溶血空斑
2015年临床医学检验技术(师)考试(专业实践能力)真题及详解
2015年临床医学检验技术（师）考试（专业实践能⼒）真题及详解⼀、A1/A2型题（以下每⼀道考题下⾯有ABCDE五个选项。
请从中选择最佳答案，并在答题卡上将相应题号的相应字母所属的⽅框涂⿊。
）1. ⾎尿酸可作为何种疾病的辅助诊断指标？（ ）A. 糖尿病B. ⼼肌梗死C. 痛风D. 肝硬化E. 急性胰腺炎【答案】 C【解析】尿酸主要⽤作痛风的诊断指标。
痛风是嘌呤代谢失调所致，⾎清尿酸可明显升⾼（可⾼达800～1500μmol/L）。
2. WHO将“精⼦快速前向运动”活⼒定为（ ）。
A. 0级B. Ⅰ级C. Ⅱ级D. Ⅲ级E. Ⅳ级【答案】 D【解析】WHO建议将精⼦活动⼒分为4级：①快速前向运动（Ⅲ级：直线运动）；②慢或呆滞的前向运动（Ⅱ级：运动缓慢）；③⾮前向运动（Ⅰ级：原地运动）；④不动（0级：不活动）。
3. 下列可引起胎⼉畸形的寄⽣⾍是（ ）。
A. 蛔⾍B. 肝吸⾍C. ⼸形⾍D. 疟原⾍E. 肺吸⾍【答案】 C⼸形⾍可以通过胎盘引起胎⼉畸形，蛔⾍、肝吸⾍、疟原⾍、肺吸⾍均为普通的寄⽣⾍，不可通过胎盘，也不会引起胎⼉畸形。
4. 溶⾎空斑试验检测的是何种细胞的功能？（ ）A. T淋巴细胞B. 巨噬细胞C. NK细胞D. B淋巴细胞E. LAK细胞【答案】 D【解析】溶⾎空斑试验的原理是将绵⽺红细胞免疫的⼩⿏脾脏（或家兔淋巴结）制成单个细胞悬液，与绵⽺红细胞在琼脂糖凝胶内混合后倾注于⼩平⽫或玻⽚上。
脾细胞中的抗体⽣成细胞（B淋巴细胞）释放抗绵⽺红细胞抗体，使其周围的绵⽺红细胞致敏，在补体参与下可将绵⽺红细胞溶解，形成⾁眼可见的溶⾎空斑。
每⼀个空斑中央含⼀个抗体形成细胞，空斑数⽬即为抗体形成细胞数。
空斑⼤⼩表⽰抗体形成细胞产⽣抗体的多少。
因此溶⾎空斑试验检测的是B淋巴细胞功能。
5. SS琼脂平板培养基是属于（ ）。
A. 基础培养基B. 营养培养基C. 鉴别培养基D. 选择培养基E. 特殊培养基【答案】 D【解析】选择培养基是指在培养基中加⼊抑制剂，抑制标本中的杂菌⽣长，有助于所选择的细菌种类的⽣长。
实验二溶血空斑meng
眼球取血 → 处死小鼠 → 取脾→用10ml洗 液冲脾→离心2000r/min 8min→弃上清，加 裂解液2ml，混匀，2min后离心（转数、时间 同上）→弃上清加洗液10ml，混匀，离心 （同上）
2.用100μl的微量进样器吸取被检细胞混 合悬液，于小室一端轻轻将液体注满两 个小室。记录实际注入的悬液微升数。
3. 将做好的标本水平放置37℃温箱中， 孵育30 分。
【结果分析】
结果观察及溶血空斑计数。
1.肉眼观察空斑 ，计数两个小室出现的溶血空 斑数。对模糊不清的空斑，可在低倍镜下检 查。真正的溶血空斑，必须中心有一个淋巴 细胞，周围为透明区。
加样
10ul 细胞悬液
玻片小室的制作
取洁净的载玻片按下图贴二条宽约5mm 和一条10mm 的双面胶，然后用小镊子取 二片盖玻片分别放在其上，做成两个小室， 用小镊子尾部将盖玻片压平贴牢。
细胞混悬液的配制及灌注
1.取小试管一支，用1ml吸管取0.2ml指示 细胞悬液；0.2ml 500倍稀释的脾细胞 悬液，混匀后即为被检的细胞混合悬液。
计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大 方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25 个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方 格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论 是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方 格数都是相同的，即16×25=400小方格。
示意图
细胞计数板的使用
1mm
A
2.计算出全脾脏中抗体产生细胞总数：
脾细胞悬液总毫升数（即为50ml）
抗体产生细胞总数＝
溶血空斑试验PFC试验PPT课件
4、制备灌注液：
实验组：脾细胞悬液100μl＋15％SRBC 100 μl＋补体 100 μl＋Hank’s液500 μl
对照组：脾细胞悬液100μl＋15％SRBC 100 μl＋Hank’s 液600 μl
5、灌注小室: 2管分别灌注2个小室，石蜡密封小室的两侧 6、 孵育： 37℃培养箱中40min
（三）材料与器材
1、小鼠，5％和15％SRBC，补体，Hank’s液 2、解剖器械，试管，载玻片，石蜡，100目不锈钢
网，双面胶带 3、37℃培养箱
（四）实验方法
1、免疫小鼠：4天前5％SRBC腹腔注射免疫小鼠
2、制备脾细胞悬液：颈椎脱臼处死小鼠，取脾在不锈钢 网上研磨（7 ml Hank’s液），1000 rpm离心6 min，去上 清，加1 ml Hank’s液悬浮脾细胞
溶血空斑试验
PFC实验
（一）实验目的
掌握PFC实验原理、实验操作和结果观察；
（二）实验原理
溶 血 空 斑 试 验 或 空 斑 形 成 细 胞 试 验 （ Plague forming cell, PFC)，体外检测抗体形成细胞。 1、SRBC＋B细胞＝记忆性B细胞（抗体形成细胞） 2、SRBC＋抗体形成细胞＝（抗原＋抗体复合物） 注意事项
（1）小室注入液体时不要留有气泡； （2）小室边缘需用石蜡封严； （3）37℃孵箱孵育时，必须放平，不可倾斜；
（六）实验结果
观察溶血空斑现象 区分： 溶血空斑：比周围颜色浅，折光性差，边缘不整齐。 气泡：比周围亮，折光性好，边缘整齐。
讨论
• 分析溶血空斑形成的原因
溶血空斑实验报告
溶血空斑实验报告溶血空斑实验报告一、引言溶血空斑实验是一种常用的实验方法，用于评估溶血性物质对红细胞的影响。
通过该实验，我们可以了解不同物质对红细胞膜的破坏程度，进而评估其溶血性质。
本实验旨在通过观察溶血空斑的形成情况，探究不同浓度的溶血物质对红细胞的影响。
二、实验方法1. 实验材料准备本实验所需材料包括：新鲜的动物全血、不同浓度的溶血物质（如甲醇、氯仿等）、生理盐水、离心管、显微镜等。
2. 实验步骤（1）将新鲜的动物全血收集到离心管中，离心3500转/分钟，5分钟，将上清液去除，留下红细胞沉淀。
（2）用生理盐水洗涤红细胞沉淀，重复上述离心步骤，去除上清液。
（3）将洗涤后的红细胞沉淀与不同浓度的溶血物质混合，如1:1、1:2、1:4等比例。
（4）将混合液搅拌均匀，然后离心3500转/分钟，5分钟。
（5）观察离心管底部是否出现溶血空斑，记录结果。
（6）将观察结果用显微镜进行进一步观察和拍照。
三、实验结果在本次实验中，我们使用了不同浓度的溶血物质对红细胞进行处理。
观察结果显示，随着溶血物质浓度的增加，溶血空斑的数量和大小也呈现出增加的趋势。
当溶血物质与红细胞比例为1:1时，溶血空斑较少且较小；而当比例为1:4时，溶血空斑明显增多且较大。
四、实验讨论通过本次实验，我们可以得出以下结论：1. 溶血物质的浓度对红细胞的溶血性有明显影响。
随着溶血物质浓度的增加，红细胞受损程度加剧，溶血空斑的形成也更为明显。
2. 溶血空斑的形成是红细胞膜受到破坏的结果。
溶血物质与红细胞膜相互作用，导致膜的破坏，从而使溶血空斑形成。
3. 不同溶血物质对红细胞的溶血性质可能存在差异。
在本实验中，我们使用了甲醇和氯仿作为溶血物质，观察到它们对红细胞的溶血性质不同。
这可能与两种物质的化学性质和作用机制有关。
五、实验意义溶血空斑实验是一种常用的实验方法，广泛应用于生物医学研究领域。
通过该实验，我们可以评估不同物质对红细胞膜的破坏程度，了解其溶血性质。
医学免疫学：溶血空斑试验(PFC测定)
(Plaque forming cell assay)
小鼠B细胞溶血空斑形成试验
➢ 溶血空斑试验是基于抗原抗体反应可活化补体， 溶解细胞的原理来检测抗体形成细胞的一种体外 试验方法，用于检测动物的抗体产生功能的经典 的试验。
➢ 将SRBC免疫过的小鼠脾细胞制成细胞悬液，与一 定量的SRBC混合，在补体参与下，使抗体产生细 胞周围的SRBC溶解，形成一个肉眼可见的溶血空 斑。主要用于测定B细胞抗体产生能力。
机， • 载玻片、双面胶、微量加样器、Tip头、棉签、石
蜡、石蜡锅、温箱等。
1.脾细胞悬液的制备
5％ SRBC 0.4ml腹腔内注射免疫小鼠
实
验
4d后
流
颈椎脱臼处死小鼠，取脾脏，放入已加8ml Hank’s液的平皿中，研磨，200目筛网过滤
程
离心：1000r/min×10min
去上清，加2ml Hank’s液制成脾PFC试验的基本原理及实验方 法；
2. 了解PFC试验的临床意义。
实验原理
➢ 抗原刺激B细胞活化分泌特异性抗体 ➢ 抗原抗体复合物经典途径激活补体系统
实验材料
• 小鼠18～22g， • 5％、15％SRBC，补体，Hank’s液， • 解剖器械（剪刀、镊子）， • 空平皿、筛网、组织研磨器、吸管、试管、离心
2.制作小室
取洁净载玻片两张
实
验
用双面胶在中间和两端各粘一条，将
流
两张玻片黏在一起即成2个小室
程
3.配制小室灌注液
准备2支试管，按照下表加样：
实 验 脾细胞悬液 流 15%SRBC 程 补体
实验管（μl） 对照管 （μl）
100
100
溶血空斑实验的原理
溶血空斑实验的原理1.实验原理：溶血空斑实验主要基于抗原和抗体之间的免疫反应。
当免疫系统受到感染或免疫原刺激时，抗体将与抗原结合，形成免疫复合物。
在溶血空斑实验中，将已知浓度的抗体与红细胞溶菌素处理的红细胞混合，然后加入琼脂糖琼脂培养基中，使混合物凝固。
在凝固过程中，溶菌素溶解琼脂糖，形成无菌区域，也就是空斑。
抗体与抗原结合后，免疫复合物被固定在空斑上。
2.溶血空斑的形成：溶血空斑的形成是通过抗原抗体反应导致的。
在实验中，抗原通常是从被测物中提取的细菌、病毒或其他病原体的产物，抗体则是抗生素和其他免疫反应生成的。
当抗原与抗体结合时，它们组成了免疫复合物。
这些复合物随后被固定在琼脂糖琼脂培养基中，形成圆形的空斑。
3.抗原抗体反应的强度：空斑的大小和数量取决于溶血抗原抗体反应的强度。
当抗体与抗原结合时，抗原抗体复合物会激活补体系统，引发溶血反应。
补体系统的活化会导致细胞膜的破坏，从而使红细胞溶解。
溶血反应越强烈，空斑越大。
因此，通过观察空斑的大小和数量，可以定量评估抗原抗体反应的溶血效应。
4.实验步骤：（1）制备琼脂糖琼脂培养基：将琼脂糖溶于琼脂基础培养基中，使其凝固。
（2）制备抗原抗体混合物：将已知浓度的抗体与红细胞溶菌素处理的红细胞混合。
（3）将抗原抗体混合物加入琼脂糖琼脂培养基中，使其固化。
（4）放置琼脂糖琼脂培养基在适宜的条件下孵育，并观察空斑的形成和大小。
（5）使用计数板或计算机软件，记录并计算空斑的数量和大小。
溶血空斑实验在免疫学研究中具有重要应用，可以被用于评估抗原抗体反应的强度和效果。
通过该实验，可以识别和定量分析具有溶血活性的物质，例如细菌外毒素、补体系统中的抗体和病毒。
它也可用于评估药物或化合物的溶血活性，以及观察疫苗的保护性能力。
总之，溶血空斑实验为研究和评估免疫反应中的溶血效应提供了重要的定量工具。
溶血空斑试验
溶血空斑试验溶血空斑试验一、原理溶血空斑试验是体外检测单个抗体形成细胞(B淋巴细胞)的一种方法，即将经绵羊红细胞(SRBC)免疫过的家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液，与一定量的SRBC结合，于37℃作用图3131琼脂平板溶血空斑溶血空斑试验溶血空斑试验试验原理示意图下，免疫活性淋巴细胞能释放出溶血素，在补体的参与下，使抗体形成细胞周围的SRBC溶解，从而在每一个抗体形成细胞周围，形成肉眼可见的溶血空斑。
每个空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。
由于溶血空斑试验具有特异性高，筛检力强，并可直接观察等优点，故可用作判定免疫功能的指标，观察免疫应答的动力学变化，并可进行抗体种类及亚类的研究。
溶血空斑试验溶血空斑试验目前有关溶血空斑试验的具体方法很多，现仅将琼脂平板溶血空斑试验的操作方法简介如图3131。
溶血空斑试验溶血空斑试验二、材料和方法(一) 材料平皿(直径55×15cm)，温箱(37℃)，水浴箱(45℃)，离心机，显微镜及白细胞计数器，18～25g昆明系小鼠等。
溶血空斑试验溶血空斑试验(二) 试剂1．SRBC悬液取无菌脱纤绵羊血(或阿氏液保存的血液)，用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗3次，每次 2 000r/min离心5min，最后取压积红细胞，悬于灭菌pH值7 2 P BS(含Ca2+、Mg2+)中，使成为20%浓度，经细胞计数后，调整细胞浓度为2×10 9/ml。
溶血空斑试验溶血空斑试验2．01mol/L pH值7 2 PBS(含Ca2+、Mg2+)。
3．底层和顶层琼脂取抗补体作用小的琼脂(日本琼脂粉或旅大水产制品厂的产品)用PBS配成14%和07%两种浓度。
将07%的琼脂分装小试管，每管15ml备用。
4．DEAE右旋糖酐分子量5万，用蒸馏水配成1%浓度备用。
5．补体采集3只以上豚鼠血清，应用时用PBS稀释成1:30浓度(如不加DEAE右旋糖酐，可采用原补体或作1:5稀释)。
溶血素实验方法详解
溶血素、溶血空斑实验方法[试验目的]：溶血素：经鸡红细胞免疫的小鼠可由其淋巴细胞产生一种特异性循环抗体——溶血素（Igm），与鸡红细胞一起体外温育，在补体参与下，可产生溶血反应。
致敏小鼠血清中的溶血素的含量可通过溶血过程中释放的血红蛋白来检测。
后者可直接或与都氏液反应形成氰化血红蛋白后比色测定。
溶血空斑：抗体形成细胞数可根据分泌的Igm抗体固定补体后溶解指示红细胞数量来反应，即将鸡红细胞免疫的小鼠脾制成细胞悬液与一定量的鸡红细胞混合，在补体的参与下，使抗体分泌细胞周围的鸡红细胞溶解，测定溶血OD值，从而定量测定抗体形成细胞所分泌的抗体。
[试验材料]：1．动物：KM远交系小鼠、土公鸡（青龙场农茂市场）2．受试物3．阳性对照药：左旋咪唑、环磷酰胺4．试剂：A、阿氏液：NaCl 4.2g 二水柠檬酸钠8.0g 柠檬酸0.5g无水葡萄糖18.7g ( 或有水葡萄糖20.6g)，溶于新鲜蒸馏水1000ml，分装成若干瓶，高压来菌（10p\115℃,20~30min）备用。
B、血红蛋白测定试剂盒（HiCN法）：四川迈克科技有限责任公司，代替都氏液。
C、Gey’s液：NH4Cl 7g Tris(mw121.4) 2.4g 溶于1000ml超纯水。
稀盐酸（1：36）调PH=7.2，（一般配1000ml 约需18ml稀盐酸）D、5%鸡红血球：健康公鸡翅下向远血端进针取静脉血约20ml于预先灭菌的阿氏液中，一般5~10ml血/瓶；取其中一瓶，生理盐水洗涤3次，每次3000rpm，10min,末次所得的红细胞在刻度离心管中定容后，加入19倍生理盐水配制成5%。
（一般5ml血可洗出血细胞约2~3ml）。
免疫小鼠用，用时ip0.2ml/只。
E、4%鸡红血球：取血、洗涤方法同5%鸡红血球。
定容后加入24倍生理盐水配制而成。
F、0.2%鸡红血球：将4%鸡红血球稀释20倍，即2.5ml 4%鸡红血球加生理盐水60ml。
G、10%豚鼠血清：豚鼠心脏取血，分离血清，定容后加入9倍生理盐水即成。
细胞生物学实验考考试样题及实验思考题答案
细胞生物学实验考考试样题及实验思考题答案细胞生物学实验考试样题一、填空题（2分/每空，共30分）1、洗液由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水组成。
2、1640培养基包括RPMI1640培养液、谷氨酰胺、双抗、小牛血清。
3、鉴别活细胞的染液是0.4%台盼蓝溶液;鉴别细胞核的染液是甲基绿-派洛宁染液；鉴别线粒体的染液中性红-詹纳斯绿染液。
4、细胞核分离的基本步骤是组织匀浆、离心、纯化、鉴定。
5、细胞骨架中使蛋白质被保存的染料是1%Triton-100。
二、简答题（5+5+10共20分）1.线粒体在分离提取过程中，为什么要在0~4℃中进行？答：①为了保持组分的生理活性;②防止线粒体中的酶被破坏，避免酶失活2.什么我们在检测细胞渗透性时要用一定浓度的试剂？答：①确保实验是在等渗条件下进行；②防止物质的进出；③同时避免由于渗透压不同而影响实验结果。
3.细胞的计数步骤和方法。
答：加等体积的染液与细胞悬液混合～把悬液滴在计数板上～底倍镜下观察，活细胞无色，死细胞为蓝色，找计数方格计四个方格的细胞总数。
（压到大格线者“计左不计右，计上不计下”）计算。
Ⅰ：每毫升原液细胞数=4个大格细胞总数/4*100*稀释倍数Ⅱ：细胞存活率(%)=(细胞总数-死细胞数)/细胞总数。
细胞生物学实验思考题答案实验一利用各种显微镜观察细胞形态、结构1、简述显微镜的主要结构和操作要领。
普通生物显微镜由3部分构成：①照明系统：包括光源和聚光器。
②光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体。
③机械装置：用于固定材料和观察方便，包括镜台(载物台) 、调节器和物镜转换器(旋转器等使用（一）、观察前准备检查：底座右侧的光源亮度旋钮是否在“1”位置，即顺时针选到最底位。
开机：①.打开后座主电源开关——绿色按钮②打开后座CCD电源开关——红色按钮白平衡调整：不放切片，在10倍物镜下将电源调整到最亮，然后按底座右方的白平衡按钮（红色）3－5秒之后将光源亮度调回到适中状态。
实验二溶血空斑
?
弃上清加 4.9ml洗液混匀
?
取0.1ml脾细胞悬液 +0.9ml洗液（A液），混 匀
?
? 取0.1ml（A液）+小室（约用 30ul）
细胞计数板（Hemacytometer）
? 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上 由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短 横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方 格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大 方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中 进行。
? 将绵羊红细胞（ SRBC）免疫过的小鼠脾细胞 制成细胞悬液，与一定量的绵羊红细胞混合， 在补体参与下，使抗体产生细胞周围的 SRBC 溶解，形成一个肉眼可见的溶血空斑。主要 用于测定 B细胞抗体产生能力。
【试剂与器材】
1. 健康小鼠（约 18～20 克重）。 2. 绵羊红细胞悬液（ 2.5%）。 3. 指示细胞悬液： 含10% 绵羊红细胞悬液
于小鼠腹腔内。（ 4 天后追加一次免疫效果 更佳）。 ? 见试验一，已做
制备脾细胞悬液
1.将免疫后 7 天的小鼠颈椎脱位处死， 75%乙醇浸泡 3 分钟，取出小鼠置于无菌纸上，左腹侧朝上；
2.在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁， 可见红色长条状脾脏；
3. 在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露脾脏，用 镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面的结缔组织， 取出脾脏。放入盛有 5ml Hanks 液的培养皿中；
1mm
A
1mm B
1ml=1cm 3=1000mm 3
A+B+C+D
细胞数=
? 104 ?稀释倍数
4
C
D
6.将沉积的红细胞用乳头吸管吹吸悬起混匀。 吸取此悬液 0.1ml 放小试管中，再加 0.9mlHank′s 液，即为 500 倍稀释的脾细胞 悬液。
溶血空斑实验..
（四）加补体 • 从温箱中取出平皿，每皿加入1:5稀 释的新鲜豚鼠血清1ml，继续放37℃ 温箱中温育30min后取出，观察溶血 空斑。也可在室温下放置1h，4℃冰 箱过夜，次日观察结果。
结果判定
观察时，将平皿对着光亮处， 用肉眼或放大镜观察每个溶血空斑 的溶血状况，并记录整个平皿中的 空斑数，同时求出每百万个脾细胞 内含空斑形成细胞的平均数。
●一个空斑代表一个抗体形成细胞（即B
细胞 ），空斑的数量反映机体的体液 免疫功能。 ●空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的 多少。由于溶血空斑试验具有特异性高， 筛选力强，可直接观察等优点，故可用 做判定免疫功能的指标，观察免疫应答 的动力学变化，并可进行抗体种类及亚 类的研究。
实验材料与试剂
• 器材：平皿、37℃水浴箱、离心机、显微 镜 • 试剂： ①SRBC悬液：取无菌脱纤维羊血，用NS或PBS 离心洗涤3次，每次以2000rpm，5min，用 PH7.2的PBS（含Ca2+、Mg2+）悬成细胞浓度 为2.00×109个/mL
②Hanks液（含Ca2+、Mg2+ ） ③底层基（1.4%）和表层基（0.7% ）： 将琼脂糖用Hanks液配成1.4%和0.7%两种 浓度。将表层基分装于小试管中，每管 2ml ④补体：新鲜豚鼠血清 ⑤小牛血清：56℃灭活 30min
实验步骤
㈠免疫脾细胞悬液的制备 ①小鼠免疫：每只小鼠经尾静脉注入上述SRBC悬 液2.00×104个/0.2ml或者腹腔注射4.00×108 个 /1ml。 ②单个脾细胞悬液的制备：将免疫后第四天的小 鼠拉颈处死，解剖取出脾脏，放入PH7.2的PBS 中漂洗，去掉结缔组织，加入适量的PBS，用镊 子挤压脾脏，稍静置，吸上清液至离心管中， 2500r/min离心5min，弃上清后，定量加入PBS 液1ml，混匀，再用PBS液稀释10倍（浓度约为 5×106个/ml）
经典溶血空斑实验的原理
经典溶血空斑实验的原理经典溶血空斑实验是一种常用于研究溶血现象的实验方法。
其原理是通过控制不同浓度的溶血试剂与红细胞悬液反应，观察溶血现象的发生情况，从而了解溶血试剂的溶血效果。
下面列举了经典溶血空斑实验的原理：1. 溶血现象：红细胞在一定条件下受到破坏，导致红细胞内部的血红蛋白溶解出来，形成溶血现象。
2. 溶血试剂：溶血试剂是一种具有溶解红细胞膜的特性的物质，常用的溶血试剂有生理盐水、蒸馏水、酸、碱等。
3. 红细胞膜：红细胞膜是红细胞的外层膜，由磷脂、蛋白质和糖组成，具有一定的韧性和弹性。
4. 溶血试剂与红细胞膜的作用：溶血试剂能够破坏红细胞膜，使血红蛋白溶解出来。
5. 溶血程度的测定：通过观察红细胞悬液与溶血试剂反应后形成的溶血空斑的大小和数量，来判断溶血程度的大小。
6. 溶血空斑的形成：红细胞悬液与溶血试剂反应后，红细胞膜受到破坏，血红蛋白溶解出来形成空斑。
7. 溶血空斑的观察：溶血空斑呈现出透明的圆形区域，周围是红色的红细胞残片。
8. 溶血程度的判断：溶血程度的大小可以通过观察溶血空斑的大小、数量和形状来判断，溶血程度越大，空斑越大、数量越多。
9. 溶血试剂浓度的影响：溶血试剂的浓度越高，其溶血效果越强，溶血程度越大。
10. 环境因素的影响：温度、pH值等环境因素也会影响溶血试剂对红细胞的溶血效果。
11. 应用范围：经典溶血空斑实验可以用于检测溶血性贫血、溶血性疾病等，也可以用于研究溶血机制和溶血试剂的效果。
经典溶血空斑实验是一种简单、直观的实验方法，通过观察溶血空斑的形成和溶血程度的大小，可以初步评估溶血试剂的溶血效果。
这种实验方法广泛应用于临床医学、生物医学研究及药物研发领域，对于研究溶血机制和溶血性疾病的发生发展具有重要的意义。
实验二溶血空斑
实验二溶血空斑实验目的：了解血液抗原与抗体的作用，掌握血凝反应的基本原理和实验方法，了解溶血空斑试验的原理，探讨影响溶血空斑的因素。
实验原理：人和动物的血液表面都有各种化学物质，其中最明显的有抗原和抗体。
血型抗原通常是在红细胞的表面，而血型抗体则在血清中。
在正常情况下，抗原与抗体之间不会产生相互作用，但是在体外与不同类型的血液混合时就会出现反应。
在血凝反应过程中，当同种抗体与同种抗原相遇时，它们会结合起来形成一个可见的团块。
抗体对于外来抗原有着高度的选择性，即其能够选择性的结合到特定的抗原，而不涉及其他抗原类型。
通常存在四种血型：A、B、AB、O。
每一种血型都有特定的抗体和抗原。
溶血是指红细胞破裂释放出细胞内物质的过程。
红细胞的膜结构具有半渗透性，并且固定量的抗体或淀粉样物质能与它们结合。
当不兼容的血液混合时，体内的抗体结合到血型抗原表面，从而导致血细胞的破裂和血液中出现游离的血红蛋白，也称为溶血现象。
溶血空斑试验是一种检测抗体特异性和浓度的试验。
在试验中，试管中的血浆加入已知抗原类型的红细胞悬液，然后让其稀释，最终加入悬液的红细胞浓度足以产生溶血空斑。
抗体与相应抗原结合时会在红细胞表面形成网状结构，称为空斑。
空斑在显微镜下呈现为圆形透明的结构，其大小和数量取决于抗体浓度和特异性。
抗体浓度越高，抗体与红细胞结合的位置越小，空斑越大。
实验步骤：设计课题：本实验选择 ABO 血型系统，探究不同抗体浓度对溶血空斑的影响。
器材：平滴管5ml，离心机，显微镜，石蜡片，波茨玻璃吸管，无菌吸球，超声波清洗器。
试剂：离心管，血型鉴定血清（A、B、O）、丙酮、0.9％生理盐水、0.3％凝血酶液、4％牛血清蛋白、洗涤缓冲液。
操作流程：1.实验器材的清洗：取下一个 50 毫升的玻璃容器，加入浓度为 10% 的氢氧化钠溶液，用玻璃棒搅拌，再洗净，然后反复用蒸馏水洗净。
之后，使用超声波清洗器清洁吸球。
将使用密闭器前的所有仪器和试剂清洗，使其无残留物和干净。
溶血空斑试验
溶血空斑试验溶血空斑试验一、原理溶血空斑试验是体外检测单个抗体形成细胞(B淋巴细胞)的一种方法，即将经绵羊红细胞(SRBC)免疫过的家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液，与一定量的SRBC结合，于37℃作用图3131琼脂平板溶血空斑溶血空斑试验溶血空斑试验试验原理示意图下，免疫活性淋巴细胞能释放出溶血素，在补体的参与下，使抗体形成细胞周围的SRBC溶解，从而在每一个抗体形成细胞周围，形成肉眼可见的溶血空斑。
每个空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。
由于溶血空斑试验具有特异性高，筛检力强，并可直接观察等优点，故可用作判定免疫功能的指标，观察免疫应答的动力学变化，并可进行抗体种类及亚类的研究。
溶血空斑试验溶血空斑试验目前有关溶血空斑试验的具体方法很多，现仅将琼脂平板溶血空斑试验的操作方法简介如图3131。
溶血空斑试验溶血空斑试验二、材料和方法(一) 材料平皿(直径55×15cm)，温箱(37℃)，水浴箱(45℃)，离心机，显微镜及白细胞计数器，18～25g昆明系小鼠等。
溶血空斑试验溶血空斑试验(二) 试剂1．SRBC悬液取无菌脱纤绵羊血(或阿氏液保存的血液)，用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗3次，每次 2 000r/min离心5min，最后取压积红细胞，悬于灭菌pH值7 2 P BS(含Ca2+、Mg2+)中，使成为20%浓度，经细胞计数后，调整细胞浓度为2×10 9/ml。
溶血空斑试验溶血空斑试验2．01mol/L pH值7 2 PBS(含Ca2+、Mg2+)。
3．底层和顶层琼脂取抗补体作用小的琼脂(日本琼脂粉或旅大水产制品厂的产品)用PBS配成14%和07%两种浓度。
将07%的琼脂分装小试管，每管15ml备用。
4．DEAE右旋糖酐分子量5万，用蒸馏水配成1%浓度备用。
5．补体采集3只以上豚鼠血清，应用时用PBS稀释成1:30浓度(如不加DEAE右旋糖酐，可采用原补体或作1:5稀释)。
溶血空斑实验报告
一、实验目的1. 掌握溶血空斑实验的基本原理和方法。
2. 了解溶血空斑实验在免疫学中的应用。
3. 检测实验动物抗体形成细胞的功能。
二、实验原理溶血空斑实验（Plaque Forming Cell assay, PFC）是一种体外检测单个抗体形成细胞（B淋巴细胞）的方法。
其原理是将绵羊红细胞（SRBC）免疫家兔或小鼠，取家兔淋巴结或小鼠脾细胞制成细胞悬液，与高浓度绵羊红细胞混合后加入琼脂糖凝胶中。
其中每个释放溶血性抗体的B淋巴细胞在补体的参与下可溶解周围的绵羊红细胞，在周围形成一个可见的空斑。
一个空斑代表一个抗体形成细胞（即B细胞），空斑的数量反映机体的体液免疫功能。
空斑大小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。
三、实验材料与试剂1. 器材：平皿、37℃水浴箱、离心机、显微镜、移液器、吸管等。
2. 试剂：（1）SRBC悬液：取无菌脱纤维羊血，用NS或PBS离心洗涤3次，每次以2000rpm，5min，用PH7.2的PBS（含Ca2+、Mg2+）悬成细胞浓度为2.0×10^9个/mL。
（2）Hanks液（含Ca2+、Mg2+）：将琼脂糖用Hanks液配成1.4%和0.7%两种浓度。
（3）底层基：将琼脂糖用Hanks液配成1.4%浓度。
（4）表层基：将琼脂糖用Hanks液配成0.7%浓度。
（5）补体：新鲜豚鼠血清或小牛血清，56℃灭活30min。
四、实验方法1. 免疫脾细胞悬液的制备（1）小鼠免疫：取10只小鼠，每只小鼠腹腔注射1ml SRBC悬液，免疫3次，每次间隔2周。
（2）脾细胞悬液的制备：无菌取小鼠脾脏，剪碎，用生理盐水洗涤，加入适量生理盐水制成单细胞悬液，调整细胞浓度为1.0×10^6个/mL。
2. 溶血空斑实验（1）将底层基加入平皿中，置于37℃水浴箱中溶化。
（2）取适量脾细胞悬液加入底层基中，轻轻混匀。
（3）加入适量表层基，轻轻混匀。
（4）加入适量补体，轻轻混匀。
（5）将平皿置于37℃水浴箱中孵育4h。
初级临床医学检验技士专业实践能力模拟题10
初级临床医学检验技士专业实践能力模拟题10一、1. 酶的竞争性抑制物具有的动力学效应为A.Km升高，Vmax不变B.Km降低，Vmax不变C.Km升高，Vmax降低D.Km不变，Vmax升高E.Km不变，Vmax降低答案：A本题考查竞争性抑制剂对酶促反应的影响，竞争性抑制剂与底物竞争与酶的同一活性中心结合，从而干扰了酶与底物的结合，使酶的催化活性降低，Km↑，Vmax不变。
2. 不同组织器官的碱性磷酸酶(ALP)由于合成修饰后的电泳迁移率不同，琼脂糖凝胶电泳可将其分为6种同工酶，从阳极到阴极的顺序为A.ALP1、ALP2、ALP3、ALP4、ALP5、ALP6B.ALP2、ALP1、ALP3、ALP4、ALP5、ALP6C.ALP1、ALP3、ALP2、ALP4、ALP5、ALP6D.ALP1、ALP2、ALP3、ALP4、ALP6、ALP5E.ALP1、ALP2、ALP4、ALP3、ALP5、ALP6答案：A本题考查琼脂糖凝胶电泳分离ALP同工酶，琼脂糖凝胶电泳可将ALP分为6种同工酶，从阳极到阴极的顺序为ALP1、ALP2、ALP3、ALP4、ALP5、ALP6。
3. 分泌的是B.主细胞C.黏液细胞D.胃幽门黏膜G细胞E.胃黏膜表面上皮细胞答案：E本题考查的分泌，胃黏膜表面上皮细胞分泌。
4. CK-MM亚型对急性心肌梗死的早期诊断较敏感，一般以下列哪项作为诊断标准A.MM3/MM1＞0.5B.MM3/MM1＞1.0C.MM3/MM2＞1.5D.MM1/MM3＞1.5E.MM1/MM3＞1.0答案：BCK同工酶亚型分析在诊断AMI的特异性和灵敏度方面优于CK及其同工酶，可用于AMI的早期诊断。
一般以CK-MM3/CK-MM1>1.0作为诊断AMI的标准，但必须排除急性骨骼肌损伤。
5. 肝功能受损时，血中A.清蛋白含量升高B.球蛋白含量下降C.清蛋白含量升高，球蛋白含量下降D.清蛋白含量下降，球蛋白含量升高或相对升高E.清蛋白和球蛋白含量都正常Alb由肝实质细胞合成，肝脏功能受损，Alb合成减少，球蛋白代偿性增高以维持血浆胶体渗透压。
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将2ml预热的0.7%琼脂糖凝胶与0.2ml SRBC 及0.1 ml脾细胞悬液迅速混匀，倾注与已制 备好的下层琼脂糖上制备上层37℃孵育1h 加入稀释好的补体1ml继续37℃孵育1h
计数溶血空斑数
• 有直接法和间接法
• 直接法：检测抗SRBC IgM型抗体形成细胞，初 次面以后4～5天达高峰 • 间接法：检测抗SRBC IgG 和IgA型抗体，初次 免疫后8～10天达高峰
方法
• 制备补体
• 制备SRBC
• 免疫动物ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 脾细胞悬液的制备
• 空斑测定
空斑测定步骤
将3.5ml 1.4%琼脂溶解并 倾注在培养皿上制备下层
抗体生成细胞检测 溶血空斑
Lixian Wu
原 理
• 是检测空斑形成细胞即B淋巴细胞分泌抗体功 能的一种体外实验方法，可检测机体体液免疫 功能状况。用绵羊红细胞免疫小鼠，取小鼠脾 脏制成细胞悬液，与一定量的SRBC混合后加入 琼脂糖凝胶中，其中每一个有活性的B细胞所 产生的溶血素可致敏周围的SRBC，在补体的参 与下，SRBC溶解，形成肉眼可见的溶血斑，空 斑的数目代表抗体生成细胞的多少，空斑的大 小代表反映抗体生成细胞产生抗体的能力。