银染
DNA和蛋白银染步骤(独门绝技--有图)
DNA银染一、银染试剂500ml/瓶(双蒸水稀释)1、固定液：50ml乙醇2、前处理液（敏化液）：5ml HNO33、染色液：0.5g 硝酸银（避光配制）4、显色液：无水Na2CO3 12.5g 甲醛200ul 加水至500ml5、终止液：50ml 冰醋酸二、银染步骤（摇床设置52rpm左右）1、准备好放有双蒸水的塑料盒，将电泳后的变性胶放入盒中在摇床上轻摇1min；2、凝胶固定：倒掉盒中的水，加入100ml左右的固定液，摇床上缓缓摇动10min；3、洗胶：弃固定液，用双蒸水洗2次，每次30S；4、凝胶氧化：弃双蒸水，加入100ml左右前处理液氧化6min；5、洗胶：弃前处理液，用双蒸水洗2次每次10S；6、凝胶染色：弃双蒸水，加入100ml左右的染色液避光摇20min；7、洗胶：弃染色液，用双蒸水洗1次10S；8、凝胶显色：加入100ml显色液摇到看到清晰的条带为止；9、终止：弃显色液，迅速加入终止液100ml左右，摇2-3min；10、洗胶：弃终止液，用双蒸水洗2次每次1min。
三、变性聚丙酰胺凝胶的配制（两块、使用1.0BioRad胶板）1.2%的凝胶可以跑微卫星，和基因组DNA1、尿素：7.2g2、30%聚丙酰胺，4.68ml3、10×TBE，1.5ml (Tris碱108g；硼酸55g；EDTA 40ml 0.5mol/L,Ph=8.0；加水至1L)4、30%AP，35ul5、TEMED,4ul四、下图：左为果蝇正常基因组DNA与损伤后基因组DNA；右为果蝇微卫星电泳12h Treatment24h TreatmentMCT 0 5 10 200 5 10 20Protein银染一、银染试剂500ml/瓶(双蒸水稀释)1、固定液：200ml甲醇，50ml冰醋酸2、前处理液（敏化液）：150ml 乙醇，34g醋酸钠，1g硫代硫酸钠（使用前加入）3、染色液：1.25g 硝酸银（避光配制）4、显色液：无水Na2CO3 12.5g 甲醛200ul 加水至500ml5终止液：2g甘氨酸二、银染步骤（摇床设置52rpm左右）1、凝胶固定：准备好放有双蒸水的塑料盒，将电泳后的变性胶放入盒中，加入100ml左右的固定液，摇床上缓缓摇动30min；2、洗胶：弃固定液，用双蒸水洗2次，每次1min；3、凝胶氧化：弃双蒸水，加入100ml左右前处理液氧化30min；4、洗胶：弃前处理液，用双蒸水洗3次每次5min；5、凝胶染色：弃双蒸水，加入100ml左右的染色液避光摇20min；6、洗胶：弃染色液，用双蒸水洗2次每次5min；7、凝胶显色：加入100ml显色液摇到看到清晰的条带为止；8、终止：弃显色液，迅速加入终止液100ml左右，摇10min；9、洗胶：弃终止液，用双蒸水洗2次每次5min。
考染与银染资料
常用的蛋白质染色试剂分为已考马斯亮蓝为代表的有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。
其中考马斯亮蓝染色法的应用较为广泛，现将其与其他的蛋白质染色方法(主要是银染法)作一比较，帮助大家更好地去选择合适的蛋白质染色方法。
蛋白质的染色常用的有4类：有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。
其中有机试剂染色以考马斯亮蓝染色法(Coomasie brilliant blue ，CBB)为代表，在蛋白质分析中常用，但对低丰度蛋白质的显现较差;银染灵敏度虽高，却常与质谱不兼容；荧光染色以SYPRO试剂为主，蛋白质检测灵敏度高，能兼容质谱，但由于需要配备特殊的检测仪器及试剂的昂贵，未被作为常规方法使用；而同位素显色则存在安全性和操作局限性等问题。
因此，筛选简便、节约、检测灵敏度高、质谱兼容的蛋白质着色法是蛋白质组研究所需。
由于考马斯亮蓝染色法的广泛运用，近年来就考马斯亮蓝染色法在提高其灵敏性方面研究者们作了许多改进，方法众多，评价不一。
我们在作双向凝胶电泳时，将常用的几种考马斯亮蓝染色法及银染进行了比较，并就其染色影响因素作岀分析。
试剂固相pH 梯度干胶条(IPG strip pH3-10NL , IPG strip pH5-8 , 17cm )、urea、CHAPS、TBP、DTT、Bio-Lyte裂解，静置30分钟，15500X g离心30分钟，取上清，进行蛋白质定量。
单向定量电泳取蛋白质分子量标准物，第一次按1 : 2稀释后，以后按1 : 3倍比例逐级稀释，经4级稀释后，取15卩l 上样液上样，性半乳糖苷酶上样量依次分别为1川、0.24 tig 0.062 tig、0.0156 0.004 心作12g/L SDS-聚丙烯酰胺凝胶单向电泳，同时电泳4份胶，显色以确定染色灵敏度。
双向电泳取3001样品液沿水化盘中槽的边缘自左向右线性加入，将17cm IPG胶条胶面朝下置于槽中，静置45分钟后覆盖矿物油，在20 C溶胀11〜16小时。
银染高尔基体的原理
银染高尔基体的原理银染高尔基体原理是指在显微镜下观察细胞或组织切片时，通过使用银盐处理使细胞或组织中的一些部分显现出银污染的现象，从而增强细胞或组织的显微镜观察效果。
该原理是通过银离子与细胞或组织中的一些物质结合，生成银盐沉淀物，从而显现细胞或组织的形态、结构和组成成分。
1.染色：首先将切片放入带有银离子的染液中浸泡。
在染液中，银离子可与细胞或组织中的一些亲银物质如核酸、蛋白质反应生成络合物，即银盐。
染色时间的长短会影响银盐的生成程度和颜色强度。
2.显影：染制之后，将切片用光或热暴露于显影溶液中。
显影溶液中一般含有还原剂，如亚硝酸盐，通过还原作用将银离子还原成金属银，从而使银盐沉淀出现颜色。
同时，还原剂可与银盐结合形成多余的沉淀物。
3.固定：最后，将切片放入含有固定剂如硝酸等的浸泡液中，固定切片并中和显影溶液产生的酸性物质。
同时，固定剂可以使切片保持稳定，防止银盐溶解或褪色。
然而，银染高尔基体也存在一些限制和注意事项。
首先，染色结果受到很多因素的影响，包括组织固定的条件、染色液的配制和使用、显影条件和时间等。
其次，显影的过程中需要控制显影时间，特别是对于细胞数量较少或低亲银性的细胞组织，显影过久会导致银盐过度显影，造成背景干扰。
此外，银染高尔基体染色方法相对比较复杂和耗时，不适用于常规的组织切片分析。
综上所述，银染高尔基体通过利用银盐与细胞或组织中的亲银物质反应，生成银盐沉淀物，从而增强细胞或组织的显微镜观察效果。
其原理主要包括染色、显影和固定三个过程。
该技术可用于研究细胞核酸和蛋白质的结构和功能，但在应用中需要注意控制染色和显影条件，以获得准确的结果。
银染方法总结
银染的方法种类很多，目前有文献报道的就有100 多种。
大致的原理是银离子在碱性pH 环境下被还原成金属银，沉淀在蛋白质的表面上而显色。
由于银染的灵敏度很高，可染出胶上低于1 ng/蛋白质点，故广泛的用在2D 凝胶分析上，及极低蛋白含量测定的垂直凝胶中。
这里介绍的是我们实验室成功运用的银染方法，主要是用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测！如内源性GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究银染操作规程实验原理：在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。
染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。
试剂：乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛实验操作程序：固定：30min或者更长时间100ml 乙醇（40% 乙醇）25ml冰醋酸（10% 冰醋酸）加水到250ml致敏：30min75ml 乙醇（30% 乙醇）17g乙酸钠或28.2g三水乙酸钠0.5g硫代硫酸钠加水到终体积250ml 水洗：3 x 10min银染：20min0.625g AgNO3、100 ul 37%甲醛（在使用前加入）加水到终体积250ml水洗：2 x 1 min (注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色)显色：视情况而定6.25 g Na2CO3、50 ul 37% 甲醛（在使用前加入）加水到终体积250ml终止：10min3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸加水到终体积250ml保存：1% 冰醋酸，4 ℃注意事项：1．固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。
2．甲醛在使用前加入。
3．最好多配制一份显色液，第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液，显色到点清晰。
4．显色过程很快，要注意把握时间，避免染色过度。
5．银染液和显色液需要预冷。
银染
一、银染前准备1. 银染水质很重要，最好全部双蒸水或去离子水。
2. 装胶的器皿清晰干净，最后双蒸水多冲几遍。
3. 操作时戴手套，不然gel上会有大手印。
4. 跑胶时我采用大梳子，小样本量。
因为银染本身分辨率就很高，样本量太大时杂带太浓。
小梳子的条带比较模糊。
二、银染过程1. 电泳结束后，自来水冲洗玻璃板两面，预冷，剥下凝胶，双蒸水洗涤两次。
2. 浸没于0.1%的AgNO3溶液中，摇床银染10分钟。
注意事项：a. 时间。
银染时间可延迟到15分钟，但是千万不要超过20分钟，否则胶的背景极深，一个字，丑。
b.浓度。
硝酸银溶液浓度不宜超过0.15%，我的经验表明，AgNO3浓度越高，胶越黄越丑。
3. 双蒸水冲洗两次，1min。
注意事项：a. 充分的漂洗可以降低背景色。
因此漂洗时间一定要到1min4. 浸没于1.2% NaOH+ 0.4% 甲醛溶液中显影，看到模糊的条带后立即大量双蒸水冲洗，中止显影。
注意事项：a. 白色器皿，看条带比较方便。
b.出现淡淡条带后立即中止银染。
千万不要等到看到清晰的目标条带时才中止显影，那时已经显影过度，拍片时背景色极深，丑。
c. 采用“低浓度NaOH×长时间显影”的策略。
实验证明浓度较高的NaOH（浓度超过1.5%）很容易显影过度。
因此不采用“高浓度NaOH×短时间显影”的策略。
d.为便于控制显影速度，得到最佳的信噪比，显影液温度不要过高（显影液提前半小时配，NaOH溶解后会释放热量，导致显影液温度过高），以10度左右为宜，温度过高则易显影过度，背景深；温度过低则显影时间延长。
e. 显影后尽早拍片。
胶片会随着时间逐渐变黄，条带越来越浓，最后杂带逐渐显现，因此拍品要趁早。
时间拖得越久，片子越难看。
蛋白质银染原理与方法
原理：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是2～5.0ng／蛋白条带。
① SDS-PAGE电泳。
注意：银染检测蛋白质的水平是在100ng左右，与CommassieBlue染色比较，银染加样量要少。
否则难以得到清晰的电泳分辨率。
②电泳结束后，戴手套将PAGE胶转移到干净的玻璃培养皿或TIP头盒盖中。
加入25ml FixingSolution（固定液），室温振荡保温30min。
胶需要完全淹没在固定液中。
③彻底弃去固定液，加入25mlIncubation Solution（保育液），室温振荡保温30min。
胶需要完全淹没在保育液中。
④彻底弃去IncubationSolution（保育液），用50ml去离子水洗3次，每次5min。
⑤准备：取2.5ml 10XSilvering Solution, 加入22.5mL水，混匀后使用。
⑥弃去洗涤的水，加入25mlSilvering Solution (银染液)。
室温振荡保温20min。
⑦彻底弃去银染液，加入25mLDevelopingSolution（显色液），室温振荡保温1~10min。
注意观察目的条带。
如果目的条带出现了，可以考虑终止显色。
显色时间不要过长，否则本底较深。
⑧彻底弃去显色液,加入25mLStopping Solution（终止液），室温振荡保温10min。
⑨彻底弃去StoppingSolution（终止液），用50mL去离子水洗3次，每次5min。
弃去洗涤的水，加入25mL PreservingSolution（保护液），室温振荡保温20min。
银染PAGE胶可以拍照保存，也可以室温玻璃纸干燥。
今天第一次银染，结果出来啥也没有，凝胶就像一块海带一样。
能不能提供详细的银染步骤呢？好像有好几种版本，哪位大侠有经验的希望能点拨一下？hotstoe wrote:1. 取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒.2. 0.1% 硝酸银染色10分钟.3. 弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟.4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.显色液配方: 10克氢氧化钠+0.2克碳酸钠+2m甲醛溶液,定溶到500ml.这个染色方法挺好的,我用过.注意染色时间不能长.我的经验是：1.取下凝胶用去离子水冼胶30秒三次，2.0.1% 硝酸银染色10分钟.3.弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟（换2次去离子水）4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.不要试图将所有的条带都显出来，要求越高可能导致背景就深，5.染色后要用固定液（冰乙酸）终止染色，6.固定3分钟后再用去离子水洗涤2遍（整个试验比较费去离子水）。
银染经验谈
银染是一种常用的蛋白质染色方法，具有较高的灵敏度，可以染出SDS-PAGE胶中含量低至0.2ng的蛋白。
虽然这是protocol上的说法，但如果操作得当，检测到5ng左右的蛋白应该不成问题。
如果搜索银染的protocol，可能会得到许多种说法。
为什么这样一种重要的实验手段却得不到统一的应用呢？这可能要从银染本身那复杂而又灵活的原理说起。
简单的讲，银染的原理就是将银离子还原，附着在蛋白表面，形成染色。
银染所用的银，基本上是基于两种试剂，一种是硝酸银，另一种是Silver diammine。
基于硝酸银的应用要多于后者（据说Silver diammine比较费“银子”），现在主要说说基于硝酸银的银染的原理。
银离子容易被还原，在PAGE胶上，哪里的银离子先开始被还原，哪里就先开始出现条带。
通常由于蛋白质结构上的复杂性，一部分银离子结合在蛋白质之上后会影响更多银离子的结合，所以有蛋白的地方银离子较少，如果不做任何处理，有蛋白的部位将会染色更浅，所以最初的银染是负染。
那最初的负染是如何演变成正染色的呢？一方面是选用还原速度较慢的还原剂，如甲醛，另一方面，利用慢还原争取到的时间将胶上多余的银离子洗去，由于银离子对蛋白质有一定的结合力，故更多地保留在有蛋白的位置，于是形成了正染。
但是这种染色的方法灵敏度还不是很高，所以人们又在染色之前加入了敏化的步骤，能够使银染敏化的试剂很多，一类是增加蛋白质与银离子的结合位点，如SDS等；还有一类能使银离子和蛋白形成silver sulfide等结合，硫代硫酸盐起到的就是这个作用；还有的试剂兼顾上述两种功能，如戊二醛。
通过敏化过程，银染的灵敏度大大增加，同时也降低了背景。
综上，银染的原理概括如下：让银离子尽可能多的于蛋白结合，尽可能的洗掉胶上的银离子，然后还原显色。
各种各样的protocol基本上都是基于这个原理。
最为经典的一个版本是这样的：谈谈其中一些具体步骤：1. 固定，固定的作用主要是使蛋白变性，防止蛋白在扩散2. 敏化，戊二醛和硫代硫酸钠都是增加蛋白和银离子的结合，但是做质谱兼容银染的时候一般都把戊二醛去掉，原因是对蛋白造成修饰（在我的实验中，有戊二醛存在的时候一般也能鉴定到蛋白，不知道是不是去掉更好）。
银染aav纯度鉴定原理
银染aav纯度鉴定原理银染（Silver Staining）是一种常用的蛋白质染色技术，非常适用于核酸电泳分析和研究。
而纯度鉴定是确保蛋白质样品中目标蛋白的含量高，且无杂质的重要步骤。
在银染aav （Adeno-Associated Virus，腺相关病毒）纯度鉴定中，我们可以采用以下原理：1.样品制备：将含有目标aav的样品进行破碎和裂解，释放出其中的蛋白质。
经过离心等步骤，得到蛋白质上清液。
这是进行纯度鉴定的起点。
2.蛋白质凝胶电泳：将样品中的蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳分离。
通常使用的是SDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis）技术，它能够使蛋白质在电场中按照分子量进行迁移。
3.银染法：将经过电泳分离的蛋白质在凝胶上进行银离子反应，形成深紫色或黑色的沉淀，从而可视化蛋白质的分布情况。
银染法对蛋白质含量敏感，且具有较高的分辨能力。
4.分析结果评估：通过观察银染后的凝胶，我们可以根据目标aav蛋白与其他蛋白质之间的迁移距离和沉淀程度，来初步评估样品中目标蛋白的纯度。
较高的纯度将表现为目标蛋白清晰的单个带状沉淀。
5.图像分析：使用图像分析软件可以量化评估银染结果，测量蛋白质带状沉淀的强度和宽度，进而计算出目标蛋白的相对含量。
这种定量分析可以更精确地确定aav样品的纯度。
总结而言，银染aav纯度鉴定基于蛋白质的分离和银染反应，通过观察和分析蛋白质在凝胶上的迁移和沉淀情况，可以初步评估目标蛋白的纯度，并通过图像分析软件进行定量评估。
这种方法可帮助研究人员确保aav样品中目标蛋白质的高纯度和可靠性，为后续实验和应用奠定基础。
我们实验室用的银染方法
我们实验室用的银染方法1.50%甲醇浸泡15分钟(置于摇摆床上,以下省略,本步骤两次,每15分钟更换一次)2.10%甲醇浸泡10分钟3.水漂洗3次,每次数秒4.2μM DTT溶液浸泡20分钟5.0.1%硝酸银溶液浸泡20分钟6.水漂洗3次,每次不超过15秒(每次约150ML)7.显色液漂洗3次,每次不超过15秒(每次约100ML)8.显色液浸泡显色至看到目的蛋白带(约200ML)9.10G柠檬酸定影显色液:15G无水碳酸钠溶于500ml水,用前加入250μL福尔马林搅拌均匀水用双蒸水就可以,纯度越高越好,其他试剂用分析纯,据书上说甲醇用化学纯的比分析纯更灵敏此方法出自冷泉港蛋白质技术指南(实际上是其蛋白质技术会议的总结)灵敏度稍低于分子克隆上老方法,但是非常方便,也比其他方法快速,只需要1.5小时,我染出来的胶非常漂亮,有需要的话可以上传给大家看看一般来说，高背景是由于杂质产生的，银染的水质很重要，最好要用去离子水或双蒸水，装胶的器皿也一定要洗得很干净。
固定、银染之后均需充分的漂洗。
其实银染就是银镜反应，可能是你的样品浓度高，所以白了，浓度更高还会变成一条能反光的带。
固定时间不需加长，我有时来不及还减少固定时间，银染关键是器皿和溶液干净，显色前胶一定要漂干净大板本来效果就差点，浓度越大，条带形状越差，这也很正常，银染薄点的胶效果要好些，因为染的是表面的蛋白1.取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒.2. 0.1% 硝酸银染色10分钟.3. 弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟.4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.显色液配方: 10克氢氧化钠+0.2克碳酸钠+2m甲醛溶液,定溶到500ml.这个染色方法挺好的,我用过.注意染色时间不能长.材料没什么要求，玻璃会更好一点，但不好搞到，我们是见到什么大小合适就用什么。
液体的量一般是胶体积的5倍，比如13×13×0.1cm的胶，用一百ml一定够，80也行。
银染
银染步骤及相关药品配制快速银染步骤1．洗板和擦板电泳槽板先用无水乙醇擦一遍，5分钟后用配制的剥离硅烷（repel，4度保存）--（使电泳槽与胶分离）溶液涂抹均匀。
放置15－30分钟玻板（用过的玻板先用NaOH溶液（1瓶加约25L水，可反复使用）浸泡1-2（30min）天，直至废胶脱落）先用抹布蘸少许洗洁精在自来水下洗净，再用无水乙醇擦一遍，5分钟后用新鲜配制的溶液【亲和硅烷（binding）8ul+冰乙酸8ul+无水乙醇至2.0ＥＰ管满】【配方二：200ul binding原液+50ml 蒸馏水，可久存】涂抹均匀。
放置15－30分钟2．装板玻板在下，电泳槽板在上，中间放两根压条(涂抹repel和binding的面相互靠近)，对齐后，用三对夹子将波板与电泳槽板夹紧。
3．灌胶用针筒吸取凝胶混合液【配方一：50ml 6％的聚丙烯酰胺凝胶溶液+100ul APS（即10%的过硫酸铵：超纯过硫酸铵2g+18ml超纯水）+200ul TEMED】【配方二：50ml 6％的聚丙烯酰胺凝胶溶液+350ul APS（即10%的过硫酸铵：超纯过硫酸铵2g+18ml超纯水）+28ul TEMED，该溶液很快就凝固，需快速灌胶】缓慢均匀的从灌胶口将胶灌入，灌好后取下靠近灌胶口的夹子，倒插入梳子，注意不要起汽泡，插好后，再夹上夹子。
凝胶需要1－2（30min）个小时。
4．预电泳（主要是使凝胶的温度达到一定高度）取下夹子，拔出倒插的梳子，在自来水下将灌胶口冲洗干净，放入电泳槽，卡紧，灌入缓冲液，上下槽各300ml左右，上下槽用一样的缓冲液（即1×TBE）注意用夹子夹紧上槽排放缓冲液的胶管。
80W衡功率电泳半小时。
5．点样用吸管吹干净灌胶口的废胶，将梳子顺插入灌胶口，再用吸管将每个梳孔吹干净，开始点样，注意不要串样，梳齿不要将胶面弄坏。
6．电泳80W衡功率电泳1小时左右（电压可能达到1100V-2000V，若太高则有可能配错，将功率调低，以免温度过高，玻璃板裂开）。
电泳银染原理
电泳银染原理电泳银染原理1. 介绍电泳银染是一种常用的蛋白质分析技术，可用于检测和定量蛋白质。
本文将从基本原理、操作步骤以及优缺点等方面进行介绍。
2. 基本原理电泳银染基于电泳分离原理，通过电场的作用将蛋白质分离成不同电荷的带点，并利用银离子与蛋白质结合形成可见的银颗粒，从而使分离出的蛋白质区域显现出染色。
3. 操作步骤电泳银染的操作步骤主要包括准备样品、电泳分离、固定蛋白质和银染。
准备样品首先，需要将待分析的蛋白质样品进行制备。
通常包括提取蛋白质、测定蛋白质浓度、标记蛋白质等步骤，确保样品浓度适宜且能与电泳介质配合良好。
电泳分离将准备好的样品加载到准备好的电泳介质中，通常是聚丙烯酰胺凝胶。
施加电场后，蛋白质根据其大小和电荷差异在凝胶中移动，实现分离作用。
固定蛋白质为了增强染色效果，需要将分离出的蛋白质固定在凝胶上。
使用甲醛等试剂固定蛋白质，使其与凝胶交联，以防止后续步骤中的蛋白质流失。
银染银染是电泳银染的核心步骤。
首先，将固定的蛋白质与银离子接触，银离子会与蛋白质中含有的亲银基团发生反应，形成可见的银颗粒。
然后，通过一系列洗涤、显色和停止反应的步骤，实现对银颗粒的增强和可视化。
4. 优缺点电泳银染作为一种常用的蛋白质分析方法，具有以下优点和缺点：优点•灵敏度高，可以检测低浓度的蛋白质。
•分辨率高，能够准确分离不同大小和电荷的蛋白质。
•操作相对简单，不需要使用昂贵的设备。
缺点•染色过程相对复杂，需要掌握一定的技术。
•染色结果呈现一定的变异性，不同实验条件下结果可能有差异。
•对于一些特殊的蛋白质，可能出现较大的染色偏差。
5. 结论电泳银染是一种可靠的蛋白质分析技术，以其高灵敏度和高分辨率备受广大科研人员的青睐。
虽然操作过程相对复杂，但掌握正确的操作步骤和技巧，能够得到准确的结果。
此外，对于染色结果的解读和分析也需要结合实验设计和其他技术手段进行综合评估。
6. 拓展应用除了在蛋白质分析领域，电泳银染还有一些其他的拓展应用。
银染步骤及注意事项
银染步骤及注意事项银染色步骤为1次固定10分钟冰醋酸2用双蒸水洗涤凝胶，每次1分钟3染色液1g硝酸银。
5mL37甲醛1L双蒸水现在匹配染色30分钟。
4.快速清洗并清洗凝胶数次。
5开发30克碳酸钠1.5毫升37甲醛200微升10毫克/升硫代硫酸钠显影直到出现清晰的条纹银染色成功的关键因素包括:1 .用超纯水，如纳米纯水或Milli-Q或双蒸水进行银染色的纯化2.使用提供的碳酸钠或ACS试剂级碳酸钠染色后用于水洗的时间长度非常重要。
清洗胶水，然后将其放入通常浸泡在水中的显色溶液中，只需5-10秒钟。
4使用前及时向显色液中加入甲醛和硫代硫酸钠ul/1ml5.使用前及时配制染液银染方法有很多种，目前文献报道有100多种。
然而，确切的染色机理还不是特别清楚。
一般原理是银离子在碱性酸碱度环境下还原成金属银，沉淀在蛋白质表面形成颜色。
银染色广泛用于2D凝胶分析和垂直凝胶，用于极低蛋白质含量的测定，因为它对低于1纳克/蛋白质斑点的染色凝胶具有高灵敏度。
本文介绍了我们实验室成功使用的银染色法，以补充关键操作和要求。
主要用于垂直凝胶电泳中低丰度蛋白的检测，如内源GST-Pulldown、Co-IP等实验中相互作用蛋白的研究。
银染色程序用于检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质。
实验原理是在碱性条件下，用甲醛将蛋白质带上的硝酸银和银离子还原成金属银，在蛋白质带上沉积银颗粒。
染色程度与蛋白质中某些特殊基团的有关。
不含或很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时会被染色。
银染的详细机制尚不十分清楚。
试剂乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或乙二胺四乙酸。
Na2.2H2O，甲醛实验程序固定30分钟或更长时间100毫升乙醇40毫升乙醇25毫升冰醋酸10毫升冰醋酸加水250毫升敏化30分钟75毫升乙醇30毫升乙醇17克醋酸钠28.2克三水醋酸钠0.5克硫代硫酸钠加水250毫升水洗涤3×10毫升银染料20分钟0.625克硝酸银100微升37甲醛加水至最终体积250毫升使用前用水冲洗2×1min注意掌握时间水冲洗时间长颜色慢点是黄色发展取决于情况o 6.25 g Na2CO3 o 50 ul 37甲醛添加o 水至最终体积2使用前50ml终止10 min o 3.65 g EDTA、na 2.2h2o 或1g甘氨酸o加水至最终体积250ml保存1冰醋酸4℃注意事项1如果固定时间较长，加一步水洗30分钟以避免胶水太脆而破裂。
lps银染鉴定法
lps银染鉴定法说到银饰，大家肯定都会心生向往。
谁不喜欢那闪闪发亮的银光呢？尤其是那些个古色古香的银器，看起来又高雅又有品位，拿在手里，简直有种优越感。
不过，随着市场上的银饰越来越多，假的也渐渐多了，怎么辨别呢？今天就给大家聊聊一种特别实用的“银染鉴定法”，就是通过LPS银染这个方法来辨别银饰的真伪。
简单、实用，效果杠杠的，听起来就让人有点期待吧？银染鉴定法听起来很专业，对吧？但你完全不需要担心它有多复杂。
LPS银染是通过一种特别的试剂来对银饰进行检测，看它是否含有银元素。
怎么说呢，就像医生给你检查身体一样，银饰也得“体检”一下，看是不是“健康”。
不过，这个“体检”的过程其实一点都不痛，还挺有趣的。
想象一下你买了一块心仪已久的银项链，突然发现自己手里拿着的东西不知道是真是假，这种感觉一定很不爽吧？所以这个时候，LPS银染法就能帮你解决问题。
话说回来，LPS银染法可不是一味地往银饰上涂个什么东西。
它可是通过专业的染色试剂来分析银饰的成分。
你想，银染一上，假银饰的“底色”马上就显现出来，像个偷偷摸摸的坏小子，藏不住自己的心虚。
所以，如果你看到银饰在试剂的作用下迅速染色变色，那你就可以放心了，至少它的成分大致是合格的，真银的可能性很大。
相反，如果什么变化都没有，或者是变化得不明显，那就要小心了，可能这玩意儿根本就不是银。
但别看这个过程简单，效果却特别明显。
就像有的人看脸能一眼看穿真假，LPS银染法也是如此，通过色变来直观地告诉你银饰的真伪。
是不是有点神奇？还是得提醒一下大家，虽然这个方法很靠谱，但它也有局限性。
如果银饰表面做了特别的处理，比如镀了一层银，或者用了某些特殊的合金，可能就没那么灵验了。
这个时候，还是要配合其他的方法一起使用，才能更准确地判断。
怎么操作呢？大家完全可以自己动手做个小实验。
拿个小瓶子，里面装上LPS银染试剂，然后拿上你的银饰，轻轻地放进去看看。
哎呀，这个过程就像是看一场魔术表演，银饰一旦染上颜色，你马上就能看出它的真假。
细胞生物学 银染法 9页
-关于核仁组织区不得不说的二三事
纯 手 打 ， 勿 喷
Байду номын сангаас
银染法
银染法是生物科学常用的试验方法，种类 有很多，具体染色机制尚不明确，大致原 理是银离子被还原成银颗粒沉淀在蛋白质 表面从而显色，染色的程度与蛋白中的一 些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱 氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。
在这里，我们可以用银染法来研究rRNA转录的活性
核仁成周期性变化，在前期结束时才完全消失，此时 rDNA已经收缩成为次缢痕，不再进行转录活动，因 此相应的蛋白质水平也随之降低，这一情况也可以被 银染法表示为银染颗粒颜色较浅或者根本不见银染颗 粒Ag-NOR。细胞分裂末期后，染色体解旋，NOR又 开始合成rRNA,重组核仁，那些个酸性蛋白质又将回 到原有水平。
在分裂期，这些DNA袢环又螺旋化为染 色体的一部分，具体位置是在染色体的 次缢痕部位（如图），具体在人类上， 是13、14、15、21、22这几条染色体。
然后，rRNA就是在这样的一个地方合成的，具体合成过程与所谈的主题无太多 关系，不多赘述。
核仁组织区银染法原理
当NOR在间期转录时，产生一种与转录活动密切相 关的酸性蛋白在基因附近（C23，B23），此蛋白含 有大量S-H基团和二硫键，可保留至中期并能将染液 中的银离子还原为金属银而显现为黑色。而没有转 录活性的NOR则不会被染色，所以银染法可在中期 染色体上显示具有转录活性的NOR数目，而且，染 色的深黑程度，还可以反应出基因的活性高低。
rRNA
核仁
核 仁 是 转 录 加 工
和 装 配 核 糖 体 亚 基 的 场 所
核仁组织区NOR位于核仁的纤维中心，这里存在rRNA基因也就是rDNA，也 是核仁的染色质区。之所以叫他核仁组织区，是因为就是他组织的核仁的形 成。
银染法的名词解释
银染法的名词解释对于普通人来说，银染法可能是一个陌生的名词，但对于纺织品行业的从业者来说，它却是一个非常重要的工艺。
银染法是一种利用化学方法将银离子引入纺织品中，以达到防菌、抗菌、净化空气等功能的一种技术。
下面，我们将深入探讨银染法的详细内容。
一、银染法的原理银染法利用的是银离子的抗菌性能。
事实上，早在古代，人们就发现银具有抗菌的作用。
在现代，科学家们通过研究发现，银离子能够干扰细菌的细胞膜和核酸的复制，从而抑制细菌的生长和繁殖。
为了将银离子引入纺织品中，银染法应运而生。
二、银染法的流程银染法的流程主要包括：纺织品预处理、银染剂的配制、浸染银染剂、干燥和固定银离子等步骤。
首先，在纺织品进行预处理。
预处理主要包括漂白、洗涤、软化、充电等步骤，以去除纺织品表面的杂质，使其更加适合染色。
接着，配制银染剂。
银染剂通常由银盐和染料组成。
不同的银盐可以产生不同的效果，例如硝酸银可以产生较强的抗菌效果，氧化银则可以产生净化空气的效果。
然后，将纺织品浸泡在银染剂中。
这个步骤中，纺织品会吸收银离子，并且银离子会与纺织品的纤维结合，从而实现功能的目的。
完成浸染后，需要将纺织品进行干燥。
干燥的目的是除去多余的水分，使银离子更好地固定在纺织品上。
最后，采用适当的固定剂将银离子固定在纺织品上。
固定剂能够与银离子进行反应，形成稳定的化学结构，从而增加银离子在纺织品上的使用寿命。
三、银染法的应用银染法在现代纺织品行业中应用广泛。
首先是医疗纺织品领域。
由于银离子的抗菌性能，银染法在生产医用口罩、手术衣等产品时被广泛采用，可以有效地阻止细菌的传播，保护医护人员和患者的健康。
另外，银染法也被应用于家纺领域。
银染法可以制作出带有抗菌功能的床上用品，例如枕头套、被套等。
这些产品可以减少细菌的滋生，为家庭提供一个干净、健康的生活环境。
此外，银染法还可以应用于户外装备领域。
例如，登山服、户外鞋等产品采用了银染法，不仅可以抑制细菌的生长，还有效防止异味产生，让户外运动更加舒适。
考染与银染资料
常用的蛋白质染色试剂分为已考马斯亮蓝为代表的有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。
其中考马斯亮蓝染色法的应用较为广泛，现将其与其他的蛋白质染色方法（主要是银染法）作一比较，帮助大家更好地去选择合适的蛋白质染色方法。
蛋白质的染色常用的有4类：有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。
其中有机试剂染色以考马斯亮蓝染色法（Coomasie brilliant blue，CBB）为代表，在蛋白质分析中常用，但对低丰度蛋白质的显现较差;银染灵敏度虽高，却常与质谱不兼容;荧光染色以SYPRO试剂为主，蛋白质检测灵敏度高，能兼容质谱，但由于需要配备特殊的检测仪器及试剂的昂贵，未被作为常规方法使用;而同位素显色则存在安全性和操作局限性等问题。
因此，筛选简便、节约、检测灵敏度高、质谱兼容的蛋白质着色法是蛋白质组研究所需。
由于考马斯亮蓝染色法的广泛运用，近年来就考马斯亮蓝染色法在提高其灵敏性方面研究者们作了许多改进，方法众多，评价不一。
我们在作双向凝胶电泳时，将常用的几种考马斯亮蓝染色法及银染进行了比较，并就其染色影响因素作出分析。
试剂固相pH梯度干胶条（IPG strip pH3-10NL，IPG strip pH5-8，17cm）、urea、CHAPS、TBP、DTT、Bio-Lyte 3/10 Ampholyte、IAM、SDS、Tris、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、CBB-G250均为BIO-RAD公司产品。
硫酸铵及磷酸均购自成都科龙试剂厂。
AgNO3为Sigma公司出品。
Protein molecular weight marker #SW0431为MBI公司出品。
甲醛、Na2S2O3与Na2CO3分别为成都天华科技股份有限公司、重庆北碚化学试剂厂和天津市塘沽鹏达化工厂产品。
仪器IPGphor等电聚焦仪、proTEANⅡ垂直电泳仪、Power PAC1000电泳仪、加样溶胀槽、GS-800 Calibrated Densitometer扫描仪、PDQuest凝胶图像分析软件均为BIO-RAD公司产品。
银染法原理
银染法原理
银染法（Silver Dyeing）是一种针织衫表面装饰印花工艺，其原理是通过水洗酚与羟基合铝（DHDH）交联到纤维表面，形成一层“磁铁膜”。
此外，经过“活性染料”稳定处理之后，通过“中性染银”工艺，将银染剂附着在纤维表面，形成银染浸出物，从而达到印花的目的。
经过“活性染料”和中性染银的处理，纤维表面结合强条件的DHDH，使纤维表面形成稠密平整的银染“磁铁膜”，并且可以在低温条件下对DHDH进行化学反应，而不会损伤纤维结构，维持纤维表面质地、厚度及形状的稳定性。
因此，银染法可以显著改善纤维表面的抗湿性、抗脏能力，确保长期的产品性能。
此外，由于银染可以实现多种渐变色印花，因而在市场上十分受欢迎。
银染法的一大优点是对纤维表面的抗湿性和耐磨性都有很大的改善，而且易于清洁，易于使用。
此外，它相对传统的织物印花可以提供更持久的色彩，而且可以提供更多的色彩选择。
此外，还有各种多种渐变色印花可以实现，增强了产品的装饰性和独特性。
考染与银染
常用的蛋白质染色试剂分为已考马斯亮蓝为代表的有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。
其中考马斯亮蓝染色法的应用较为广泛，现将其与其他的蛋白质染色方法（主要是银染法）作一比较，帮助大家更好地去选择合适的蛋白质染色方法。
蛋白质的染色常用的有4类：有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色.其中有机试剂染色以考马斯亮蓝染色法（Coomasie brilliant blue,CBB)为代表,在蛋白质分析中常用,但对低丰度蛋白质的显现较差；银染灵敏度虽高,却常与质谱不兼容；荧光染色以SYPRO试剂为主，蛋白质检测灵敏度高,能兼容质谱,但由于需要配备特殊的检测仪器及试剂的昂贵，未被作为常规方法使用；而同位素显色则存在安全性和操作局限性等问题。
因此，筛选简便、节约、检测灵敏度高、质谱兼容的蛋白质着色法是蛋白质组研究所需。
由于考马斯亮蓝染色法的广泛运用，近年来就考马斯亮蓝染色法在提高其灵敏性方面研究者们作了许多改进，方法众多，评价不一.我们在作双向凝胶电泳时，将常用的几种考马斯亮蓝染色法及银染进行了比较，并就其染色影响因素作出分析。
试剂固相pH梯度干胶条(IPG strip pH3—10NL,IPG strip pH5—8,17cm)、urea、CHAPS、TBP、DTT、Bio—Lyte 3/10 Ampholyte、IAM、SDS、Tris、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、CBB-G250均为BIO-RAD公司产品。
硫酸铵及磷酸均购自成都科龙试剂厂.AgNO3为Sigma公司出品。
Protein molecular weight marker ＃SW0431为MBI公司出品.甲醛、Na2S2O3与Na2CO3分别为成都天华科技股份有限公司、重庆北碚化学试剂厂和天津市塘沽鹏达化工厂产品。
仪器IPGphor等电聚焦仪、proTEANⅡ垂直电泳仪、Power PAC1000电泳仪、加样溶胀槽、GS—800 Calibrated Densitometer扫描仪、PDQuest凝胶图像分析软件均为BIO-RAD公司产品。
银染流程及注意事项
银染流程及注意事项
银染流程银染 protocol
注意事项：
在最初甲醇固定时就应该先除去甘油、尿素、甘氨酸、Triton X 100和两性电解质这些干扰性物质。
蛋白胶固定之前一定要先用水涮干净！
SDS凝胶中的巯基乙醇会导致在60 KDa或67 KDa处出现两条水平线。
减少巯基乙醇的用量即可避免。
不同蛋白质对银染的反应是不一样的，尤其是碱性蛋白染色效果差。
因此，不宜用银染测定不同蛋白的比例。
染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择 40 60 rpm.
对于银染条带不理想可尝试优化：
① 反应溶液都平衡到室温，
② 硝酸银和显色液容易失效，可以现配现用
③ PAGE胶固定之前，用水浸洗掉running buffer
④ 检查用水器具是否都去离子彻底（用新鲜配置50%硝酸润洗）。
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1）30%(w/v)Acrylamide 1L，(丙烯酰胺：甲叉双丙烯酰胺=29:1)：
配制方法：称量丙烯酰胺290g、甲叉双丙烯酰胺10g溶于600ml去离子水中，充分搅拌溶解，定容至1L，用0.45um滤膜滤去杂质，于棕色瓶中4°C保存。
2）5×TBE（1L）：
配制方法：称量54gTris碱，3.72gNa2EDTA2H2O，27.5g硼酸溶于800ml去离子水中，充分搅拌溶解，定容至1L，高压灭菌后室温保存。
3）10%(W/V)过硫酸铵（10 ml）：
配制方法：称取1g过硫酸铵，溶于10ml去离子水中搅拌溶解，储存于4℃。
5）10%乙醇(200ml)：
配制方法：20ml无水乙醇加水溶解，最后定容至200ml。
6）1%的HNO3溶液（200ml）：
配制方法：2ml硝酸加入到198ml双蒸水中，边加边搅拌。
7）染色液：0.2%的AgNO3溶液(200ml)：
配制方法:快称0.4克AgNO3倒入200ml双蒸水中，黑暗中搅拌溶解后，快速倒入一棕色瓶中。
8）显色液：2%的Na2CO3及0.4%的甲醛溶液(200ml)：
配制方法：称取4g Na2CO3精确量取0.8ml甲醛溶于少量双蒸水中，定容至200ml。
9）终显液：4%冰乙酸(200ml)：
配制方法：量取8ml冰醋酸溶于双蒸水中，定容至200ml。
注：
1）---3）为制胶配方
5）---9）为银染试剂配方
实验步骤：PCR产物的检测（12% 的PAGE电泳检测）：
洗净玻璃板、胶条及梳子，晾干，然后用夹子夹好制成灌胶板。
↓
用枪吸取 2.36ml三蒸水加入10ml离心管中，再加1.2ml 5×TBE缓冲液，2.4ml 30% Acr，4ul TEMED，最后加42ul APS(过硫酸铵)，用移液抢吹打混合混匀，然后缓慢倒入灌胶板中，插上梳子，慢慢放平，让其凝固。
↓
待凝胶凝固后，拔掉梳子及玻璃板底部胶条，放入电泳槽，加1×TBE电泳缓
冲液并接通电源，60伏，预电泳30min。
↓
停止预电泳，将待检测DNA样品和10×加样缓冲液以10：1比例混合均匀，加
入点样孔。
↓
80伏电压，聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳1.5个小时。
↓
电泳结束后，取下玻璃板，去掉两侧胶条，用大头针撬下一层玻璃，将胶轻轻的敲落到洗胶盘中，用蒸馏水洗两次，然后倒入10%乙醇固定20分钟。
↓
回收乙醇后，用蒸馏水快洗两次后，倒入1%的HNO3溶液氧化5分钟
↓
回收1%的HNO3，用蒸馏水快洗两次后，倒入0.2%的AgNO3溶液染色30分钟
以上。
↓
染色结束，回收AgNO3溶液，再用蒸馏水快洗两次，然后加入显色液（2%的Na2CO3及0.4%的甲醛）显色，直至出现清晰的目的条带为止。
↓
显色完全后，快速倒掉显色液，加入终显液（4%冰乙酸）终止显色。
↓
对凝胶进行照相，保存实验结果。
↓
用Quantity One处理软件进行结果分析。