血球计数板误区探究
关于血球计数板的使用
关于“使用血球计数板对酵母菌进行计数”的问题探讨摘要：“培养液中酵母菌种群数量的动态变化”是新课标教材“必修3：稳态与环境”中的学生分组实验，需要学生学会使用血球计数板进行准确计数酵母。
通过结合“培养液中酵母菌种群数量的动态变化”这一实验和有关血球计数板的命题的分析，对血球计数板的计数原理和操作方法中遇到一些问题进行探讨。
在人教版高中生物教材中，“探究培养液中酵母菌种群数量变化”只作了基本的原则性指导，对一些操作过程的细节，没有作细化阐述，而这些细节都是实验成功的关键所在。
如何正确使用血球计数板对酵母菌种群数量进行计数，是本实验的重点和难点。
根据中学实验条件，用显微镜直接计数法相对容易，只要指导学生掌握血球计数板的正确使用便可。
但学生对血球计数板结构的认识不够明确，教师也讲解不清晰。
而在近年来的高考题或模拟题中多次出现相关的试题，而且不仅从如何计算酵母的数量的角度来考查学生，还从操作方法或操作过程中出现的一些问题以及处理方法来考查学生。
而教师在遇到这些问题往往让学生记答案，学生对这些问题仍是感到疑惑。
笔者在近年来的教学实践中，将教师和学生在做该实验和相关命题遇到的一些问题，进行了分析探讨。
1 血球计数板的构造和计数原理虽然不同版本的教材推荐使用的血球计数板的规格不同，人教版建议使用2mmx2mmx0.1mm方格，苏教版推荐使用1mmx1mmx0.1mm方格，但是血球计数板的使用原理和方法是相同的。
以下以1mmx1mmx0.1mm方格的计数板为例分析结构和计数原理。
每个血球计数板上有两个计数室（图1）。
血球计数板上的符号和数字（图1）的含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板中计数室分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2（计数室边长1mm），分400个小格，每小格面积是1/400mm2（图2），9个大方格中只有中间的有小方格的中央大方格才是计数室。
解惑血球计数板
糖尿病 、 慢性 肾功 能衰 竭 等 。 ２ 目前 国 内的现 状
城市在不知不觉中陷入“ 毒雾 ” 。 有 暖气 的地 区降低 室 内 温度 。在 北 方 大 多 数 地 区， 还是依靠燃煤供暖。 煤污染不仅会带来二氧化硫 ， 还 会排 放 烟尘 ， 增加 大 气 中的 可吸 人颗 粒 物 。 以 ， 所 暖 气最好控制在 ２ ℃以内。 Ｏ 阴霾天气戴 口罩。大雾天如果长时间待在户外 ， 最 好戴 上 口罩 。回到家 后 一定 要及 时洗脸 、洗 手 、 漱 口。 最好用棉签蘸点 自来水或生理盐水清洗鼻腔。 普 通 口罩 的 阻挡 效 果并 不 好 ， 医用 Ｎ ５口罩 ， 阻 挡 而 ９ 在 比如煤尘 、 水泥尘 、 酸雾等可吸人颗粒物的过滤效果 是值得肯定 的。
除此 之 外 ， 家 呼 吁 ， 关 部 门应 提早 制订 空气 专 相
少开车， 堵车就熄火 ， 避免汽车空转。 汽车尾气不 仅危害长时间在道路周边的人 ，也危害司机本身 ， 特 别是长时间堵 车、 汽油得不到完全燃烧时。所以最好
少开 车 ， 时 间堵 车 时最好 熄 火 ， 量 少 开窗 。 长 尽
严禁近郊私 自焚烧垃圾和枯草败叶。 自焚烧是 私
很多农户和企业处理垃圾最便捷的方式。 但私 自焚烧 所产生 的二嗯英 、 烟尘颗粒等有毒 物质 ， 会使周 边的
２ 公式 之惑 （ １ｍｍ ×１ｍｉ 规 格计 数板 为例 ） 以 ｌ ｌ
４ 加 样 之 惑
每种 规 格 的血 球 计 数板 的计 数 室通 常 与又 有 两 种 规 格 ， 种 是 ２ ￣ ６型 ， 大方 格 中含 ２ 一 ５１ 即 ５个 中格 ， 每 个 中格 又分 为 １ 小方 格 ， ６个 因此 每个 大 方格 （ 数 计 室） 中含有 ２￣ ６个 小方 格 ； 一种 为 １ｘ ５型 ， ５１ 另 ６２ 即大
血球计数板的使用及相关问题的分析
血球计数板的使用及相关问题的分析在高中阶段的学习中，血球计数板被用来统计酵母菌种群数量的工具。
血球计数板是一种常用的微生物细胞计数工具，也是中学生需要掌握的实验技能之一。
现就血球计数板的使用及相关问题作一些探讨。
1血球计数板的结构血球计数板是一块比普通载玻片大而厚的特制玻璃片。
中间有四条漕沟，其间形成三个平台，中央的平台比两边的稍低，加血盖片以后，中央的平台比两边平台低0.1毫米，中央平台的中部被一小漕沟分隔成上下两半，每半边各刻有一个方格网，每个方格网又被分成九大格，其中间的一大格为计数室。
每个血球计数板有上下两个计数室，一般选择一个计数室计数即可！血球计数板有两种规格。
一种血球计数板的计数室有25个中格，每个中格有16个小格，共400个小格，总容积为0.1mm3；另一种类型的血球计数板的计数室有16个中格，每个中格有25个小格，一样共400个小格，总容积也为0.1mm3。
本文以前一种类型的血球计数板为例进行分析。
2 血球计数板的原理通过对一定数量的小格（中格）计数，根据相应小格（中格）所占的体积，可以推算出单位体积的溶液中微生物细胞的密度或总数。
实验过程中，一般对计数室四角上的四个中方格以及正中间的一个中方格进行统计；对于压线的，采取数上不数下，数左不数右的原则。
将五个中格中微生物细胞之和扩大5倍即为一个计数室中微生物细胞的总数。
而一个计数室的总容积为0.1mm3，由此即可推算出单位体积或溶液中微生物细胞的密度或总数。
3 血球计数板使用过程中相关问题的分析和讨论3.1 溶液中微生物细胞总数的推算假设五个中格中微生物细胞之和为n，则：一个计数室中微生物细胞的总数25/5 * n ＝5n，而其溶液体积为0.1mm3，1ml溶液体积为1000mm3。
由此推出：1ml溶液中微生物细胞的总数即为：5n * 10 * 1000＝50000n3.2 计数时，取样的五个中方格是否存在边缘效应，与样方法取样原则相矛盾？分析：计数室是位于方格网中九大格的中间的一大格，是计数板上最中央的区域了，当然也就避免了边缘效应的可能！同时，所取的五中格，犹如常用的五点取样法一样，并没有掺杂实验者本身的主观意愿，与随机取样的原则不矛盾。
血球计数板计数误差的来源及解决方案——自动化计数
血球计数板计数误差的来源及解决方案——自动化计数引言血球计数板一直是实验室细胞计数的金牌标准。
自从18世纪在法国第一次被用于分析病人的血液样本，血球计数板在过去几百年中已经得到一系列的重大发展，相比以前计数更为精确、使用更为简单，并最终形成了今天我们使用的样子。
现在血球计数板计数仍然是所有细胞学研究的一个组成部分，然而其计数存在的问题由于自身固有的设计和使用方法并没有随着时间而消失。
我们在这里将要列出造成血球计数板计数误差的来源，并将讨论自动化计数是如何消除这些问题的。
血球计数板计数误差的来源1. 人工失误(混匀、加样、稀释、计算错误以及人工操作误差)a. 在对5个操作者的观察中，操作错误和随机错误分别占3.12%和7.8%[3]。
b. James M. Ramsey做了一项实验，衡量取样区和稀释系数如何影响计数的准确性。
他测试了3个取样区面积(18, 9和4 mm2)及两个稀释系数(1:100 和1:25)。
取样面积减小时CVs值是升高的，稀释倍数的升高会降低CVs[4]。
c. Bane 发现，当同一个操作者去对同样的两份精液样品计数时，计数结果的差异55%归因于取样和移液问题，45%归因于计数室和细胞计数问题[5]。
Freund和Carol 展开的另外一项实验表明，不同操作者之间的计数差异能高达52%，而同一个操作者的计数差异为20%[5]。
2. 多次计数以保证结果准确性的必要性a. 1907年，John C. DaCosta 声明，为了得到精确的计数结果，很有必要取血液样品中的多滴血液分别进行计数[1].b. Nielsen, Smyth和Greenfield得出结论，为了得到10%, 15%和20%的血球计数板计数准确性, ，必需的样品数分别为7份, 3份和2份,每份样品中分别包含180个, 200个和125个细胞[6]。
c. 1881年，Lyon 和Thoma推测血球计数板的标准误差为,其中n即计数的细胞数目；d. 1907年, William Sealy以“学生”的名义发布了他计数酿啤酒师的酵母的工作，他特地通过实验和数学模型计算了计数误差，公式也为[7,8]。
高中生物血细胞计数板的误差
高中生物血细胞计数板的误差
血细胞计数板的误差主要来源于两方面：操作者误差和仪器本身误差。
操作者误差包括：
1. 要正确取样，取血液的量和混合稀释液的量要严格按照要求使用，否则会影响计数结果。
2. 操作血细胞计数板时需要注意清洁，保证操作环境卫生干净，否则会影响计数结果。
3. 在计数过程中需要专注、耐心，将视线放在特定的细胞计数区域。
仪器本身误差包括：
1. 稀释液的制备过程中出现的误差，比如不同批次的稀释液在浓度不同。
2. 常温下对于不同血细胞的形态影响也可能会对结果造成误差。
总的来说，为了得到正确的结果，需要严格遵循操作规程，保证稀释液配制准确，操作环境优良，并考虑仪器的误差，多次重复测试以得到更准确的结果。
关于血球计数板的使用及注意事项
虽然 不同版 本的教 材推荐 使用 的血球计 数板 的规 格 不 同 （ 教 版 建 议 使 用 ２ ｍ ×２ ｍ × 人 ｍ ｍ
０１ ｍ 方 格 ， 教 版 推 荐 使 用 １ ｍ × １ ｍ × ．ｍ 苏 ｍ ｍ
数字 （ 图 １ ）其 含义 是 ： ＢＫ ２ 见 ａ， Ｘ — ．５为计数 板 的型
４ 肖常 磊 ， 钱扬 义 ． 中学 化 学 实验 教 学 论 ［ ． 京 ： 学 工业 出 Ｍ］北 化
版社 ，０ ８ ８ ２０ ．５—８ ９
分 析总结 。
１ 血 球 计 数 板 的 使 用 原 理
显微镜 直接计 数法 是将少 量待测 样 品的悬浮
参 考文献
１ 艾 约 翰 编 ， 湘 善编 译 ． 外 中学 实 验 ： 学 ［ ． 京 ： 都 师 贺 国 化 Ｍ］北 首 范 大 学 出 版 社 ，９６ １ １９ ．２
实验
Ｃ ｅ ｉ ｌ ｒ ｅ ｅ ｉａ ｏ ｖｒ ｌ ． ｙｕｒ２ Ｃ ｅ ｉ １ ｈｍｅ ｓ ｏ ａ ｆ ｍ ｈ ｍｃ ｆ ｅｅ Ｊ ｌ ｒ ｙ Ｊ ｏ ｒ ． ｈｍ ｃ ． ｍ ａ
Ｅｄｃｔｏ ２ ０ ｕａｉｎ．０ ５，８ （ ）：４ ２４ ５２
３ Ｗｒ ｈ ，Ｓ ｅ ｈ ｌ Ｗ ． Ｆ ｌｅ ， Ｍａｓ ａ ｉ ｔ ｔｐ ｅ ｇ ； ｏｇ ｒ ｒ ｈ Ｒ． Ｒｉｅ Ｍａｔ ｅ Ａ．Ａ ； ｃ， ｔ ｗ ｈ
注 ： 文为 中国化 学 学会 化 学教 育 委 员会 基 本
础教 育“ 一五” 十 重点 课题 “ 型 化 学 实验 的趣 味 微 性 与探 究性研 究” Ｈ ２０ — ０ ６ 成果 。 （ Ｊ０ ８ ０ ０ ）
使用血 球计数 板 进行 准 确 计数 ， 该 实 验成 功 与 是 否 的关键 。 ‘
血球计数板使用注意事项
血球计数板使用注意事项
1.在使用血球计数板之前，必须先进行清洗和消毒，以确保使用时的卫生性和准确性。
2.使用血球计数板时，应严格按照使用说明书中的步骤进行操作，避免出现误差。
3.在进行血细胞计数时，应该注意调整显微镜的放大倍数，以确保检测结果的准确性。
4.使用血球计数板时，应该保持操作环境的清洁和安静，以避免干扰和误操作。
5.在使用血球计数板时，应该避免将其接触到酸、碱或其他腐蚀性物质，避免损坏血球计数板。
6.在使用血球计数板时，应该注意保持手部的干燥和清洁，避免手汗或其他污渍对检测结果产生影响。
7.使用血球计数板时，应该遵守相关的安全操作规程，以确保操作过程的安全性和可靠性。
8.使用血球计数板时，应该注意对其进行维护和保养，以延长其使用寿命并保证检测结果的准确性。
- 1 -。
解惑血球计数板
解惑血球计数板“培养液中酵母菌种群数量的变化”是新课程标准增设的一个探究活动，旨在培养学生建构种群增长的数学模型，并用数学模型解释种群数量变化的能力，具有多方面的意义和价值。
但这项探究历时长，涉及的技术多而复杂，教科书通常仅作简要的提示，因此具体实施过程中需要教师提供或师生共同查阅相关资料，如血球计数板的使用就是学生学习中不容回避的障碍之一。
但不同版本的教科书、大学教材、网络资源及某些中学教辅书籍说法不一，甚至还不乏谬误，易给师生的教与学造成混乱，甚至误导。
笔者通过多方求证和实践，力图就血球计数板使用过程中经常遇到的一些困惑逐一探讨，以期达成共识并解除诸多疑惑。
1 规格之惑关于探究活动中血球计数板的选用，人教版、浙科版教材推荐使用2mm×2mm方格，苏教版推荐使用1mm×1mm方格。
后者在市场上较为常见，多数大学教材也多以此规格为例。
以上数据是指计数板计数平台上大方格的规格，也即计数室的边长。
由于方格网距盖玻片0.1mm，因此，这两种计数室的容积分别为0.4mm3(4×10-4mL)、0.1mm3(1×10-4mL)。
当镜检所选中格并计数完毕后，推算出整个计数室细胞总数，除以计数室容积就可获得所测培养液中酵母菌的种群密度。
2 公式之惑(以1mm×1mm规格计数板为例)每种规格的血球计数板的计数室通常与又有两种规格，一种是25×16型，即大方格中含25个中格，每个中格又分为16个小方格，因此每个大方格(计数室)中含有25×16个小方格；另一种为16×25型，即大方格中含16个中方格，每个中方格又分为25个小方格(2004年版河北少儿版教科书第82页示意图在表示方格划分方面存在失误)，每个大方格(计数室)中含的小方格数为16×25。
显然，尽管规格不同，但两类计数室均含有400个小方格(25×16或16×25)。
库尔特血球仪血细胞错误计数原因探讨
库尔特血球仪血细胞错误计数原因探讨Coulter Gen.sII全自动血细胞分析仪(简称库尔特血球仪)是美国贝克曼库尔特公司生产的全自动五分类血细胞分析仪,笔者根据6 a来使用该机的情况,对一些血细胞计数错误常见原因及解决办法进行探讨,供大家参考。
1 温度因素血细胞计数最适温度为17~30e,低于17e或高于30e,均对结果有影响。
因此,操作时应控制室温在20e左右。
实验室温度不仅决定了仪器、试剂的温度,而且决定了标本的温度。
当仪器、试剂温度较低时,不仅白细胞本身体积受到影响,而且可能影响溶血剂与白细胞膜的作用,不能有效地使白细胞皱缩和红细胞破坏,使计数和分类出现异常现象。
2 试剂因素2.1 溶血剂通常表现为白细胞突然增高,其原因是由于溶血不充分,导致大量红细胞进入白细胞计数孔,造成计数错误。
这时应立即检查溶血剂及其管路系统,看溶血剂有无,管路是否通畅以及溶血泵机是否正常工作。
通常情况下,溶血剂瓶内有传感器,无溶血剂会报警,除非传感器已损坏;另一种可能是溶血剂质量出现问题,应检查溶血剂是否过期。
2.2 稀释液过滤不严或被污染,导致本底过高,易引起血小板计数增高,此种情况易被发现,因每天都要做本底测试。
此外,更换试剂时要轻拿轻放,按照更换试剂程序进行更换,否则可能会产生气泡,导致血小板计数假性增高。
3 仪器因素3.1 低负压过高或过低当负压管道提供的进样压力不够时,流速慢,通过计数小孔的有效颗粒数减少,从而导致血细胞计数减少。
反之,流速快,导致血细胞计数假性增高。
处理:应经常清洗负压瓶,并把低负压(Low Vacum)调节在5.94~6.06(6.0?0.10)。
3.2 计数小孔由于没有定期保养仪器或者小的血凝块将计数小孔堵塞,导致计数小孔内有污物沉积异常附着,严重者计数小孔被完全堵塞。
计数小孔因有污物附着,会产生大量低值区域干扰信号,导致白细胞计数假性增高,常可见计数白细胞的三个小孔数值异常增高,白细胞计数值显示/*0,报警/clog0处理:烧灼小孔(用功能键F01或F09)或用10%次氯酸钠浸泡计数池并进行清洗。
关于“血球计数板”
人 教 版 高 中生 物模 块 ＝“ 态 与 环境 ” 四章第 三稳 第
间的平台较宽 ， 其中间又被一 短横槽隔为两半 ， 每半 边上 面刻有 １ 个方 格 网 ，方 格 网上刻有 ９个 大方 格 ，
其 中只有 中间 的一个 大方格 为计 数室 ， 供微 生物 计数 用， 这一 大 方格 的 长 和宽 各 为 １ ｍ， 度 为 ０１ ｍ 深 ．ｍｍ， 其体 积 为 ‘１１。 １１１ 计数 室通 常有两 种规格 ， １． １ ３ 一种 是大 方格 内分 为 １ ６中格 ， 一 中格 又 分 为 ２ 格 ； 每 ５小 另一 种是 大 方格 内分 为 ２ ５中格 ，每一 中格 又 分 为 １ ６小 格 。但 是不 管计 数室 是哪一 种构 造 ， 它们都 有一 个共
理 ， 数时 ， 计 如果使 用 １ｘ ５规格 的计 数室 ， 按对 角 ６２ 要 线位 ， 取左上 、 上 、 右 左下 、 下 ， 有 中间位 置 再任 取 右 还
一
物总数 目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总
和 ， 又称 为总菌 计数 法 。 故 １ 血 球计 数板 的构造 血球 计 数板 是 由一块 比普 通载 玻 片厚 的特制 玻 片制成 的 ， 片 中有 ４条下 凹 的槽 ， 玻 构成 ３ 平 台 ， 个 中
。。— —
硬物洗刷 ， 洗后 自行晾干或用 吹风机吹干 ， 或用 ９ ％ ５ 的乙醇 、 无水乙醇 、 丙酮等有机溶剂脱水使其干燥 ， 通 过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物 。 若 不干 净 ， 则必须 重 复清洗 直到 干净 为止 。
细胞 、 细菌等一些微小物体的长度 ， 还有就是计数 ， 如 单位体积细胞的数量。 用血球计数板在显微镜下直接计数 ， 是一种常见
实验—血球计数板的使用
一、血球计数板的使用原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。
血球计数板是常用的计菌器之一。
血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。
方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。
这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。
在血球计数板上，刻有一些符号和数字，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm 为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。
计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。
但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
1．16×25型的计数板将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数。
将每一中格放大，可见25个小格。
计数重复3次，取其平均值。
计数完毕后，依下列公式计算：酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/100 ×400×10000×稀释倍数2．25×16型的计数板中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用。
血液分析仪计数误差的各项因素分析
血 液 分 析 仪 计 数 误 差 的 各 项 因素 分 析
卢淑 兰 王 玉红
河 北省 荣军 医院 （ 河北 保 定 ０ １０ ） ７ ００
【 关键词】 血细胞 分析仪 ； 细胞计数 ； 显微镜检查
近 年来 ， 血球 计 数 仪 已基 本 取 代 了 人 工显 微 镜 计 数 细胞 ， 血
集， 影响其计 数使结 果偏 低 ， 以要 注 意气 温 恒定 ， 温要 在 所 室
１ ５℃ 一 ５℃ 之 间 ， ２ 尤其 是 咋 暖 还寒 时我 国北 部 的 地 区要 注 意 仪
器 室 的保 温 。
２ ２２ ＷＢ ．． Ｃ假性 降低因素
２ ２３ Ｒ Ｃ测定 误 差 ． ． Ｂ
（） １ 包细胞 聚集 ， 如寒 冷所 致 ，７ ３
保 定 市 第二 医院
多 出现 无 报 警 的 Ｐ Ｔ偏 高现 象 ， Ｌ 对仪 器 进 行 清 洗后 ， 数结 果 恢 计
复正 常 。因此 ， 液 分 析仪 一 定 要 定 期校 准 ， 持 进 行 日常 清 洗 血 坚 保养 。
球 计 数仪 具 有 快 速 方 便 重 复 性 好 ， 作 效 率 高 的 优 点 。但 在 使 工 用 血球 仪 的过 程 中 ， 现 了有 些 因 素 和 情 况 可 导 致 仪 器 计 数 结 发 果 有偏 差 ， 常见 的 Ｐ 偏低 或 偏 高 ， 细 胞 计 数 结果 与临 床 不 如 ｕ 血 符 等现 象 ， 就此 情 况 笔 者 在 平 时 的工 作 实 践 一 级 翻 阅 资 料 学 习
医 学 ， 合 ≯中外 医毒。 ｌ萤０ ０年 １！ 第８ 第２期 ＣＩ Ｓ ＡＤ ＯＥ Ｎ ＥＩ Ｌ ＥＥＲＨ 综 ｕ 学研 究 ｌ２ １≯ 誊 ≯ ≯ ｌ ｜ １月 ． 卷 ７ Ｈ Ｅ Ｎ ＲＩ Ｄ Ａ ＳＡＣ ＮＥ Ｆ ＧＭ Ｃ Ｒ
关于“使用血球计数板对酵母菌进行计数”的问题探讨
关于“使用血球计数板对酵母菌进行计数”的问题探讨作者：丁傅来源：《中学生物学》2012年第11期摘要：“培养液中酵母菌种群数量的动态变化”是新课标教材“必修3：稳态与环境”中的学生分组实验，需要学生学会使用血球计数板进行准确计数酵母。
通过结合“培养液中酵母菌种群数量的动态变化”这一实验和有关血球计数板的命题的分析，对血球计数板的计数原理和操作方法中遇到一些问题进行探讨。
关键词：血球计数板生物学实验实验操作中图分类号：G633.91文献标识码：B在人教版高中生物教材中，“探究培养液中酵母菌种群数量变化”只作了基本的原则性指导，对一些操作过程的细节，没有作细化阐述，而这些细节都是实验成功的关键所在。
如何正确使用血球计数板对酵母菌种群数量进行计数，是本实验的重点和难点。
根据中学实验条件，用显微镜直接计数法相对容易，只要指导学生掌握血球计数板的正确使用便可。
但学生对血球计数板结构的认识不够明确，教师也讲解不清晰。
而在近年来的高考题或模拟题中多次出现相关的试题，而且不仅从如何计算酵母的数量的角度来考查学生，还从操作方法或操作过程中出现的一些问题以及处理方法来考查学生。
而教师在遇到这些问题往往让学生记答案，学生对这些问题仍是感到疑惑。
笔者在近年来的教学实践中，将教师和学生在做该实验和相关命题遇到的一些问题，进行了分析探讨。
1 血球计数板的构造和计数原理虽然不同版本的教材推荐使用的血球计数板的规格不同，人教版建议使用2mmx2mmx0.1mm方格，苏教版推荐使用1mmx1mmx0.1mm方格，但是血球计数板的使用原理和方法是相同的。
以下以1mmx1mmx0.1mm方格的计数板为例分析结构和计数原理。
每个血球计数板上有两个计数室（图1）。
血球计数板上的符号和数字（图1）的含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板中计数室分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2（计数室边长1mm），分400个小格，每小格面积是1/400mm2（图2），9个大方格中只有中间的有小方格的中央大方格才是计数室。
关于血球计数板的使用及相关问题
个小方格细胞总数 ×400×10000×稀释倍数血球计数板的构造（三）（25×16） 二、血球计数板的使用方法步骤 1．镜检计数室。
在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数； 2．加样品。
将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防止产生气泡，多余培养液可用滤纸吸去； 3．计数。
稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后，先在低倍镜下找到计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。
三、血球计数板的使用注意事项 《培养液中酵母菌种群数量的动态变化》实验是一个历时较长（7天左右）的实验，事前一定要做好周密的计划，定程序、定时间、定人员。
每天采用抽样检测法使用血球计数板对酵母菌进行计数，在计数时应从以下几方面注意。
1．每天同一时间，各组取出本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录，连续观察7天。
2．从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几下，这样使酵母菌分布均匀，防止酵母凝聚沉淀，提高计数的代表性和准确性，求得的培养液中的酵母菌数量误差小。
3．如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当对培养液进行稀释以便于酵母菌的计数。
具体方法是：摇匀试管，取1mL 酵母菌培养液，加入成倍的无菌水稀释，稀释n 倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以稀释倍数。
以每小方格内含有4—5个酵母细胞为宜。
特别是在培养后期的样液需要稀释后计数。
4．活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。
5．对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数，一般可采取“数上线不数下线，数左线不数右线”的原则处理，另两边不计数。
计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数；如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。
高中生物 关于血球计数板的使用及问题讨论
关于血球计数板的使用及问题讨论《培养液中酵母菌种群数量的动态变化》是新课标教材“必修3：稳态与环境”中的学生分组实验，该实验通过探究培养液中酵母菌种群数量的变化，尝试建构种群增长的数学模型并用数学模型解释种群数量的变化，说明制约种群个体数量变化的种群外部环境因素和种群内部因素。
在该实验中，需要测定酵母菌细胞数量。
测定细胞数目的方法有显微镜直接计数法、平板菌落计数法、光电比浊法等，教材采用的是较为简便、快速、直观的显微镜直接计数法。
因此，学会使用血球计数板进行准确计数，是该实验成功与否的关键。
虽然不同版本的教材推荐使用的血球计数板的规格不同，人教版建议使用2mm×2mm×0.1mm方格，苏教版推荐使用1mm×1mm×0.1mm方格，但是血球计数板的使用原理和方法是相同的。
笔者通过近年来对该实验的摸索，对血球计数板的使用和命题方面存在的一些问题进行了分析总结。
一、血球计数板的使用原理显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。
血球计数板是常用的计菌器之一。
血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。
方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。
这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。
在血球计数板上，刻有一些符号和数字(见图一)，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。
关于血球计数板的使用及问题讨论
关于血球计数板的使用及问题讨论一、血球计数板的使用原理血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。
方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。
这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。
在血球计数板上，刻有一些符号和数字(见图一)，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。
计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。
但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
1．16×25型的计数板将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数（见图二）。
将每一中格放大，可见25个小格。
计数重复3次，取其平均值。
计数完毕后，依下列公式计算：酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/ 100 ×400×10000×稀释倍数2．25×16型的计数板中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用（见图三）。
一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。
血球计数板使用注意事项
血球计数板使用注意事项血球计数板是一种用于计算血液中各种细胞数量的工具，被广泛应用于医疗、科研等领域。
但是，使用血球计数板需要注意一些事项，才能保证计数的准确性和科学性。
接下来，我们将介绍使用血球计数板需要注意的事项。
1. 需要使用干净的血球计数板：在使用血球计数板之前，需要对其进行清洁消毒，以避免污染干扰计数。
在清洁完毕之后，需要将其表面擦干，以保证细胞在板面上扩散均匀。
2. 需要准备好合适的显微镜和放大倍数：不同类型的细胞大小和形态各异，需要通过放大倍数的调整来清晰地观察和计数。
因此，在使用血球计数板时，需要准备好适合的显微镜以及对应的放大倍数。
3. 需要选择合适的悬液：在使用血球计数板时，需要选择合适的悬液将血液样本稀释，以便于观察和计数。
血液稀释太多会影响灵敏度，稀释太少会影响计数精度，因此需要掌握合适的稀释比例。
4. 需要保持稳定的计数条件：在进行血球计数的过程中，需要保持计数板和显微镜的稳定，并尽量避免移动计数板和显微镜，以避免干扰计数。
同时需要注意保持计数板和显微镜的温度、湿度等环境条件的稳定。
5. 计数过程需要耐心和细心：在进行血球计数时，需要耐心观察和计数，同时需要注意不要漏计或重计细胞。
要注意手动计数时，要避开周围的红细胞或空白区域。
6. 计数之后需要验算和再次确认：在进行血球计数之后，需要进行验算和再次确认，以确保数据的准确性和可靠性。
如果发现了差异或数据不够精确，需要进行修正或重复计数。
7. 需要注意安全操作：在使用血球计数板时，需要注意安全操作，避免接触污染血液样本和计数板等物品，同时需要注意洗手和消毒，以避免进行血球计数过程中感染对身体的危害。
总之，血球计数板是一种重要的计数工具，使用时需要注意事项，以确保计数的准确性和科学性。
如果能够注意这些事项，就能够更好地利用血球计数板进行研究分析，为医学研究和临床诊断提供有力的支持。
使用血细胞计数板的两个疑问——对浙科版与人教版高中生物教材中同一内容的讨论
使用血细胞计数板的两个疑问——对浙科版与人教版高中生物教材中同一内容的讨论王苗苗;王正庆;杨国锋【期刊名称】《中学生物教学》【年(卷),期】2015(0)6【摘要】1问题王苗苗[浙江省临安中学（311300）]使用血细胞计数板时，浙科版教材中表述“计数总数不少于300个细胞”，但又表述“方格内细胞数目多于300个或数不过来，可以稀释”，这两种表述是否矛盾？邓纯臻[四川省攀枝花市第七高级中学（617005）]人教版高中《生物·必修3·稳态与环境》P．68指出，使用血球计数板时，先盖盖玻片，然后将培养液滴于盖玻片边缘；浙科版高中《生物·必修3·稳态与环境》P．74认为：“用滴管从试管A中取1滴培养液到血球计数板的方格区，盖上盖玻片”，两种操作顺序究竟哪个正确？王正庆[山西省阳泉市第十七中学（045209）]浙科版和人教版描述“使用血球计数板对酵母菌进行计数”时，人教版中要求先在计数室上盖上盖玻片，再滴加菌液；浙科版中要求先将适量菌液滴加在计数平台上，再将盖片从一侧压到计数板上。
【总页数】2页(P66-67)【关键词】生物教材;人教版;血细胞;计数;高中;内容;同一;高级中学【作者】王苗苗;王正庆;杨国锋【作者单位】浙江省临安中学;山西省阳泉市第十七中学;甘肃省礼县实验中学【正文语种】中文【中图分类】G633.91【相关文献】1.研读质疑教材,发展创新思维r——对浙科版高中生物必修教材中有关内容的思考与建议 [J], 杨俊之2.人教版和浙科版高中生物教材习题的比较分析——以人教版和浙科版《必修2·遗传与进化》为例 [J], 朴海樱;汪鸣3.人教版和浙科版高中生物教材中针对DNA和RNA的观察实验的比较 [J], 王梦昕;任山章4.人教版和浙科版高中生物教材中“活动”模块的比较研究 [J], 程江船;5.对浙科版高中生物学新教材中若干问题的讨论 [J], 全刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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血球计数板误区探究
“培养液中酵母菌种群数量的变化”是新课程标准增设的一个探究活动，旨在培养学生建构种群增长的数学模型，并用数学模型解释种群数量变化的能力，具有多方面的意义和价值。
但这项探究历时长，涉及的技术多而复杂，教科书通常仅作简要的提示，因此具体实施过程中需要教师提供或师生共同查阅相关资料，如血球计数板的使用就是学生学习中不容回避的障碍之一。
但不同版本的教科书、大学教材、网络资源及某些中学教辅书籍说法不一，甚至还不乏谬误，易给师生的教与学造成混乱，甚至误导。
笔者通过多方求证和实践，力图就血球计数板使用过程中经常遇到的一些困惑逐一探讨，以期达成共识并解除诸多疑惑。
1 规格之误区
关于探究活动中血球计数板的选用，人教版、浙科版教材推荐使用2mm×2mm方格，苏教版推荐使用1mm×1mm方格。
后者在市场上较为常见，多数大学教材也多以此规格为例。
以上数据是指计数板计数平台上大方格的规格，也即计数室的边长。
由于方格网距盖玻片0.1mm，因此，这两种计数室的容积分别为0.4mm3(4×10-4mL)、0.1mm3(1×
10-4mL)。
当镜检所选中格并计数完毕后，推算出整个计数室细胞总数，除以计数室容积就可获得所测培养液中酵母菌的种群密度。
2 公式之误区(以1mm×1mm规格计数板为例)
每种规格的血球计数板的计数室通常与又有两种规格，一种是
25×16型，即大方格中含25个中格，每个中格又分为16个小方格，
因此每个大方格(计数室)中含有25×16个小方格；另一种为16×25型，即大方格中含16个中方格，每个中方格又分为25个小方格(2004年版河北少儿版教科书第82页示意图在表示方格划分方面存在失误)，每个大方格(计数室)中含的小方格数为16×25。
显然，尽管规格不同，但两类计数室均含有400个小方格(25×16或16×25)。
2.1 用25×16型计数室计数
通常计数四个角及中央的五个中方格(5×16=80个小方格)的细胞数A，计数重复3次，取平均值。
计算公式为：
酵母菌个数/1mL=80个小方格细胞总数/80×400×10000×稀释倍数；
或：=A/5×25×10000×稀释倍数。
2.2 用16×25型计数室计数
通常计数四个角的中方格(4×25=100个小方格)的细胞数A＇，计数重复3次，取平均值。
计算公式为：
酵母菌个数/1mL=100个小方格细胞总数/100×400×10000×稀释倍数；
或：=A＇/4×16×10000×稀释倍数。
公式中，“10000”是指1mL相当于10000个计数室(容积为0.1mm3)的容积。
因为：1mL=1cm3=1000mm3，0.1mm3=1×10-4mL。
“10000"前面的式子表示计数室中细胞总数，可用小方格数400×平均每个小方格中细胞数，也可用计数室所含中方格数×平均每个中方格中细胞数。
综上所述，计算公式可概括为：酵母菌个数/1mL=计数室中酵母菌数
×10000×稀释倍数，其中计数室中酵母菌数因其规格及取样方法而异。
3 边缘效应之误区
对如何处理样方边缘上的个体，人教版教师教学用书必修三2007年版第75页明确描述为：“一般而言，样方顶边、左边及左角处的个体统计在内，其他边缘不作统计。
”浙江科学技术出版社教科书必修三2004年版第72页描述为：“压在方格线上的细胞只计左线和上线上的细胞数”。
河北少儿版第82页也有类似的描述，但还常见到以下不同说法：2010年版教辅资料《世纪金榜》第42页描述为：“对于压在小方格界线上的酵母菌，应只计数相邻两边及其顶角的酵母菌。
”1989年第二版高等学校教材《微生物学实验》第137页则描述为：“位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。
”综上所述，鉴于中学阶段教学实际及操作的可行性和避免混乱，建议采用人教版教学用书的处理约定。
通俗地说即：在计数时遵循“计上不计下，计左不计右”的原则，交点处个体只记一次。
4 加样之误区
因血球计数板在结构及原理上不同于普通的载玻片，其加样及盖盖玻片也有特殊要求，即“先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入，多余的培养液用滤纸吸去”。
(人教版教科书必修三2007年版P68)。
河北少儿版第82页描述为：“从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片下缘滴入一小滴(勿产生气泡)，用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液”。
而浙科版第
72页却描述为：“用滴管从试管中取1滴培养液到血细胞计数板的方格区，盖上盖玻片。
”网络中部分实验视频中也采取了后盖盖玻片的方式。
其实，后盖盖玻片也未尝不可，但它对液滴量的要求较高，盖盖玻片时也易产生气泡。
因此，从操作规范及成功率角度讲，应采用先盖盖玻的方式。
至于加样位置，因计数室靠外侧边缘的平台已作斜面处理(如图1)，这使得在盖玻片(图中最上层虚线框)边缘处与计数室所在平台的距离大于0.1mm，就是为了方便液滴自行吸入，因此，图1中箭头所示部位为最佳加样位置。
待液体充满计数室所在平台，立即撤走吸管，一般不会有过多的液体流入沟槽。
相反地，若从沟槽内沿盖盖玻片下缘滴入，不易操作且易导致液滴流入沟槽。
因此建议采用人教版所述流程操作。
适量加样之后，从侧面观察应如图2所示状态。
但不少教辅资料如2010年版《世纪金榜》第42页及一些介绍其用法的文章常将侧面图表示为图3状态，若如此，则意味着培养液已因过多而溢入沟槽，这是不符合操作规范的。
5 小结
如今，方便快捷的网络为教师提供了大量的信息资源，琳琅满目的教辅资料也为教学提供了必要的帮助，但面对这些丰富但又良莠不齐的教学资源，教师应当增强自身的责任意识，仔细甄别、科学推敲、细心筛选，努力为学生提供准确的信息，切实承担起释其疑解其误区之重任。