CHEF Mapper XA脉冲场电泳操作规程
大肠杆菌、沙门氏菌和志贺杆菌PFGE标准操作
1、 确保电泳槽是水平的。如果不水平，调整槽底部的旋钮。 注：不要触碰电极。 2、 加入 2-2.2L 0.5×TBE,关上盖子。 3、 打开主机和泵的开关，确保泵设在－70（这时缓冲液的流速约 1L/分钟）和 缓冲液在管道中正常循环。
4、 打开冷凝机， 确保预设温度在 14℃ （缓冲液达到该温度通常约需要 20 分钟） 。 5、 打开胶槽的旋钮，取出凝固好的胶，用吸水纸清除胶四周和底面多余的胶， 小心的把胶放入电泳槽，关上盖子。 6、 设置电泳参数。 （1）沙门菌属以 XbaⅠ或 AvrⅡ（BlnⅠ）酶切，电泳条件相同。 CHEF Mapper: Auto Algorithm 30kb ——low MW（最小分子量） 700kb ——high MW（最大分子量） 按“enter”选择程度默认值 run time（电泳时间）改为 18-19h （默认值： initial switch time （初始转换时间） =2.16s； final switch time（终末转换时间）=63.8s） CHEF DR-Ⅲ： Initial switch time: 2.2s Final switch time: 63.8s Voltage: 6v Included Angle: 120° Run time：18-19h （2） 大肠杆菌 O157 和宋内志贺菌 XbaⅠ或 AvrⅡ （BlnⅠ） 酶切， 电泳条件相同。 CHEF Mapper: Auto Algorithm 30kb ——low MW（最小分子量） 600kb ——high MW（最大分子量） 按“enter”选择程度默认值 run time（电泳时间）改为 18-19h （默认值： initial switch time （初始转换时间） =2.16s； final switch time（终末转换时间）=54.17s） CHEF DR-Ⅲ：
电泳车间基本操作规程以及注意事项
作业项目作业内容作业要求作业工具作业设备注意事项过滤袋规格更换过滤罐过滤袋1.关闭过滤罐进口阀2.打开压缩空气阀门进行吹气排液。
3.大约5分钟后关闭过滤罐出口阀门同时关闭压缩空气。
4.打开过滤罐顶部排气阀进行排气。
5.使用专业工具开启四周固定的螺栓，最后打开过滤罐顶盖进行更换过滤袋。
1.当过滤罐进出口压力差超过0.05MPA。
2.用压缩空气排液5分钟。
3.更换的过滤袋要及时扔进垃圾桶避免污染地面。
4.要清理过滤罐内磁棒后才能更换新过滤袋，规格是150U纱布。
5.压盘必须压紧防止产生异响。
6.阀门恢复初始状态。
1.专业工具 1.过滤罐2.压缩空气3.自来水管1.不能长时间用空气吹气避免槽液翻滚溢出来。
2.更换前必须把循环泵停止3.过滤袋规格要对应4.进出口阀门必须关紧5.压盘必须压实密封圈必须密封好。
5.如果过滤袋堵塞严重有水溢出来，将作业内容重新一次预脱脂12*150u纱布主脱脂32*150u纱布水洗一18*100u纺布表调18*50u纺布水洗二18*50u纺布纯水一18*50u纺布电泳20*25u除油20*25u除渣UF 18*25u纺布纯水二18*25u纺布超滤5*25u纺布纯水49*5u滤芯烤房1# 42*高温滤棉烤房2# 42*高温滤棉强冷室25*高温滤棉预脱脂风机6*高温滤棉电泳线加料作业1、加料作业流程图接受加料单→核对→备料→加料→清洗料管→记录加料数据以及签名确认、加料之前的准备2.1运行员收到《电泳线加料单》后应仔细核对加料单内所列物料名称及其数量，如发现异常及时报告化验员或工艺员2.2按照先进先出的原则，根据加料单要求备料；备料时应仔细查看物料的包装标签，不在保质期内的物料不得使用2.3搬运物料时要轻装轻卸，运送要平稳，避免物料包装破损而出现泄漏，如发生意外应按照MSDS资料要求进行相应处理。
2.4搬运、加料过程中要做好劳动防护，按照要求佩带防护眼镜、自吸式过滤袋防尘口罩、耐酸碱手套等防护用品。
电泳法操作规程
电泳法操作规程电泳法是一种通过电场作用分离、检测和纯化生物分子的方法，广泛应用于生物学、生物化学、医学等领域。
为了确保电泳实验的准确性和安全性，需要遵循一系列操作规程。
以下是电泳法的一般操作规程，供参考：实验前准备：1. 仔细阅读电泳实验的相关文献，了解目标分子的性质和最佳运行条件。
2. 准备实验室所需的试剂、仪器和耗材，并检查其有效期和状态。
3. 清洁实验台面和仪器设备，保持实验环境的整洁和卫生。
准备样品：1. 从合适的来源收集样品，确保其完整和纯净。
2. 避免样品的污染和降解，使用洁净的工具和容器进行操作。
3. 样品的浓度和量要适宜，确保电泳过程中的分离效果和信号强度。
制备电泳缓冲液：1. 根据实验目的选择合适的电泳缓冲液，如TAE缓冲液或TBE缓冲液。
2. 严格按照缓冲液配制方法和浓度进行配制，确保其pH值和离子浓度符合要求。
3. 使用无菌容器保存制备好的电泳缓冲液，避免污染和降解。
准备电泳仪和装置：1. 检查电泳仪和装置的状态，确保其功能正常，电极接触良好。
2. 根据实验目的和样品特点选择合适的电泳仪和装置，并进行必要的调整和校正。
3. 使用无菌纸巾擦拭电泳仪和装置，尽量避免灰尘和杂质的附着。
装载样品和标记物：1. 使用专用的微量移液器装载样品和标记物，并避免气泡和溢出。
2. 清楚标记每个样品和标记物的位置和浓度，便于后续的数据分析和结果解读。
3. 将样品和标记物装载到电泳槽中，保持装载均匀和稳定。
进行电泳分离：1. 将装载好的电泳槽放入电泳仪中，并连接电源线和电极线。
2. 根据实验要求设置适当的电场强度和运行时间，启动电泳电源。
3. 在电泳过程中注意观察电泳进程，确保电流稳定和样品分离良好。
4. 电泳结束后，关闭电源并小心将电泳槽取出，避免溶液的外溢和样品的损失。
分析和解读结果：1. 根据实验目的和样品特点选择合适的方法和仪器进行结果分析和解读。
2. 使用专业的软件进行数据分析和图像处理，得到准确的结果和图表。
脉冲场凝胶电泳.
脉冲场凝胶电泳(PFGE实验原理、操作步骤和注意事项【实验原理】大分子DNA(一般长度超过20kb ，在某些情况下，超过40kb 在电场作用下通过孔径小于分子大小的凝胶时，将会改变无规卷曲的构象，沿电场方向伸直，与电场平行从而才能通过凝胶。
此时，大分子通过凝胶的方式相同，迁移率无差别(也称“极限迁移率”，不能分离。
脉冲场凝胶电泳技术解决了这一难题，它应用于分离纯化大小在10～2000kb 之间的DNA 片段。
这种电泳是在两个不同方向的电场周期性交替进行的，DNA 分子在交替变换方向的电场中作出反应所需的时间显著地依赖于分子大小，DNA 越大，这种构象改变需要的时间越长，重新定向的时间也越长，于是在每个脉冲时间内可用于新方向泳动的时间越少，因而在凝胶中移动越慢。
反之，较小的DNA 移动较快，于是不同大小的分子被成功分离。
在许多实用的PFGE 方法中，倒转电场凝胶电泳是最简单最常用的方法(FIGE。
通过把一个在不同电场方向有不同脉冲方式的脉冲电场加在样品上，倒转电场凝胶电泳(FIGE设备能把大小范围在10～2000kb 的DNA 片段分开。
FIGE 也可通过重新确定一个对准完全固定好角度的电场，这样会进一步扩展其分离极限达到10Mb 。
【仪器、材料与试剂】1. 制备DNA 样品所需材料1TEN 缓冲液(0.1mol/LTris，pH7.5；0.15mol/LNaCl；0.1mol/LEDTA。
2Seaplaque 琼脂糖(EC 缓冲液中浓度为2%。
3EC 缓冲液(6mol/LTris，pH7.5；lmol/L NaCl；0.5%4ESP 缓冲液(0.5mol/L EDTA，1%十二烷基肌氨酸钠，lmg/mL 蛋白酶K 。
5 溶葡萄球菌素(5mg/mL。
6RNase(10mg/mL。
7 胶模(由常规琼脂糖凝胶制得或购买成品。
8 苯甲基横酰氟(PMSF(17.4mg/mL 于乙醇中。
90.5μg/mL 溴化乙锭2. 分离、纯化大的DNA 片段所需材料1 紫外递质。
电泳指导书工序操作规程
电泳指导书工序操作规程XXXX电泳作业指导书（电泳工序操作规程)批准:___________ 日期:____________审核:___________ 日期:____________校对:___________ 日期:____________制订:___________ 日期:____________8月电泳工序操作规程1、电泳1.1、目的本工序为阴极电泳涂装，电泳槽内设置阳极管，工件为阴极，在直流电场作用下，漆液中带正电荷的树脂离子夹带颜料向阴极移动，并在阴极（即工件）上脱去正离子，沉积为不溶于水的电泳漆膜，在电泳槽出口处设置槽上喷淋装置，用后道工序喷淋槽内的超滤水喷洗工件，可将工件外表面的大部分浮漆冲洗下来，重新回到电泳槽。
1.2、设备电泳系统，主要包括：电泳槽（含副槽）：30m3主循环系统：循环泵 2台篮式过滤器 2个袋式过滤器（六袋） 1个搅拌喷嘴 214个热交换系统：加热泵 2台篮式过滤器 2个袋式过滤器（六袋） 2个板式换热器 1个超滤器反洗系统：超滤泵 1个单袋过滤器 6个膜组 8组超滤液槽1.5 m3 1个反洗槽 0.5m3 1个阳极液系统：阳极槽2m3 1个阳极液循环泵 1台管式阳极 120根裸阳极 10根加料系统：气动隔膜泵 2台轴封系统：轴封槽0.5 m3 1个轴封泵 1台槽上喷淋装置：喷嘴 28个排风系统：风机 4台1.2、材料成膜物质：系列改性的中分子量双酚酞A型环氧树脂胺化剂：乙醇胺固化剂：异氰酸酯中和剂：醋酸助溶剂：醇醚纯水：电导率＜5μs/cm1.3、工艺参数固体份：18～20%PH：5.7～6.1电导率：1000～1800μs/cm温度：28～32℃时间：3′电压：60V-280V超滤液：PH 5.2～5.9固体份＜0.3%电导 600～1500μs/cm阳极液：电导率300-800μs/cmPH值：3-6槽上喷淋时间：15″槽上喷淋压力:0.05-0.1Mpa1.4、工作液的配制1.4.1、设备的清洗先后用自来水、纯水洗净电泳线各槽及管路系统；1.4.2、在电泳槽内加注1/5体积左右的纯水并使其处于循环状态；1.4.3、准备配槽用料色浆： 3750 kg乳液： 11250kg1.4.4、经过树脂加料系统将树脂缓缓打入电泳槽中；1.4.5、加颜料浆时，先搅拌均匀，再经过色浆加料系统将色浆打入电泳槽中；1.4.6、将适量的添加剂缓缓打入电泳槽中；1.4.7、用纯水清洗加料桶，清洗液打入电泳槽中；1.4.8 补加纯水至离槽口200mm左右，并填写《R 04-041电泳加料记录表》；1.4.9、循环熟化96小时。
脉冲场凝胶电泳试验流程
脉冲场凝胶电泳实验流程一、准备样品1. 琼脂糖包埋的样品常用的DNA提取方法不能得到完整的大分子量DNA。
大分子量DNA很脆弱，在制备过程中容易因移液等操作造成机械剪切。
将完整细胞包埋入琼脂糖后再进行裂解，去除蛋白的操作，可防止大分子量DNA的断裂。
琼脂糖块包埋的DNA可以避免被机械剪切，并且是一种简单的操作方法。
处理过的包埋有DNA的琼脂糖块可以直接放入琼脂糖凝胶的点样孔。
在将细胞包埋入琼脂糖之前要先确定细胞浓度，尽管吸光度很常用，但是并不可靠。
单位吸光度对应的细胞浓度会因菌株不同或培养基不同而有差异。
这会影响琼脂糖块中DNA的含量，导致上样量过大或不足。
不论细菌、真菌还是哺乳动物细胞，使用血球计数板均可得到准确和高重复性的细胞浓度。
Bio-Rad提供一次性的样品模具（货号：170-3713）。
每个模具可制备50个10 x 5 x 1.5 mm的琼脂糖胶块。
样品制备过程中的酶可以快速有效的扩散进入胶块，用Bio-Rad标准梳子制胶，胶块不需要修剪就可直接放入点样孔。
2. 液体样品小于200kb的DNA片断可以不用琼脂糖包埋，可直接以液体形式加入点样孔。
当操作的DNA大于50kb时，必须用大开口的吸头。
如果只电泳液体样品，使用厚度0.75 mm的梳子可以获得更锐利的条带和更高的分辨率。
3. 制备琼脂糖包埋的哺乳动物DNA该方法中用到的缓冲液，酶和琼脂糖均包含于试剂盒CHEF Mammalian Genomic DNA Plug Kit （货号：170-3591）。
1)将细胞悬浮于等渗盐溶液或不含血清的培养基中并置于冰上。
用血球计数板对细胞计数，每毫升琼脂糖块需要5 x 107个细胞，每个10 x 5 x 1.5 mm的样品块需要0.1 mL琼脂糖。
2)准备2% CleanCut™琼脂糖（货号：170-3594），用微波炉融化并置于50 °C水浴。
3)1000g、4 °C离心细胞悬液5分钟，用琼脂糖块一半体积的细胞悬浮缓冲液（10 mM Tris, pH 7.2,20 mM NaCl, 50 mM EDTA）重悬细胞并置于50 °C水浴。
脉冲场电泳仪操作规程
脉冲场电泳仪操作规程1 .在电泳槽内加入约2.2升合适的电泳缓冲液。
2 .打开主机开关，待主机自检结束后，打开循环泵开关，使电泳缓冲液开始循环，泵的速度设在“70”左右。
然后开启冷凝系统开关，按“settemp”键设置所需电泳温度，按“actua 1temp”显示实际温度。
3 .灌胶，等胶凝固后，上样4 .待电泳缓冲液到达设置的温度后，将加好样的凝胶连同底座一起放入电泳槽内的黑色方框内，并保证电泳缓冲液超过胶面b2≡ι,盖好电泳槽盖5 .在主机上设置电泳程序，先选择采用哪种类型程序，例如最常用的TWoState 方法：FIGETWOSTATEMU1TISTATE(1)按TWOSTATE 键，屏幕显示a Youwi11destroythe1astprogram-Goon?"，输入"1”确认后，系统显示AUrO A1GORITHM ⅛/一、Gradient≡[]V∕cmRunTime≡[]Inc1udedAng1e=[ ]0输入相应的参数后，按ENTER键,屏幕显示输入相应的参数后，按ENTER键确认(其中RamPingfactor默认是线性增长，如果欲采用默认值直接回车即可)。
CHEFMapper屏幕会显示AProgramisinmemory.P1easeenteranothercommand.若需存储程序，按SToREPGM 进行存储。
按STARTRUN即开始运行，此时可观察到电泳槽内电极开始出现气泡。
(2)如选用autoa1gorithm方法，按“autoa1gorithm,,键,键入欲得到的线性范围的最大片段和最小片段的kb数，确认所有给出参数，按“startrun”键，即可进行电泳。
(3)如选用MUItiState及FIGE方法,请参阅说明书。
6.电泳开始后，“highVo1tage”灯亮，此时切不可打开电泳槽盖进行操作，以免发生触电危险。
7.电泳结束后，"highVoItage”灯灭。
电泳设备操作规程
电泳设备操作规程
《电泳设备操作规程》
一、设备检查
1. 检查电泳设备的外观，确保设备表面干净整洁。
2. 检查电泳槽、电源、电极和其他配件的连接情况，确保无松动和损坏。
3. 检查电泳缓冲液和试样准备情况，确保实验所需材料齐全。
二、设备准备
1. 打开电泳设备主电源，确保设备正常通电。
2. 将电泳槽内注入足够的电泳缓冲液。
3. 将试样按照实验要求加载到电泳槽中。
三、设备操作
1. 设置电泳条件，如电场强度、电泳时间等。
2. 启动电泳设备，确保设备正常运行。
3. 在电泳过程中定时查看实验进展情况，及时调整电泳条件。
四、设备结束
1. 当实验结束后，关闭电泳设备主电源。
2. 将试样从电泳槽中取出，并进行后续实验处理。
3. 清洁电泳设备及配件，确保设备清洁干净。
五、设备维护
1. 定期对电泳设备进行检查和维护，确保设备正常运行。
2. 注意保养电泳设备，如清洁、除锈、防尘等工作。
3. 定期更换电泳缓冲液和其他耗材，避免实验受到影响。
六、注意事项
1. 操作人员需穿戴实验室个人防护用具，确保安全操作。
2. 操作人员需严格按照实验操作规程进行操作，避免出现错误。
3. 经验不足或操作不熟练的人员需要在有经验或资质人员的指导下进行操作。
以上为电泳设备的操作规程，操作人员需严格遵守，确保实验的顺利进行和安全。
脉冲场凝胶电泳试验流程
脉冲场凝胶电泳实验流程一、准备样品1. 琼脂糖包埋的样品常用的DNA提取方法不能得到完整的大分子量DNA。
大分子量DNA很脆弱，在制备过程中容易因移液等操作造成机械剪切。
将完整细胞包埋入琼脂糖后再进行裂解，去除蛋白的操作，可防止大分子量DNA的断裂。
琼脂糖块包埋的DNA可以避免被机械剪切，并且是一种简单的操作方法。
处理过的包埋有DNA的琼脂糖块可以直接放入琼脂糖凝胶的点样孔。
在将细胞包埋入琼脂糖之前要先确定细胞浓度，尽管吸光度很常用，但是并不可靠。
单位吸光度对应的细胞浓度会因菌株不同或培养基不同而有差异。
这会影响琼脂糖块中DNA的含量，导致上样量过大或不足。
不论细菌、真菌还是哺乳动物细胞，使用血球计数板均可得到准确和高重复性的细胞浓度。
Bio-Rad提供一次性的样品模具（货号：170-3713）。
每个模具可制备50个10 x 5 x 1.5 mm的琼脂糖胶块。
样品制备过程中的酶可以快速有效的扩散进入胶块，用Bio-Rad标准梳子制胶，胶块不需要修剪就可直接放入点样孔。
2. 液体样品小于200kb的DNA片断可以不用琼脂糖包埋，可直接以液体形式加入点样孔。
当操作的DNA大于50kb时，必须用大开口的吸头。
如果只电泳液体样品，使用厚度0.75 mm的梳子可以获得更锐利的条带和更高的分辨率。
3. 制备琼脂糖包埋的哺乳动物DNA该方法中用到的缓冲液，酶和琼脂糖均包含于试剂盒CHEF Mammalian Genomic DNA Plug Kit （货号：170-3591）。
1)将细胞悬浮于等渗盐溶液或不含血清的培养基中并置于冰上。
用血球计数板对细胞计数，每毫升琼脂糖块需要5 x 107个细胞，每个10 x 5 x 1.5 mm的样品块需要0.1 mL琼脂糖。
2)准备2% CleanCut™琼脂糖（货号：170-3594），用微波炉融化并置于50 °C水浴。
3)1000g、4 °C离心细胞悬液5分钟，用琼脂糖块一半体积的细胞悬浮缓冲液（10 mM Tris, pH 7.2,20 mM NaCl, 50 mM EDTA）重悬细胞并置于50 °C水浴。
脉冲场电泳操作注意事项
脉冲场电泳操作注意事项一、操作注意事项安全：1、CHEF 系统在运行中使用高电压和大电流，因此在仪器运行过程中，不能随意打开电泳槽。
如果确实需要打开电泳槽，一定要在仪器暂停、“high voltage”指示灯熄灭后才可以打开。
2、脉冲场电泳过程中，缓冲液会循环流动，因此要检查电泳槽和管道系统时候有漏液。
3、电泳结束后，等“high voltage”灯灭后，再依次关掉冷凝系统，主机开关，打开电泳槽，取出凝胶，进行染色等操作。
操作注意事项：4、电泳槽水平的调节：用水平泡调节，确保电泳槽的水平，5、灌胶框的放置：不同的凝胶使用不同的灌胶框，检查灌胶框的位置，使之处在电泳槽的中央。
6、梳子的放置：梳子不要和灌胶框密切接触，保持1-2毫米的距离；7、灌胶：灌胶前用水平泡调节灌胶框的水平；加热好的琼脂糖溶液，不要立刻倒胶，待稍许冷却后，约40℃左右，再倒胶。
倒胶过程中如果有气泡，用tip头将气泡戳破即可。
8、修胶：制备好的凝胶，在从灌胶架取下后，要用手术刀片，对凝胶进行修饰，把多余的凝胶刮去。
9、凝胶的放置：点样孔的位置应靠近电泳槽的后侧。
10、蠕动泵的流速：电泳过程中，控制好蠕动泵的流速，一般控制在50左右，以免速度太快，使胶在溶液中移动。
11、过滤条的使用：在电泳槽的前内侧，放置过滤条，以放置游离的凝胶碎片进入冷却泵，堵塞管道系统。
12、冷却泵的开启：冷却泵开启时，一定要把蠕动泵打开，以避免冷却泵管道内的溶液因为过度制冷，凝结成冰块而堵塞管道。
13、电泳结束后，应及时取出凝胶，进行染色等操作，以避免因为时间太长，而造成条带的弥散。
CHEF MAPPER操作说明
CHEF MAPPER操作说明一、脉冲场电泳原理当电场在不同的方向转换时，DNA巧妙的以阶梯式的方式在凝胶中运动。
这是该技术被称为“脉冲场电泳” 。
当凝胶被加载第一个方向的电场时，DNA 会在电场的方向上拉伸，开始在凝胶中迁移。
随后，根据运行的参数，第一个方向的电场会被转换到第二个方向。
此时，DNA 必须改变构向，在第二个电场方向重新定位后，再迁移。
只要以相同的电压和脉冲时间转化电场，DNA在凝胶中会笔直的顺着凝胶迁移。
在电泳过程中,可以观察到DNA的“结”。
电场转换时，一些“结”解开，使得整个分子在凝胶中移动。
二、准备工作1、仪器线路和管道装接2、220V电源，接地良好3、试剂准备：1X TAE或者0.5X TBE 3升，双蒸水3升4、微波炉、天平、手术刀片5、烧杯（2000ml）、量筒(1000ml)、三角烧瓶（250ml）。
电泳前半个小时进行的工作：1、检查管道系统，确认管道连接密闭，不漏气。
2、电泳槽内加入越2.2L的无菌水3、开启主机开关，自检后，开启泵的开关，使无菌水形成环流4、开启冷却泵，“set temp”键调节电泳温度，推荐为12-15摄氏度，一般为14摄氏度，“actual temp”显示实际温度。
5、开启蠕动泵，调节速度为“80-100”。
15-20min守将无菌水放出，接着加入2.2L（最低不少于2L，最高不超过2.5L）电泳缓冲液（0.5X TBE）。
三、实验流程试剂：脉冲场专用琼脂糖、DNA校准品、TBE缓冲液、EB溶液1、琼脂糖凝胶的制备：1g脉冲场专用琼脂糖加入100ml 0.5X TBE缓冲液中，煮沸至透明。
2、上样a：装配好灌装框，梳齿与底部预留1cm的空间。
b：将DNA标准品切成小块，长1cm，宽与梳齿同宽；粘在梳齿的外侧，朝DNA 运动方向。
3、灌胶装置好灌胶框和梳子后将煮沸后冷却到约40摄氏度的琼脂糖溶液倒入灌胶框中，静置约15-20min。
待完全凝固后，拔去梳子。
电泳仪操作规程范文
电泳仪操作规程范文一、操作前的准备工作1.检查设备及周围环境是否正常，无杂物及有关危险物品。
2.检查电泳仪的电源及电源线是否完好。
3.检查仪器的冷却系统是否正常运行，保证电泳所需温度的稳定性。
4.检查电泳仪的电极是否安装牢固，电极间隔是否合适，电极材料是否适用于电泳实验。
5.检查电泳仪的电流源设置是否正确。
二、试验前的操作1.打开电源开关，确保电泳仪处于待机状态。
2.将待测样品装入电泳槽中，注意样品的添加顺序以及浓度的控制。
3.将电泳槽盖严，确保试验过程中无漏电现象发生。
4.根据需要选择合适的缓冲液，并将其加入电泳槽中。
5.调整电泳仪的电流源，设置适当的电压和电流。
三、电泳操作步骤1.打开电源，启动电泳仪，确保电泳槽内的缓冲液开始循环。
2.选择合适的电压和电流，根据电泳实验的要求进行设置。
3.开始电泳过程，记录下电泳时间。
4.控制温度，确保样品的尽快分离。
5.观察电泳过程中的变化，根据需要调整电压和电流。
四、电泳后的处理1.关闭电源，停止电泳实验。
2.将电泳槽中的样品取出，转移到后续实验操作所需的容器中。
3.清洗电泳槽，清除残留的缓冲液和样品残留物。
4.关闭冷却系统，让设备自然冷却。
5.清洗电极，保证电极的清洁度。
6.检查仪器，将电泳仪恢复待机状态。
五、安全注意事项1.在操作电泳仪时要佩戴防护手套、眼镜等个人防护用品。
2.避免直接接触电极和它们之间的电压源。
3.防止溶液溅入眼睛、口腔等部位，应避免喷溅。
4.操作时要注意避免电泳槽的翻倒、碰撞等情况的发生。
5.严禁将有机溶剂或易燃物品靠近电泳仪。
六、故障处理1.若发现电泳槽内有漏电现象，立即停止操作，并进行检查和维修。
2.若发现电泳温度无法控制，应检查冷却系统是否正常工作，并作出相应的处理。
3.若发现电泳结果不理想，可检查电流源的设置、缓冲液的配制等因素。
需要特别注意的是，本规程只是针对一般电泳仪的操作规范，具体操作还需要根据实际型号的电泳仪来进行相应的调整。
脉冲场电泳
脉冲场凝胶电泳- 高分子量DNA琼脂糖凝胶块制备和加工1．收集10ml全血，加入30ml细胞裂解液。
置冰浴中至少20min直至红细胞完全溶解。
2．2000r/min离心10min，移去红色上清液，再次用细胞裂解液洗涤细胞，然后用PBS重悬细胞。
3．稀释单细胞悬液并取一小份用Neubauer腔计数细胞。
4．用PBS重悬细胞，以达到40μl PBS中含1百万个细胞比例（1百万个二倍体哺乳动物大约含有基因组DNA 10μg）5．用PBS配制2％浓度低熔点琼脂糖溶液并保持在50℃。
6．将等体积（各1ml）细胞悬液与琼脂糖溶液于室温下混匀，立即倒入凝胶块模具中。
7．静置20min让琼脂糖固化，用无菌塑料杯（通常用作划菌）将凝胶块自模具中取出并置入蛋白酶缓冲液中，加入2mg/ml的蛋白酶K。
8．将带有凝胶块的蛋白酶K缓冲液于50℃保持2～3天。
每个盛有50ml蛋白酶缓冲液的Falcon管可容纳多达100个凝胶块。
9．蛋白酶K消化后，可将凝胶块保留在此缓冲液或0.5mol/L EDTA溶液中保存于4℃。
10．此外，继续将凝胶块用高压消毒过的TE缓冲液冲洗数遍的步骤。
11．将凝胶块放入装有TE及0.04mg/ml PMSF溶液的Falcon试管中，灭活残留的蛋白酶K。
12.室温下用TE溶液漂洗凝胶块数次,将凝胶块放入另一干净的试管，可直接用于酶切反应或用0.5mol/L EDTA，（pH8.0）4℃保存凝胶块。
13．若用EDTA保存凝胶块，取出后应用TE溶液室温下漂洗30 min×2次。
脉冲场凝胶电泳- 大小标准物的制备λ多联体1．以TE缓冲液悬浮λ多联体（Boehringer MA宝灵曼公司产品），浓度为4μg/40μl。
2．用等体积TE配制的2％低熔点琼脂糖（温度保持在45℃）混匀。
3．移去混合液注入预冷的凝胶块模具中。
4．室温下用TE及100 mmol/L NaCl溶液温育2天。
酵母染色体1．从YPD（酵母提取物，蛋白胨和葡萄糖）培养基瓶皿中挑选单一克隆加入10ml YPD预培养的肉汤中，30℃下剧烈震荡生长24小时，然后加入200ml YPD肉汤，剧烈振荡24～48h（产量大约100块）。
脉冲场凝胶电泳
脉冲场凝胶系统操作规范文件编号：VBQW11##-##版本号：A0制定：制定日期：审核：审核日期：批准：批准日期：颁发部门：质量保障中心发行日期：文件更改记录版本号发行日期变更原因、依据及详细变更内容制定人分发部门具体部门目录1. 目的 (4)2. 适用范围 (4)3. 职责 (4)4. 操作规范 (4)4.1 简介 (4)4.1.1. 技术原理 (4)4.1.2 主要仪器设备和试剂 (4)4.2 准备工作 (5)4.3 灌胶 (5)4.4 上样 (6)4.5 主机程序设置 (6)4.6 凝胶染色和观察 (6)4.7 电泳槽清理 (7)5. 注意事项 (8)6. 常见故障及解决方法 (8)7. 关于参数设置的几点建议 (9)8. 试剂配制 (11)1.目的指导技术员规范地使用脉冲场凝胶系统。
2.适用范围本标准适用于利用脉冲场凝胶系统对相关产品进行检测。
3.职责分子部门负责本文件的编写，质量保障部及检验人员负责本标准的监督。
4.操作规范4.1简介4.1.1. 技术原理常规的琼脂糖凝胶电泳采用单一的均匀电场，一定大小的线状DNA分子经凝胶的分子筛作用以一定的速率由负极向正极移动。
但当DNA分子的长度超过一定极限后，其迁移率于则于分子大小无关，而主要是决定于电场强度。
实践表明，长度大于50kb的DNA不能在恒场强的琼脂糖凝胶电泳中较好的分离。
脉冲场凝胶系统(Pulsed field gal electrophoresis, PFGE)正好解决这一问题。
PFGE采用两个交变电场，即两个电场交替地开启和关闭，DNA的电泳方向随着电场的变化而改变，大分子的DNA得以分离。
严格来讲，“脉冲”场电泳有些用词不当，应称作“交替”场电泳。
电场变换方向的间隔时间为脉冲时间，其分为从数秒到几小时。
通常脉冲时间越长分辨的DNA片段越长。
图一. 脉冲场电泳交变示意图图一是根据Carle和Olson最初设计的正交场电泳装置(orth-ogona1 field gel electrophoresis，OFAGE) 绘制的PFGE示意图。
PFGE（脉冲场凝胶电泳）标准操作规程（SOP）
PFGE（脉冲场凝胶电泳）标准操作规程（SOP）PFGE（脉冲场凝胶电泳）标准操作规程(SOP)关键词：PFGE，脉冲场凝胶电泳目的：运用PFGE方法对20Kb至数Mb的DNA进行分子分型图谱分析：采用“PFGE脉冲场凝胶电泳分子分型识别系统”（官微：PFGE_CHINA）进行图谱分析。
系统主要功能是PFGE图谱分子分型在线识别和处理，提供二叉层级聚树，MLVA、MLST字符类型的最小生成树，SEQUENCE基因片段类型的亲缘树计算和图形绘制，用于分析菌株之间的相关性，协助追踪感染来源以及有效控制疫情。
第一天一、胶块的制备1、在Falcon 2054管上标记样品名称和空白对照，分别加入约2ml细胞悬浊液（CSB）；2、在1.5ml eppendorf管上标记好对应样品的名称；3、在模具上标记好对应样品的名称；4、用CSB湿润接种环，从培养皿上刮取适量细菌，均匀悬浊于CSB中，用bioMerieuxVitek colorimeter测其OD值，并调整至3.6~4.5。
如果OD值大于4.5，加入CSB稀释；如果OD值小于3.6，增加菌量提高其浓度。
5、取400μl细菌悬浊液于相应的1.5ml eppendorf管中，置于37℃水浴中孵育5分钟。
将剩余的细菌悬浊液置于冰上直到胶块制备好放在水浴摇床中。
6、从水浴箱中取出eppendorf管，每管加入20μl蛋白酶K（储存液浓度为20mg/ml）混匀，使其终浓度为0.5mg/ml。
7、制备好1%Seakem Gold：1%SDS，放于56℃水浴箱中。
8、在eppendorf管中加入400μl的1% Seakem Gold：1%SDS，用枪头轻轻混匀。
9、将混合物加入模具，避免气泡产生，在室温下凝固10-15分钟。
注意事项：（1）用后的接种环要放在指定的废弃物容器中。
（2）细胞悬浊液、蛋白酶K要置于冰上。
（3）在混合细胞悬浊液和1% Seakem Gold：1%SDS时要避免气泡的产生。
副溶血弧菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)标准操作方案
酶 NotI（10U/µl） 4µl 总体积 200µl
9、
每管加入 200µl 混合液，轻轻在实验台上磕管子的底部，确保胶块在液面 的下面。
10、
在 50℃水浴中孵育至少 4 小时，H9812 的胶块放在 37℃水浴中孵育至少 2 小时。 灌制电泳胶
1、 打开水浴箱，温度调至 55-60℃。 2、 配制 2200ml 的 0.5×TBE。 3、 用 0.5×TBE 配制 1%SeaKem Gold(SKG)胶。 14cm 宽电泳胶框（10-15 加样孔） ：1.0gSKG 胶溶于 100ml0.5×TBE 中； 21cm 宽电泳胶框（≥15 加样孔） ：1.5gSKG 胶溶于 150ml0.5×TBE 中。 4、 熔化时，微波加热 60 秒，混合；每隔 15-30 秒重复一次，直到胶完全熔化。 放在 55-60℃水浴备用（温度至少平衡 30 分钟以后使用） 。 5、从 37℃水浴中取出酶切完的胶块，平衡到室温。 6、用枪头吸出酶切混合液，避免损伤或吸出胶块。 7、每管加入 200µl 0.5×TBE, 室温平衡 5 分钟。 8、安装胶槽，调整梳子高度，使梳子齿与胶槽的底面相接触。用水平仪调整胶 槽使其水平。 9、 把梳子平放在胶槽上， 把胶块加在梳子齿上。 把标准菌株 H9812 加在第 1、 5、 10 个齿上（10 齿梳子）或第 1、5、10、15 个齿上（15 齿梳子） 。 10、用吸水纸的边缘吸去胶块附近多余的液体，在室温下风干约 3 分钟。 11、把梳子放入胶槽，确保所有的胶块在同一条直线上，并且胶块与胶槽的底面 相接触。从胶槽的下部中央缓慢到入熔化的在 55℃－60℃平衡的 1％SKG。避免 气泡的生成；如果有，用枪头消除。在室温下凝固 30 分钟左右。 12、记录加样顺序。
202X年脉冲场凝胶电泳(1)
2) 噬菌体载体DNA的分离
纯净病毒颗粒 病毒载体DNA
M13mp载体可采用质粒DNA的分离方法
第十二页，共三十八页。
二、RNA的分离与纯化
1. 制备RNA的关键—防止内外源RNase的作用
1) RNase的特点：抗酸抗碱,具很广pH作用范围; 抗高温严寒 (0~65℃均具活性）；抗变性剂
单子叶植物 151（玉米）~182kb（浮萍） 藻类 132（裸藻）~191kb（衣藻）
第八页，共三十八页。
1) DNA分离纯化过程
破碎细胞 + DNA抽提液(EDTA、去污剂、还原剂) 65℃温育
20’
冰浴冷却 离心去细胞碎片 苯酚抽提法①
CsCl密度梯度离心②
1) 苯酚抽提法 上清液 缓冲液用水饱和苯酚抽提2~3次 上层液相用氯仿抽 至界面无蛋白变性物 上层液相用两倍体积冷乙醇沉淀 沉 淀物用70%冷乙醇洗涤,干燥 溶于缓冲液 加入RNAase处理 除去RNA 苯酚氯仿抽提 沉淀干燥
2) 按电泳装置分: 水平式/琼脂糖凝胶; 竖式/聚丙烯酰胺凝胶
3) 两种方法比较：分离效果和分离范围; 操作难易
2. 用途
琼脂糖凝胶用于DNA和RNA的常规(chángguī)分析；聚丙烯酰胺凝胶常 用于小分子核酸分析。
3. 凝胶电泳的一般程序
制胶 点样 电泳 染色 观察
二、DNA电泳
1. DNA分子种类
288 kb
痘病毒
196 kb
质体 几~100以上kb
线粒体
藻类 线状
15kb
酵母 环状
19~78 kb
电泳线操作标准书
1.工件表面水膜应完整连续，无水珠悬挂。 质量 要求 设备凃装 工艺要求
1.槽液温度：室温℃； 2.喷淋时间：20S，喷淋压力：0.10—0.15MPa。 3.PH值5.8～7.5。 4.工件在进入和提出槽体过程中，无严重漂浮现象 设计 设备
名称
设备工装号
数量
校对
设备工装号
审核
更换 记录
标记
处数
更改文件号
设计 更换 记录 标记 处数 更改文件号 日期 签字 标记 处数 更换文件号 适用车型 工序号 3 日期 签字
校对
设备工装号
审核
涂装车间前处理工段 NO. 1 2 3 4 5
涂装工艺卡
工序内容
所有车型 工序编号 标号
文件编号 第1#水洗
CQ-GY-TZ1-06 共15页 第3页 工时定额 （min) 操作人员
零部件、材辅料 名称 牌号、规格
工作前应启动各循环泵，检查槽液循环情况。 观察工件在表调过程中的运行情况，是否按程序运行。 检查循环量是否在工艺范围，观察工件在水洗后的表面状况。 每班对槽液碱度进行分析。 生产期间，不停巡视压力、温度、泵的运行情况及喷嘴情况。 槽液每两天换一次。 a
纯水
1.发现水质太差，溢流给水不足等情况，立即向班长反映进行调整。 2.槽液碱度、PH化验：1次/天（白班检测），超标时增加溢流量。 质量 3.自行链条或电机出现故障立即将控制盒打到手动模式并通知维修人员。 反映 控制
零部件、材辅料 名称 牌号、规格 0.1N 工业级 用量
工作前应启动各循环泵，检查槽液循环情况。 观察工件在主脱脂过程中的运行情况，是否按程序运行。 检查循环量是否在工艺范围，观察工件在水洗后的表面状况。 每班对槽液碱度进行分析。 生产期间，不停巡视压力、温度、泵的运行情况。 a b c d
CHEF培训材料
Bio-Rad China
脉冲场电泳培训材料
提纲
1、 装机前的准备 2、 仪器清点 3、 仪器安装 4、 仪器操作 5、 演示实验流程 6、 结果分析 7、 操作注意事项 8、 常见故障的解决 附： 9、 脉冲场电泳原理介绍 10、 消耗品
（本培训材料仅供参考，以英文说明书为准）
操作注意事项： 4、 电泳槽水平的调节：用水平泡调节，确保电泳槽的水平， 5、 灌胶框的放置：不同的凝胶使用不同的灌胶框，检查灌胶框的位置，使
之处在电泳槽的中央。 6、 梳子的放置：梳子不要和灌胶框密切接触，保持 1-2 毫米的距离； 7、 灌胶：灌胶前用水平泡调节灌胶框的水平；加热好的琼脂糖溶液，不要
一、 装机前的准备 在 CHEF 装机前，需要用户做好以下的准备： 1） 电源：220V，接地良好； 2） 试剂准备：1X TAE 或 0. 5 X TBE 至少 3 升、双蒸水； 3） 电炉或者微波炉、天平、手术刀片； 4） 其他消耗品：烧杯（2000ml）、量筒（1000ml）、三角烧瓶（250ml）。
四、 仪器操作 本部分内容仅仅是最基本的仪器操作过程。样品制备、凝胶制备和凝胶染色 的过程请参见第五部分内容。
电泳前半小时进行以下工作：
1、 检查管道系统，确认管道连接密闭，不漏气。 2、 在电泳槽内加入约 2.2 升合适的电泳缓冲液。 3、 接通主机和冷却泵电源，开启主机开关，主机自检结束后，开启冷却泵开关。 4、 按冷却泵的“set temp”键调节需要的电泳温度，一般为 14℃。按“actual
电泳 6）将制好的凝胶转移到电泳槽中，加入 2200ml 0.5X TBE 缓冲液。设置 电泳条件如下：6V/cm，14℃，120°脉冲角度，电场转换时间 50~90 秒，电泳 18 小时。
电泳指导书(工序操作规程)
XXXX电泳作业指导书（电泳工序操作规程)批准:___________ 日期:____________ 审核:___________ 日期:____________ 校对:___________ 日期:____________ 制订:___________ 日期:____________2014年8月电泳工序操作规程1、电泳1.1、目的本工序为阴极电泳涂装，电泳槽内设置阳极管，工件为阴极，在直流电场作用下，漆液中带正电荷的树脂离子夹带颜料向阴极移动，并在阴极（即工件）上脱去正离子，沉积为不溶于水的电泳漆膜，在电泳槽出口处设置槽上喷淋装置，用后道工序喷淋槽内的超滤水喷洗工件，可将工件外表面的大部分浮漆冲洗下来，重新回到电泳槽。
1.2、设备电泳系统，主要包括：电泳槽（含副槽）：30m3主循环系统：循环泵2台篮式过滤器2个袋式过滤器（六袋）1个搅拌喷嘴214个热交换系统：加热泵2台篮式过滤器2个袋式过滤器（六袋）2个板式换热器1个超滤器反洗系统：超滤泵1个单袋过滤器6个膜组8组超滤液槽1.5 m31个反洗槽0.5m31个阳极液系统：阳极槽2m31个阳极液循环泵1台管式阳极120根裸阳极10根加料系统：气动隔膜泵2台轴封系统：轴封槽0.5 m31个轴封泵1台槽上喷淋装置：喷嘴28个排风系统：风机4台1.2、材料成膜物质：系列改性的中分子量双酚酞A型环氧树脂胺化剂：乙醇胺固化剂：异氰酸酯中和剂：醋酸助溶剂：醇醚纯水：电导率＜5μs/cm1.3、工艺参数固体份：18～20%PH：5.7～6.1电导率：1000～1800μs/cm温度：28～32℃时间：3′电压：60V-280V超滤液：PH 5.2～5.9固体份＜0.3%电导600～1500μs/cm阳极液：电导率300-800μs/cmPH值：3-6槽上喷淋时间：15″槽上喷淋压力:0.05-0.1Mpa1.4、工作液的配制1.4.1、设备的清洗先后用自来水、纯水洗净电泳线各槽及管路系统；1.4.2、在电泳槽内加注1/5体积左右的纯水并使其处于循环状态；1.4.3、准备配槽用料色浆：3750 kg乳液：11250kg1.4.4、通过树脂加料系统将树脂缓缓打入电泳槽中；1.4.5、加颜料浆时，先搅拌均匀，再通过色浆加料系统将色浆打入电泳槽中；1.4.6、将适量的添加剂缓缓打入电泳槽中；1.4.7、用纯水清洗加料桶，清洗液打入电泳槽中；1.4.8 补加纯水至离槽口200mm左右，并填写《R 04-041电泳加料记录表》；1.4.9、循环熟化96小时。
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CHEF Mapper XA脉冲场电泳操作规程
一、开机
在等待凝胶凝固的期间，检查管路的连接状态，加入约2.2L的0.5X TBE缓冲液到电泳槽中。
打开主机电源开关，然后打开旁边的蠕动泵开关，最后打开冷凝泵开关。
二、制冷
将蠕动泵流速调节到100，按冷凝泵上的“Set temp”键将温度设定到14°，按“Actual temp”显示实际温度。
三、放置凝胶
1、将电泳凝胶的框架放入电泳槽中，白色螺丝固定到电泳槽的孔中。
2、将凝固好的凝胶从模具中卸下，连同黑色底板一起放到框架中。
3、确认液面完全超过胶面，确认挡胶条已经安装在电泳槽的下端。
四、电泳
1.开机后，按“AUTO ALGORITHM”键。
2.屏幕上显示“Molecular Weight:Low”，此时通过面板上的数字键和字母键输入你
所要分离的最小片段。
比如：220kb，输入220，“K-BASES”，回车键；
3.随后，屏幕上显示“Molecular Weight:High”，此时输入你所要分离的最大片段，
比如2200kb，输入2200，“K-BASES”，回车键；
4.屏幕上显示“Calibration Factor”,按回车键；
5.屏幕上显示“0.5X TBE,14℃,1%PFC agarose，按回车键；
6.此时屏幕上会显示如下参数：6V/cm，Run Time=**.**(hr)，Included angel 120 ，
将Run Time改为18-19h，其他按回车即可；
7.屏幕上显示：Int. Sw. Tm=**.**s, Fin Sw. Tm=**.**s, Ramping Foctor:a=[linear],按回
车键。
8.此时显示“A program is in memory”,按“START RUN”即开始运行。
五、清洗
1、电泳结束后，关闭冷凝泵并取出凝胶进行染色和成像，将放水管插入右侧的接口中，
把缓冲液放到一个容器中。
2、加入2L的双蒸水，将蠕动泵调节到100，冲洗电泳槽15分钟后将水放出。
3、依次关掉蠕动泵和主机。
将电泳槽内的水彻底放干，用吸水纸把剩余的水擦干，注
意不要触碰到电极。