大肠菌群原始记录2003
生产用水水质微生物检验原始记录
菌落总数、大肠菌群检验原始记录编号：002 品名：取样日期：取样量：一、菌落总数(实验仪器：SP-02型生化培养箱，LX-01型立式压力蒸汽灭菌器)1.检测设备：培养箱：℃，高压蒸汽灭菌锅温度：℃，压强：Mpa ，灭菌时间：min2.检测条件：温度：℃，湿度：%检测方法：GB4789.2-2016用刻度吸管吸取样品液1ml注入9ml无菌生理盐水的试管中混匀，制成1：10的样品均液。
按上述操作，制成10倍系列稀释样品均液。
根据对样品污染状况的估计，选择2-3个稀释度，每个稀释度分别吸取1ml样品稀释均液加入2个平皿内，同时分别吸取1ml无菌生理盐水加入2个无菌平皿做空白对照。
倾注15ml-20ml 46 ℃左右的PCA培养基，静置冷却，倒置于36±1℃的恒温培养箱中培养48h±2h。
二、大肠菌群(实验仪器：SP-02型生化培养箱，LX-01型立式压力蒸汽灭菌器)1.检测设备：培养箱：℃，高压蒸汽灭菌锅温度：℃，压强：Mpa ，灭菌时间：min2.检测条件：温度：℃，湿度：%培养开始：年月日时，培养结束：年月日时，培养时间：h检测方法：GB/T 4789.3-2003用刻度吸管吸取样品液1ml注入9ml无菌生理盐水的试管中混匀，制成1：10的样品均液。
按上述操作，制成10倍系列稀释样品均液。
根据对样品污染状况的估计，选择2-3个稀释度，每个稀释度接种三管。
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管中，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管，每个稀释度接种三管，置于36±1℃的恒温培养箱中培养24h±2h ，如果所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则将产气的发酵管分别转接种在伊红美蓝琼脂平板上，置于36±1℃的恒温培养箱中培养18h±2h，然后取出观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。
20-6.大肠菌群检验原始记录
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
3
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
4
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长大肠菌群检验原始记录来自检验项目大肠菌群
样品状态
□完好□异常
检验
方法
GB 4789.3—2016（第二法）
仪器
设备
样品
处理
□固体样品：无菌操作称取25g加入到225mL无菌生理盐水均质袋中，拍打1～2min
□液体样品：无菌吸管吸取25mL加入到225mL灭菌生理盐水中，充分混匀
样品
序号
培养过程
稀释倍数
结果计算
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
5
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
琼脂
对照
0 CFU/皿
盐水
对照
0 CFU/mL
检验人：
复核人：
检验日期：
报告CFU/g
100
10-1
10-2
10-3
1
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
2
大肠菌群检验原始记录
初发酵（月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，）支）
产气管数（支）
复发酵(煌绿乳糖胆盐
肉汤，
37℃，,48h)
产气管数（支）
10-1
10-2
10-3
检验结果
（MPN/100g）
检验人：复核人：
大肠菌群检验检验原始记录
样品名称
明胶
样品编号
样品状态
生产日期
检验依据
GB4789.3-2010
检验日期
大肠菌群检验过程：
1、称取样品25g样品放入盛有225ml灭菌的生理盐水中，制成1：10的样品匀液，用1ml无菌吸管吸取1：10的样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中，制成1：100的样品均液，用1ml无菌吸管吸取1：100的样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中，制成1：1000的样品均液。
2、初发酵试验：大肠菌群每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤（大肠菌群测定：如果超过1ml，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内产气情况。如未产气，培养至48h±2h，如产气着进行复发酵试验。
三、复发酵试验：（大肠菌群的测定）用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，，观察产气情况。
大肠菌群快速纸片法原始记录
受检单位
«供样单位»
检测环境
温度（T）：℃；相对湿度（RH）：%
接样日期
年月日
检测地点
——
检测起止日期
年月日～月日检测依据□《食（饮）来自消毒卫生标准》GB14934-94
□《食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》GB4789.3-2008
检测仪器
□电热恒温培养箱（型号：DNP-9272）36±1℃编号□04-15□04-24□05-11
培养基
□LST肉汤ML□BGLB肉汤ML□其他
培养条件
培养温度℃，培养时间h
样品编号及样品名称
纸片颜色及结果
可疑结果确证
（发酵法）
均匀紫色
（未检出）
黄色背景上有红点或片状红晕（检出）
异常显色反应（可疑）
«样品编号1»«样品名称1»
«样品编号2»«样品名称2»
«样品编号3»«样品名称3»
«样品编号4»«样品名称4»
«样品编号5»«样品名称5»
检测者：审核者：
微生物检验原始记录(大肠菌群)
微生物检验原始记录(大肠菌群)检验原始记录编号：报告类别：微生物共页项目：大肠菌群coliforms 检验地点：样品名称：样品编号：样品状态：符合检验要求；其他境条件：实验依据及步骤GB4789.3-2016样品稀释固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225ml生理盐水或磷酸盐缓冲液的无菌均质容器内均质，或放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中拍击式均质器拍打，制成为1:10样品匀液。
依次进行10倍递增稀释。
液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中混匀，为1:10样品匀液。
样品匀液的ph应在6.5-7.5之间，必要时分别用1mol/lNaOH或1mol/lHcL调节。
取1mL1∶10稀释匀液沿管壁缓缓注入9ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100样品匀液。
按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1mL灭菌吸量管。
从样品匀液制备到样品接种完毕，全过程不得超过15min。
初发酵试验（9管法）每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤（大肠菌群测定：如果超过1ml，则用双料LST肉汤）36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生。
产气者进行复发酵试验，未产气则继续培养至48±2h，产期进行复发酵试验。
未产气者为大肠菌群阴性。
复发酵试验（证实试验）用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，，观察产气情况。
数据分析与结果一、菌落计数根据证实为大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告大肠菌群的最可能数。
大肠菌群检验原始记录表
从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，36℃±1℃培养24-48h，观察产气情况
。凡是BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
操作依据
GB4789.3-2010
稀释倍数
a-10倍
b-100倍
c灭菌生理盐水对照
/6.1
VRBA平板
操作依据 GB4789.3-2010
检验日期：
2016 年 月 日
采样依据 GB4789.12010/4.1、 4.2.1二级 采样方案 (n、c、m值 5、0、0)
10的均匀稀释液，编号a 灭菌生理盐水，编号c做
、b2、c1。向上述5个平 ，依次置于36℃±1℃培
养24-48h，观察产气情况
操作依据 B4789.3-2010
/6.1 操作依据 B4789.3-2010
/8.2 操作依据 B4789.3-2010
/8.3
实试验及观察结果 依据
B4789.3-2010 /8.4
肠菌群数的计算 据GB4789.3-2010
/8.5 数据修约依据 789.来自-2010/7.2报告依据 B4789.3-2010
/8.5
培养基）
年月日
。用灭菌吸管取1mla，加入9ml灭菌生理盐水中，混合均匀做成1:100的均匀稀释液，编号b。取1ml灭菌生理盐水，编号c做
为空白对照。
从a、b、c液中，分别前后2次，各吸取1ml移液到2个灭菌平皿中，平皿编号分别为a1、a2、b1、b2、c1。向上述5个平
皿中分别注入凉至46℃的VRBA15ml，混匀待VRBA凝固后，再加3mlVRBA覆盖平板表层，翻转平板后，依次置于36℃±1℃培 养箱中，培养20h。
大肠菌群检验原始记录-平板计数法5样
10-1
24 26 10
10-2
3
2
0
10-3
0
0
0
BGLB 阳性管数
6
稀释度
第一稀释度 第二稀释度 第三稀释度
样
品 VRBA 疑似大肠菌群菌落数
5
接种 BGLB 管数
10-1
20 22 10
10-2
1
2
0
10-3
0
0
0
BGLB 阳性管数
7
VRBA 空白（仅 VRBA）
-
-
空 白
稀释液空白（稀释液+VRBA）
样品名称
xxxx
样品批次
2022xxxx
仪器设备及耗材： 天平：( xxxx) 培养箱: ( xxxx)
洁净工作台: (xxxx)
培养基及试剂： 结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）： xxxx 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）： xxxx 磷酸盐缓冲液：xxxx 0.1mol/L 氢氧化钠：
配制日期 2022/xx/xx 配制日期 2022/xx/xx 配制日期 2022/xx/xx 配制日期：2022/xx/xx
实验过程： 1.样品处理和稀释： 1.1 如需要，使用 0.1mol/L 氢氧化钠或 0.1mol/L 盐酸将样品调整 pH 在 6.5~7.5 之间。 1.2 制备样品稀释液
根据样品状态，无菌操作，称取/吸管吸取 25g（mL）样品，加入到 225mL 无菌磷酸盐缓冲液中均质（混 匀），制成 1:10 样品匀液。根据对样品污染情况的估计，按上述操作将样品稀释至所需浓度。 2.接种 VRBA
-
-
BGLB 空白（仅 BGLB）
-
-
大肠埃希氏菌检验原始记录
***疾病预防控制中心
大肠样品名称：收样日期：年月日检测日期：年月日
检测项目：□大肠埃希氏菌检验方法：GB4789.6-2003GB4789.36-2008
□有/□无可疑菌落
TSI
尿素
营养琼脂斜面
氧化酶试验
革兰氏染色
靛基质
甲基红
VP试验
赖氨羧酶试验、
动力试验
麦康凯
平板
显色
平板
备注：
检验人：审核人：检毕日期：年月日
注：□内打“√”表示选定，□内打“×”表示不选定。
仪器设备：□生化培养箱□隔水恒温培养箱□显微镜实验地点：病原微生物室环境条件：℃％RH
样号
样品名称
样品来源
增菌培养
分离培养
初步生化试验
生化试验
血清学
实验
结果
报告
25g检样+225ml
□普通肉汤36±1℃培养6h；
□EC增菌肉汤44.5±0.2℃培养18～24h
接种麦康凯和显色平板，36±1℃分别培养18～24h，
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检验原始记录
编号：
报告类别： 微生物 共 页第 页 项目： 大肠菌群 检验地点：
样品名称： 样品编号： 样品状态：
符合检验要求； 其他 环境条件： 20℃
主要仪器设备
名 称
规格型号 编 号 量 程 准确度 检定有效期 电子天平
0-2.1Kg ±0.0001g 电热恒温培养箱
室温-60℃ ±0.1℃
实验依据及步骤 GB4789.3-2003 样品
稀释 固体和半固体样品：称取25g 样品置盛有225ml 生理盐水的无菌均质容器内均质，为1:10样品匀液。
依次进行10倍递增稀释。
液体样品：以无菌吸管吸取25ml 样品置盛有225ml 生理盐水的无菌锥形瓶中混匀，为1:10样品匀液。
依次进行10倍递增稀释。
液体样品：直接吸取样品原液进行检验。
GB/T 4789.3-2003
MPN 计数法 主要培养基：乳糖胆盐培养基，伊红美蓝琼脂，乳糖发酵管
乳糖发酵试验：培养箱温度36℃±1℃，入培养箱时间起： 止： 分离培养：培养箱温度36℃±1℃，入培养箱时间起： 止：
复发酵证实试验：培养箱温度36℃±1℃，入培养箱时间起： 止：
数据分析与结果
接种量/g （ml ） 10g(ml)×3 1g(ml)×3 0.1g(ml)×3 0.01g(ml)×3 0.001g(ml)×3 报告MPN 值/100g （ml) 发酵结
果阳性管数
检测记录人员：
校队人员： 检测日期：。