小鼠骨髓细胞染色体标本 制作和观察-医学资料
小鼠骨髓细胞染色体
实验步骤
预处理——取股骨——冲洗骨髓——离 心——低渗——离心——固定——离心——
滴片——染色——观察
1. 取材及前处理：取健康小白鼠（约65-90天龄）， 腹腔注射0.1%秋水仙素溶液0.1ml，剂量为 4ml/Kg动物体重 2. 取骨髓：将已用秋水仙素前处理的小白鼠，经过 2-3小时后，用损伤脊椎法处死小白鼠，立即取出 两侧股骨，把肌肉刮净，然后从骨股两端关节处 剪下，用2%柠蒙酸钠溶液洗净骨股上的血污及肌 肉残渣，剪去骨股两端膨大的关节头，使其露出 骨髓，然后用吸有3-5ml2%柠檬酸钠溶液的注射 器，从股骨的一端插入针头，往骨髓内冲洗多次， 直至股骨断面变成粉白色为止，可多剪几个断面 反复冲洗，这样制备了骨髓细胞悬浮液，也可用 眼科镊子小心地取出骨髓，置于有少量柠檬酸钠 溶液培养皿中捣碎，然后再加入2%柠檬酸钠溶液 适量，制成3-5ml骨髓细胞悬液
骨髓细胞染色体的制备与观察
2010级生物技术专业——冯德
实验目的 实验原理
实验用品 实验方法
实验目的
初步掌握小白鼠骨随细胞染色体的制 备方法，计算骨髓细胞分裂中期的分裂相 的染色体数目并观察端着丝点的形态特 点．
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞能生成 各种血细胞和原始细胞，具有较高的分裂 能力。本实验采用这一材料，通过前处理， 低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色 体标本，可观察到许多处于分裂中期的染 色体
3.
பைடு நூலகம்1.
低渗处理：用吸管将骨髓细胞悬液移入带刻度离心管 内，1000rpm离心10分钟，吸去上清液。加入0.075M氯 化钾溶液5ml立即将细胞团吹打均匀，置37℃水浴25-30 分钟 4. 预固定、固定：经低渗处理后的细胞，加入卡诺氏 固定液5-6滴搅拌均匀进行预固定10分钟，然后以 1000rpm离心10分钟，此为第一次固定然后以同法离心， 弃上清液，仅留约0.2-0.3ml的细胞团与部分上清液，吹 均匀制成细胞悬浮液涂片观察。如果细胞分散的不好， 可再按上述方法再固定1-2次，使染色体进一步分散 气干法制片：取预先冰冻的载玻片，滴2-3滴细胞 悬浮液于其上，立即吹气均匀打散、过火、置室温中自 然干燥
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察ppt课件
9．在干净、湿冷的载玻片上以高距离滴2～3 滴上层细胞悬液，气干或在酒精灯上文火 烘干。注意在滴片时要有一定的高度（大 于40cm），使细胞膜破裂后易于使染色体 散开，并尽量使滴片上的细胞分布均匀， 不要重叠。
10．气干，染色。 在一块洁净的玻板上，将玻片标本有细胞的一面 朝下用牙签架空于玻板上。 11．用滴管将配好的染液充满于玻板与载玻片之间 的空隙中，注意载片上有细胞面的进行染色并在 滴加染液时注意排除气泡。视室温而定，染色15 分钟。 12．染色后，轻轻揭起玻片，倾斜玻片在自来水管 下细水流冲洗数秒，冲掉染液，擦干玻片标本底 面和四周，显微镜观察和分析。注意不要搞错沾 有细胞的一面。选择染色较好、较分散、形态清 晰的细胞分裂相，进行显微观察。
小鼠骨髓细胞染色体 标本的制备与观察
实验目的：
1．初步掌握动物骨髓细胞染色体的制备方法。 2．了解小鼠骨髓细胞染色体的形态特点。Fra bibliotek实验原理：
染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定 形式，是染色质紧密包装的结果。染色体 是有机体遗传信息的载体，对染色体的研 究在生物进化、发育、遗传和变异中有十 分重要的作用。
谢 谢 大 家
核型分析均是以中期染色体为标准，对制 作出的染色体标本进行照相以获得染色体 的显微图像，并将其剪裁排列即成，或用 专用软件进行分析排列。 凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各 种处理后，细胞就可进入分裂期此时均可 用于染色体分析。
在正常动物体内，骨髓是处于不断分裂的 组织之一。此时给动物注射一定剂量的秋 水仙素可使许多处于分裂的细胞停滞于中 期（ 秋水仙素可阻断纺锤丝微管的组装）， 然后采用常规空气干燥法制备染色体，即 可得到大量可供分析的染色体标本。本方 法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌 操作。
试验六 小白鼠骨髓细胞染色体制备及观察
小白鼠的保定和注射
五．结果与讨论
1．结果： （1）．选取分散良好的染色体绘实物图，上 传图片1幅）。 （2）．染色体计数（2n=40）。 2．讨论： （1）．实验前注射秋水仙素的作用？不作此 步会怎样？ （2）．为何要用冷冻片？烘烤片的作用？
小鼠骨髓细胞染色体
试验六 小白鼠骨髓细胞染色 体制备及观察
一．实验目的：
1．学习小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
2．观察骨髓细胞染色体，计数染色体。
二．原理：
活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分 析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使 细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理， 可得到清晰的中期染色体标本。
三．材料试剂
1．材料：小白鼠；ห้องสมุดไป่ตู้
2．试剂：Giemsa染色液，0.4％KCl，2％柠 檬酸钠，固定液（甲醇：冰乙酸＝3：1）。
四．操作步骤
1．实验前4－8h小鼠腹腔注射秋水仙素1ml （0.14mg/ml）,(据小鼠体重用量调整)或1ml饱和 对二氯苯。 • 2．脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。 用细针头注射器吸取2％柠檬酸钠1ml，反复冲洗 骨髓腔5次，将冲洗液（离心管中）加入0.4%KCl 低渗10min（8ml,37℃）。
• 3．离心（1000rpm，8min）,去上清液，加固定 液5ml（注意缓慢加入）。充分吹打，使沉淀块 分散，静置10min，再离心10min，弃上清液， 重复一次。
4．用约2ml固定液悬浮骨髓细胞成悬液（依 沉淀量定）。
5．取冷冻载片，距载片15cm高度滴下悬液 （取悬液前吸打均匀），单向吹气展开， 酒精灯上文火烘干。
实验十四小鼠骨髓细胞染色体制片
小鼠骨髓细胞染色体 制片
实验目的
• 掌握制作动物骨髓细胞染色体标本的方 法，练习染色体制片技术。
• 了解小鼠染色体的形态和数目。
实验原理
• 染色体（chromosome）在间期细胞中见 不到，它只在分裂细胞中出现。因此从 理论上讲，任何处于分裂状态的细胞都 可以作为染色体标本制备的材料。染色 体在分裂中期是最典型的。用适量的秋 水仙素溶液注入动物体内，可抑制分裂 细胞纺锤体的形成，使分裂终止在中期， 积累大量的中期细胞，再通过常规的制 片方法，可获得动物染色体标本。
• 收集细胞：将股骨放入培养皿中（加入生理盐 水）用止血钳夹碎，吸取上清夜，移入离心管， 1500rpm离心8分钟，留沉淀。
• 低渗处理：用预热氯化钾溶液6毫升，轻轻混 匀，37°C保温20分钟，加入新鲜固定液1毫升， 预固定。
实验方法
• 沉淀加5毫升固定液1500rpm离心8分钟，留沉 淀。（反复2次）
实验结果
实验报告与思考题
• 根据实验过程分析实验结果，分析原因， 总结经验。
• 制备染色体标本时，为什么用秋水仙素， 作用是什么？
• 制片过程中，为什么要进行固定？
实验材料与试剂
• 材料：小白鼠 • 试剂：秋水仙素，氯化钠低渗液，甲醇-
冰乙酸（固定液）生理盐水，姬姆萨染 色液。
实验方法
• 选择体重18-20克的健康小白鼠，在实验前3-4 小时注射秋水仙素（2ug/g体重）。
• 用颈椎脱臼法处死小白鼠，从背部剪开肢体皮 肤和肌肉，取出完整的股骨，用生理盐水洗净。
• 制备细胞悬液：沉淀加入0.5毫升新鲜固定液， 混匀制成细胞悬液。
• 滴片：用吸管吸取少量悬液，在离载玻片30cm 高度滴2滴于载玻片上，沿斜面吹散，再酒精 灯上微烤，晾干。
小鼠骨髓染色体标本的制备.
8、制片：用滴管吸细胞悬液，从20－30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色：Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检：低倍镜下找到分散良好的分裂相后，换高倍镜、油 镜、认真观察。
四、作业 1 为什么要低渗处理？ 2 观察2-3个小鼠骨髓细胞染色体的分裂
小鼠骨髓染色体标本的制备
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的： 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原/L-1KCI进行低渗后，经 固定、染色，可见到分散的染色体。
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦 去附着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗， 用离心管接收冲洗液。
相，数一数有几条。
2、低渗处理：加KCL至2/3管，用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液 中，放入37℃恒温水浴锅中，静置25min。（吹打不宜过猛）
3．预固定：加入固定液5滴吹打混匀。
4．离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
6、再离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
实验九小鼠骨髓细胞染色体标本制备
四、实验步骤
1、预处理：实验 。作用：
2、处死动物：断颈处死小白鼠， 解剖小鼠内生殖器官，鉴别雌雄性别
3、取股骨：剥取股骨，剔去肌肉 组织，剪去两端的股骨头。
11、滴片：用吸管吸取细胞悬液， 滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰 上微微加热，室温晾干。预冷载玻片 的作用：
12、染色：10% Giemsa染液染色30分 钟。
13、镜检：低倍———高倍 。
五、作业
1、选择染色体清晰，分散好的 中期分裂相，计数染色体，显微摄影、 并打印出照片。
2、分析成功或失败的原因。
4、取骨髓：注射器吸取0.6ml生 理盐水, 针头插入股骨一端,反复冲 洗骨髓到10ml的离心管中。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用
6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定；
同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具：
注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品： 0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨 髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造 血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察PPT
结果分析
实验过程中，细胞培养和染色环节是关键，需要 严格控制实验条件，以保证染色体制备的质量。
染色体观察需要经验丰富的实验员，以确保准确 识别染色体的数目和结构。
实验结果与预期相符，证明了实验方法的可靠性 和准确性。
结果讨论与展望
本实验为小鼠骨髓细胞染色体制备与观察提供了有益 的参考，但仍需进一步优化实验条件和操作步骤，以
04
其他必要的缓冲液和盐溶液
实验仪器
显微镜
01
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细胞培养箱
离心机
03
04
染色设备（染色缸、染色架等）
恒温水浴锅
05
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吸管和移液器等定量工具
02
CATALOGUE
实验步骤
小鼠骨髓细胞的采集
01
02
03
麻醉小鼠
使用麻醉剂将小鼠麻醉， 确保其在整个采集过程中 保持安静。
采集骨髓
使用注射器抽取小鼠的骨 髓，注意抽取时要避免混 入其他组织或血液。
染色体组型分析
将染色体制成中期片，进行染色体组型分析，可以观察到染色体的配对情况、 排列顺序等特征，有助于判断染色体的结构异常。
染色体畸变分析
染色体结构畸变
观察染色体的结构畸变，如染色体断裂、倒位、缺失等， 可以分析出细胞在分裂过程中可能遇到的异常情况。
染色体数目畸变
分析染色体数目畸变，如非整倍体、多倍体等现象，有助 于了解细胞分裂过程中的异常变化。
小鼠骨髓细胞染色 体制备与观察
目录
• 实验准备 • 实验步骤 • 实验结果 • 结论与讨论
01
CATALOGUE
实验准备
实验材料
小鼠骨髓细பைடு நூலகம்胞样本
小鼠骨髓染色体制备与观察
u 高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色体 标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
三、实验器材和试剂
1、器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射
器、10ml离心管、吸管、量筒、预冷载玻片、试 管架、离心机、恒温水浴锅、显微镜、香波油、 乙醚酒精、擦镜纸
滴1～2滴，用口顺着倾斜面吹散源自胞，迅速过火焰3-5次进行干燥。 注意：a. 温度、高度、倾斜度 b. 火焰干燥的目的：使固定液迅速挥发，产生四周张力加速
细胞破裂，使染色体更好地粘连在载玻片上；不可使载玻片烫手。
7.染色：在玻片上滴几滴Giemsa染液并铺匀，染色8～10min，倒去染
液，用自来水缓缓冲洗干净、晾干。（染色盘中进行） 注意：采用平铺的方法
21三体综合征； 18三体综合征、 猫叫综合征
18三体综合征
二、实验原理
染色体标本的观察广泛应用于一些疾病的临床诊 断中。例如白血病、恶性血液病等的诊断。
染色体是染色质在细胞分裂期的存在形式。 细胞分裂的中期，染色体在赤道板上排列清晰，
是染色体观察的最佳时期。
骨髓细胞 数量多且分裂旺盛，可直接进行染色体 标本的制备。取材方便，操作简单和无需体外培养 和无菌操作，是研究小型哺乳动物等染色体的常用 方法。
作用：终止低渗；维持细胞的膨胀状态；防止离心破裂
5. 固定、制细胞悬液：加固定液5ml 吹打混匀 固定15min 离心1500r/min，5min 弃上清，加固定液 0.2~0.4ml 吹打成细胞悬液，准备制片使用。
制备细胞悬液时，根据具体情况加固定液，以悬液呈现 乳白色为宜。
6. 滴片：冰片倾斜30°, 细胞悬液距离玻片15-30cm高，在不重叠位置
小鼠骨髓染色体制备及观察
小鼠骨髓染色体制备及观察许多化学毒物具有遗传毒性基因突变：碱基置换和移码突变。
染色体畸变（structural chromosome aberration)：是指由于染色体或染色单体断裂，造成染色体或染色单体缺失或引起各种重排，从而出现染色体结构异常颜色体数目异常：整倍性和非整倍性改变。
染色体损伤的类型：☐染色体数目的改变①非整倍体：亚二倍体或超二倍体。
②整倍性改变：染色体成倍增加。
☐染色体结构的改变1.断裂和裂隙：2.微小体；较断片小而呈圆形。
3.有着丝点环：带有着丝点部分，两端形成环状结构并伴有一双无着丝点断片。
4.无着丝点环：成环状结构。
5.插入/重复8 非特定性型变化：如粉碎化、着丝点细长化、粘着等整倍性畸变非整倍性畸变如何评价化合物的遗传毒性？鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）：是最常用的检查基因突变的方法。
检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力☐评价染色体损伤的试验方法包括：常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE) 微核试验 体外培养细胞或者体内染色体畸变试验2、实验原理☐有丝分裂：真核细胞的染色质凝集成染色体，复制的姐妹染色单体在纺锤丝的牵拉下分向细胞的两极，从而产生两个染色体数目和遗传性相同的子细胞的一种细胞分裂的类型。
☐细胞周期：从一次有丝分裂完成时开始，到下一次有丝分裂结束时为止，成为一个细胞周期。
G1：从有丝分裂结束到DNA 复制之前；S: DNA 合成；G2：DNA 复制结束到有丝分裂开始；M ：有丝分裂期✓增殖群细胞，细胞始终保持分裂能力，持续进入分裂循环；✓不再增殖细胞，比如神经细胞；✓暂不增殖细胞，比如肝脏细胞。
端着丝粒染色体。
小鼠骨髓细胞染色体制备
小鼠骨髓细胞染色体制备染色体制备是生物学研究中常用的实验技术之一，通过染色体制备可以获得染色体的形态和结构信息，从而进一步研究其功能和遗传特性。
本文将介绍小鼠骨髓细胞染色体制备的方法和步骤。
一、材料准备1. 小鼠骨髓细胞2. 10% 碘酒3. 0.075M KCl 溶液4. 甲醛溶液（4%）5. 甲基绿染液6. 预热37°C恒温水浴7. 玻片和载玻片夹二、实验步骤1. 将小鼠安乐死并取出骨髓，将骨髓切碎并转移到15ml离心管中。
2. 加入适量的10%碘酒，使得骨髓完全被浸泡，放置室温下静置15分钟，使细胞均匀染色后固定。
3. 使用离心机以1000rpm离心10分钟，将碘酒倒掉。
4. 加入适量的0.075M KCl 溶液，使骨髓细胞悬浮，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
5. 再次加入适量的0.075M KCl 溶液，使骨髓细胞悬浮，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
6. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
7. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
8. 加入适量的甲醛溶液（4%），使骨髓细胞固定，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
9. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
10. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
11. 加入适量的甲基绿染液，使骨髓细胞染色，用离心机以1000rpm离心10分钟，将上清液倒掉。
12. 将悬浮的骨髓细胞滴于预热的玻片上，并用载玻片夹轻轻压平。
13. 将载玻片夹放入预热37°C的恒温水浴中，静置10分钟。
14. 将载玻片夹取出，用甲醛固定液稍微洗净，并用酒精进行脱水。
15. 将载玻片夹放入洗净过的甲醛固定液中浸泡10分钟，然后用酒精进行脱水。
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
细胞培养：在适宜的条件下将细胞从体内分离出来进行体外培养 传代：将培养的细胞按照一定的比例进行分装使细胞能够继续生长
制备前的准备：选 择合适的细胞培养 并维持细胞生长。
细胞固定：使用固 定剂将细胞固定在 一定位置防止细胞 移动。
细胞染色：根据实 验需求选择合适的 染色剂进行染色。
观察与拍照：使用 显微镜观察染色后 的细胞并记录照片 。
小鼠骨髓细胞染色体 制备与观察
汇报人：
目录
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实验准备
染色体制备
观察和分析
实验结论
添加章节标题
实验准备
小鼠骨髓细胞
培养基
胰蛋白酶
秋水仙碱
实验仪器：显微镜、离心机、细胞培养皿、细胞 刮刀等
实验试剂：生理盐水、胰蛋白酶、甲醇、冰醋酸、 Giems染料等
准备实验器材：显微镜、染色剂、 细胞培养皿等
染色体测量：使用显微测微尺等工具测量染色体的长度、宽度、着丝粒位置等特征有助于分析染色体的形态和结 构。
染色体组型分析：根据染色体的数目、形态和结构特征进行染色体组型分析有助于了解小鼠骨髓细胞的遗传特征 和变异情况。
染色体核型分析：通过观察染色体的数目、形态和排列方式分析染色体的核型有助于了解小鼠骨髓细胞的染色体 异常和遗传疾病。
实验前要洗手戴手套避免手上的杂 菌污染细胞。
染色体制备过程中要控制好温度和 时间避免温度过高或时间过长导致 细胞死亡。
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染色体制备过程中要保持细胞活性 避免细胞死亡。
染色体制备过程中要选择适当的染 色剂避免使用过多的染色剂导致细 胞死亡。
观察和分析
观察步骤：将制备好的小鼠骨髓细胞染色体放在显微镜下调整焦距观察染色体的形态和分布
实验二小鼠骨髓细胞染色体标本制备
实验二小鼠骨髓细胞染色体标本制备实验目的：通过制备小鼠骨髓细胞染色体标本，了解染色体结构、形态和变异等方面的知识，为后续核型分析、染色体异常检测等实验打下基础。
实验原理：小鼠骨髓细胞染色体标本制备是指将小鼠骨髓组织中的细胞进行处理后制备成适合观察的染色体标本。
该标本制备方法包括细胞处理，染色体制备和染色体观察等环节。
1.小鼠骨髓细胞处理将小鼠放入固定夹，使用无菌注射器向小鼠腹腔注入适量的钾盐缓冲液（KCl，0.074mol/L）。
钾盐缓冲液的功能是使细胞发生肿胀，探头区别正常细胞和异常细胞。
此外，钾盐缓冲液也有不利的作用，可以导致一些染色体脱落或断裂。
接下来，在小鼠固定夹上进行剖腹，取出骨髓。
骨髓组织放置在一滴含有10%甘露醇的氯仿中进行易位。
在显微镜下观察细胞的形态结构，进行可行性检测。
2.染色体制备取干净的药片，滴入细胞悬液，热外片变性塔。
药片的材料使用高价值玻璃药片，这样可以保证药片平整和染色体不能和药片表面黏附。
加入甘醇一定要多加就能快速促进水分的蒸发，避免液体反应产生气泡而影响结果。
不需要太用力，在药片的表面轻轻涂抹，使液体均匀分布。
接下来，将药片吸入液、95%甲醇，以及3%乙酸中每个5分钟，直到药片完全干燥。
3.染色体观察将药片上的细胞标本置于显微镜上，根据染色体数目和形态等信息进行染色体分析。
在显微镜下观察染色体的特征，包括染色体数量、形态、大小、位置以及异常情况等。
对观察到的染色体进行记录和描述。
实验结果：通过对小鼠骨髓细胞进行染色体制备和检测，我们可以观察到染色体的结构、形态等方面的特征。
此外，通过对染色体的数量和形态进行观察，还可以发现染色体的变异情况，进一步了解染色体的异常情况。
在实际操作过程中，需要注意细胞处理和染色体制备的每一个环节，以保证实验的准确性和可靠性。
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察一、实验目的了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。
观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。
利用显微照相技术对所得切片进行照相。
二、实验原理染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。
因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。
进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。
如将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收并可转运到骨髓，结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。
这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。
对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。
对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。
人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。
三、实验用具及材料实验材料：体重20克左右的小鼠一只实验试剂：0.075mKCl低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯实验材料：恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸光学显微镜、带数码相机的光学显微镜四、实验步骤1腹腔注射秋水仙素溶液：在做实验前2~3小时，对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4％的秋水仙素注射。
2取材：实验时，用断颈法迅速将小鼠处死，通过解剖取出股骨，用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升，将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从股骨的另一端流出。
收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。
3低渗：用吸管将冲洗液吹打几次，然后把离心管放在37℃恒温水浴槽内低渗20分钟。
4固定：之后取出并加1ml的固定液，吹打之后放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。
5离心：然后将1000rpm离心10分钟，弃去上清。
实验6小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
内容与方法
1、动物预处理：取材前 3~4小时，腹腔注射 0.01%的秋水仙素。
2、取材：处死小白鼠，剥取股 骨，暴露骨髓腔，用4~5ml KCl 冲洗骨髓腔获得骨髓细胞，定容 至6ml。
4、预固定：加1mlCarnoy 固定液混匀，配平，离心 1000rpm/8分钟。
3、低渗：37度恒温水浴30分钟 ➢在酒精灯火焰过火2~3次， ➢做记号，凉干，染色
作业与思考题
1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞 染色体中期分裂相。
2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液 各起什么作用？
3、简述实验中应注意那些关键问题？
目的与要求
1、掌握脊椎动物骨髓细胞染色体标本制备的 方法；
2、了解小鼠骨髓细胞染色体的形态和数目。
实验原理
➢ 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。
➢ 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
5、固定：弃上清，再加 Carnoy 固定液至6ml刻度， 悬浮，静置20分钟，离心 同上。
6、制片：去上清液,加少量固定液， 混匀，滴片，
7、染色：Giemsa染色10分钟
取材：椎脱臼处死小白鼠，剥取股骨。
小白鼠骨骼标本
收集细胞：
➢ 暴露骨髓腔，
➢ 反复冲洗骨髓腔获得 骨髓细胞，
➢ 收集到离心管中,
小鼠骨髓染色体制备及观察
02
2%柠檬酸钠溶液：：称2.28克柠檬酸钠溶于100ml蒸馏水中。
03
Giemsa溶液
04
溶液配制：
3、实验材料
主要实验步骤
4、实验方法
方法与步骤
取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。
腹腔内注射秋水仙素3~4小时后， 断头处死小鼠。
取出小鼠的后肢骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细胞的流失。
滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、肌肉等组织清除干净。
加入适量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并用吸管吹打，使骨髓细胞全部释放出来。
亦可用注射器抽取柠檬酸铵溶液冲洗骨髓，效果佳
将获得的液体收集到离心管中，离心后去上清液，加低渗液至8ml左右，室温下静置20~30分钟，进行低渗。低渗结束后，加入1ml左右的Carnoy’s固定液进行预固定，轻轻混匀后，离心。
实验动物
试剂
3、实验材料
恒温培养箱、普通离心机、显微镜、分析天平、离心管(5～10 mL)、吸管注射器(5 mL)、100 mL烧杯、
载玻片 （冰片）
实验器材
3、实验材料
0.01％秋水仙素：称10 mg秋水仙素，溶于100 mL生理盐水中。
01
低渗溶液：称5.59克KCl溶于1,000 mL蒸馏水中，其浓度为0.075M。
实验三 小白鼠骨髓染色体制备及观察
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小鼠骨髓细胞
01
秋水仙素可破坏骨髓细胞分裂过程中纺锤体的形成，把分裂细胞阻截在中期。
02
通过对小鼠骨髓细胞的低渗、固定、滴片、染色等处理，可观察到小鼠染色体。
小鼠骨髓细胞染色体标本制备
小鼠骨髓细胞染色体标本制备1. 引言大家好，今天我们来聊聊一个听起来可能有点儿复杂，但其实挺有趣的话题——小鼠骨髓细胞染色体的标本制备。
别担心，我会把这些专业术语说得简单明了，让你也能轻松get到这个过程。
说起来，小鼠可真是科学研究中的“常客”，就像饭桌上的米饭，随处可见，缺了它可不行。
这不，今天咱们就来探索一下怎么从小鼠身上提取骨髓细胞，搞个染色体标本，看看这些小家伙们的秘密。
2. 骨髓细胞的来源2.1 小鼠的选择首先，你得找一只小鼠。
挑小鼠可不是随便的，得挑那些健康活泼的小家伙，就像挑选水果一样，选那种又圆又亮的最好。
一般来说，实验室里会用小鼠的某个特定品系，比如C57BL/6，它们可是科研界的明星。
别忘了，鼠鼠们可不是随便抓来的，得遵循一套规矩，确保它们的生活环境干净卫生，毕竟咱们要尊重这些小生命。
2.2 获取骨髓细胞接下来，就是动手获取骨髓细胞的环节了。
首先，要麻醉小鼠，这一步可不能省，麻醉得当才能让它们安静下来，不然你想抓取细胞，它们可是不会轻易妥协的。
麻醉之后，小心翼翼地取出小鼠的骨髓，这个过程就像是在做外科手术，要有点儿医生的范儿，稳重些。
骨髓一般是在鼠鼠的股骨和胫骨里，捣鼓的时候要小心别伤到周围的组织。
3. 细胞制备过程3.1 细胞分离一旦取出骨髓，你会发现那里面的小细胞们就像一群调皮的孩子，四处乱窜。
我们要做的就是把它们从骨髓中分离出来。
这个过程通常会用到生理盐水，简单说就是把骨髓和盐水混合，轻轻摇晃，让细胞们游出来。
记住，摇晃的时候要轻柔，别像个暴徒一样，细胞们可是很娇嫩的！3.2 染色体制备接下来就是最神奇的部分——染色体的准备。
我们需要把这些细胞放到培养基里，让它们再长一段时间，这样细胞会分裂得更多，染色体也会更加明显。
等到细胞生长到一定程度，我们就可以通过加一些化学药剂，比如秋水仙素，来阻止它们的分裂，准备好进行染色。
4. 染色体的染色与观察4.1 染色过程染色这个步骤可有意思了！我们要用一种专门的染色液，把这些细胞染上色。
小鼠骨髓细胞染色体
实验材料： 实验器材：离心管、低速离心机、吸管、 牙签、剪刀、载玻片、显微镜等。 实验试剂： 100µ g/ml秋水仙素、0.075M KCl、Carnoy固定液、Giemsa 染液、pH6.8 磷酸缓冲液、 0.85% NaCl生理盐水、0.4% KCl（低渗液）等。 小鼠腿一只
实验步骤： 1．秋水仙素注射 称出小白鼠的体重，然后按2～4µg/g体重的剂量经腹腔 注射秋水仙素，3～4h后颈椎脱臼法处死。 2．取出股骨 取出小鼠后肢的股骨，剔除附着的肌肉，剪去股骨两端关 节。 3．剪碎股骨于生理盐水 直接用手术剪将股骨剪碎于含有5 ml 0.85% NaCl的培养 皿中，反复剪碎，使骨髓细胞析出，溶液成悬液状。 4．收集细胞 用吸管反复吸打细胞，使细胞团块分散，转入两支1.5ml 离心管中。注意股骨碎片不要吸入离心管中。3000 rpm离 心10分钟收集细胞。弃去上清。（注意：可合并两支管内 沉淀）
结果与讨论： 绘制染色体图 ：（小鼠骨髓细胞染色体）
对于小鼠骨髓细胞染色体标本的制作，一般包括以下几个要 点： （重点） 1．用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂 停滞在分裂中期，使中期染色体停留在赤道面处。 2．用低渗法使将细胞膨胀， 以至于在滴片时细胞被胀破， 使细胞的染色体铺展到载玻片上。 3．空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平，经Giemsa 染色后便可观察到染色体的图像。 4．倒置染色法：在玻璃板上用牙签做支架，使标本载玻片 的标本面向下放置到支架上，然后用滴管在玻璃板和标本 载玻片之间滴加Giemsa染液，在操作时应注意，滴染液时 应尽量慢，不要有气泡，以免部分染色体不被着色。此法 一是可以节省染料，二可以避免染液快速挥发，三可以防 止染色颗粒沉淀，影响观察。
5．室温低渗 加入0.4％KCl溶液1ml，轻微吸放混匀细胞，然后 将离心管在室温下低渗20min。 6．Carnoy固定液预固定 低渗结束后在离心管中加入0.5ml Carnoy固定液进 行预固定，用吸管轻微混匀，可避免细胞结块， 室温固定5分钟后，混匀以2000 rpm离心10min。 7． Carnoy固定液重新固定 弃去上清液，沿离心管壁缓慢加入新配制的甲醇： 冰醋酸(3:1)固定液1.5ml，用滴管小心将细胞团 块打散，继续固定10分钟。 8．2000 rpm离心10分钟，留少量固定液后用滴管 小心将细胞团块打散，制成均匀的细胞悬液。
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可见中西医学，一个是以“功能人” 为概念 的独特 的哲学 医学理 论体系 ，一个 是以“ 解剖人 、肉体 人”为 概念的 新兴的 现代医 学科学 理论体 系，二 者都不 是以完 整人为 研究对 象的科 学，从 理论讲 二者都 不是科 学的， 势必影 响各自 发展。 事实也 证明这 一切， 中医长 期停滞 不前、 疗效也 不确实 。西医 尽管发 展到目 前的基 因分子 层次， 但疾病 发病率 居高不 下，对 绝大部 分疾病 发病原 因认识 不清、 发病机 理弄不 明白， 治疗受 到制约 ，在小 小SAR S、禽 流感面 前竟束 手无策 ，在糖 尿病、 癌症、 心脑血 管疾病 、尿毒 症等相 当多疾 病面前 更是不 得不求 助或借 助中医 治疗。 一个是 疗效不 确实， 一个是 有些甚 至相当 多疾病 无法治 疗，这 就是中 西医学 结合的 缘由。 然而， 由于二 者是两 套理论 、两股 道上跑 的车， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。故 出现西 医对治 疗不了 的疾病 只好求 助中医 ，而中 医则往 往采用 西医诊 断中医 治疗， 以及中 西治疗 法一块 用的局 面。
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子
玻璃吸管 10ml刻度的离心管 离心机 载 玻片 盖玻片 显微镜 滤纸 擦镜纸 纱布 恒温水浴锅 3．药品：0.01%秋水仙素 0.075MKCl 固 定液（甲醇：冰醋酸=3：1） 2%柠檬酸 钠 改良石炭酸品红
实验步骤
预处理 取股骨 冲洗骨髓 离心 低渗 离心 固定 离心 滴片 染色 观察
至于循证
现今医学分为传统医学、基于“生 物-医 学模式 ”近代 发展起 来的西 医，20世纪西 医又发 展到“ 社会-心 理-生物 医学” （df高血压958心脏病983u6糖尿病87fr） 或综合 医学模 式，后 基因组 时代系 统生物 学的兴 起，（45传染 病q566丙肝964jo乙肝 28jgsx甲肝gh）形成 了系统 医学在 全球的 迅速发 展，成 为继传 统医学 、西医 学之后 中、西 医学汇 通的未 来医学 。当代 中国医 学类专 业比较 优秀的 学校有 北京大 学、（ 4f肿瘤fbb癌症 yuw3胃 癌d65i o肠癌.f2tr肺癌 65ff）
管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间 （约15 min ）再吹散一次，使细胞分散， 悬浮于溶液中 6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清 7．固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管轻 轻吹匀，进行固定，中间（约15 min ） 再吹散一次
实验步骤
8. 离心： 1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清，轻轻吹打成细胞悬液
华中科技大学、郑州大学等学校。 （df肺25s血液f369血小板t5172红血球gdf55m白血 球fd2）
中医即中国传统医药学，是形成于数千 年前的 中国， 是建立 在人们 与疾病 长期斗 争的经 验总结 及阴阳 五行、 八纲脏 腑辨证 基础上 ，运用 朴素辩 证法及 思辨推 理方法 ，认识 机体、 自然、 疾病三 者关系 ，发展 起来的 （45传 染病q566丙肝964jo乙 肝28jgs x甲肝gh）一 门以“ 功能人 ”包括 功能脏 器为概 念的独 特的医 学哲学 理论体 系。（ df4肺炎 88gdg青霉素d25f肝 炎df6）
在治疗上，除了药物外，还有针灸、 推拿气 功、（df高血 压958心 脏病983u6糖 尿病87fr ）耳针 等特殊 疗法， 它是世 界传统 医学中 最完善 的一种 医学理 论体系 。它为 人类尤 其为中 国人民 （4f肿 瘤fbb癌 症 yuw3胃癌d65io肠 癌.f2tr肺 癌65ff）
实验原理
制备方法包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的
形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色 体停留在赤道面处
2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴 片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载 玻片上
3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载 片上展平, 经Giemsa染色后便可观察到染 色体的显微图象
实验步骤
1．预处理：实验前2.5-3小时，按每克体重 注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙 素。
2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组 织，洗净
3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取 10ml 2%柠檬酸钠，注射 器针头插入股 骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到 10ml的离心管中
实验步骤
4 ．离心： 1000r/min 离心10 min ,弃上清 5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴
9. 滴片：用吸管吸取细胞悬液，高度30-40 cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯 火焰上微微加热，室温晾干
10. 染色：改良石炭酸品红染色10-20 min 11. 观察：低倍———高倍
绘图
绘制一张小鼠骨髓细胞中期染色体图
思考题
分析本实验中造成制片不佳的原因
西医学是最近三四百年来建立在解 剖学、 生物学 及现代 科学技 术基础 上、发 展起来 的一门 以“解 剖人、 肉体人 ”为概 念的、 新兴的 现代医 学科学 理论体 系。主 要采用 科学实 验方法 ，从宏 观到微 观，直 至目前 的分子 基因层 次水平 ，发展 极为迅 速，超 过其它 任何一 门医学 科学， 成为世 界医学 史上的 主流。 医学、比较医学、后现代医学、行为 医学等 所谓“ 医学” ，都称 不上一 门独立 的医学 科学， 关于这 一点在 灵魂医 学有关 章节中 将有相 关点评 。