MicroRNA与异烟肼所致小鼠抗结核药物性肝损伤关系的研究

实验组（70只）予以INH（180mg/kg）灌胃处理，实验组分别在给药后的0.25、0.75、 1.5、6、12、18、24h和对照组24h留取10只小鼠的血清和肝组织标本。 （2）实验方法： HE染色法，光学显微镜下观察肝组织病理学变化；全自动生化分析仪检测血清ALT 和AST水平； 实时荧光定量PCR检测肝组织中miR-122和miR-155表达。 （ 3） 统计分析： 采用SPSS17.0数据分析，数据以 x s 表示，计量资料采用单因素方差法，相关性分 析采用Pearman相关性分析，P<0.05为差异有统计学意义。 2）慢性毒性实验： （1）实验对象：除实验组每天予以 INH（90 mg/kg）灌胃， 其中实验组分别在连续给药后的 1D、3D、5D、1W、2W、3W、4W 和对照组 4W 留 取小鼠的血清和肝组织标本，其他同急性毒性实验。 （2）实验方法：组织病理学、 ALT 和 AST 检测同急性毒性实验，一般生化分析法检测 CuZnSOD 和 MDA 的水平； 酶联免疫吸附吸附法检测 MT 和 MRPS11 蛋白表达水平； miR-122 表达水平检测同急 性毒性实验。 （3）统计分析：同急性毒性实验。 结果 1）急性毒性实验： （1）肝组织病理学：给药后的 0.25h，可见少量肝细胞肿胀， 随给药时间的变化并逐渐加重。 （2）ALT 和 AST：小鼠血清中 ALT 和 AST 在 0.75h 出现显著性变化，且两者均上升到最大值。 （3）miR-122 和 miR-155：给药后 miR-122 整体呈下降趋势， 0.25h 即开始发生显著性下降为 （56.50±27.77） ％， （P<0.05） ； miR-155 呈上升趋势， 0.75h 开始出现显著性上升（ 11.25±1.43 ）倍。 （ 4 ）相关性分析： miR-122/miR-155 比值与 ALT 和 AST 均呈负相关性（r＝-0.356，r＝-0.246；P<0.05） ， 且与肝组织病理学评分有很好的负相关性（r＝-0.779，P<0.01） 。 2）慢性毒性实验： （1）肝组织病理学：连续给药后的第 3D，显微镜下可见少量 肝细胞肿胀，胞浆稀疏。随着用药时间延长，肝组织损伤程度逐渐加重。 （2 ） ALT 和 AST：两者分别在 2W 和 3W 出现显著性变化。 （3）CuZnSOD 和 MDA：与对照 组相比 5D 发生了显著性变化。 （4）miR-122：给药后整体呈下降趋势，第 3D 表达开 始下降（88.72±5.15）％（P<0.05） 。 （5）MT 和 MRPS11：与对照组相比两者均在第
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作者签名： 签字日期： 年 月 日
导师签名： 签字日期： 年 月 日
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摘
要
摘
目的
要
采用 INH 诱导的小鼠抗结核药物性肝损伤模型，观察 miR-122、miR-155 及
氧化损伤指标的动态变化，初步探讨 miR-122、miR-155 及氧化应激在抗结核药物性 肝损伤发生发展中的作用及关系， 为抗结核药物性肝损伤的早期诊断和发病机制研究 提供实验依据。 方法 1）急性毒性实验： （1）实验对象：昆明小鼠，对照组（10只）给予生理盐水，
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河北联合大学硕士学位论文
3D 出现变化， 且在 2W 分别下降到最小值 （908.68±152.87） pg/ml 和 （9.72±1.31） pg/ml （P<0.01） 。 （6）相关性分析：miR-122 与 CuZnSOD、MDA 和 MT 存在相关性（r＝ 0.240，r＝-0.311，r＝0.415；均 P<0.05)；MRPS11 与 CuZnSOD，MDA 和 MT 存在 相关性（r＝0.313，r＝-0.250，r＝0.366；均 P<0.05） 。 结论 急/慢性毒性实验中， miRNA 与 ADLI 存在相关性， miR-122 低表达和 miR-155
高表达均与 ADLI 发生发展有关，miR-122/miR-155 比值有望成为 ADLI 早期诊断标 志物，且 miR-122 可能通过调节 MRPS11 参与 ADLI 中的氧化应激反应，为 ADLI 发病机制研究提供了新的实验依据。
图 7 幅；表 14 个；参 188 篇。 关键词：抗结核药物性肝损伤；异烟肼；microRNA；microRNA-122；microRNA-155； 氧化应激 分类号： R183.3
Dissertation Submitted to Hebei United University in partial fulfillment of the requirement for the degree of Master of Medicine by Song Lei (Public Health and Preventive Medicine) Supervisor: Professor Feng Fumin
论文评阅人：匿 名 匿 名
论文答辩日期：2014 年 6 月 4 日 关 键
词 ： 抗 结 核 药 物 性 肝 损 伤 ； 异 烟 肼 ； microRNAs ； microRNA-122 ； miccoRNA-155；氧化应激
唐山
河北联合大学
2014 年 6 月
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Involvement of MicroRNA in Isoniazid-induced Liver Injury in Mice
中图分类号：R183.3 U D C：
论文编号：HBLH2014-807 密 级： 公 开
硕 士 学 位 论 文
MicroRNA 与异烟肼所致小鼠抗结核 药物性肝损伤关系的研究
作者姓名：宋 磊 学科名称：公共卫生与预防医学 学习单位：河 授 单位：河北联合大学公共卫生学院 单位： 单位： 答辩委员会主席：张建新 主任医师 学习时间：3 年 研究方向：流行病与卫生统计学 提交日期：2014 年 4 月 29 日
June, 2014
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独
创
性
说
明
本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的 研究工 作及 取得 的研究 成果 。尽我 所知 ，除 了文中 特别 加以 标注 和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成 果，也不 包含 为获 得河 北联合 大学 以外其 他教 育机 构的学 位或 证 书所使 用过 的材 料。与 我一同 工作 的同志 对本 研究 所做的 任何 贡 献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。 论文作者签名： 日 期 ： 2014 年 4 月 27 日
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摘
要
Abstract
Objectives We detect the expression of miR-122/155 and the indexes of oxidative stress
in liver injury in mice, by the administration of isoniazid, a first-line antituberculosis drug. And we analyze the relationship of miR-122/155 and oxidative stress during the development of anti-tuberculosis liver injury (ADLI), which could make a contribution for searching a new biomarker and pathogenesis of early ADLI. Methods 1) Acute toxicity experiment: (1) Animal experiment: Blood and liver tissue samples were collected at 0.25, 0.75, 1.5, 6, 12, 18, and 24 h after administering INH (180mg/kg)(n = 10 per time point/treatment group) and physiological saline (n = 10, control group). Blood and liver tissue samples were collected over time, after administration. (2) Experimental methods: Formalin-fixed samples were embedded with hematoxylin and eosin for microscopic examination. ALT and AST levels were determined using an automatic biochemical analyzer. The expression levels of miR-122/155 were detected by quantitative reverse transcription-PCR. (3) Data analysis: The data are expressed as mean ± SD. Statistical differences between groups were determined using ANOVA. Correlation analysis was performed using Pearman. Differences with P<0.05 were considered statistically significant. 2) Chronic toxicity experiment: (1) Animal experiment: Animal treated the same as acute toxicity experiment. In addition, blood and liver tissue samples were collected at 1D, 3D, 5D, 1W, 2W, 3W, and 4W after administering INH (90mg/kg). (2) Experimental methods: microscopic examination, ALT, AST and miR-122 were determined the same as acute toxicity experiment. CuZnSOD and MDA levels were determined using by biochemical method. The protein of MT and MRPS11 were detected by ELISA. (3) Data analysis: The same to acute. Results 1) Acute toxicity experiment (1) Histopathology: The livers of the INH-treated mice exhibited inflammatory cell infiltration since the 0.25h time point. (2) Serum biochemistry: The serum ALT and AST levels at 0.75h after INH administration was considerably higher than those at the other time points. (3) Changes in tissue miR-122/155: The miR-122 levels began to decline at 0.25h (56.50±27.77)% (P<0.05). The miR-155 levels began to decline at 0.75h (11.25±1.43)fold (P<0.05). (4) Correlations of biochemistry change: The best correlation coefficient of pathological score and ratio of