植物花粉生活力测定技术
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉是植物生殖过程中非常重要的一环，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。
花粉生活力测定方法是通过一系列的实验和观察，来评估花粉的生长和发育能力，从而为植物的繁殖提供科学依据。
本文将介绍几种常见的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和爱好者有所帮助。
首先，传统的花粉生活力测定方法是通过染色观察花粉管的生长情况。
首先，将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察花粉管在一定时间内的生长情况，通过显微镜观察花粉管的长度和形态，从而评估花粉的生活力。
这种方法简单直观，但需要显微镜等设备，且操作较为繁琐。
其次，现代的花粉生活力测定方法中，常用的是荧光显微镜观察法。
通过将花粉与特定的荧光染料结合，使花粉在荧光显微镜下呈现出特定的荧光信号，从而可以清晰地观察花粉管的生长情况。
这种方法操作简便，观察效果明显，对于大规模的花粉生活力测定具有很大的优势。
另外，还有一种常见的花粉生活力测定方法是通过花粉萌发率来评估花粉的生活力。
这种方法是将采集到的花粉悬浮在含有营养液的培养基中，然后观察一定时间内花粉的萌发情况，通过统计萌发的花粉数量来评估花粉的生活力。
这种方法简单易行，可以在较短的时间内获取较为准确的结果。
除了上述几种方法外，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，如分子生物学技术的应用、电子显微镜的观察等，这些方法在花粉生活力测定领域也取得了一些重要的进展。
综上所述，花粉生活力测定是植物繁殖和生长研究中的重要内容，而花粉生活力的准确测定则需要科学、准确的方法。
不同的方法各有优劣，研究者可以根据具体的实验目的和条件选择适合的方法进行花粉生活力的测定，从而为植物繁殖和生长研究提供可靠的数据支持。
希望本文介绍的几种常见的花粉生活力测定方法对相关领域的研究者和爱好者有所帮助，也希望在未来的研究中能够有更多更准确的花粉生活力测定方法被发展和应用。
花粉活力测定的3种办法
精心整理实验16?花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。
掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法【原理】水放???????1.用。
2.20℃条???????1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
二、碘-碘化钾染色测定法多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。
因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】???显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
???【试剂】-KI300ml。
???I2～3张片??基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲??）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。
【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
【试剂】0.5%TTC溶液：称取0.5gTTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。
溶液避光保存，若发红时，则不能再用。
采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉生活力测定方法是一种评估人们对花粉过敏的程度和生活质量的指标。
它通过采用定量和定性的方法来测定人体对花粉的反应和影响，以便为患者提供相应的治疗和干预措施。
下面我将详细介绍花粉生活力测定方法的原理和步骤。
首先，花粉生活力测定方法需要进行花粉源的采集和制备。
花粉源可以是空气中的自然环境采集或人工培养的花粉。
采集后，需要将花粉样本进行处理和制备，包括去除杂质和保持花粉的活力。
其次，花粉生活力测定方法中常用的技术是皮试和血清学检测。
皮试是一种常用的检测方法，主要通过在患者皮肤表面划一道小口，然后将一定浓度的花粉溶液滴在皮肤上，观察皮肤是否出现过敏反应，如红肿、瘙痒等。
这种方法简单快捷，可以初步筛查患者的过敏反应。
血清学检测是通过采集患者的血液样本，检测血清中花粉特异性IgE抗体水平来评估过敏反应的程度。
常用的检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光试验（IFA），这些方法可以检测到血液中特定花粉过敏原的抗体水平，并根据抗体浓度的高低来评估患者的过敏程度。
除了皮试和血清学检测，还可以进行生活质量评估。
这是一种主观的方法，通常通过问卷调查的方式，询问患者对花粉过敏的影响程度和日常生活质量的变化。
问卷通常包括患者的症状、疾病活动、工作和学习能力、社交活动和睡眠质量等方面的评估，以便评估花粉过敏对患者生活的影响。
最后，花粉生活力测定方法可以通过统计分析和数据处理来得出评估结果。
根据皮试和血清学检测的结果、生活质量评估和患者的症状表现等，可以综合评估花粉过敏的程度和生活质量的变化。
这些评估结果可以帮助医生为患者制定个性化的治疗方案，包括药物治疗、免疫疗法和生活调整等。
综上所述，花粉生活力测定方法是评估人们对花粉过敏的程度和生活质量的一种指标。
通过采用皮试和血清学检测、生活质量评估等方法，可以全面分析患者的过敏反应和生活质量的变化，为患者提供针对性的治疗和干预措施。
这种方法对于花粉过敏的预防和管理具有重要的临床意义。
2实验二、花粉生活力测定
前 言
花粉生活力测定在育种 力 2．雄性不育系的鉴定
实验目的：
学习并初步掌握作物花粉生 活力测定的常用方法
测定方法:
（一）I-KI染色鉴定
（二）TTC染色鉴定
（三）花粉粒发芽鉴定
实验方法 I-KI染色鉴定：
正常的成熟花粉粒体积较大， 并含有大量的淀粉粒，遇I-KI 呈紫黑色，不正常的花粉粒体 系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。
实验方法 TTC染色鉴定：
具有生活力的花粉中含有 脱氢酶，它能催化引物使脱下 的氢与TTC结合，生成红色化 合物甲替。凡有生活力的花粉 呈红色，生活力弱的呈浅红色， 无生活力的不显色或成黄色。
实验方法
花粉粒发芽鉴定：
在人工培养基上进 行发芽试验，可以比较 准确地判断花粉的生活 力。
实验步骤
I-KI染色鉴定：
2 ．准备 TTC 染色和发芽试验的材料， 置培养箱保温； 3．调试显微镜，I-KI染色鉴定； 4．TTC染色鉴定、发芽率调查。
作业
实验三、作物花粉生活力测定 1．测定方法和原理： （一）I-KI染色鉴定：正常的成熟花粉粒体积较大，并含有大量的淀粉 粒，遇I-KI呈紫黑色，不正常的花粉粒体系较小、有时畸形、染色浅或 不染色。 （二）TTC染色鉴定：具有生活力的花粉中含有脱氢酶，它能催化底物 使脱下的氢与TTC（氯化三苯基四氮唑）结合，生成红色化合物甲替。 凡有生活力的花粉呈红色，生活力弱的呈浅红色，无生活力的不显色或 成黄色。 （三）花粉粒发芽鉴定：在人工培养基上进行发芽试验，可以比较准确 地判断花粉的生活力。 2．实验结果： 材料 I-IK染色率% TTC染色率% 发芽率%
用镊子夹一个花药于载玻片 上滴上一滴1%I-KI溶液 用镊子将花药夹碎并把碎片 去干净盖上盖玻片置显微 镜下观察。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉是植物生殖的重要组成部分，其生活力的测定对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
本文将介绍几种常用的花粉生活力测定方法，希望能够对相关领域的研究者和生产者有所帮助。
首先，最常见的花粉生活力测定方法是离体培养法。
这种方法首先需要收集新鲜的花药，然后在适当的培养基上进行培养，观察花粉的萌发情况来判断其生活力。
离体培养法的优点是操作简单，结果可靠，因此被广泛应用于植物育种和种子生产中。
其次，荧光显微镜法也是一种常用的花粉生活力测定方法。
这种方法利用荧光显微镜观察花粉颗粒的形态和结构，通过判断其内部结构的完整性来评估花粉的生活力。
荧光显微镜法对花粉的观察更加直观，能够提供更多的信息，但需要专业的设备和操作技能。
另外，还有一种叫做染色法的花粉生活力测定方法。
这种方法通过在花粉颗粒上涂抹特定的染料，然后观察染色情况来判断花粉的生活力。
染色法简单易行，可以快速得到结果，但对染料的选择和浓度有一定要求。
除了上述方法，还有一些新兴的花粉生活力测定方法，比如电子显微镜法、流式细胞仪法等。
这些方法在技术上更加先进，能够提供更为精细的数据，但也需要更高的成本和专业的操作技能。
综上所述，花粉生活力的测定对于植物育种和种子生产具有重要意义，而不同的方法各有优劣。
在选择具体的测定方法时，需要根据实际情况和研究目的进行综合考虑，以便选择最适合的方法。
希望本文介绍的内容能够对相关领域的研究者和生产者有所启发，推动相关领域的科研工作和生产实践取得更好的成果。
花粉活力测定
花粉活力测定一、实验原理：TTC染色法——TTC（2，3，5－三苯基氯化四氮唑）的氧化态是无色的，可被氢还原成不溶性的红色三苯甲潛（TTF）。
用TTC的水溶液浸泡花粉，使之渗入花粉内，如果花粉具有生命力，其中的脱氢酶就可以将TTC作为受氢体使之还原成为红色的TTF；如果花粉死亡便不能染色；花粉生命力衰退或部分丧失生活力则染色较浅或局部被染色。
因此，可以根据花粉染色的深浅程度可鉴定花粉的生命力。
培养基萌发法——常的成熟花粉粒具有较强的活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长，在显微镜下可直接观察计算其萌发率，以确定其活力。
二、实验仪器：载玻片、盖玻片、显微镜、镊子、毛笔、滤纸、培养皿、三角瓶、天平、烧杯、恒温箱、量筒、吸管三、实验药品：0.5%TTC溶液、琼脂、硼酸、氯化钙、蒸馏水、蔗糖（浓度分别为5%、10%、15%、20%）四、实验步骤：TTC法：将采集到的花粉（虞美人、三色堇），取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，并用清水做对照，置37℃恒温箱中，30min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
每片取3个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
培养基萌发法： 1.将培养基熔化后，用吸管蘸少许，涂布在载玻片上 2.将花粉（虞美人、三色堇）洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，置于25℃左右的恒温箱中，24小时后在显微镜镜检，每片取3个视野，统计其萌发率。
五、实验结果：TTC 法：虞美人花粉活力——26.1% 三色堇花粉活力——23% 培养基萌发法：蔗糖浓度5% 10% 15% 20% 虞美人花粉活力 1.3% 0.79% 2.2% 9.6% 三色堇花粉活力8.7% 22.2% 46.9% 32.8% 六、结果分析：1、TTC法：三色堇花粉染色在30分钟时观察时基本没有染色，50分钟左右观察，才有明显染色的划分出现，原因可能是花粉对TTC的敏感度不同2、培养基萌发法：不同糖浓度下花粉的萌发率不同，虞美人花粉在20%的糖浓度下活力最强，三色堇花粉在15%的糖浓度下活力最强。
实验：园艺植物花粉生活力测定
天竺葵柱头上的花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
蒂氏荚蒾花粉（灰色) 其中一个已开始萌发
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
勿忘草的花粉 最小的花粉粒之一，直径只有0.005毫米
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花锦葵属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
桦树的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
柳树花粉粒
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
染色者为发育不良、生活力弱的花粉。观察3~4个视野，
五、方法步骤：
（三）花粉生活力试验
3.取另一载玻片，加少量同种待测花粉，然后在花
粉上滴试剂Ⅰ和试剂Ⅱ各一滴，仔细搅匀，盖上盖
玻片，用镊子轻轻压实。经3～4分钟后，放在显微
镜下检查。
有生活力的花粉呈红色或玫瑰色，无生活力的 花粉为黄色或无色，连续观察3～4个视野，分别记 录有生活力及无生活力的花粉数。
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
凤梨科植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉生活力是指花粉颗粒的活力和生长能力，是衡量植物繁殖成功的重要指标。
花粉生活力测定方法是一种用来评估花粉质量和活力的技术手段，对于植物繁殖和种子生产具有重要意义。
传统的花粉生活力测定方法主要包括花粉染色观察法、花粉萌发率测定法和花
粉活力染色法。
花粉染色观察法是将花粉染色后在显微镜下观察其形态和数量，从而评估花粉的活力和质量。
花粉萌发率测定法则是将花粉培养在适宜的培养基上，观察其萌发情况以评估花粉的活力。
花粉活力染色法则是利用染色技术来观察花粉内部的活力指标，如线粒体和细胞核的活跃程度。
随着科学技术的发展，现代的花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。
比如，利用生物技术手段对花粉进行基因测序和分析，可以更准确地评估花粉的生活力和遗传信息。
同时，利用先进的显微镜和成像技术，可以对花粉的微观结构和形态进行更精细的观察和分析。
花粉生活力测定方法的发展不仅有助于科学家和植物育种者更好地了解植物的
繁殖机制和生长规律，也为农业生产和生态保护提供了重要的技术支持。
通过准确评估花粉的生活力，可以选择出高质量的花粉进行人工授粉或者种子生产，从而提高植物的繁殖成功率和产量。
此外，对花粉生活力的准确测定也有助于保护植物遗传资源，促进植物多样性的保护和利用。
总之，花粉生活力测定方法是一项重要的植物科学技术，它为我们深入了解植
物繁殖机制和提高农业生产效率提供了重要的技术手段和支持。
随着科学技术的不断进步，相信花粉生活力测定方法将会在未来发挥更加重要的作用。
花粉活力测定的3种方法
欢迎阅读实验16?花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。
掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法90ml 水放???????1.用。
2.采集丝瓜、南瓜或其他葫芦科植物刚开放或将要开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在25℃左右的恒温箱（或室温20℃条件下）中孵育，5~10min 后在显微镜下检查5个视野，统计其萌发率。
????【注意事项】???1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
-KI溶I2??????【试剂】-KI溶液：取300ml。
???I2贮于棕色瓶中备用。
【方法】采集水稻、小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药，取一花药于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子将花药捣碎，使花粉粒释放，再加1～2滴I2-KI溶液，盖上盖玻片，在显微镜下观察。
凡是被染成蓝色的为含有淀粉的活力较强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。
观察2～3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的育性。
??【注意事项】此法不能准确表示花粉的活力，也不适用于研究某一处理对花粉活力的影响。
因为三核期退化的花粉已有淀粉积累，遇碘呈蓝色反应。
另外，含有淀粉而被杀死的花粉粒遇I2-KI也呈蓝色。
氯化三苯100ml【方法】?采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
实验一 花粉生活力的测定
【思考题】 1 用染色法计算花粉生活力（3个视野）。用 发芽法计算花粉生活力（3个视野）。 2 同一品种花粉用不同方法测定时其生活力 高低的结果分析。
【实验方法与步骤】 鉴定花粉生活力的方法有很多，概括起来 不外下列几种：一是将待测花粉直接授粉， 最后计算结实数和结籽数；二是将花粉授 到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微 镜下观察花粉萌发情况，测定萌发率；三 是形态观察；四是染色观察；五是在人工 培养基上播种花粉，观察萌发率。
1 形态观察法 一般把具有品种典型性的花粉（指具有该 品种花粉粒的大小、形态和色泽等）作为 具有生活力的花粉，把小型的、皱缩的、 畸形的作为无生活力的花粉。 形态观察的具体方法是：首先将花粉置于 载玻片上，在显微镜下查看三个视野，要 求被检查的花粉粒总数达100粒以上，计算 正常花粉粒占总数的比率。此法简便易行 但准确性差，通常只用于测定新鲜花粉的 生活力。
通常花粉的形态、花粉中酶的活性以及积 累淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉生活 力密切相关，因此可以利用花粉的形态观 察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀 扮的含量以及在人工培养基上花粉管萌发 的情况作为确定花粉生活力高低的标准。
【实验材料、主要仪器及试剂】 1 实验材料 各种园林植物的花粉。如百合、牡丹、凤仙花、 柳树、菊花、月季、凤仙花、紫茉莉等植物的花 粉。 2 主要仪器 载玻片、凹玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、棉球、 显微镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培养皿、玻璃 棒、玻璃铅笔、凡士林、标签、冰箱。 3主要试剂 碘-碘化钾、氯化三苯基四氮唑、 Na2HPO4· 2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、 H3BO3，Ca（NO3）2，MgSO4，KNO3。
（2）培养基发芽法 a．培养基的制备：在250 mL的烧杯中加 入90 mL蒸馏水，再加入1g的琼脂，在酒精 灯上加热，使之完全熔解，然后加入10g蔗 糖，制成10％的糖液（如有可能，可配置 不同含糖量的培养基，进行比较试验）。 注意用玻璃棒不断搅拌，使其融化均匀， 有条件时还可加入微量柱头渗出液、维生 素等以形成花粉粒发芽的最适环境条件。
花粉生活力检测
植物花粉保存与花粉生活力的测定一、实验目的了解花粉生活力测定的一般方法，并掌握培养法测花粉生活力。
二、实验原理不同的植物成熟花粉的生命力长短不一，在自然状态下，成熟花粉有些存活仅数小时，有的课长达1个多月。
通过在干燥、低温、密封等的条件下保存，花粉的呼吸作用被抑制，生活力得以延长。
进行杂交人工授粉前，常对父母本花粉尤其是经过保存的花粉进行生活力测定。
其方法有：形态鉴定、TTC染色法鉴定、花芽萌芽鉴定等。
（1）形态鉴定除饱满、圆形的正常外，其他都不正常。
（2）TTC染色法鉴定脱氢辅酶存在于活的细胞内，当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTE)。
当细胞死亡后，NADH会迅速被降解，不会发生相应的颜色反应，故TTC染色法可显示细胞是否存活。
（3）花芽萌发鉴定将花粉置于合适的培养基上进行培养，花粉即可萌发出花粉管，发芽率可作为花粉生活力的检测指标三、实验材料、药品和器具1、实验材料兰花毛豌豆和葛藤正在开放的花2、药品和器具显微镜、凹式载玻片、培养皿、盖玻片、镊子、解剖针、蔗糖硼酸悬浮培养基四、实验内容1、花粉的保存（1）短期保存：低于4°C，冰壶中保存长期保存：（2）长期保存：干燥器中干燥24h，自由水含量低于1%，用石蜡封口，低于1°C的冰箱中保存2、花粉生活力的测定（花粉萌发鉴定法或称培养法）（1）用滴管滴1小滴蔗糖硼酸悬浮培养基于盖玻片上，注意不要滴到边缘，以免与载玻片凹面边缘接触。
(2)取兰花毛豌豆和葛藤正在开放的花的雄蕊，将雄蕊在培养基里反复涂抹几次，让花粉散落在培养基表面。
(3)迅速将盖玻片翻转，放置于凹式载玻片上，让培养基悬浮在凹式载玻片的凹面处，注意不要让培养基接触凹面边缘。
(4)每一个植物做两个重复，放置在显微镜下观察花粉形态。
20min后，观察并花粉发芽状况。
五、实验结果将实验结果填入花粉生活力测定实验记录表处理重复视野Ⅰ视野Ⅱ合计花粉粒数发芽粒数发芽率/%花粉粒数发芽粒数发芽率/%花粉粒数发芽粒数发芽率/%兰花毛豌豆重复Ⅰ70 65 92.8 65 60 92.3 135 125 92.6 重复Ⅱ80 76 95.0 74 70 94.6 154 146 94.8 合计150 141 94.0 139 130 93.5 289 271 93.8葛藤重复Ⅰ40 35 87.5 35 30 85.7 75 65 86.7 重复Ⅱ42 36 85.7 38 31 81.6 80 67 83.8合计82 71 86.6 73 61 83.6 155 137 88.4六、注意事项1、用滴管向盖玻片滴培养基时，要尽量滴在盖玻片中央，要避免液体培养基接触载玻片凹面边缘部分。
花粉生活力测定
（三）TTC法：（染色法） TTC即2、3、5-三苯基四唑氯化物。主要原理在于检验花 粉呼吸过程中脱氢酶的活性。2、3、5-氯化三苯基四氮唑 (TTC)的氧化状是无色的，被氢还原时成红色的TTF。 具有活力的花粉呼吸作用较强，由于呼吸作用产生的氢能 使TTC还原成TTF，因此花粉便染成红色；而无生命的花 粉没有呼吸代谢活力，TTC不被还原，因而不着色。所以， 可根据花粉染不染成红色来判断有无生命力，从而测定花 粉生活力。
（二）联苯胺法：（染色法）
具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。此酶能利 用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色， 依据颜色可知花粉有无活性。实验中甲液成分为联苯胺， α-萘酚、碳酸钠，乙液成分为过氧化氢。
H2O2 + 酚
（无色）
过氧化氢酶
醌 + H2O
（红色、玫瑰红色）
1、配制药液 a．0.2克联苯胺溶于100毫升50%的酒精溶液； b．0.15克a-萘酚溶于100毫升50%酒精溶液； c．0.25克的碳酸钠溶解在100毫升的蒸馏水中。 以上三种溶液分别放入棕色瓶中备用 d.使用时将这三种溶液等量配成“甲液”，放入棕色滴瓶中 备用， e.将过氧化氢用蒸馏水稀释成0.3%的溶液作为“甲液”，随 配随用。 2、观察 取花粉少许撒入凹型载玻片，然后在花粉上滴“甲液”一滴， 片刻后，再滴入“乙液” 一滴，仔细搅匀，盖上盖玻片。 经3～5分钟后，再放在显微镜下检查。 有生活力的花粉呈红色或玫瑰红色，不着色者为无生活力的 花粉。为了确定具有生活力的花粉百分率，要连续观察3～5 个视野，求其平均值，将观察结果填入表内。
配置培养基（ 100ml水+1g+琼脂+0.01g硼酸+ 5-20g糖 ） 煮沸溶化 用玻棒分装与凹玻片中 播撒花粉 置于培养皿中20-25℃恒温培养数小时 保持湿度 在显微镜下镜检计数
植物花粉生活力测定技术
在育种工作中，有时需要将花粉保存一段时间。虽然人们已经知道，花粉保存以温度较 低（0～15℃），空气湿度稍干（不能太干）、黑暗条件下为宜。但是各种不同植物花粉寿命 长短相差悬殊，这一是由花粉本身的特征决定的，二是由贮藏条件决定的。一般来说，禾谷 类作物花粉的寿命较短，自花授粉植物花粉的寿命尤其短，如小麦在花药开裂后 30min，花 粉即由鲜黄色变为深黄色，此时已有大量花粉丧失活力。在许多特殊条件下，花粉的生活力 的测定显的很重要，如：
一、试材及用具
1．材料：几种植物的不同处理花粉；如：小麦、玉米、大白菜、黄瓜、杏、苹果等。 2．试剂：配制好的缓冲液、联苯胺液、过氧化氢液、TTC 粉、蔗糖、琼脂等； 3．用具：显微镜、载玻片、盖玻片、凹面载玻片、玻璃棒、擦镜纸、吸水纸、标签纸、 铅笔。
二、方法步骤
（一）直接检验法 每个实验小组选定同品种种株去雄。注意：选用的花蕾最好是花前 1～2d，且发育正常、 饱满。每天去雄 20 个花蕾，然后套袋隔离，连续 5d，共 100 朵花。这一实验要和花粉贮藏 实验相配合，即花粉贮藏的当天开始去雄。授粉时，每去雄一次，分别授以两种不同贮藏条 件下的花粉（各 10 朵），连续 5d，就使得贮藏期分别为当天、第二天、第三天、第四天、 第五天的花粉授到了去雄后的花蕾上。实验时，一定要挂牌标好品种、花粉贮藏期、贮藏条 件、株号、授粉日期、授粉人。等最后一个处理完后十天，检验结实率和结籽率。将得到的 结果填入表 1－6。 （二）染色鉴定法（TTC 法） TTC 即 2、3、5－三苯基四唑氯化物。主要原理在于检验花粉呼吸过程中去氧酶的活性。 具有生活力的花粉的脱氢酶，在催化去氢的过程中，把氢转移到其他的物质上去，使用 TTC 与催化过程中产生的氢结合成红色化合物，从而使具有生活力的花粉变为红色。 1．先配制下列溶液 （1）磷酸缓冲液：在 100 毫升的蒸馏水中，溶解 0.832 克的磷酸氢二钠和 0.273 克的磷 酸二氢钾，调整 PH 值为 7.17。
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法花粉生活力是指花粉颗粒在一定条件下保持生活状态并完成受精的能力。
花粉生活力的测定对于植物的繁殖和育种具有重要意义。
下面将介绍几种常用的花粉生活力测定方法。
1. 离体培养法。
离体培养法是一种常用的花粉生活力测定方法。
首先需要收集新鲜花朵，取出花药，然后将花药中的花粉颗粒悬浮在含有营养物质的培养基上进行培养。
在适宜的温度和湿度条件下，观察花粉颗粒的萌发和生长情况，从而判断花粉的生活力。
这种方法简单易行，能够直观地观察花粉的生活状态。
2. 着色法。
着色法是另一种常用的花粉生活力测定方法。
该方法使用活性染料或染色剂对花粉颗粒进行染色，然后观察染色后的花粉颗粒对染色剂的反应情况。
通过观察染色颗粒的颜色变化和形态特征，可以判断花粉颗粒的生活力。
这种方法操作简便，结果直观，适用于大规模的花粉生活力测定。
3. 离体染色法。
离体染色法是一种较为精细的花粉生活力测定方法。
该方法首先将花粉颗粒置于含有染色剂的培养基中进行染色，然后观察染色颗粒的颜色变化和形态特征。
通过观察染色颗粒的反应情况，可以准确地判断花粉颗粒的生活力。
这种方法需要较为精细的操作和观察，但结果准确可靠。
4. 离体培养-染色法。
离体培养-染色法是一种结合了离体培养和染色法的花粉生活力测定方法。
该方法首先将花粉颗粒进行离体培养，然后在培养基中加入染色剂进行染色，最后观察染色颗粒的反应情况。
通过结合离体培养和染色的方法，可以更准确地判断花粉颗粒的生活力。
这种方法需要较为复杂的操作，但结果具有较高的准确性。
总结。
花粉生活力的测定对于植物的繁殖和育种具有重要意义，而不同的测定方法各有优劣。
离体培养法简单易行，适用于初步的花粉生活力测定；着色法操作简便，适用于大规模的花粉生活力测定；离体染色法结果准确可靠，适用于精细的花粉生活力测定；离体培养-染色法结合了离体培养和染色的优点，结果具有较高的准确性。
选择合适的花粉生活力测定方法，可以为植物的育种工作提供有力的支持。
实验：园艺植物花粉生活力测定
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
凤梨科植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
爵床属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
桤木(桦树家族成员)的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
松树的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内， 花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶中，瓶口上塞以棉 花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。 把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在相对湿度较 低（一般0～40%）、低温（0～4℃）黑暗的条件 下贮藏。 用室温、正常空气湿度贮藏的花粉作对照。
五、方法步骤：
（二）药品配制
三、说明：
父母本花期不一致时，花粉需要经过 一段时间的贮藏；从外地采集花粉做父本 时，花粉要经过运输、邮寄过程。
因此在杂交前应检验花粉的生活力， 以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作 的失败。
四、实验原理：
1.碘-碘化钾染色法
正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则
较少。正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良
花锦葵属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花粉生活力测定方法
花粉生活力测定方法
花粉是植物繁殖的重要媒介，其生活力的测定对于植物繁殖和生长具有重要意义。
近年来，随着科学技术的不断发展，花粉生活力测定方法也得到了不断的改进和完善。
传统的花粉生活力测定方法主要包括离体花粉萌发试验、花粉染色观察、花粉活力染色观察等。
这些方法虽然可以初步判断花粉的生活力，但存在着操作繁琐、结果不稳定、时间周期长等问题，限制了其在实际应用中的发展。
近年来，随着生物技术和显微镜技术的不断进步，新型的花粉生活力测定方法逐渐被引入。
比如，利用荧光显微镜观察花粉萌发情况，结合数字图像处理技术进行分析，可以快速、准确地测定花粉的生活力。
另外，利用生物标记技术对花粉进行标记，然后观察其在植物受精过程中的行为，也可以对花粉的生活力进行评估。
除了显微镜技术和生物标记技术，分子生物学技术在花粉生活力测定中也发挥了重要作用。
通过分析花粉中的基因表达情况、蛋白质组成等，可以更直观地了解花粉的生活力情况，为植物繁殖提供更准确的数据支持。
综上所述，随着科学技术的不断发展，花粉生活力测定方法也在不断完善和创新。
新型的测定方法不仅提高了测定的准确性和稳定性，同时也为植物繁殖和生长研究提供了更多的可能性。
相信随着科学技术的不断进步，花粉生活力测定方法将会更加完善，为植物繁殖和生长研究带来更多的突破和进展。
花粉活力测定的3种方法
实验16?花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，常涉及花粉活力的鉴定。
掌握花粉活力快速测定的方法，是进行雄性不育株的选育、杂交技术的改良以及揭示内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。
一、花粉萌发测定法【原理】90ml水放???????1.用。
2.20℃条???????1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件。
???2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响。
3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的葫芦科等植物花粉活力的测定。
二、碘-碘化钾染色测定法多数植物正常的成熟花粉粒呈球形，积累较多的淀粉，I2-KI溶液可将其染成蓝色。
发育不良的花粉常呈畸形，往往不含淀粉或积累淀粉较少，I2-KI溶液染色呈黄褐色。
因此，可用I2-KI溶液染色来测定花粉活力。
【器材与用具】???显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
???【试剂】???I2-KI300ml。
2～3张片??基四氮唑）还原成红色的TTF（三苯基甲??）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸作用较弱，TTC 的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后的颜色变化判断花粉的生活力。
【器材与用具】显微镜；载玻片与盖玻片；镊子；恒温箱；棕色试剂瓶；烧杯；量筒；天平。
【试剂】0.5%TTC溶液：称取0.5gTTC放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解，然后用蒸馏水稀释至100ml。
溶液避光保存，若发红时，则不能再用。
采集任何植物的花粉，取少许放在干洁的载玻片上，加1~2滴0.5%TTC溶液，搅匀后盖上盖玻片，置35℃恒温箱中，10~15min后镜检，凡被染为红色的花粉活力强，淡红次之，无色者为没有活力或不育花粉。
观察2~3张片子，每片取5个视野，统计花粉的染色率，以染色率表示花粉的活力百分率。
实验七花粉生活力的观察
实验七花粉生活力的观察技能目标掌握鉴定花粉生活力的几种常用方法。
一、花粉萌发测定法( 一 ) 原理正常成熟花粉粒具有较强的活力, 在适宜的培养条件下能萌发和生长在显微镜下可直接观察与计数萌发个数, 计算其萌发率, 以确定其活力。
( 二 ) 器材与用具显微镜、恒温箱、培养皿、载玻片、玻棒、滤纸。
培养基（10%蔗糖，10mg·L-1硼酸，0.5%琼脂）：称10g蔗糖，1mg硼酸，0.5g琼脂与90ml水放入烧杯中，在100℃水浴中溶化，冷却后加水至100ml备用。
（三）方法与步骤1．培养花粉。
将培养基熔化后，用玻璃棒蘸少许，涂布在载玻片上，放入垫有湿润滤纸的培养皿中，保湿备用。
采集丝瓜、南瓜或其它葫芦科植物刚开放的成熟花朵，将花粉洒落在涂有培养基的载玻片上，然后将载玻片放置于垫有湿滤纸的培养皿中，在25℃左右的恒温箱(或室温 20 ℃ ) 下培养5～10min。
2. 观察。
用显微镜检查5个视野, 统计萌发花粉个数。
二、碘—碘化钾染色测定法（一 ) 原理大多植株正常成熟的花粉呈圆球形, 积累着较多的淀粉, 用碘—碘化钾溶液染色时,呈深蓝色。
发育不良的花粉往往由于不含淀粉或积累淀粉较少, 碘—碘化钾溶液染色时呈黄褐色。
故可用碘—碘化钾榕液染色法来测定花粉活力。
( 二 ) 器材与用具显微镜、天平、载玻片与盖被片、镊子、烧杯、量筒、棕色试剂瓶。
碘—碘化钾溶液:取2g碘化钾溶于 5～10ml蒸溜水中,加人1g碘,充分搅拌使完全溶解后, 再加蒸溜水300ml时, 摇匀贮于棕色试剂瓶中备用。
( 三 ) 方法与步骤1. 制片与染色。
采集水稻、小麦或玉米可育和不育植株的成熟花药 , 取一花药于载玻片,加1滴蒸溜水,用慑子将花药捣碎, 使花粉粒释放。
再加1-2滴碘—碘化钾溶液 , 盖上盖玻片。
2. 观察。
观察2-3张片子, 每片取5个视野, 统计花粉的染色率, 以染色率表示花粉的育性。
三、氯化三苯基四氮唑法 (TTC 法 )( 一 ) 原理具有活力的花粉呼吸作用较强, 其产生的NADH或 NADPH能将无色的TTC 还原成红色的TTC而使花粉本身着色。
实验二 花粉生活力的测定
实验二花粉生活力的测定一实验目的掌握花粉生活力鉴定的方法和原理二实验材料羽衣甘蓝、矮牵牛、三色堇等植物的花粉三仪器及药品载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培养皿、玻璃棒、滴管、量筒、电炉、石棉网、烘箱蔗糖、琼脂、蒸馏水、磷酸二氢钾、磷酸二钠、TTC四实验原理花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少通常与其生活力密切相关，因此可利用花粉的形态观察过氧化物酶、脱氢酶活性的高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，主要有1 直接鉴定法2 形态观察法3 染色观察法4 培养基发芽法五实验步骤花粉生活力的测定染色观察法——TTC染色1 配置TTC染色液，称取0.5gTTC溶于100ml磷酸盐缓冲液中，装入棕色瓶2 制片：取少量花粉于载玻片上，滴入1~2滴0.5%TTC染色液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，于35~40°C条件静置15~20min。
3 观察统计：在显微镜下观察三个不同视野。
凡被染成红色或玫瑰色都是有生活力的花粉.培养基发芽法——固体培养基1 配制培养法：取1g琼脂，5g蔗糖，量94ml蒸馏水，装入烧杯，加热使琼脂溶化，配成5%浓度培养基。
同法配置10%、15%、20%浓度的培养基。
2 制片：用滴管吸取少量培养基，趁热滴在载玻片上，使放置凝固。
3播种花粉：少量的花粉均匀撒播4培养与观察：将制好的片子放在垫有湿润滤纸的培养皿内，于20—22℃温箱中培养。
待花粉萌发后于显微镜下观察，并统计发芽率，观察是每片随机取三个视野，统计花粉总数，计算平均发芽率。
六作业及思考题同种植物材料培养基法测得的花粉生活力较低染色法测得的花粉生活力较高原因：因为用染色法时，只要是有活力的花粉粒就会被染上颜色，而有活力的花粉粒却不一定会萌发。
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植物花粉生活力测定技术
在育种工作中，有时需要将花粉保存一段时间。
虽然人们已经知道，花粉保存以温度较低（0～15℃），空气湿度稍干（不能太干）、黑暗条件下为宜。
但是各种不同植物花粉寿命长短相差悬殊，这一是由花粉本身的特征决定的，二是由贮藏条件决定的。
一般来说，禾谷类作物花粉的寿命较短，自花授粉植物花粉的寿命尤其短，如小麦在花药开裂后30min，花粉即由鲜黄色变为深黄色，此时已有大量花粉丧失活力。
在许多特殊条件下，花粉的生活力的测定显的很重要，如：
1．外地采集来的花粉或杂交时父本花期早于母本时都要将花粉进行短暂贮藏；
2．自交或远缘杂交时，为了分析结实率或不结实原因时；
3．为了鉴定雄性不育系时；
4．了解某些杂交技术时，如测定花粉的刺激等作用，测定受精选择性等。
因此，要根据各种植物花粉的特点，采取适当的保存方法。
花粉生活力的测定方法很多，其中发芽试验手续较复杂，设备要求较高，需时也较长。
为了简易而迅速的测定花粉生活力，也常采用化学染色的方法，但是此法也有缺点，就是染上色的花粉不一定都具有生活力，因为染上色的花粉中也包括了那些生活力弱不能正常发芽的花粉，所以一般常用而且较为可靠的方法仍然是采用花粉发芽实验。
要是要求不严格对新采集的花粉还有一个较简便的鉴定方法——形态鉴定法。
本实验目的是学习花粉生活力测定的方法，进而研究花粉寿命长短与环境条件的关系，以探求保存花粉的合适方法。
一、试材及用具
1．材料：几种植物的不同处理花粉；如：小麦、玉米、大白菜、黄瓜、杏、苹果等。
2．试剂：配制好的缓冲液、联苯胺液、过氧化氢液、TTC粉、蔗糖、琼脂等；
3．用具：显微镜、载玻片、盖玻片、凹面载玻片、玻璃棒、擦镜纸、吸水纸、标签纸、铅笔。
二、方法步骤
（一）直接检验法
每个实验小组选定同品种种株去雄。
注意：选用的花蕾最好是花前1～2d，且发育正常、饱满。
每天去雄20个花蕾，然后套袋隔离，连续5d，共100朵花。
这一实验要和花粉贮藏实验相配合，即花粉贮藏的当天开始去雄。
授粉时，每去雄一次，分别授以两种不同贮藏条件下的花粉（各10朵），连续5d，就使得贮藏期分别为当天、第二天、第三天、第四天、第五天的花粉授到了去雄后的花蕾上。
实验时，一定要挂牌标好品种、花粉贮藏期、贮藏条件、株号、授粉日期、授粉人。
等最后一个处理完后十天，检验结实率和结籽率。
将得到的结果填入表1－6。
（二）染色鉴定法（TTC法）
TTC即2、3、5－三苯基四唑氯化物。
主要原理在于检验花粉呼吸过程中去氧酶的活性。
具有生活力的花粉的脱氢酶，在催化去氢的过程中，把氢转移到其他的物质上去，使用TTC 与催化过程中产生的氢结合成红色化合物，从而使具有生活力的花粉变为红色。
1．先配制下列溶液
（1）磷酸缓冲液：在100毫升的蒸馏水中，溶解0.832克的磷酸氢二钠和0.273克的磷酸二氢钾，调整PH值为7.17。
（2）TTC溶液：称取0.02～0.05克（不同植物所用的量是不同的）的TTC溶解在10ml的磷酸缓冲液中，溶液配好后装入棕色滴瓶内，置入暗处，因氯化三苯基四唑有毒，操作时要
注意安全。
2．操作步骤：
（1）取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上滴上1～2滴配制液，用玻璃棒混合后盖上盖玻片。
（2）将载玻片置于恒温箱中（35～40℃）约15～20min。
（3）在显微镜（10×10）下观察：凡具有生活力的花粉呈红色，部分丧失生活力的呈淡红色，无色的是死的和不育的花粉粒。
3．观察和测定结果：每片观察3个视野，并统计具有生活力花粉的百分率，填入表1－6。
（三）发芽测定法（培养基培养法）
1．培养基的配制
常用的花粉发芽培养基有液体和固体两种。
以前者最为简便。
本实验选用前者。
其有效成分主要有：蔗糖、硼酸、柠檬酸、赤霉素等。
不同的植物所用的蔗糖培养液的浓度是不同的，配制3～30%的蔗糖培养液：在100ml水中，加糖3～30g，加热溶解后，再加0.1%硼酸数滴。
2．制片
取双凹载玻片，滴2滴培养液于槽中，用解剖针挑少许花粉均匀撒于培养液的表面（注意不必搅拌，以防花粉混于液体中因缺少空气而影响发芽，又因花粉深浅不一而在显微镜检查时因光线折射而不易观察。
）处理好后，放于一下部添有少量蒸馏水、内有两根玻璃棒的培养皿中（注意不要使水没过载玻片），放到恒温为25℃左右的恒温箱中或室内2h。
3．镜检
将放置2h后的载玻片取出，放在显微镜下观察三个视野，统计总花粉数与发芽的花粉数，然后计算比例，填入下面的表格中。
（四）形态鉴定法
对于新采集的花粉来说，还有一个更为简便的鉴定方法——形态鉴定法。
将花粉用解剖针播于一般载玻片上，然后直接放到显微镜下观察，根据形态特征，判断花粉的生活力状况，一般来说，畸形、皱缩、小形化等均为无生活力花粉，而有光泽、饱满、具有本品种花粉典型特征等性状的均为有生活力花粉。
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