小鼠骨髓细胞染色体标本制备中的失误与对策
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
实验七小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
一、实验目的
1. 学会小鼠骨髓细胞的采集和处理方法。
2. 掌握细胞较好的贴壁与生长条件，以保证细胞的好。
3. 学会最常用的Gimsa染色方法，使出现的幻觉具有明朗的色调，以便细胞的编号与统计。
二、实验原理
骨髓细胞是一种多能性细胞，可分化为血液成分或骨骼系统的成分。骨髓细胞被用于
检测细胞遗传学异常，在染色体物质遗传及细胞迁移等方面具有潜在用处，并可为结构遗
传学提供信息。
作为染色体标本制备的来源，一般选用小鼠骨髓细胞是最为经常采用的试验模型之一，常常作为各类染色体研究、映射和诊断的标本；其区别如来源易得、繁殖成本低、染色体
数量较少，易于研究、成熟度高等因素显得优越。
三、实验步骤
1. 实验前准备工作
（1）保存干燥灭菌的小鼠骨髓细胞培养基，避免接触灰尘。
（2）检查各种器械的完整性，保证手段的杀菌处理。
（3）使用有缩小五倍功能的显微镜，以确保细胞图片清晰度与细胞形态的准确。
（4）打开红外线灯，以增强视觉效果并避免光损伤。
（5）按实验方案准备各种试剂和设备。
（6）实验室内准备50 mL恒温水浴和常规离心机。
2. 骨髓细胞的采集
（1）设备：小鼠解剖刀片、50mL离心试管、海绵、抽管等。
（2）用70%酒精清洗瓶子的注射器，使用注射器收集小鼠间隔内的骨髓，放入存储试管中。
（3）轻轻摇动骨髓，使其中的细胞与上清液充分混合均匀。
3. 细胞的处理
（1）细胞浓度的调整：从建立骨髓细胞培养物开始，骨髓细胞培养物可以在50mL培养基中存在。使用试管取出足量细胞，可用比值0.2 mL的浓度悬液被移入12孔文化板中，吸入的细胞细胞数为2×106个左右。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
实验目的：
本实验的目的是利用正常小鼠的骨髓细胞制备染色体标本，并通过显微镜观察染色体的形态和数量，并了解染色体的组成和结构。
实验原理：
染色体是细胞核中最大的有组织结构，由DNA和蛋白质组成。染色体的数量和形态是每个物种独特的标志之一。在有丝分裂过程中，染色体的形态和数量的变化可以反映出细胞的分裂状态。
为了制备染色体标本，需要通过细胞的裂解，释放和固定染色体，然后在显微镜下观察染色体的形态和数量。
实验步骤：
1. 取出小鼠的股骨，并在无菌条件下对其进行消毒。
2. 使用消毒的剪刀剪下股骨两端，将骨髓剪下，加入RPMI-1640培养液中，使髓液悬浮，然后用细胞培养器将其孵育2-3天，使骨髓细胞增殖。
3. 用离心机将骨髓细胞离心，去除培养液，用磷酸盐缓冲液进行细胞裂解。
4. 将制备好的染色体悬液滴在预先涂上盐酸聚赖氨酸溶液的载玻片上，让其固定，然后通过染色体芝士和琼脂糖溶液对细胞进行染色。
5. 用显微镜观察染色体标本，记录染色体的数量和形态，并观察细胞的分裂状态。
实验结果：
制备的染色体标本在显微镜下观察。通过对标本的观察，我们可以看到染色体形态和数量的变化，以及细胞分裂状态的变化。同时，我们可以从染色体上观察到细胞的遗传信息，包括基因序列和调控因子等。
结论：
本实验成功制备了小鼠骨髓细胞染色体标本。观察染色体形态和数量的变化，可以从中了解细胞的遗传信息和分裂状态变化。同时，该实验也展示了染色体的重要性和组成结构，加深了对细胞生物学的理解。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
第3页
三、试验用具
1.材料：小白鼠 2.试剂：0.01﹪秋水仙素,0.4%氯化钾 (KCl), Carnoy固定液(甲醇:冰醋酸=3:1),Giemsa 染 液，0.01M磷酸缓冲液(pH 6.8)，2%柠檬酸钠。 3.器材：离心机、显微镜、剪刀、解剖刀、小镊 子、注射器及针头、刻度离心管、吸管、载玻 片和盖玻片、染色缸、玻片盒
10.滴片：用吸管吸收细胞悬液，滴在预冷载玻 片上，室温晾干
11.染色：10% Giemsa染液染色30分钟
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
第6页
五、试验结果
在显微镜下观察Giemsa染色之后染色体 片(染色体呈紫红色)，找出分散适度中期染色 体图象, 观察小白鼠染色体形态，统计其染色 体数目。
制得好标本应是细胞多、颜色为紫红色。 此时间期细胞因为低渗和固定处理，细胞膜和质 已被去掉，镜下看到仅为膨胀后呈圆形细胞 核。分裂期细胞染色体集中在一起，其外也无细 胞膜包裹，染色体之间无重合，易分辨，臂长 度适中。但最主要是分裂相要多。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
第7页
几个动物染色体形态特征
ຫໍສະໝຸດ Baidu
动物名称 染色体数
染色体类型
x染色体形态
y染色体形态
青蛙 小白鼠
26
中央、亚中央着丝粒染色 中央着丝粒染色体 中央着丝粒染色体
试验六 小白鼠骨髓细胞染色体制备及观察
小白鼠的保定和注射
五．结果与讨论
1．结果： （1）．选取分散良好的染色体绘实物图，上 传图片1幅）。 （2）．染色体计数（2n=40）。 2．讨论： （1）．实验前注射秋水仙素的作用？不作此 步会怎样？ （2）．为何要用冷冻片？烘烤片的作用？
小鼠骨髓细胞染色体
试验六 小白鼠骨髓细胞染色 体制备及观察
一．实验目的：
1．学习小wenku.baidu.com骨髓细胞染色体制备方法。
2．观察骨髓细胞染色体，计数染色体。
二．原理：
活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分 析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使 细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理， 可得到清晰的中期染色体标本。
三．材料试剂
1．材料：小白鼠；
2．试剂：Giemsa染色液，0.4％KCl，2％柠 檬酸钠，固定液（甲醇：冰乙酸＝3：1）。
四．操作步骤
1．实验前4－8h小鼠腹腔注射秋水仙素1ml （0.14mg/ml）,(据小鼠体重用量调整)或1ml饱和 对二氯苯。 • 2．脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。 用细针头注射器吸取2％柠檬酸钠1ml，反复冲洗 骨髓腔5次，将冲洗液（离心管中）加入0.4%KCl 低渗10min（8ml,37℃）。
小鼠骨髓染色体标本的制备.
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的： 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原理
小鼠骨髓细胞用秋水仙素积累分裂相， 用0.075 mol/L-1KCI进行低渗后，经 固定、染色，可见到分散的染色体。
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦 去附着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗， 用离心管接收冲洗液。
2、低渗处理：加KCL至2/3管，用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液 中，放入37℃恒温水浴锅中，静置25min。（吹打不宜过猛）
3．预固定：加入固定液5滴吹打混匀。
4．离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
6、再离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
7、再固定：再加入固定液2－3滴，打匀。
8、制片：用滴管吸细胞悬液，从20－30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色：Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检：低倍镜下找到分散良好的分裂相后，换高倍镜、油 镜、认真观察。
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
动物骨髓细胞染色体标本的制备实验报告
通过制备动物骨髓细胞染色体标本，进一步了解细胞染色体的形态和结构，以及染色体在遗传学研究中的应用。
实验原理
动物骨髓细胞是一种快速分裂细胞，其中染色体数目和结构较为清晰，因此通常用于染色体分析和遗传学研究。为了制备动物骨髓细胞染色体标本，需要经过细胞取样、细胞处理与固定、染色和镜检等几个步骤。
实验步骤
1. 取样：在实验动物体内取出一小段骨髓组织，置于离心管中，加入10ml生理盐水，轻轻摇晃，使细胞均匀分散。
2. 细胞处理和固定：取出适量的细胞液，加入等体积的去离子水后进行处理。将细胞液滴于预先贴有载玻片上的正常细胞培养液中，使其渐渐均匀分散。将玻片放置在室温下，使细胞贴附在玻片上并进行细胞固定。细胞固定可用10%甲醛或70%乙醇，也可用50%醋酸处理。
3. 染色：将固定的细胞标本先置于1%琼脂糖中5～10分钟，用注射器吸取琼
脂糖，并把细胞标本冲洗干净，然后用生理盐水洗净。若要染色，则滴上适量的霉素酚-吡啶溶液或可以染细胞核者，如吉姆萨红溶液或乙酰苯胺-三甲胺水溶液等，等颜色形成后即可洗净。
4. 镜检：放入顶匣，用显微镜观察染色后细胞形态和染色体。如果需要拍照，则可利用显微摄影技术，对样本进行记录。
实验结果
通过实验可以观察到动物骨髓细胞染色体的形态、数量和结构，进一步了解染色体在遗传学研究中的应用。同时，该实验对熟悉细胞培养和染色技术也有一定帮助。
实验结论
通过本次实验，我们可以获得动物骨髓细胞染色体标本，并学习了细胞处理、固定、染色和镜检等关键步骤。实验结果可以为生物学研究提供相关实验基础。
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察
小鼠骨髓细胞染色体标本制作与观察
试验目的
把握动物骨髓染色体标本制备基本过程，了解操作步骤的原理
试验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是生成各种血细胞和原始细胞，具有高度的分裂力量，本试验采纳这一材料，通过前处理，低渗，固定，制片，染色等步骤制得染色体标本，可观看到很多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。
试验原理
制备方法包括以下几个要点:
1. 用肯定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处
2. 用低渗法使将细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上
3. 空气干燥法可使使细胞的染色体在载片上展平, 经Giemsa染色后便可观看到染色体的显微图象
试验用品
1．材料：小白鼠
2．器具：注射器（1ml,5ml）剪刀镊子玻璃吸管10ml刻度的离心管离心机载玻片盖玻片显微镜滤纸擦镜纸纱布恒温水浴锅
3．药品：0.01%秋水仙素0.075MKCl 固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）2%柠檬酸钠改良石炭酸品红
试验步骤
预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗离心固定离心滴片染色观看
1．预处理：试验前2.5-3小时，按每克体重注射0.02ml，给小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2．取股骨：断颈处死小鼠后，剔去肌肉组织，洗净
3．冲洗骨髓：剪去两端的股骨头，吸取10ml 2%柠檬酸钠，注射器针头插入股骨一端,反复冲洗两根股骨，洗液收集到10ml的离心管中
4 ．离心：1000r/min 离心10 min ,弃上清
5 ．低渗：加入8ml 0.075mol/LKCl溶液,滴管吹散,37℃水浴低渗30 min ，中间（约15 min ）再吹散一次，使细胞分散，悬浮于溶液中6．离心：1000r/min离心10 min，弃上清
小鼠骨髓细胞染色体制备与观察PPT
结果分析
实验过程中，细胞培养和染色环节是关键，需要 严格控制实验条件，以保证染色体制备的质量。
染色体观察需要经验丰富的实验员，以确保准确 识别染色体的数目和结构。
实验结果与预期相符，证明了实验方法的可靠性 和准确性。
结果讨论与展望
本实验为小鼠骨髓细胞染色体制备与观察提供了有益 的参考，但仍需进一步优化实验条件和操作步骤，以
小鼠骨髓细胞染色 体制备与观察
Hale Waihona Puke Baidu
目录
• 实验准备 • 实验步骤 • 实验结果 • 结论与讨论
01
CATALOGUE
实验准备
实验材料
小鼠骨髓细 胞样本
细胞培养基
染色剂（如 吉姆萨染料 ）
载玻片和盖 玻片
胰蛋白酶
细胞离心管 和吸管等
实验试剂
无菌水 生理盐水
甲醛
实验试剂
01
丙酮酸
02 03
EDTA 胰蛋白酶抑制剂
染色体畸变与疾病
染色体畸变与多种疾病的发生密切相关，如唐氏综合征、 威廉姆斯综合征等。通过染色体畸变分析，可以为疾病诊 断和治疗提供重要依据。
04
CATALOGUE
结论与讨论
实验结论
成功制备了小鼠骨髓细胞染色体 标本。
染色体数目正常，未发现异常染 色体结构。
实验结果表明，小鼠骨髓细胞染 色体制备与观察技术是可行的， 为后续的遗传学研究提供了基础
实验小鼠骨髓染色体制备和观察
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形 成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期， 积累大量中期分裂相细胞。
低渗作用: 使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互 缠绕和重叠。
预固定：终止低渗作用，使细胞离心时不易破裂 ，固定维持细胞形态结构。
高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色 体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
三、实验器材和试剂
• 1.器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射
器、10ml离心管、吸管、量筒、预冷载玻片、试 管架、离心机、恒温水浴锅、显微镜、乙醚酒精 、擦镜纸
• 2、试剂 100ug秋水仙素液、 0.075 mol/L KCl
低渗液、 Giemsa染液
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
是染色体观察的最佳时期。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
骨髓细胞 数量多且分裂旺盛，可直接进行染色体 标本的制备。取材方便，操作简单和无需无菌培 养，是研究小型哺乳动物等染色体的常用方法。
人骨髓染色体抽取
wenku.baidu.com
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
怎样才能制备一个好的染色体标本？
获得大量处于有丝分裂中期的细胞。 使细胞膜破裂，且染色体能够完整并较分散的释
小鼠骨髓染色体制备及观察
方法与步骤
取材前3～4 h，向腹 腔内注射秋水仙素。注 射浓度随动物种类不同 而异。秋水仙素的主要 作用是使分裂细胞阻断 在有丝分裂中期，增加 中期分裂相的比例。
3、实验材料
实验动物
健康小鼠(Mus musculus 2n=40)，体重约18～ 20g，雌雄不限。
试剂
甲醇、冰乙酸、石炭酸品红、秋水仙素、KCl、 生理盐水
3、实验材料
实验器材
恒温培养箱、普通离心机、显微镜、分析天平、 离心管(5～10 mL)、吸管注射器(5 mL)、100 mL 烧杯、 载玻片 （冰片）
将获得的液体收集到离心管中，离心后去上清液， 加低渗液至8ml左右，室温下静置20~30分钟，进行 低渗。低渗结束后，加入1ml左右的Carnoy’s固定液 进行预固定，轻轻混匀后，离心。
1000转/分，离心10分钟，弃上清，加入固定液， 混匀后，室温放置25分钟，再次离心去上清，重 复固定一次，离心后，向沉淀中加入1ml固定液， 将细胞重悬。
3、实验材料
溶液配制：
(1)0.01％秋水仙素：称10 mg秋水仙素，溶于 100 mL生理盐水中。 (2)低渗溶液：称5.59克KCl溶于1,000 mL蒸馏水 中，其浓度为0.075M。 2%柠檬酸钠溶液：：称2.28克柠檬酸钠溶于 100ml蒸馏水中。 Giemsa溶液
小鼠骨髓染色体制备及观察
小鼠骨髓染色体制备及观察
许多化学毒物具有遗传毒性
基因突变：碱基置换和移码突变。
染色体畸变（structural chromosome aberration)：是指由于染色体或染色单体断裂，造成染色体或染色单体缺失或引起各种重排，从而出现染色体结构异常
颜色体数目异常：整倍性和非整倍性改变。
染色体损伤的类型：
☐染色体数目的改变
①非整倍体：亚二倍体或超二倍体。
②整倍性改变：染色体成倍增加。
☐染色体结构的改变
1.断裂和裂隙：
2.微小体；较断片小而呈圆形。
3.有着丝点环：带有着丝点部分，两端形成环状结构并伴有一双无着丝
点断片。
4.无着丝点环：成环状结构。
5.插入/重复
8 非特定性型变化：如粉碎化、着丝点细长化、粘着等
整倍性畸变
非整倍性畸变
如何评价化合物的遗传毒性？
鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）：是最常用的检查基因突变的方法。检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力
☐评价染色体损伤的试验方法包括：
常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE) 微核试验 体外培养细胞或者体内染色体畸变试验
2、实验原理
☐有丝分裂：真核细胞的染色质凝集成染色体，复制的姐妹染色单体在纺锤丝的牵拉下分向细胞的两极，从而产生两个染色体数目和遗传性相同的子细胞的一种细胞分裂的类型。
☐细胞周期：从一次有丝分裂完成时开始，到下一次有丝分裂结束时为止，成为一个细胞周期。
G1：从有丝分裂结束到DNA 复制之前；
S: DNA 合成；
G2：DNA 复制结束到有丝分裂开始；
M ：有丝分裂期
简述小鼠骨髓染色体制备流程及注意形象
简述小鼠骨髓染色体制备流程及注意形象
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小鼠骨髓细胞染色体制备与观察
染色体组型：将染 色体ห้องสมุดไป่ตู้照大小、形 态进行排列分析染 色体组型的特征
实验结论
观察到了染色体分裂相
成功制备了小鼠骨髓细胞染 色体
确定了分裂相的数目和形态 特征
为进一步研究小鼠骨髓细胞 提供了实验基础
实验结果与文献报道的相似性 实验结果与文献报道的差异性 实验结果的创新性 实验结果的可靠性分析
实验结论：成功制备了小鼠骨髓细胞染色体观察到了染色体 的形态和结构特征。
染色体数目异 常：如非整倍 体、多倍体等
染色体结构异 常：如缺失、 重复、倒位、
易位等
染色体变异： 如染色体畸变、 染色体变异等
染色体异常的 遗传机制：如 基因突变、染
色体畸变等
染色体数目：确保 染色体数目正常无 异常增加或减少
染色体形态：观察 染色体的长度、着 丝粒位置和染色粒 分布等特征
染色体结构：检查 染色体是否存在缺 失、重复、倒位等 结构异常
细胞培养：在适宜的条件下将细胞从体内分离出来进行体外培养 传代：将培养的细胞按照一定的比例进行分装使细胞能够继续生长
制备前的准备：选 择合适的细胞培养 并维持细胞生长。
细胞固定：使用固 定剂将细胞固定在 一定位置防止细胞 移动。
细胞染色：根据实 验需求选择合适的 染色剂进行染色。
观察与拍照：使用 显微镜观察染色后 的细胞并记录照片 。
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
小鼠骨髓细胞染色体标本的制备
【目的要求】
1.掌握小鼠细胞染色体标本制备方法。
2.计数并观察小鼠骨髓细胞分裂中期染色体的数目及特点
【基本原理】
在骨髓细胞中，有丝分裂旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到中期细胞。骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。
【实验用品】
1．器材：解剖刀、剪刀、镊子、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、冰冷载玻片、酒精灯、大培养皿、显微镜、纱布,标签纸，记号笔等；
2．试剂0.1%秋水仙素溶液、Carnoy’s固定液（甲醇：冰醋酸＝3：1）、0.075 mol / L KCI溶液、Giemsa染液等。
3．材料：65-90天健康小鼠（生技09级72人，新华09生物技术36人，生科08级75人，生技08级70人，共253人，需购小鼠110只）
【方法与步骤】
1．前处理取材前3～4 h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异，一般每克体重注射2～6μg，注射总量不宜超过2 ml（例如一只体重50 g的蟾蜍，若按4μg / g注射，需注射浓度为0.1％的秋水仙素溶液0.2 ml ）。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。
2．取骨髓细胞处死动物，用装有生理盐水的注射器反复冲洗出骨髓细胞，并用注射器筒轻轻吹打，使细胞团块分散，静置片刻、待大组织团块沉淀后，用吸管将骨髓细胞悬浮液移至离心管中，以1000 r / min 离心5~10 min，弃去上清液。
遗传学实验报告：小鼠骨髓染色体标本制备
小鼠骨髓染色体标本制备实验报告
一、实验目的
掌握实验动物骨髓染色体标本的一般制备方法；识别有丝分裂中期相的染色体形态；了解小鼠染色体的形态特征及其数目。
二、实验原理
用于染色体制备的细胞系需要是分裂增殖旺盛的。一般临床采用外周血细胞培养，利用植物血凝素刺激淋巴细胞转化为具有分裂能力的淋巴母细胞。动物骨髓细胞是另一种具有旺盛分裂增殖能力的细胞。在骨髓细胞中处于分裂相的细胞数目较多。为了有效积累更多的有丝分裂中期细胞，可在收集骨髓细胞前用秋水仙素对其进行处理，其作用是抑制细胞分裂过程纺锤丝的形成，使细胞有丝分裂停止于中期，可以积累中期分裂相细胞，以便于染色标本的制备。
制备过程中用KCL低渗处理，可使细胞体积膨大，染色体分散。低渗后，需要用固定液固定染色体。高位滴片和吹散滴液，可使染色体进一步分散。用预冷的载玻片滴片后，迅速过火，可使染色体进一步扩散和固定，以便于制片和观察分析。
通过制备小鼠骨髓染色体标本，可以评价毒性物质对动物细胞染色体的影响。本法可应用于环境致突变剂的检测，具有简单、直接、利于掌握的特点，普通实验室均可应用。因此本法是检测有害物质对机体遗传物质损伤的常用实验方法之一。
三、实验步骤
1、取材：小鼠股骨骨髓细胞
取材前4小鼠于小鼠腹腔内注入0.04%的秋水仙素（0.01ml/10g）以积累中期分裂相。颈椎脱臼法处死小鼠，取其两侧股骨。将处死后的小鼠腹面朝上，用酒精棉球将皮毛擦拭干净，从外生殖口剪开皮肤，剃净肌肉及内脏，用酒精纱布清除其上粘附的肌肉及结缔组织。剔除干净后，用剪刀剪去股骨两端少许骨垢及骨皮质，暴露出红骨髓，用5ml预温37℃的0.075M KCL分两次分别从股骨两端冲洗骨髓腔，将冲洗液收集到同一5ml刻度离心管中。
实验6小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
实验原理
小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性， 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。 数量较多。
秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成， 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内， 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
内容与方法
1、动物预处理：取材前 、动物预处理： 3~4小时，腹腔注射 小时， 小时 0.01%的秋水仙素。 的秋水仙素。 的秋水仙素 2、取材：处死小白鼠，剥取股 、取材：处死小白鼠， 暴露骨髓腔， 骨，暴露骨髓腔，用4~5ml KCl 冲洗骨髓腔获得骨髓细胞， 冲洗骨髓腔获得骨髓细胞，定容 至6ml。 。
6、制片：去上清液,加少量固定 、制片：去上清液 加少量固定 混匀，滴片， 液，混匀，滴片， 7、染色：Giemsa染色 分钟 、染色： 染色10分钟 染色
取材：椎脱臼处死小白鼠，剥取股骨。 取材：椎脱臼处死小白鼠，剥取股骨。
小白鼠骨骼标本
收集细胞： 收集细胞：
暴露骨髓腔， 暴露骨髓腔，
反复冲洗骨髓腔获得 骨髓细胞， 骨髓细胞，
处死小白鼠剥取股骨暴露骨髓腔用处死小白鼠剥取股骨暴露骨髓腔用45mlkcl冲洗骨髓腔获得骨髓细胞定容至冲洗骨髓腔获得骨髓细胞定容至6ml
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小鼠骨髓细胞染色体标本制备中的失误与对策
作者：刘涌涛， 马全祥， 刘慧娟
作者单位：新乡医学院基础部,河南新乡,453003
刊名：
生物学通报
英文刊名：BULLETIN OF BIOLOGY
年，卷(期)：2003,38(6)
被引用次数：5次
1.翟中和.王喜忠.丁明孝细胞生物学 2000
2.杨保胜.丰慧根医学遗传学实验方法与技术 1998
3.宋金丹医学细胞生物学 1997
1.杨小芝.刘国良.郭嘉林氟铃脲对小鼠骨髓细胞和生殖细胞染色体畸变作用分析[期刊论文]-现代预防医学2009(11)
2.李昇刚.方选.丛江螺旋藻片对小鼠骨髓细胞染色体致畸变实验[期刊论文]-中国药师 2009(1)
3.刘文静.杨月阳被动吸烟对小鼠骨髓细胞姐妹染色单体交换率的影响[期刊论文]-实验动物与比较医学 2008(1)
4.谭秀华.梁磊秋水仙素对小鼠骨髓细胞有丝分裂的影响[期刊论文]-中国现代药物应用 2007(5)
5.黄燕.赵小平.余红.陈绍坤动物骨髓细胞染色体标本制备失败的原因分析[期刊论文]-生物学通报 2006(1)
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