生物：2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》课件(新人教版选修1)
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土壤中分解尿素的细菌的分离和计数_课件
实验组
尿素唯一氮源 牛肉膏蛋白胨
对照组
生长多种微生物
选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微
生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。
㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数： 血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品 中微生物的数量。
2. 稀释涂布平板法 （活菌计数法） （1）原理：
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
微生物的培养与观察
三.结果分析与评价
测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的 细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？
/v_show/id_XMjY3NDM3 MTg0.html
/v_show/id_XMTc3Mjg3OTU2.html
NaH2PO4 MgSO4`7H2O 葡萄糖 尿素
1.4g
2.1g 0.2g 10.0g 1.0g
琼脂
15.0g
①从物理性质看属于哪类？从功能上属于哪类培养基？
固体培养基
选择培养基 氮源：尿素
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素
4、怎样证明此培养基具有选择性呢？
培养基类型
结果
只生长分解尿素细菌
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度
测定土壤中细菌的数量，一般选用 104 105 106 测定放线菌的数量，一般选用103 104 105 测定真菌的数量，一般选用102 103 104
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？
2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件 新人教版选修1
四、实验案例
土壤中某样品细菌的分离与计数
实验的具体操作步骤如下: 实验的具体操作步骤如下: 1.土壤取样 1.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。 从肥沃、湿润的土壤中取样。先 铲去表层土3 cm左右 再取样， 左右， 铲去表层土3 cm左右，再取样，将 样品装入事先准备好的信封中。 样品装入事先准备好的信封中。
专题2 专题2 微生物的培养与应用
【课题目标】 课题目标】
研究培养基对微生物的选择作用， 研究培养基对微生物的选择作用，进行微 生物数量的测定。 生物数量的测定。
【研究对象】 研究对象】
土壤中能分解尿素的细菌
【达到目的】 达到目的】
（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ） （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这 ） 样的细菌
（三）设置对照
A同学的结果与其他同学不同，可能 同学的结果与其他同学不同， 的解释有两种。 的解释有两种。 一是由于土样不同； 一是由于土样不同； 二是由于培养基污染或操作失误。 二是由于培养基污染或操作失误。 究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。 究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。
实验方案有两种
计算公式：
每克样品中的菌落数= 每克样品中的菌落数=（某一稀释度下平板上生长的平均菌落 涂布平板所用稀释液体积） 数／涂布平板所用稀释液体积）×稀释倍数
2、显微镜直接计数法
（1）原理：此法利用特定细菌计数板或血细 胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品 中微生物数量。 （2）方法：用计数板计数。计数板是特制的 载玻片，其上有特定的面积为1mm2，高为 1mm2 0.1mm的计数室，一个计数室又被分成25个 （或16个）中格，每个中格再被分成16个 （或25个）小格，每个计数室都由400个小格 组成。
人教版高中生物选修一课件：2.2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数+
专题2
微生物的培养与应 用
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、研究思路
（一） 筛 选 菌 株
1、PCR技术及提示
2、实验室微生物的筛选原理（P21）
pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
人为提供有利于目的菌株的条件（包括营养、温度、
3、选择培养基（阅读配方）
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长， 同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称 做选择培养基。
通过这个事例可以看出，实验结果要有说 服力，对照的设置是必不可少的
四、实验设计
（实验案例 ）
实验名称：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
……
实验的具体操作步骤如下:
资料一.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 信封中。
制备培养基：
准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。
由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择 了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103～107。
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀 释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能 分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同 吗？ 答：这是因为土壤中各类微生物的数量是不同 的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性 厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万， 霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微 生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应 当有针对性地提供选择培养的条件。
（二）样品的稀释操作是否成功 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～ 300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够 进行菌落的计数。 （三）重复组的结果是否一致 如果学生选取的是同一种土样，统计的结 果应该接近。如果结果相差太远，需要进一步 分析产生差大量的微生物，其 中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物 多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离其中能 分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基外，还 应参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。
微生物的培养与应 用
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
一、研究思路
（一） 筛 选 菌 株
1、PCR技术及提示
2、实验室微生物的筛选原理（P21）
pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
人为提供有利于目的菌株的条件（包括营养、温度、
3、选择培养基（阅读配方）
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长， 同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称 做选择培养基。
通过这个事例可以看出，实验结果要有说 服力，对照的设置是必不可少的
四、实验设计
（实验案例 ）
实验名称：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
……
实验的具体操作步骤如下:
资料一.土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 信封中。
制备培养基：
准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。
由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择 了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103～107。
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀 释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能 分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同 吗？ 答：这是因为土壤中各类微生物的数量是不同 的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性 厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万， 霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微 生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应 当有针对性地提供选择培养的条件。
（二）样品的稀释操作是否成功 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～ 300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够 进行菌落的计数。 （三）重复组的结果是否一致 如果学生选取的是同一种土样，统计的结 果应该接近。如果结果相差太远，需要进一步 分析产生差大量的微生物，其 中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物 多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分离其中能 分解尿素的微生物除了需要准备选择培养基外，还 应参照厌氧菌的培养方法进行实验设计。
人教生物选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数(共25张PPT)
3.设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响, 提高实验结果的可信度。
（二）设置对照
一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。
究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实验方案有两种。 一种方案是可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验， 如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则 证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。另一种方 案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养， 作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。通过这个事例 可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。
结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
显微镜直接计数也是测定微生物数量的常
用方法。
每克样品中的菌株数
C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积（ml) M：稀释倍数
说明设置重复组的重要性。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组， 因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平 板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可 能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。这个实 例启示学生，在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增 强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的 结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。
[一]土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装 入事先准备好的信封中。
[二]样品的稀释
为什么分离不同的微生 物要采用不同的稀释度？ 测定土壤中细菌的总量 和测定土壤中能分解尿 素的细菌的数量，选用 的稀释范围相同吗？
人教生物选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数(共24张PPT)
需培养基：
①从物理性质看 此培养基属于哪
KH2PO4 NaH2PO4
1.4g 2.1g
类？ 固体培养基
MgSO4`7H2O 葡萄糖
0.2g 10.0g
②在此培养基中 哪些作为碳源、 氮源？
尿素 琼脂
1.0g 15.0g
碳源：葡萄糖
氮源：尿素
③此培养基对微生物是否具有选择作用？ 具有。只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，才 能在此培养基上生长
灭菌的试管和1个灭菌的移液管。
③ 应在火焰旁称取土壤 10 g。在火焰附近将称好的土样倒入
盛有90mL 无菌水 的锥形瓶中，塞好 棉塞 。在稀释土壤溶液的
过程中，每一步都要在 火焰旁 进行（无菌操作）。
④ 为避免试管相互混淆，可以将已经进行过稀释的试管，按
稀释度递增的顺序
依次放在试管架的另一行。
① 按照浓度 从低到高的顺序 涂布平板，不 必更换移液管（无菌操作）。
② 实验时要对培养皿作好标记，注 明 培养基类型、、培养时间、、稀释度 等。
甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：结果误差过大，不应用于计算平均值
计算公式： 每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M
某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得
平板上菌落数的平均数为234，那么每克样
品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液
的体积为0.1ml） A. 2.34×108
( B)
B. 2.34×109
C. 234
D. 23.4
去①表从层富土含，有在机距物地、表潮约湿3、-8pHc≈m的7的土土壤壤层中取取样样，。再先将铲 样品装入事先准备好的 信封 中。（原因：土壤微生
物3主-8要分cm布的在近距中地性表土壤中，约70％-90％为
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数课件高二下学期生物人教版选修1
（1）原理：
在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上 所形成的一个菌落是由一个活菌繁殖而成的，即 一个菌落代表原先的一个活菌。
（2）计算公式：
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml) M：代表稀释倍数
例：P22 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有 问题，错在哪？
这个实例可以看出，实验结果要有说服力， 对照的设置是必不可少。
3 实验设计
实验 流程
1 土壤取样 2 制备培养基 3 样品稀释涂布平板 4 微生物的培养与观察
5 菌落计数
1、土壤取样 “微生物的天然培养基”
①取样条件：从肥沃、富含有机质的土壤表层，酸 碱度接近中性且潮湿的土壤取样。
②取样部位：距地表约3～8cm的土壤层。
甲：没有重复实验，不具说服力（至少涂布3个平板）
乙：21这个结果误差过大，不应用于计算平均值
（3）注意事项：
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的 平板上进行计数。
②为使结果更准确，可将同一稀释度涂布三个或三 个以上的培养皿中，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。因此， 统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
解析 链霉素是抗生素，可抑制细菌生长，故在M培养基中加入链霉素)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质 类型除氮源外还有_碳__源__、__无__机__盐__(答出两点即可)。氮源进入细胞后，可参 与合成的生物大分子有_蛋__白__质__、__核__酸__(答出两点即可)。
（二）、统计菌落数目
1、显微镜直接计数：
利用血细胞计数板， 在显微镜下计算一定容积 里样品中微生物的数量的 方法。
在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上 所形成的一个菌落是由一个活菌繁殖而成的，即 一个菌落代表原先的一个活菌。
（2）计算公式：
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml) M：代表稀释倍数
例：P22 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有 问题，错在哪？
这个实例可以看出，实验结果要有说服力， 对照的设置是必不可少。
3 实验设计
实验 流程
1 土壤取样 2 制备培养基 3 样品稀释涂布平板 4 微生物的培养与观察
5 菌落计数
1、土壤取样 “微生物的天然培养基”
①取样条件：从肥沃、富含有机质的土壤表层，酸 碱度接近中性且潮湿的土壤取样。
②取样部位：距地表约3～8cm的土壤层。
甲：没有重复实验，不具说服力（至少涂布3个平板）
乙：21这个结果误差过大，不应用于计算平均值
（3）注意事项：
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的 平板上进行计数。
②为使结果更准确，可将同一稀释度涂布三个或三 个以上的培养皿中，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。因此， 统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。
解析 链霉素是抗生素，可抑制细菌生长，故在M培养基中加入链霉素)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质 类型除氮源外还有_碳__源__、__无__机__盐__(答出两点即可)。氮源进入细胞后，可参 与合成的生物大分子有_蛋__白__质__、__核__酸__(答出两点即可)。
（二）、统计菌落数目
1、显微镜直接计数：
利用血细胞计数板， 在显微镜下计算一定容积 里样品中微生物的数量的 方法。
2018版高中生物人教版选修1课件：2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
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课题2 土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数
一二三四
目标导航
Z Z D 知识梳理 HISHISHULI
重难聚焦
HONGNANJUJIAO
典例透析
IANLITOUXI
2.设置对照 对照的设置也会增加实验结果的可信度和说服力。在该实验中, 可在配制培养基时,准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基两种培 养基,牛肉膏蛋白胨培养基作为对照,用来判断选择培养基是否起 到了选择作用,在相同的稀释度下,牛肉膏蛋白胨培养基上生长的 菌落数应明显多于选择培养基上生长的菌落数。另外,要设置空白 对照,即在培养基中不加土样,如果空白对照的培养基上没有菌落 生长,则说明培养基没有被杂菌污染。
-15-
课题2 土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数
目标导航
Z Z D 知识梳理 HISHISHULI
重难聚焦
HONGNANJUJIAO
典例透析
IANLITOUXI
题型一 题型二 题型三
题型一 选择培养基的特点与应用 【例题1】 甲、乙、丙是三种微生物,下表Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ是用来培 养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖;甲 能在Ⅰ中正常生长繁殖,而乙和丙都不能;乙能在Ⅱ中正常生长繁 殖,甲、丙都不能。下列说法正确的是( )
粉状
硫
K2HPO4 FeSO4 4 g 0.5 g
10 g
Ⅰ+ +
+
Ⅱ+ +
+
Ⅲ+ +
+
蔗糖 (NH4)2SO4 10 g 0.4 g
H2O 100 mL
MgSO4 9.25 g
+-
++
生物：2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》课件(新人教版选修1)
原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大 多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。
启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找。
2、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营 养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生 物生长。 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点， 包括营养、生理、生长条件等； 方法： ⑴抑制大多数微生物不能生长 ⑵造成有利于该菌生长的环境， 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过 平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。
3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培 养基：
KH2PO4 NaH2PO4 MgSO4`7H2O
葡萄糖
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g
尿素
1.0g
琼脂
15.0g
①从物理性质看此培养基属于哪类？
固体培养基
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 5、培养基选择分解尿素的微生物的原理
结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不
同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地 提供选择培养的条件。
㈣.取样涂布
◆实验时要 对培养皿作 好标记。注 明培养基类 型、培养时 间、稀释度、 培养物等。
◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板， 则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如 果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试 验不精确，需要重新实验。
TIP2：什么叫认知获取：知道一些概念、过程、信息、现象、方法，知道它们 大 概可以用来解决什么问题，而这些东西过去你都不知道；
TIP3：认知获取是学习的开始，而不是结束。
为啥总是听懂了， 但不会做，做不好？
启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找。
2、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营 养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生 物生长。 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点， 包括营养、生理、生长条件等； 方法： ⑴抑制大多数微生物不能生长 ⑵造成有利于该菌生长的环境， 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过 平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。
3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培 养基：
KH2PO4 NaH2PO4 MgSO4`7H2O
葡萄糖
1.4g 2.1g 0.2g 10.0g
尿素
1.0g
琼脂
15.0g
①从物理性质看此培养基属于哪类？
固体培养基
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 5、培养基选择分解尿素的微生物的原理
结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不
同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地 提供选择培养的条件。
㈣.取样涂布
◆实验时要 对培养皿作 好标记。注 明培养基类 型、培养时 间、稀释度、 培养物等。
◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板， 则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如 果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试 验不精确，需要重新实验。
TIP2：什么叫认知获取：知道一些概念、过程、信息、现象、方法，知道它们 大 概可以用来解决什么问题，而这些东西过去你都不知道；
TIP3：认知获取是学习的开始，而不是结束。
为啥总是听懂了， 但不会做，做不好？
人教版选修1土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件19张
（2）计算
每克样品中的菌落数＝(C ÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌 落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积 (ml) ，M代表稀释倍数。
阅读课本22页中间的资 料并思考问题作出回答
说明设置重复组的重要性。 在设计实验时，一定
要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力 与准确性 。在分析实验结果时， 一定要考虑所设置的重复 组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要 重新实验。
菌落形状、大小、隆起程度和颜色
三、
[一]无菌操作 1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥 形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品 的稀释度等。（皿底旁边标记） [ 三]规划时间
（三）. 微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
（四）细菌计数和计算
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
课题二
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
研究思路
? 筛选菌株 ? 统计菌落数目
? 设置对照
㈠. 筛选菌株
1 、实例： PCR技术 DNA 多聚酶链式反应是 一种在体外将少量DNA 大量复制(PCR) 的技术 ，此项技术要求使用耐 高温（93 0C ）的DNA 聚 合酶。
原因：因为热泉温度70 ～80 0C ，淘汰了绝大 多数微生物只有Taq 细菌被筛选出来。
每克样品中的菌落数＝(C ÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌 落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积 (ml) ，M代表稀释倍数。
阅读课本22页中间的资 料并思考问题作出回答
说明设置重复组的重要性。 在设计实验时，一定
要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力 与准确性 。在分析实验结果时， 一定要考虑所设置的重复 组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要 重新实验。
菌落形状、大小、隆起程度和颜色
三、
[一]无菌操作 1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥 形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品 的稀释度等。（皿底旁边标记） [ 三]规划时间
（三）. 微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
（四）细菌计数和计算
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
课题二
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
研究思路
? 筛选菌株 ? 统计菌落数目
? 设置对照
㈠. 筛选菌株
1 、实例： PCR技术 DNA 多聚酶链式反应是 一种在体外将少量DNA 大量复制(PCR) 的技术 ，此项技术要求使用耐 高温（93 0C ）的DNA 聚 合酶。
原因：因为热泉温度70 ～80 0C ，淘汰了绝大 多数微生物只有Taq 细菌被筛选出来。
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2、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营 养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生 物生长。 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点， 包括营养、生理、生长条件等； 方法： ⑴抑制大多数微生物不能生长 ⑵造成有利于该菌生长的环境， 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过 平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。
1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（ A ） A.在液体培养基上进行 B.至少接种一种细菌 C.接种一个细菌 D.及时补充消耗的营养物质 2.使用选择培养基的目的是（ C ） A.培养细菌 B.培养真菌 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别 3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是 ( D) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素
5.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中 加入（ C ） A.较多的氮源物质 B.较多的碳源物质 C.青霉素类药物 D.高浓度食盐
例3．（2005年江苏）抗生素作为治疗细菌感 染的药物，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业 经久不衰。其中青霉素的发现和应用具有划时代的意 义。 ⑴青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型 次级 是 异养需氧型 ，青霉素是青霉菌的 代谢产物。 ⑵在生产和科研中，常选用处于 对数 期的青霉菌作 为菌种或研究材料，因为此时的青霉菌代谢旺盛， 和 个体的形态 比较稳定。 生理特性 ⑶对青霉菌菌体生长情况的测定：取一定体积的发 酵液，经离心分离、反复洗涤后， 称菌体的湿重 ，再计算 （称烘干后的重量） 发酵罐中菌体的总重量。
专题2 微生物的培养与应用 课题2 土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数
一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农 作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才 能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因
土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2)
脲酶
NH3 + H2O + CO2
3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培 养基： KH2PO4 1.4g NaH2PO4 2.1g MgSO4`7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基
②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？
碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 4、培养基选择分解尿素的微生物的原理 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物 才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微 生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发 育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选 择出分解尿素的微生物。
方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验
结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误； 如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养 基的配制有问题。 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情 况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是 否受到污染。 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有 说服力，对照的设置是必不可少的。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M
其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平 均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液 的体积(ml)，M代表稀释倍数。
注意事项
①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30— —300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三 个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出 菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以 三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌 落数在50个左右为最好。
㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里 样品中微生物的数量。
缺点
不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培 养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖 而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。
二.实验的具体操作
㈠.土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层 土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用
前都要灭。
[三]样品的稀释
◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行
四、操作提示
无菌操作 做好标记 规划时间
五.课外延伸
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH 升高，指示剂将变红，说明该细菌能够 分解尿素。
测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水 用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红美蓝 培养 基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出 水样中大肠杆菌的数量。
实践训练
4.下列说法不正确的是（ B ） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚 合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、 M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因 素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大， 种类最多。
㈤.微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
微生物的培养与观察
3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、 棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌 也能分解尿素。
4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌
②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
一.研究思路
㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照
1、实例： DNA多聚酶链式反应是 一种在体外将少量DNA 大量复制的技术，此项 技术要求使用耐高温 （930C）的DNA聚合酶。 原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大 多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找。
大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上典型特征
大肠杆菌呈 黑色中心 ,有或无金属光泽
本课题知识小结:
例2．在微生物群体生长规律的测定中，种内 斗争最显著最激烈的时期是 答案：C A．调整期 B．对数期 C．稳定期 D．衰亡期
解析：种内斗争是一种生态因素。种内斗争反应了种内生物 对生存空间和生活资源的争夺。在生活空间充裕，营养充足的时 候，种内斗争的程度是比较低的。随着微生物个体数目的增加， 每个个体的生存空间越来越少，营养物质也越来越少，每个个体 对生存空间和资源的争夺也越来越激烈，种内斗争就越来越激烈。 由此可知，在稳定期的种内斗争最激烈。在衰亡期，微生物的数 目已经开始减少，pH已经极度不适于微生物的生存，次级代谢产 物积累到很高的程度，这时的微生物的生存斗争主要是与无机环 境的斗争。
三.结果分析与评价
1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染， 菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则 菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出 分解尿素的微生物。 2.提示：选择每个平板上长有30—300个 菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。 同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相 差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。
原因：土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）
㈣.取样涂布
◆实验时要 对培养皿作 好标记。注 明培养基类 型、培养时 间、稀释度、 培养物等。
◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板， 则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如 果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试 验不精确，需要重新实验。
◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于 计数的平板
为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？ 测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素 的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中： 好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数 约为477万，霉菌数约为23.1万。 结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不 同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地 提供选择培养的条件。
㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素 对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数 目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基 中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样 的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。 原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或 者是混入了其他的含氮物质)