小鼠骨髓细胞染色体标本制备中的失误与对策
小鼠骨髓细胞有丝分裂染色体标本制备方法的优化
小鼠骨髓细胞有丝分裂染色体标本制备方法的优化高振华;吴浩浩;赵志辉;许英梅;Aguzey Harry;程贵兰;生冉;许嫣红【摘要】将201只小鼠随机分为3组,分别采用1次固定(60 min)、2次固定(30、25 min)和3次固定(30、25和15 min),其他操作步骤相同.结果表明,与1次固定相比,2次固定和3次固定视野中骨髓细胞数量(P<0.05)和分裂相细胞数量显著增多(P<0.05),制片成功率分别高7.1和7.9百分点,固定时间分别增加5和30 min.1次固定整体效果不佳,或很难找到明确形态的染色体,或染色体形态不清晰、分散;2次固定染色体分散效果良好,染色体数目和形态都十分清晰,染色体结构完整;3次固定中期分裂相多,染色体集中且分散适度,染色体清楚可见,分布整齐不重.综合考虑,小鼠骨髓细胞有丝分裂染色体标本制备的最佳固定次数为2次,适宜的固定时间为30、25 min.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2019(047)007【总页数】3页(P102-103,106)【关键词】小鼠骨髓细胞;染色体制片;固定程序优化【作者】高振华;吴浩浩;赵志辉;许英梅;Aguzey Harry;程贵兰;生冉;许嫣红【作者单位】广东海洋大学农学院,广东湛江524088;广东海洋大学农学院,广东湛江524088;广东海洋大学农学院,广东湛江524088;广东海洋大学农学院,广东湛江524088;广东海洋大学农学院,广东湛江524088;广东海洋大学农学院,广东湛江524088;广东海洋大学农学院,广东湛江524088;广东海洋大学农学院,广东湛江524088【正文语种】中文【中图分类】S-01细胞染色体是细胞核中稳定且重要的成分，是生物遗传物质的载体，其数目与形态是研究生物进化、遗传变异、个体发育、疾病预防、病因发生、疾病诊断和治疗等的基础手段[1-3]。
染色体标本的制备是进行染色体核型分析、带型分析和检测遗传学相关疾病的前提[4-7]。
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作和观察-医学资料
可见中西医学，一个是以“功能人” 为概念 的独特 的哲学 医学理 论体系 ，一个 是以“ 解剖人 、肉体 人”为 概念的 新兴的 现代医 学科学 理论体 系，二 者都不 是以完 整人为 研究对 象的科 学，从 理论讲 二者都 不是科 学的， 势必影 响各自 发展。 事实也 证明这 一切， 中医长 期停滞 不前、 疗效也 不确实 。西医 尽管发 展到目 前的基 因分子 层次， 但疾病 发病率 居高不 下，对 绝大部 分疾病 发病原 因认识 不清、 发病机 理弄不 明白， 治疗受 到制约 ，在小 小SAR S、禽 流感面 前竟束 手无策 ，在糖 尿病、 癌症、 心脑血 管疾病 、尿毒 症等相 当多疾 病面前 更是不 得不求 助或借 助中医 治疗。 一个是 疗效不 确实， 一个是 有些甚 至相当 多疾病 无法治 疗，这 就是中 西医学 结合的 缘由。 然而， 由于二 者是两 套理论 、两股 道上跑 的车， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。故 出现西 医对治 疗不了 的疾病 只好求 助中医 ，而中 医则往 往采用 西医诊 断中医 治疗， 以及中 西治疗 法一块 用的局 面。
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备一、实验目的1. 学会小鼠骨髓细胞的采集和处理方法。
2. 掌握细胞较好的贴壁与生长条件，以保证细胞的好。
3. 学会最常用的Gimsa染色方法，使出现的幻觉具有明朗的色调，以便细胞的编号与统计。
二、实验原理骨髓细胞是一种多能性细胞，可分化为血液成分或骨骼系统的成分。
骨髓细胞被用于检测细胞遗传学异常，在染色体物质遗传及细胞迁移等方面具有潜在用处，并可为结构遗传学提供信息。
作为染色体标本制备的来源，一般选用小鼠骨髓细胞是最为经常采用的试验模型之一，常常作为各类染色体研究、映射和诊断的标本；其区别如来源易得、繁殖成本低、染色体数量较少，易于研究、成熟度高等因素显得优越。
三、实验步骤1. 实验前准备工作（1）保存干燥灭菌的小鼠骨髓细胞培养基，避免接触灰尘。
（2）检查各种器械的完整性，保证手段的杀菌处理。
（3）使用有缩小五倍功能的显微镜，以确保细胞图片清晰度与细胞形态的准确。
（4）打开红外线灯，以增强视觉效果并避免光损伤。
（5）按实验方案准备各种试剂和设备。
（6）实验室内准备50 mL恒温水浴和常规离心机。
2. 骨髓细胞的采集（1）设备：小鼠解剖刀片、50mL离心试管、海绵、抽管等。
（2）用70%酒精清洗瓶子的注射器，使用注射器收集小鼠间隔内的骨髓，放入存储试管中。
（3）轻轻摇动骨髓，使其中的细胞与上清液充分混合均匀。
3. 细胞的处理（1）细胞浓度的调整：从建立骨髓细胞培养物开始，骨髓细胞培养物可以在50mL培养基中存在。
使用试管取出足量细胞，可用比值0.2 mL的浓度悬液被移入12孔文化板中，吸入的细胞细胞数为2×106个左右。
（2）添加培养基到细胞培养物中，以充分覆盖细胞。
（3）将板加入约为35℃，5%二氧化碳环境下的恒温培养箱中，进行配队。
（4）半小时后使用显微镜检查细胞的附着，然后循环补充适量接种。
在24小时之前，每隔2小时更换于第一个。
4. Gimsa染色法（1）准备细胞标本：从培养基中取出涂片架，然后“组织培养板”模式的检测做法，将液体在上面包括涂片架移至吸满液体。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。
染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。
在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。
通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。
同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。
观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。
同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备方法的改进
小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备方法的改进刘星;冯昆;张青峰;姬可平;王燕【摘要】目的改进小鼠骨髓细胞中期染色体标本制备的方法,以利于在实验教学中应用.方法设定不同浓度梯度的秋水仙素,分别作用于小鼠4小时和14小时,调整低渗液浓度及低渗时间、预固定和固定时间、离心速度及离心时间、滴片高度等,制作出分散良好、形态清晰的染色体标本.结果经过多次反复实验比较,秋水仙素注射剂量为10 μg/g BW作用4小时和5μg/gBW作用14小时,低渗液处理15分钟,预固定2分钟,固定10分钟,2500转/分,离心5分钟,滴片高度50～80 cm,可获得理想的实验结果.结论改进后的实验方法不仅能有效地缩短实验操作时间,而且可以提高实验教学质量,可应用于相关实验教学.【期刊名称】《卫生职业教育》【年(卷),期】2015(033)018【总页数】2页(P101-102)【关键词】小鼠;骨髓细胞;中期染色体;制备方法【作者】刘星;冯昆;张青峰;姬可平;王燕【作者单位】遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041;遵义医学院珠海校区,广东珠海519041【正文语种】中文【中图分类】G424.31染色体的结构和数目是研究生物体遗传、变异、发育等的基础［1］，染色体制备对人类遗传病的研究和诊断有着非常重要的意义［2］，也是进行染色体原位杂交、染色体畸变、染色体核型分析和显带分析等研究的重要基础。
制备小鼠染色体标本是各大农业、生物和医学院校细胞生物学、遗传学、医学遗传学等实验课程中重要的实验内容之一。
通过实验，学生可了解小鼠染色体的数目及形态特征，掌握中期染色体制备的实验原理和方法。
该实验操作步骤简单，但每个步骤稍有不慎将导致实验失败，不能在镜下观察到清晰的、分散好的中期染色体。
另外，实验要求提前对实验动物进行预处理，因此对实验课程开设的时间有所限制。
小鼠骨髓染色体标本的制备.
3．预固定：加入固定液5滴吹打混匀。
4．离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
6、再离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
7、再固定：再加入固定液2－3滴，打匀。
8、制片：用滴管吸细胞悬液，从20－30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色：Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检：低倍镜下找到分散良好的分裂相后，换高倍镜、油 镜、认真观察。
四、作业 1 为什么要低渗处理？ 2 观察2-3个小鼠骨髓细胞染色体的分裂
相，数一数有几条。
小鼠骨髓染色体标本的制备
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的： 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原理
小鼠骨髓细胞用秋水仙素积累分裂相， 用0.075 mol/L-1KCI进行低渗后，经 固定、染色，可见到分散的染色体。
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦 去附着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗， 用离心管接收冲洗液。
小白鼠染色体的标本制备和观察实验不足之处
小白鼠染色体的标本制备和观察实验是细胞生物学和遗传学研究中非常重要的一环。
通过观察小白鼠染色体的结构和数量，可以更好地了解其遗传特性和遗传变异。
然而，在现有的研究中，我们发现了一些实验中存在的不足之处，这些问题可能会影响实验结果的准确性和可靠性。
有必要对现有的标本制备和观察实验进行深入的评估和改进。
以下是小白鼠染色体标本制备和观察实验中存在的一些不足之处：1. 标本制备不规范：在研究中，染色体标本的制备非常重要，影响着后续的观察和分析结果。
然而，在一些实验中，我们发现染色体标本的制备过程存在一些不规范的情况，比如处理时间过长、温度控制不当等问题，这些问题可能会影响细胞的完整性和染色体的展开情况。
2. 染色体观察方法不精准：在染色体观察实验中，常用的方法包括显微镜观察和染色体计数。
然而，在一些实验中，我们发现染色体观察的方法不够精准，特别是在染色体计数过程中存在误差较大的情况，可能会影响实验结果的可靠性。
3. 样本数量不足：在一些研究中，由于样本数量有限，可能导致实验结果的稳定性和代表性不足，不能充分反映小白鼠染色体的遗传特性和变异情况。
针对以上问题，我们提出了一些改进方案：1. 规范标本制备流程：在染色体标本制备过程中，需要严格控制处理时间和温度，确保细胞的完整性和染色体的展开情况，可以采用标准的化学方法或酶切方法来提高染色体的展开度和清晰度。
2. 优化染色体观察方法：在染色体观察实验中，可以采用先进的显微镜技术和染色体计数工具，提高观察结果的准确性和精准度，也可以结合计算机图像分析技术来进行数据处理和统计分析，减少人为误差的影响。
3. 增加样本数量：为了提高实验结果的稳定性和代表性，可以增加样本的数量，尽可能覆盖不同个体和不同遗传背景的小白鼠，从而更全面地了解染色体的遗传特性和变异情况。
通过改进小白鼠染色体标本制备和观察实验中存在的不足之处，可以提高实验结果的准确性和可靠性，为细胞生物学和遗传学研究提供更可靠的数据支持。
小鼠骨髓染色体标本的制备.
8、制片：用滴管吸细胞悬液，从20－30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色：Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检：低倍镜下找到分散良好的分裂相后，换高倍镜、油 镜、认真观察。
四、作业 1 为什么要低渗处理？ 2 观察2-3个小鼠骨髓细胞染色体的分裂
小鼠骨髓染色体标本的制备
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的： 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原/L-1KCI进行低渗后，经 固定、染色，可见到分散的染色体。
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦 去附着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗， 用离心管接收冲洗液。
相，数一数有几条。
2、低渗处理：加KCL至2/3管，用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液 中，放入37℃恒温水浴锅中，静置25min。（吹打不宜过猛）
3．预固定：加入固定液5滴吹打混匀。
4．离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
6、再离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
通过制备动物骨髓细胞染色体标本，进一步了解细胞染色体的形态和结构，以及染色体在遗传学研究中的应用。
实验原理
动物骨髓细胞是一种快速分裂细胞，其中染色体数目和结构较为清晰，因此通常用于染色体分析和遗传学研究。
为了制备动物骨髓细胞染色体标本，需要经过细胞取样、细胞处理与固定、染色和镜检等几个步骤。
实验步骤
1. 取样：在实验动物体内取出一小段骨髓组织，置于离心管中，加入10ml生理盐水，轻轻摇晃，使细胞均匀分散。
2. 细胞处理和固定：取出适量的细胞液，加入等体积的去离子水后进行处理。
将细胞液滴于预先贴有载玻片上的正常细胞培养液中，使其渐渐均匀分散。
将玻片放置在室温下，使细胞贴附在玻片上并进行细胞固定。
细胞固定可用10%甲醛或70%乙醇，也可用50%醋酸处理。
3. 染色：将固定的细胞标本先置于1%琼脂糖中5～10分钟，用注射器吸取琼
脂糖，并把细胞标本冲洗干净，然后用生理盐水洗净。
若要染色，则滴上适量的霉素酚-吡啶溶液或可以染细胞核者，如吉姆萨红溶液或乙酰苯胺-三甲胺水溶液等，等颜色形成后即可洗净。
4. 镜检：放入顶匣，用显微镜观察染色后细胞形态和染色体。
如果需要拍照，则可利用显微摄影技术，对样本进行记录。
实验结果
通过实验可以观察到动物骨髓细胞染色体的形态、数量和结构，进一步了解染色体在遗传学研究中的应用。
同时，该实验对熟悉细胞培养和染色技术也有一定帮助。
实验结论
通过本次实验，我们可以获得动物骨髓细胞染色体标本，并学习了细胞处理、固定、染色和镜检等关键步骤。
实验结果可以为生物学研究提供相关实验基础。
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察试验目的把握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理试验原理小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂力量，本试验采纳这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观看到很多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
试验原理制备方法包括以下几个要点:1. 用肯定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观看到染色体的显微图象试验用品1．材料：小白鼠2．器具：注射器（1ml,5ml）剪刀镊子玻璃吸管10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜滤纸擦镜纸纱布恒温水浴锅3．药品：0.01%秋水仙素0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）2%柠檬酸钠改良石炭酸品红试验步骤预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗离心固定离心滴片染色观看1．预处理：试验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组织，洗净3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取10ml 2%柠檬酸钠，注射器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到10ml的离心管中4 ．离心：1000r/min 离心10 min ,弃上清5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间（约15 min ）再吹散一次，使细胞分散，悬浮于溶液中6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清7．固定：沉淀加8ml固定液，并用吸管轻轻吹匀，进行固定，中间（约15 min ）再吹散一次试验步骤8. 离心：1000r/min 离心10 min ,留1 ml 左右上清，轻轻吹打成细胞悬液9. 滴片：用吸管吸取细胞悬液，高度30-40 cm，滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰上微微加热，室温晾干10. 染色：改良石炭酸品红染色10-20 min11. 观看：低倍高倍。
小鼠骨髓细胞染色体标本制备
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具： 注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品：
0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、 Giemsa染液、0.01M磷酸缓冲液 (PH6.8)，0.85%生理盐水。
实验九
小鼠骨髓
细胞染色体标本制备
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨
髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造
血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
2、适当浓度秋水仙素处理分裂 增殖的骨髓细胞，能抑制细胞分裂 时纺锤丝、纺锤体的形成，而染色 体不分裂成为子染色体，使细胞不 向后期过渡，从而收集到更多的中 期分裂相。 同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用 6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定； 1000rpm离心10分钟后，弃去上清液。
7、固定：沿管壁慢慢加入固定液 5ml，用吸管吹打成细胞悬液后，室 温下静置15分钟，5分钟时轻轻吹打， 使细胞充分固定。 8、离心：1000rpm离心10分钟， 弃上清液。 9、再固定：同固定I。 10、再离心：同8，离心后加 0.1ml固定液，吸管吹打成细胞悬液。
四倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=32）
二倍体荞麦体细胞中期染色体（2n=16）
动物骨髓细胞染色体标本制备失败的原因分析
２秋 水 仙 素 处 理 的 时 间 和 用 量 ： 髓 细 胞 具 有 高 ） 骨
度 的 分 裂 增 值 能 力 ， 由 于 细 胞 分 裂 不 同步 ． 髓 内 但 骨
分 裂 中期 细 胞 不 多 ， 以 一 般 在 处 死 豚 鼠前 要 腹 腔 内 所
就 是 秋 水 仙 素 处 理 不 当 。 因 此 秋 水 仙 素 处 理 时 要 注 意 ： 注 射 的方 法 ： 该 左 手 提 起 腹 部 皮 肤 ， 手 拿 注 ① 应 右
而 制 备 失 败 ， 本 质 量 不 佳 ， 常 可 出 现 以 下 几 标 通
种情况 ：
１骨 髓 细 胞 虽 多 ， 色体 ｒ期 分 裂 相 却 很 少 。 ） 染 ｆ １ ２ 中期 分 裂相 多， 染 色体短 小 ， 态 结构 不 清 晰 ） 但 形
组 形
裂相 。 用于 制备骨髓染 色体的动物要求 ： ①健康 、 生长 发 育 良好 ； ②有 足够 体重 ， 因为 大 的动物 才可 取得 更 多 细胞 。一 般 实 验 选 用 动物 为 体重 在 ２ ０ ５ ０ ｇ的 豚 ５ ～ ０
鼠 为佳 ， 易 于 收集 骨髓 ， 得 更 多 的 中期 细 胞 。而 使 更 获 用 小 白 鼠量 大 且 体 重 轻 ， 能 收 集 大 量 的 细 胞 ， 用 不 使 豚 鼠 可使 动 物 用 量 减 少 ， 能 收 集 到 更 多 的细 胞 。 另 也 外 经 过 实 验 ，在 豚 鼠背 部 剪 掉 １ｃ １ｅｌ ｍ￣ ｌ 的皮 肤 ， ｌ 可 以 刺 激 豚 鼠 的 免 疫 力 ， 强 骨 髓 细 胞 活 跃 功 能 ， 能 增 电
一
般 处 理 时 间 ３ ４ ｈ 豚 鼠体 大 ， 射 用 量 应 为 １ ｇｇ ～ ， 注 ０ Ｉ ／ ｘ分 收 缩 或 染
小树骨髓细胞有丝分裂染色体制片 制片质量评价
小鼠骨髓细胞染色体制片质量评价1、制片人：徐宜强2、同组人：朱沛煌徐宜强3、时间：2011年12月7日4、制片内容：小白鼠骨髓细胞染色体标本的制备5、制片过程：①预处理（实验前，老师已帮忙做好）取骨髓前3-4h给小鼠注射0.1%的秋水仙素。
②取骨髓断颈法处死小鼠，取股骨，剪掉股骨两端关节头，用注射器吸取1%你们酸钠洗脱至骨腔变白。
③低渗用吸管吹打，1000prm离心10min，去上清，加0.075mol/L KCl 5-8ml，吹打，水浴20min④固定1000prm离心10min，去上清，沿管壁慢慢加8ml固定液（3:1），轻轻吹打均匀，静置20-30min，1000prm离心10min，去上清，留0.5ml沉淀加固定液（1:1）5-6滴。
⑤滴片将事先在冰箱中预冷的载玻片30º倾斜，滴管与玻片50cm高度滴片，每张玻片上滴2-3滴，滴完立即吹散吹匀，放置至充分干燥。
⑥染色充分干燥后用苯酚品红染液染色20min。
⑦观察染色完毕后，用清水轻洗，干燥，观察染色体形态。
6、细胞破碎率：制片编号 1 2 3 4 5 65 10 12 13 15 5每100个细胞中细胞跌破数综合制作的六张玻片，得细胞破碎率=10%7、染色体形态：大体上呈现U字型。
8、染色体数目：小白鼠骨髓细胞染色体有40条。
9、清晰程度：中等，大部分染色体形态可以看清楚，有的染色体很清晰，个别染色体很模糊。
在个别较清晰破碎细胞中，可隐约数到36条。
10、实验中得失分析：实验开始的第一步就是杀死小白鼠，这着实给了我一个比较大的挑战，但是想想凡事总得有个第一次，就狠下心，捉了一只小鼠，按照老师指导的要点将小鼠迅速处死了。
但是取股骨的时候，由于大意没仔细听老师讲解，取错了，把股骨剪断了。
只好又重新又取了个小鼠来取股骨。
实验操作中还存在一些不足，导致细胞跌破率不高，染色的效果不是很好，有的载玻片上的很少，有的载玻片上还有不少细胞团簇在一起，可能原因是：一、低渗做的不是很好。
小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法的改进
小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法的改进
刘庆军;孙永君
【期刊名称】《山东轻工业学院学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2012(026)004
【摘要】我们在细胞生物学实验教学中对小鼠骨髓细胞染色体标本制备方法实验
操作做了一些改进:由传统的取小鼠后腿骨改为取四肢骨,提高了实验材料的利用率；由注射器法收集骨髓细胞改为震荡器法收集骨髓细胞,使收集细胞的实验操作更加
简便、安全,而且大大提高了骨髓细胞的收得率,同时明显增加染色体中期分裂相的
细胞数,由对照组中的每视野中的中期分裂相细胞2～4个提高到5～9个,极大提高了实验教学的效果.
【总页数】2页(P64-65)
【作者】刘庆军;孙永君
【作者单位】山东轻工业学院食品与生物工程学院,山东济南250353;山东轻工业
学院食品与生物工程学院,山东济南250353
【正文语种】中文
【中图分类】Q2-06
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燕
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小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备The final revision was on November 23, 2020小鼠骨髓细胞染色体标本的制备【目的要求】1.掌握小鼠细胞染色体标本制备方法。
2.计数并观察小鼠骨髓细胞分裂中期染色体的数目及特点【基本原理】在骨髓细胞中，有丝分裂旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到中期细胞。
骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。
【实验用品】1．器材：解剖刀、剪刀、镊子、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、冰冷载玻片、酒精灯、大培养皿、显微镜、纱布,标签纸，记号笔等；2．试剂%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、 mol / L KCI溶液、Giemsa 染液等。
3．材料：65-90天健康小鼠（生技09级72人，新华09生物技术36人，生科08级75人，生技08级70人，共253人，需购小鼠110只）【方法与步骤】1．前处理取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。
注射浓度随动物种类不同而异，一般每克体重注射2～6μg，注射总量不宜超过2 ml（例如一只体重50 g 的蟾蜍，若按4μg / g注射，需注射浓度为％的秋水仙素溶液 ml ）。
秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。
2．取骨髓细胞处死动物，用装有生理盐水的注射器反复冲洗出骨髓细胞，并用注射器筒轻轻吹打，使细胞团块分散，静置片刻、待大组织团块沉淀后，用吸管将骨髓细胞悬浮液移至离心管中，以1000 r / min 离心5~10 min，弃去上清液。
3．低渗根据骨髓细胞液的多少，加 mol / L的 KCI液5～6 ml，在37℃水浴箱中或室温下低渗20～30 min。
低渗时间过长，易造成细胞破裂；时间过短，则染色体难以分散。
4．预固定低渗完毕，立即加入1 ml 新配制的预冷Carnoy’s固定液，用吸管将细胞轻轻吹打均匀，进行预固定。
实验二小鼠骨髓细胞染色体标本制备
实验二小鼠骨髓细胞染色体标本制备实验目的：通过制备小鼠骨髓细胞染色体标本，了解染色体结构、形态和变异等方面的知识，为后续核型分析、染色体异常检测等实验打下基础。
实验原理：小鼠骨髓细胞染色体标本制备是指将小鼠骨髓组织中的细胞进行处理后制备成适合观察的染色体标本。
该标本制备方法包括细胞处理，染色体制备和染色体观察等环节。
1.小鼠骨髓细胞处理将小鼠放入固定夹，使用无菌注射器向小鼠腹腔注入适量的钾盐缓冲液（KCl，0.074mol/L）。
钾盐缓冲液的功能是使细胞发生肿胀，探头区别正常细胞和异常细胞。
此外，钾盐缓冲液也有不利的作用，可以导致一些染色体脱落或断裂。
接下来，在小鼠固定夹上进行剖腹，取出骨髓。
骨髓组织放置在一滴含有10%甘露醇的氯仿中进行易位。
在显微镜下观察细胞的形态结构，进行可行性检测。
2.染色体制备取干净的药片，滴入细胞悬液，热外片变性塔。
药片的材料使用高价值玻璃药片，这样可以保证药片平整和染色体不能和药片表面黏附。
加入甘醇一定要多加就能快速促进水分的蒸发，避免液体反应产生气泡而影响结果。
不需要太用力，在药片的表面轻轻涂抹，使液体均匀分布。
接下来，将药片吸入液、95%甲醇，以及3%乙酸中每个5分钟，直到药片完全干燥。
3.染色体观察将药片上的细胞标本置于显微镜上，根据染色体数目和形态等信息进行染色体分析。
在显微镜下观察染色体的特征，包括染色体数量、形态、大小、位置以及异常情况等。
对观察到的染色体进行记录和描述。
实验结果：通过对小鼠骨髓细胞进行染色体制备和检测，我们可以观察到染色体的结构、形态等方面的特征。
此外，通过对染色体的数量和形态进行观察，还可以发现染色体的变异情况，进一步了解染色体的异常情况。
在实际操作过程中，需要注意细胞处理和染色体制备的每一个环节，以保证实验的准确性和可靠性。
实验6小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
实验六、小鼠骨髓细胞染色体标本 制备与观察
目的与要求
1、掌握脊椎动物骨髓细胞染色体标本制备的 方法； 方法； 了解小鼠骨髓细胞染色体的形态和数目。 2、了解小鼠骨髓细胞染色体的形态和数目。
实验原理
小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性， 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。 数量较多。
4、预固定：加1mlCarnoy 、预固定： 固定液混匀 配平， 混匀， 固定液混匀，配平，离心 1Biblioteka 00rpm/8分钟。 分钟。 分钟
3、低渗：37度恒温水浴 分钟。 3、低渗：37度恒温水浴30分钟。 度恒温水浴30分钟
5、固定：弃上清，再加 、固定：弃上清， Carnoy 固定液至 固定液至6ml刻度， 刻度， 刻度 悬浮，静置20分钟 分钟， 悬浮，静置 分钟，离心 同上。 同上。
秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成， 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内， 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
内容与方法
1、动物预处理：取材前 、动物预处理： 3~4小时，腹腔注射 小时， 小时 0.01%的秋水仙素。 的秋水仙素。 的秋水仙素 2、取材：处死小白鼠，剥取股 、取材：处死小白鼠， 暴露骨髓腔， 骨，暴露骨髓腔，用4~5ml KCl 冲洗骨髓腔获得骨髓细胞， 冲洗骨髓腔获得骨髓细胞，定容 至6ml。 。
收集到离心管中, 收集到离心管中
定容至6ml. 定容至
滴片： 滴片：
滴于玻片上， 滴1~2滴于玻片上，吹气， 滴于玻片上 吹气， 在酒精灯火焰过火2~3次， 次 在酒精灯火焰过火 做记号，凉干， 做记号，凉干，染色
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察
实验7小鼠骨髓细胞染色体标本的制备和观察一、实验目的了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。
观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。
利用显微照相技术对所得切片进行照相。
二、实验原理染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。
因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。
进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。
如将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收并可转运到骨髓，结果使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，使得染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。
这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。
对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。
对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。
人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。
三、实验用具及材料实验材料：体重20克左右的小鼠一只实验试剂：0.075mKCl低渗液、固定液（甲醇：醋酸＝3:1）、0.4%秋水仙素、改良苯酚品红溶液、二甲苯实验材料：恒温水浴槽、纱布、烧杯、离心管2支、刀片、镊子、解剖盘、解剖剪、镊子、注射器、离心机、镜头纸光学显微镜、带数码相机的光学显微镜四、实验步骤1腹腔注射秋水仙素溶液：在做实验前2~3小时，对实验用小鼠按0.1ml/20g小鼠的量对其进行0.4％的秋水仙素注射。
2取材：实验时，用断颈法迅速将小鼠处死，通过解剖取出股骨，用注射器吸取在37℃下保温的低渗液2毫升，将针头插入骨髓腔中冲洗骨髓，使冲洗液从股骨的另一端流出。
收集冲洗液到5ml刻度的离心管中。
3低渗：用吸管将冲洗液吹打几次，然后把离心管放在37℃恒温水浴槽内低渗20分钟。
4固定：之后取出并加1ml的固定液，吹打之后放入37℃恒温水浴槽内固定10分钟。
5离心：然后将1000rpm离心10分钟，弃去上清。
小鼠骨髓细胞染色体
实验步骤
预处理——取股骨——冲洗骨髓——离 心——低渗——离心——固定——离心——
滴片——染色——观察
1. 取材及前处理：取健康小白鼠（约65-90天龄）， 腹腔注射0.1%秋水仙素溶液0.1ml，剂量为 4ml/Kg动物体重 2. 取骨髓：将已用秋水仙素前处理的小白鼠，经过 2-3小时后，用损伤脊椎法处死小白鼠，立即取出 两侧股骨，把肌肉刮净，然后从骨股两端关节处 剪下，用2%柠蒙酸钠溶液洗净骨股上的血污及肌 肉残渣，剪去骨股两端膨大的关节头，使其露出 骨髓，然后用吸有3-5ml2%柠檬酸钠溶液的注射 器，从股骨的一端插入针头，往骨髓内冲洗多次， 直至股骨断面变成粉白色为止，可多剪几个断面 反复冲洗，这样制备了骨髓细胞悬浮液，也可用 眼科镊子小心地取出骨髓，置于有少量柠檬酸钠 溶液培养皿中捣碎，然后再加入2%柠檬酸钠溶液 适量，制成3-5ml骨髓细胞悬液
骨髓细胞染色体的制备与观察
2010级生物技术专业——冯德
实验目的 实验原理
实验用品 实验方法
实验目的
初步掌握小白鼠骨随细胞染色体的制 备方法，计算骨髓细胞分裂中期的分裂相 的染色体数目并观察端着丝点的形态特 点．
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞能生成 各种血细胞和原始细胞，具有较高的分裂 能力。本实验采用这一材料，通过前处理， 低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色 体标本，可观察到许多处于分裂中期的染 色体
3.
பைடு நூலகம்1.
低渗处理：用吸管将骨髓细胞悬液移入带刻度离心管 内，1000rpm离心10分钟，吸去上清液。加入0.075M氯 化钾溶液5ml立即将细胞团吹打均匀，置37℃水浴25-30 分钟 4. 预固定、固定：经低渗处理后的细胞，加入卡诺氏 固定液5-6滴搅拌均匀进行预固定10分钟，然后以 1000rpm离心10分钟，此为第一次固定然后以同法离心， 弃上清液，仅留约0.2-0.3ml的细胞团与部分上清液，吹 均匀制成细胞悬浮液涂片观察。如果细胞分散的不好， 可再按上述方法再固定1-2次，使染色体进一步分散 气干法制片：取预先冰冻的载玻片，滴2-3滴细胞 悬浮液于其上，立即吹气均匀打散、过火、置室温中自 然干燥
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小鼠骨髓细胞染色体标本制备中的失误与对策
作者：刘涌涛， 马全祥， 刘慧娟
作者单位：新乡医学院基础部,河南新乡,453003
刊名：
生物学通报
英文刊名：BULLETIN OF BIOLOGY
年，卷(期)：2003,38(6)
被引用次数：5次
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5.黄燕.赵小平.余红.陈绍坤动物骨髓细胞染色体标本制备失败的原因分析[期刊论文]-生物学通报 2006(1)
本文链接：/Periodical_swxtb200306033.aspx。