用5 mmol / L 磷酸缓冲液稀释的0.05% SDS
制作培养基的仪器准备
制作培养基的药品准 备
药品的称量 过程
培养基的制作过 程
四、实验方案
• 1、土样的采集及处理 • （1）方法：在苗圃，按对角交叉（五点法）取样。先出去表层约2cm的土壤，将铲子插入 土中数次，然后取2~10cm处的土壤于叠好的牛皮纸袋里。将土样放入三角瓶中，加入少量 胆酸钠，再加适量蒸馏水振荡溶解制成土壤悬浮液。调节稀释液的PH为7，略微加热后冷却 至40℃。之后，再加6%酵母膏和用5 mmol / L 磷酸缓冲液稀释的0.05% SDS震荡20min。 • （2）原理：放线菌在较干燥的，营养基质较丰富的中性或微碱性土壤中分布较多；胆酸钠 有利于分散土壤颗粒；一定浓度的酵母膏和SDS有抑制细菌、真菌的作用。 • （3）注意：所取的土样不可过湿，防止样品中杂菌过多；至土壤稀释液时要振荡充分，是 土样与水充分混合，将菌分散。 • 2、器材灭菌
从环境中分离放线菌
组长：褚凤珅、组员：赵玉玺、、张治 、王霞、 张佳慧 、张欢欢
一、 实验目的
• 1.学习从土壤中分离放线菌的方法 • 2.练习、掌控微生物接种、移植和培养的基本技术。 • 3.掌握无菌操作技术。
二、实验原理
• 放线菌是原核生物，是重要的抗生素产生菌，在土壤中的数量仅次于细菌， 尤其在有机质丰富、透气性好的中性到微碱性土壤中的数量较多。
• 土壤颗粒的分散程度对于分离放线菌也有影响。钱恒段等，用胆酸钠处理土 壤悬液后土壤分散效果较好，且优于纯蒸馏水。这可能是因为胆酸钠对土壤 腐殖质具有较强的结合能力从而有利于破坏土壤团聚结构。 • 据杨宇容等,重铬酸钾对土壤真菌、细菌的抑制作用较明显，然而对放线菌 并无抑制作用。而且其价格低廉，如安德荣等[其可作为理想的放线菌分离 抑制剂。徐成勇等实验证明酵母膏、SDS（十二烷基硫酸钠）也有抑菌的作 用。 • 本实验所用方法为综合徐成勇等及钱恒段等实验结果所得。