原料乳实验报告

原料乳的质量测定

一、实验目的

1.1 了解生乳的国家标准及相关质量指标要求

1.2 掌握相关质量指标的检测方法及原理

二、实验内容

2.1 乳总固形物的测定

2.2 新鲜度的测定

2.3 原料乳抗生素残留的测定

2.4 原料乳菌落总数的测定

三、实验原理

3.1 乳固形物测定原理

先分别测定出乳及乳制品中的总固体含量、脂肪含量（如添加了蔗糖等非乳成分含量，也应扣除），再用总固体减去脂肪和蔗糖等非乳成分含量，即非脂乳固体。

3.2 乳新鲜度测定的原理

美兰还原试验是用来判断原料乳新鲜程度的一种色素还原试验。新鲜乳加入亚甲基兰后染为蓝色。如污染大量微生物产生还原酶使颜色逐渐变浅，直至无色，通过测定颜色变化时间，间接推断出鲜奶的卫生质量。

3.3 原料乳抗生素残留测定的原理

培养基预先混合嗜热脂肪芽孢杆菌芽胞，并含有pH指示剂（溴甲酚紫）。加入样品并孵育后，若该样品中不含有抗生素或抗生素的浓度低于检测限，细菌芽胞将在培养基中生长并利用糖产酸，pH指示剂的紫色变为黄色。相反，若样品中含有高于检测限的抗生素，则细菌芽胞不会生长，pH指示剂的颜色保持不变，仍为紫色。

3.4 原料乳菌落总数测定的原理

菌落总数：菌落总数就是指在一定条件下(如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等)每克(每毫升)检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。

四、实验主要仪器与设备

4.1 原料乳抗生素残留测定原料及设备

4.1.1 原料及试剂

灭菌脱脂乳；PCA培养基

4.1.2 设备

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下

恒温培养箱；恒温水浴锅；100μL、200μL微量移液器及吸头；无菌试管：18×180

4.2 原料乳新鲜度测定

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下

恒温培养箱；恒温水浴锅；100μL、200μL微量移液器及吸头；无菌试管：18×180

4.3 乳总固形物测定原料及设备

4.3.1原料及试剂

除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为三级水。

1）平底皿盒：高20 mm～25 mm，直径50 mm～70 mm 的带盖不锈钢或铝皿盒，或玻璃称量皿。

2）短玻璃棒：适合于皿盒的直径，可斜放在皿盒内，不影响盖盖。

3）石英砂或海砂：可通过500μm孔径的筛子，不能通过180μm孔径的筛子，并通过下列适用性测试：将约20g的海砂同短玻棒一起放于一皿盒中，然后敞盖在100 ℃±2 ℃的干燥箱中至少烘2h。把皿盒盖盖后放入干燥器中冷却至室温后称量，准确至0.1 mg。用5mL水将海砂润湿，用短玻棒混合海砂和水，将其再次放入干燥箱中干燥4 h。把皿盒盖盖后放入干燥器中冷却至室温后称量，精确至0.1mg，两次称量的差不应超过0.5mg。如果两次称量的质量差超过了0.5mg，则需对海砂进行下面的处理后，才能使用：

将海砂在体积分数为25 %的盐酸溶液中浸泡3d，经常搅拌。尽可能地倾出上清液，用水洗涤海砂，直到中性。在160 ℃条件下加热海砂4 h。然后重复进行适用性测试。

4.3.2 仪器与设备

天平：感量为0.1 mg；干燥箱；水浴锅

4.4 菌落总数检测设备与材料

4.4.1 试剂和原料

PCA培养基：120ml/瓶；

4.4.2 仪器和设备

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

冰箱：2 ℃～5 ℃；恒温培养箱：28 ℃±1 ℃；均质器；恒温振荡器；显微镜：10×～100×；电子天平：感量0.1 g；无菌锥形瓶:容量500 mL、250 mL；无菌广口瓶：500 mL；无菌吸管：1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)；

无菌平皿：直径90 mm ；无菌试管：10 mm×75 mm ；无菌牛皮纸袋、塑料袋。 五、实验步骤

5.1 原料乳抗生素残留测定

样品9ml 置于灭菌空试管中（平行两份），阴性对照管和阳性对照管各1份（老师提供）。

所有试管80℃±2℃水浴加热5min ，冷却至37℃，加入测试菌液1ml ，轻轻旋转试管混匀。37℃水浴2h ，加入4%TTC 水浴液0.3ml ，混匀后37℃，水浴避光培养30min ，观察颜色变化。

5.2 原料乳新鲜度测定

吸取10ml 牛奶于灭菌空试管中（平行2份），在水浴中加热到38℃，再加入亚甲基兰溶液1ml 混匀。

将试管放入水浴中，每30min 观察1次褪色情况，并记录每个样品褪色时间。 5.3 乳总固形物测定

在平底皿盒中加入20g 石英砂或海砂，在100 ℃±2 ℃的干燥箱中干燥2 h ，于干燥器冷却0.5 h ，称量，并反复干燥至恒重。称取5.0 g （精确至 0.0001 g ）试样于恒重的皿内，置水浴上蒸干，擦去皿外的水渍，于100 ℃±2 ℃ 干燥箱中干燥3 h ，取出放入干燥器中冷却0.5 h ，称量，再于100 ℃±2 ℃ 干燥箱中干燥 1 h ，取出冷却后称量，至前后两次质量相差不超过 1.0 mg 。试样中总固体的含量按式计算：

100m

m -m X 2

1⨯=

式中：

X ——试样中总固体的含量，单位为克每百克（g/100g ）； m 1——皿盒、海砂加试样干燥后质量，单位为克（g ）； m 2——皿盒、海砂的质量，单位为克（g ）； m ——试样的质量，单位为克（g ）。

5.4 菌落总数检测 5.4.1 样品的稀释

5.4.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品至盛有225 mL 灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。或放入盛有225 mL 无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min ，制成1:10的样品匀液。

5.4.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品至盛有 225 mL 无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。