HE染色

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HE染色资料介绍

普通染色又称常规染色或HE（Haematoxylin and eosin）染色。

它是病理技术中最常用的一种方法，通过它可以做出病理诊断和发现寻求别的辅助方法，以达到准确，完整的病理诊断。

一、染色目的病理学的所有切片，都必须通过一种以上的染料，通过各种不同的方法，将切片中各种不同的物质，在不同染液的作用下，将其显示出来，使之在光学显微镜下，能够完全的观看各种结构。

例如，HE染色，好质量的切片可以清晰地显示出许多不同的结构，细胞核着蓝黑色，细胞浆着粉红色，软骨着蓝色等。

清晰的结构为诊断提供可靠的依据，因此，染色技术也是病理技术中的重要组成部分，必须不断地总结，方能提高。

如果染色不好，切片染色一团糟，红蓝不分，结构不清，层次不明，影响了镜下的观察，直接影响了临床诊断，染色结果的好坏直接关系到诊断的准确性。

二、染色的作用1．化学作用：所有的染色液中，可把它们分为两种类型，一种为酸性，另一种为碱性。

酸性染料中有染色作用的为阴离子，碱性染料中有染色作用的为阳离子，每个细胞也存在着两种物质，细胞核含的是酸性物质，细胞浆含的是碱性物质。

在染色时，细胞核中的酸性物质与苏木素染液中的阳离子发生作用，细胞浆中的碱性物质与伊红染液中的阴离子发生作用，由于反应的部位不同，结果着色有异。

2．物理作用：在染色过程中，染液中的色素微粒子浸入到被染组织的粒子间隙内，此时，因受分子的引力作用，色素微粒子被吸附而着色。

由于各种组织有不同的吸附能力和不同的吸附程度，因此就可显出来不同的颜色来。

一般来说，染色的学说还有许多，但说服力强的仅有上述两种。

但不管怎么样解释，实际上完成的每一种染色，都与上述两种学说分不开，它们的作用是相辅相成，同时存在的。

三、染色方法及步骤1．人工苏木素-伊红染色法（HE法）(1)切片浸入二甲苯中5-10min；(2)切片浸入二甲苯中5-10min；(3)100%酒精1min。

(4)100%酒精1min。

(5)95%酒精1min。

HE染色——精选推荐

HE染⾊HE染⾊实验步骤及常见问题解析⼀、HE染⾊HE染⾊全名为苏⽊精(hematoxylin)和伊红(eosin)染⾊⽅法，是最基本的也是最重要的病理学染⾊技术。

⼀张质上乘的HE切⽚是病理医⽣得以做出正确诊断的关键。

HE染⾊是⽬前国内外病理诊断上⼴泛采⽤的常规染⾊⽅法。

切⽚质量的好坏，可直接影响疾病诊断的及时与准确性。

因此，能制作出⼀张⾼质量的HE染⾊切⽚，是必须掌握的技术之⼀。

⼆、染⾊原理1.细胞核染⾊原理：苏⽊精为碱性天然染料，可使细胞核着⾊。

细胞核内染⾊质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏⽊精碱性燃料以离⼦键或氢键结合⽽被染⾊。

苏⽊精在碱性溶液中呈蓝⾊，所以细胞核被染成蓝⾊。

2.细胞浆染⾊原理：细胞浆内主要成分是蛋⽩质，为两性化合物、细胞浆的染⾊与pH值有密切关系，当pH调到蛋⽩质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染⾊。

当pH调到6.7-6.8时，⼤于蛋⽩质的等电点pH值，表现酸性电离，⽽带负电荷的阴离⼦，可被带正电荷的染料染⾊，现时胞核也被染⾊，核和胞浆难以区分。

因此必须把pH调⾄胞浆等电点以下，在染液中加⼊醋酸使胞浆带正电荷（阳离⼦），就可被带负电荷（阴离⼦）的染料染⾊。

伊红Y是⼀种化学合成的酸性染料，在⽔中离解成带负电荷的阴离⼦，与蛋⽩质的氨基正电荷（阳离⼦）结合⽽使细胞浆染⾊，细胞浆、红细胞、肌⾁、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红⾊或粉红⾊，与蓝⾊的细胞核形成鲜明的对⽐。

3.分化作⽤：染⾊后，⽤某些特定的溶液将组织过多结合的染⾊剂脱去，这个过程称为分化作⽤，所⽤的溶液称为分化液。

在HE染⾊中⽤0.5%盐酸⼄醇作为分化液，因酸能破坏苏⽊精的醌型结构，使组织与⾊素分离⽽褪⾊。

经苏⽊精染⾊后，必须⽤0.5%盐酸⼄醇分化，使细胞核过多结合的苏⽊精染料和细胞浆吸附的苏⽊精染料脱去，在进⾏伊红染⾊，才能保证细胞核与细胞浆染⾊的分明。

HE染色原理

HE染色原理HE染色原理是一种常用的组织切片染色技术，用于观察组织结构和病理变化。

HE染色技术结合了不同染色剂的特性，能够清晰地显示出组织中的细胞核、胞浆和胶原纤维等结构，为病理诊断提供了重要依据。

HE染色原理的基本步骤包括组织切片脱脂、脱水、浸入熔蜡、切片、脱蜡、脱水、染色和封片。

在染色过程中，组织切片首先被浸泡在嗜酸性染色剂中，如酸性染料Hematoxylin，其主要作用是染色细胞核和胞质。

Hematoxylin能与细胞核中的DNA结合形成复合物，使细胞核呈蓝色或紫色。

接着，组织切片在嗜碱性染色剂中浸泡，如酸性染料Eosin，其主要作用是染色胞质和胶原纤维。

Eosin具有亲和性，能与细胞胞浆中的蛋白质结合，使细胞胞浆呈粉红色或红色。

通过HE染色，可以清晰地区分细胞核、胞浆和胶原纤维，为病变的诊断提供了有力支持。

在病理诊断中，HE染色被广泛应用于肿瘤、炎症和组织结构异常等疾病的鉴别诊断。

不同的组织结构在HE染色下呈现出不同的颜色和形态特征，通过观察组织切片的染色情况，病理医师可以判断组织是否存在异常变化，进而制定合理的治疗方案。

HE染色技术的准确性和可靠性为临床诊断提供了重要的参考依据。

除了在病理诊断中的应用，HE染色技术还被广泛用于科研领域。

科研人员可以通过HE染色观察细胞结构和组织形态的变化，研究细胞生物学、病理生理学等领域的问题。

HE染色技术的简便易行性和可靠性使其成为科研工作中不可或缺的工具。

总的来说，HE染色原理是一种简单而有效的组织染色技术，通过染色显示细胞核、胞浆和胶原纤维等结构，为病理诊断和科研研究提供了重要帮助。

HE染色技术的应用范围广泛，对于促进医学和生命科学的发展起到了重要作用。

希望通过对HE染色原理的了解，可以更好地理解组织结构和病理变化，为人类健康和科学研究做出贡献。

HE染色

H-E染色概述苏木精（Hematoxylin）-伊红（Eosin）染色也称普通染色，简称为H-E染色。

是生物组织学、病理学及细胞学工作必不可少的最常用的染色方法，故又称常规染色H-E染色应该是红蓝相映，层次浓淡均为分明稳恒定优质各种固定、包埋方法所制作的组织切片和冰冻切片等，均可用采用常规染色H-E染色原理组织细胞的不同成分对苏木精染料的亲合力不同，经苏木精染色的组织切片，再利用酸乙醇的分化作用，可使细胞核等酸性成分着色清晰，而其它成分脱色再经伊红染细胞质等碱性成分，则各种组织与病变的一般形态结构均可显示出来一张优质的染色切片，可以清晰地观察到各种不同的组织结构以此作为病理诊断的确切依据再根据此染色切片所见，分别进行不同的特殊染色到目前为止人类所积累的病理组织学知识，绝大部分是从观察苏木精-伊红染色标本所得来的第一节染液及溶液的配制一、明矾苏木精染液的配制苏木精染液的配法很多，普通、常规染色多用明矾苏木精，常用的有哈瑞（Harris）、埃利希（Ehrlich）、德拉菲而德（Delafield）及迈耶（Mayer）等明矾苏木精染液用钾明矾或铵明矾中的铝离子作为苏木精的媒染剂利用氧化汞等氧化剂进行人工氧化或通过自然氧化成熟的方法，使苏木精具有较强的染色效果还需用冰醋酸作为促染剂，以增强染色能力（一）哈瑞斯（Harris）苏木精染液1．配方（1）甲液苏木精1g无水乙醇10ml（2）乙液钾明矾（硫酸铝钾）20g蒸馏水200ml（3）其他氧化汞0.5～1g冰醋酸0.5～1ml2．配制法分别配制甲、乙液，将乙液（加温并搅拌），待全部溶解后，再加入甲液，混合后煮沸1～2分钟，然后改用小火加温，慢慢加入氧化汞，同时不停地摇荡或搅拌使其充分氧化，当液体变为深紫蓝色时，即迅速将容器放入入冷水中使之迅速冷却，室温静置数小时至一夜。

第二天过滤，每100毫升滤液内加0.5～1毫升冰醋酸，以增强其染色力染色时间为3～15分钟此液为人工氧化剂，配制方便，配后第二天即可应用，且染色时间较短，为临床病理常用之方法，保存时间不能太长，经2～6个月后染色作用渐弱，故现用现配为好，一次不宜配制过多，应按需要量随用随配钾明矾为媒剂，氧化汞为氧化剂，冰醋酸为促染剂二、伊红染液的配制为砖红色粉末状或酱红色结晶，是最常用的胞浆染料伊红有水溶性和醇溶性，黄光（Y）与蓝光（B）之分病理组织学常规染色一般多用水溶性伊红Y伊红染液的一般浓度为0.25％～1％。

(完整word版)HE染色

我来一一解答你的疑问：1.“做大鼠皮下HE染色后可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况吗？”答：HE 染色，即苏木精—伊红染色法，苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

HE染色后是可以观察炎症细胞及其他细胞的存在情况，因为炎症细胞有自身的特点，通常细胞核较大，核质比大，H&E染色后，细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。

因此，H&E染色，尤其在400倍放大的情况下，可以明显看到一个个以蓝色为主的点状的炎症细胞（主要是中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞），而其他细胞则体积较大，细胞质较多成粉红色，细胞核较小，呈蓝色或深蓝色。

2. “通过HE染色观察我的材料是否对皮下组织产生炎症反应，那么HE的结果包括哪些呢？”答：通过HE染色来评价是否有炎症反应以及炎症反应的强弱，通常有两种方法：炎症细胞浸润区域的面积大小和高倍视野下平均炎症细胞的数量。

1）H&E染色，在400倍下，是可以观察到明显的炎症细胞的，故可知道你的材料是否对皮下组织产生炎症反应；2）HE的结果通常用炎症细胞浸润区域的面积大小和高倍视野下平均炎症细胞的数量来评价，并通过统计数据，做出柱状图来进行统计学比较。

炎症细胞浸润区域的面积大小：可以用image pro-plus (IPP)软件来计算，首先用软件中的选择区域图标选出你的炎性细胞浸润的区域，然后再点击area count 计算该区域的面积，作为该张图片的炎性区域的面积，依次类推，计算出10张同一组HE图片的面积，求平均值作为该处理组的炎症反应的强度，用此法计算其他组炎症的强弱，进而比较。

高倍视野下平均炎症细胞的数量：计算方法类似，也可以用image pro-plus (IPP)软件来计算，设置每个炎症细胞的参数，然后统计。

He染色技术实验报告

He染色技术实验报告实验目的：本实验旨在通过He染色技术对细胞或组织样本进行染色，以观察其结构特征和形态变化，进而分析细胞或组织的健康状况。

实验原理：He染色技术是一种常用的组织学染色方法，通过使用苏木精（Hematoxylin）和伊红（Eosin）两种染料对细胞或组织样本进行染色。

苏木精主要对细胞核进行染色，使其呈现蓝色；而伊红则对细胞质进行染色，使其呈现红色。

通过这种对比染色，可以清晰地观察到细胞核与细胞质的形态和结构。

实验材料：1. 待染色的细胞或组织样本2. He染色液（苏木精和伊红混合液）3. 酒精系列（70%、90%、95%、100%）4. 二甲苯5. 显微镜载玻片和盖玻片6. 吸水纸7. 显微镜实验步骤：1. 将待染色的细胞或组织样本固定在载玻片上。

2. 用70%酒精轻轻清洗样本，去除杂质。

3. 依次使用90%、95%、100%酒精进行脱水处理。

4. 将样本浸入二甲苯中进行透明处理。

5. 将样本从二甲苯中取出，滴上He染色液，染色时间根据样本不同而有所变化，一般为5-10分钟。

6. 染色完成后，用吸水纸吸去多余的染色液。

7. 用70%酒精轻轻冲洗样本，去除未结合的染料。

8. 将样本浸入水中，轻轻摇动，使染色更加均匀。

9. 用吸水纸吸干水分，然后进行脱水、透明处理。

10. 最后，将样本放在显微镜下观察，记录细胞或组织的结构特征。

实验结果：通过He染色技术，我们观察到细胞核呈现深蓝色，细胞质呈现粉红色。

细胞边界清晰，细胞核与细胞质的对比明显，有助于对细胞形态进行详细分析。

实验讨论：He染色技术是一种简便、快速的染色方法，适用于多种细胞和组织的染色。

然而，染色效果可能会受到样本固定、染色时间、冲洗等因素的影响。

因此，在实验过程中需要严格控制操作步骤，以确保染色效果的准确性。

实验结论：本实验成功地应用了He染色技术对细胞或组织样本进行了染色，观察到了清晰的细胞结构，为进一步的细胞形态分析和病理学研究提供了基础。

he染色实验报告

he染色实验报告引言：HE染色实验是一种广泛应用于组织学研究和病理学诊断的染色技术。

HE染色是指同时使用血红素染剂（eosin）和碱性染料（hematoxylin）对组织切片进行染色的方法。

该实验旨在观察和分辨组织中细胞核和胞浆的微观结构和染色效果，为后续的组织学和病理学分析提供基础。

材料与方法：1. 组织样本：我们选取了一块经过固定处理的动物组织切片作为实验样本。

2. 实验设备：显微镜、玻片、盖玻片、染色槽、组织石蜡、梳子、PAP笔等。

3. 染色操作：a. 切片上蜡：将组织切片浸入组织石蜡中，使其具有坚硬性和刚性，便于后续的取样和染色操作。

b. 制片：将蜡块切割成薄片，并将其贴在玻片上。

c. 然后将玻片放入稳定器中，加热至60摄氏度以上，以去除蜡质。

d. 染色操作：将石蜡切片浸入hematoxylin染料中，使细胞核染色；随后，将其置于eosin染料中，使细胞质染色。

e. 脱水：使用酒精的递减浓度进行脱水处理，以将多余的染料和水分去除。

f. 覆盖玻片：在切片上覆盖盖玻片，使用PAP笔在盖玻片上写上标本信息。

结果与讨论：经过HE染色实验，我们成功地观察和分辨了组织切片中的细胞核和胞浆。

在显微镜下，组织中的细胞核呈现出暗紫色或蓝色的染色，而胞浆则呈现出粉红色的染色。

这种对比使得细胞核能够清晰地与胞质区分开来，为进一步的组织学研究和病理学诊断提供了基础。

通过观察HE染色后的组织切片，我们可以获得以下信息：1. 细胞核形态和结构：通过染色后的细胞核可以观察到其形态、大小和核仁的存在与否。

这些信息对于细胞分类和诊断不同的细胞疾病具有重要意义。

2. 细胞质组织结构：染色后的细胞质颜色鲜艳，可以观察到细胞内各种细胞器的分布和数量，如线粒体、内质网、高尔基体等。

3. 细胞排列与组织结构：HE染色能够显示细胞的连接方式和组织结构，如上皮细胞的排列方式、腺体的呈腔性结构等。

在病理学领域，HE染色被广泛应用于肿瘤的诊断。

he染色流程

he染色流程HE染色是一种常用的生物化学实验技术，用于检测样本中的蛋白质是否存在或定性分析蛋白质的相对含量。

下面是HE染色的基本流程：样品制备：首先，需要准备待检测的蛋白质样品。

通常情况下，蛋白质样品需要先进行预处理，如去除杂质、分离纯化、浓缩等。

样品制备的目的是确保待检测的蛋白质样品质量可靠、浓度准确。

染色液配制：HE染色需要使用特殊的染色液，其中包含了对蛋白质有特异性反应的化学试剂，如考马斯亮蓝、甲醇、乙醇等。

根据具体的实验需求，需要选择适当的染色液和染色条件。

蛋白与染色液反应：将准备好的蛋白质样品与染色液混合，在适当的条件下反应，通常是室温或微温，使蛋白质与染色液发生特异性反应。

这个过程需要注意控制反应时间，通常在30分钟到1小时之内。

样品清洗：反应完成后，需要将染色的样品进行清洗，以去除未反应的物质和干扰因素。

这个过程通常需要使用缓冲液或生理盐水，以确保清洗的效果。

观察和结果分析：清洗后的样品需要进行观察和结果分析。

通常情况下，观察可以通过肉眼观察或使用生物显微镜进行，同时可以结合扫描或摄影进行数据记录。

结果分析需要根据具体的实验需求和检测的蛋白质种类进行判断，如通过光密度扫描或荧光分析等。

在HE染色的流程中，需要注意以下几点：样品制备过程中需要注意蛋白质的质量和浓度，以确保检测结果的可靠性。

在选择染色液时需要根据实验需求和蛋白质的特点进行选择，以避免干扰因素。

在反应过程中需要注意控制反应时间、温度和pH值等条件，以确保反应效果。

在样品清洗过程中需要注意选择适当的清洗液和清洗时间，以去除未反应的物质和干扰因素。

在结果分析过程中需要结合具体的实验需求和检测的蛋白质种类进行判断，以得出准确的结论。

总之，HE染色的流程包括样品制备、染色液配制、蛋白与染色液反应、样品清洗和观察和结果分析等多个步骤。

在实验过程中需要注意细节和条件控制，以确保检测结果的可靠性。

HE染色操作常规流程

HE染色操作常规流程1.实验前准备：1.1收集待染色的样本（如组织切片、细胞涂片等），确保样本保存完整和无污染。

1.2准备好所需的染色试剂：包括有水洗试剂（如去离子水）、染色试剂（如伊红、伊红酒精和亚甲蓝）、染色剂工作液（如伊红酒精和亚甲蓝溶液）等。

2.试片处理：2.1将组织切片或细胞涂片分别放入热腺管或玻璃片上。

2.2连续经过苯酚甲酸苯酯脱脂、乙醇梯度洗脱等步骤，去除样本中的脂肪和碱性物质，以减少后续染色的干扰。

2.3用去离子水洗涤样本，使其充分湿润，除去残存的试剂。

3.染色操作：3.1把处理好的样本放入腺管或玻璃片，倒入伊红酒精溶液中，用大约15-30分钟染色，使细胞和组织成为红色。

3.2轻轻用清水漂洗试品，去掉多余染色液。

3.3加入亚甲蓝液，使样本转为蓝色，使细胞核染色成深蓝色，时间为1-2分钟。

3.4再次用清水将试品漂洗干净。

4.固定和封片：4.1用醋酸纤维素或氯仿等溶剂固定染色后的试片，使试样中的颜色得以固定。

4.2在试片上加一滴封片剂（如封片胶）。

4.3将盖玻片缓慢地放在试片上，使封片剂均匀地覆盖整个样本。

4.4将封片剂封住，使细胞和组织样本能够在显微镜下观察。

5.显微镜观察：5.1将染色好的试片放在显微镜下，调整镜头，适当调节光线强度和聚焦位置，以便观察样本的细节。

5.2观察细胞和组织的形态、染色强度和细胞核的染色情况，并进行必要的记录和照片拍摄。

以上就是HE染色操作的常规流程。

通过此流程，我们可以对细胞和组织样本进行染色，从而得到对染色体分辨和鉴定的结果。

这一技术使我们能够更好地了解细胞和组织样本中的结构和功能，对于生物学和遗传学的研究具有重要意义。

HE染色(石蜡切片)

20X
40X
一般要浸蜡3次，第一次时间30min，第二次时间2h(或者过夜) ，第三次1-2h(具体时间自己摸索)
将浸蜡彻底的组织用石蜡包埋成规
整的长方形块状物体，便于在切片机上切片。包埋时应注意包埋面，包埋好的组织块进行修整，把整块的组织面修出来。注意往模中倒蜡包埋时，浸蜡的组织块尽量在熔化状态，从而使蜡跟浸蜡的组织块形成一个整体。
（4）脱水与透明：染色后，再进行脱水与透明，用浓度递增的酒精脱水： 70%→85%→95%→无水酒精（各级2~3分钟，在95%以下浓度的酒精中伊红易脱色，应适当缩短时间），之后用二甲苯透明（10min2次）。
（5）封片：二甲苯透明后，将多余二甲苯擦拭去，滴加树胶封片。封片要及时，掌握好树胶的量。尽量做到树胶滴而不流，盖片满而不溢，无气泡。
组织经固定后含有许多水由于水跟石蜡不能互相溶解因此不能直接进行石蜡包埋还需经过脱水这一过程逐步用某些试剂将组织中的水分置换出常用的脱水剂是酒精脱水的目的是将固定了的组织内的水分去除以便使切片时的支撑物石蜡充分进入组织内水跟石蜡不能相互溶解
HE染色(石蜡切片)
一．取材与组织的固定二．组织固定后处理及石蜡切片三．HE染色
将石蜡包埋块置于切片机切片，厚度5um。经过修整的石蜡包埋块，在切片之前进行冷冻（0~-10摄氏度），在夏季高温的情况下冷冻时间相对要长。在切片过程中，组织面完全暴露，整张切片必须完整，切片刀要锋利，切片机各螺丝要旋紧（不切片时切片机要关上保险，防止被刀片割伤）。
苏木精是一种碱性染料，将嗜碱性的细胞核
为了减少组织块过度收缩，往往在无水酒精之后，先经过酒精二甲苯的混合液，然后再浸入二甲苯中。无水酒精：二甲苯=1：1，15min一次；二甲苯，15min两次。（具体时间自己摸索）

HE染色原理

HE染色原理详解1. 引言HE（Hematoxylin and Eosin）染色是一种广泛应用于组织切片染色的方法。

它是组织学研究中最常用的染色方法之一，可以用于观察和识别不同类型的组织细胞、细胞器和细胞组分，对于发现和诊断疾病具有重要的意义。

本文将详细介绍HE染色的基本原理以及每个步骤的具体操作。

2. HE染色基本原理HE染色使用两种染料，即天青（Hematoxylin）和伊红（Eosin）。

天青染色核酸物质，如细胞核和核染色质；伊红则染色细胞质和细胞器。

这两种染料相互作用，形成了HE染色效果。

2.1 天青（Hematoxylin）染色原理天青是一种天然染料，通过与组织中的阴离子基团结合而发生染色反应。

天青与酸性物质结合形成的盐类在碱性条件下呈现出蓝色或紫色，使得细胞核等含有核酸的区域染色深蓝色。

天青染色可以分为以下几个步骤：1.组织固定：将待染的组织标本进行固定，一般使用10%中性缓冲福尔马林。

2.脱水：将组织标本通过逐渐浓度递增的酒精溶液进行脱水处理。

3.清洁：用去嵌剂的醛固定液对组织标本进行处理。

4.蜡包埋：将组织标本放入熔蜡中，使其浸透均匀。

5.切片：用梯度旋转切片机切取薄片。

6.抗静电：使用正电极处理切片以减少静电。

7.染色：将切片浸入天青染料中，使其染色蓝色。

8.除碱：用醋酸或其他酸性溶液将切片除去多余的天青染料。

9.脱水：逆序使用乙醇溶液将切片脱水。

10.透明：用透明度递增的有机溶剂对切片进行透明化处理。

11.封片：将切片放入玻璃片中，并用固定剂固定。

2.2 伊红（Eosin）染色原理伊红是一种酸性染料，其分子中含有阳离子染色基团。

伊红可与细胞质内的嗜多染色质、酸性粒细胞内的颗粒以及胶原纤维等物质结合，形成染色沉淀，使细胞质等区域呈红色。

伊红染色可以分为以下几个步骤：1.脱蜡：将切片放入去蜡剂中，去除组织标本中的蜡质。

2.脱水：使用递减浓度的酒精溶液对切片进行脱水处理。

3.染色：将切片浸入伊红染料中，使其染色红色。

HE染色基本流程

HE（Hematoxylin & Eosin ）染色基本流程苏木精—伊红染色法简称HE 染色法，它是最常用的普通染色方法。

苏木精是阳离子染料，将细胞核内的嗜碱性物质染成蓝紫色。

伊红是阴离子染料，将细胞质和胶原纤维等染成粉红色。

1、二甲苯脱蜡三道，每道30min2、无水乙醇两道，每道5min3、95%乙醇两道，每道5min4、80%乙醇5min5、70%乙醇5min6、50%乙醇5min7、蒸馏水3-5min8、苏木素染色液5-10min ，根据染色结果和气温调整时间9、浸自来水冲洗多余的染色液10、%盐酸酒精分色（70%酒精配制）3-10seconds11、水洗蓝化15-30min12、50%乙醇5min13、70%乙醇5min14、80%乙醇5min15、伊红染色液（95%乙醇配制）60seconds16、95%乙醇两道，每道5min17、无水乙醇两道，每道5min18、乙醇+二甲苯（1:1）5min19、二甲苯三道，每道5min20、中性树胶封片HE 染色注意事项：1. 染色时调节pH 值很重要。

如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。

因此，自来水中冲洗时间要长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min,这样可以使细胞核着色较深。

染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2 滴冰醋酸。

2. 切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。

如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。

3. 切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。

4. 在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态5. 切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。

6. 最后封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组织块的面积，如漏出一部分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡。

HE染色技术

HE染色技术
主要内容
一、HE染色原理二、试剂三、染色步骤四、注意事项五、几种常见的染色问题
一、HE染色的原理及分类
1、HE染色的原理
苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称 HE染色法，是普通光学显微镜观察与鉴别细胞凋亡与细胞坏死的一种染色方法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 HE染色是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法.
速擦去,在滴上一滴树胶于组织片上,然后取干净的盖玻片,仔细加在封固剂上,慢慢压平, 使盖片位置适中。切片封固后,放在温箱中烤干,或平置凉干后装盒。
四、HE染色注意事项
• 为使切片制作更符合质量标准或最佳。除按步骤严格进行外, 还应注意以下几点:
• <1>.用含升汞的固定液固定的组织块,在切片染色前, 应进行脱汞,具体方法:切片脱蜡,逐次进入70%酒精后, 入稀碘液(碘1克,碘化钾2 克,蒸馏水3000ml)内5～ 10min。蒸馏水稍洗,入5%硫代硫酸钠溶液内5min。蒸馏水充分洗后进入染色。
HE染色注意事项
• <3>.如组织片含有大量黑色素时,影响染色和检查,可在脱蜡后, 浸水后用0.25%高锰酸钾胶2～4h ,然后,常水充分洗涤,或经1% 草酸液脱去切片上的黄褐色后,再充分水洗,后进入染色。
• <4>.在切片染色后,进行脱水时,当通过90%酒精后,应对切片进行仔细擦试,此时,把切片中组织片周围的污染涂色或水分用纱布(清洁)擦干净。当切片从 100%酒精出来时,也要认真仔细擦去污物及组织片附近的水分。这样即可使组织脱水彻底,还可使酒精浓度不至明显降低尽量保持酒精原浓度。