AYL-S7-344 呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程3.0
呼吸道标本细菌学检验
呼吸道标本细菌学检验标准操作程序1.检验目的规范呼吸道标本细菌学检验操作规程，确保检验结果准确可靠。
2.适用范围呼吸道标本培养和涂片检查。
3.标本采集与运送3.1 采集时间以晨痰为好。
3.2 采集方法3.2.1 自然咳痰法用清水反复漱口后从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内。
3.2.2 气管镜下采集法在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。
3.2.3 气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。
3.2.4 呼吸机采集法使用呼吸机的病人，可利用呼吸机吸取深部痰入专用采集器内送检。
3.2.5 为了明确扁桃体炎、会厌炎、鼻咽部化脓性感染的病原体，可以采集拭子送检。
首先拭子用无菌生理盐水沾湿，然后用力在感染部位擦拭，采集标本与无菌管送检。
3.3 标本运送3.3.1 采集标本后立即送到实验室，放置时间不应超过2h。
3.3.2 延迟送检或待处理标本应置于4℃冰箱保存（疑为肺炎双球菌、流感嗜血杆菌等苛氧菌感染除外），以免杂菌生长，但必须在24h内处理。
3.3.3 对可疑烈性呼吸道传染病的患者检验标本，在采集、运送及保存过程中必须注意生物安全防护。
4.检验步骤4.1接种：用无菌拭子蘸取脓性部分，接种于血平板和巧克力平板第一区，再用一次性接种环分区划线接种。
4.2 涂片在接种的同时进行涂片。
用铅笔在磨砂部位编号，每片只涂一份标本。
4.3 培养：血平板、巧克力平板置35℃二氧化碳培养箱培养18-48h。
4.4 涂片染色镜检：涂片革兰染色，自然干燥后镜检。
先用低倍镜浏览整片，计数平均每个低倍视野WBC、上皮细胞的数量。
标本合格与否参考表1，合格标本再用油镜观察，主要观察片中主要细菌类型、WBC内吞噬什么细菌等，以作为看板时决定什么细菌要做的依据。
表1 痰液标本分级4.5 培养结果观察4.5.1 口咽部正常寄生的需氧菌主要是腐生的奈瑟菌、草绿色链球菌，4.5.2 有明确意义的病原菌： A群溶血性链球菌(咽炎)、流感嗜血杆菌（b型5y以下儿童急性会厌炎、急性支气管炎）、肺炎链球菌（急性支气管炎常继发于病毒感染、大叶性肺炎）、百日咳鲍特菌（咳嗽、支气管扩张）、金黄色葡萄球菌（肺炎）、军团菌（肺炎）、白喉棒状杆菌。
ayl-s7-130标准菌株的保存与复苏标准操作规程-3.0
作业指导书文件编号: AYL-S7-130 版本:3.0 页码: 第1页共5页编写者：沈继录审核者：批准人：生效日期：2012.1.1文件发放范围：微生物组文件年度审核审核者：审核者：审核者：审核者：日期：日期：日期：日期：标准菌株的保存与复苏标准操作规程1.目的1.1.标准菌株是微生物实验室室内质量的重要物质基础。
选择合适的保存方法与复苏步骤，能使标准菌株的形态、染色、生化及血清学特性尽量减少变异。
2.适用范围2.1.微生物实验室所有ATCC标准菌株及卫生部临检中心的室间质控菌株，以下简称标准菌株。
3.试验器材3.1.无菌接种针或环3.2.—80℃低温冰箱4.试剂4.1.40%甘油肉汤/Microbank4.2.血平板或巧克力平板4.3.营养斜面5.标准菌株的复苏5.1.标准菌株送到实验室后，应严格按照说明书操作，复苏标准菌株。
6.标准菌株的保存6.1.将标准菌株以无菌技术接种于10支Microbank中，置≤-80℃低温冰箱保存。
6.2.每年取出1支Microbank菌种管，取1-2粒小珠接种于相应平板上，培养18～24h使其获得纯菌落。
使用过的Microbank菌种管仍放回-80℃低温冰箱保存。
Microbank菌种管内有20-25颗小珠可供应1年的标准菌株使用。
6.3.再挑取纯菌落接种于5-10支40%甘油肉汤，置于—80℃低温冰箱保存，用以当月的质控菌株传代。
7.标准菌株的使用7.1.每月使用时，须从-80℃低温冰箱中取出供每月使用的甘油肉汤，接种于相应平板上，孵育培养获得作业指导书文件编号: AYL-S7-130 版本:3.0 页码: 第2页共5页纯菌落。
7.2.平板上生长的纯菌落可以在2-8℃冰箱中保存一个月用以当月的质控菌株传代。
7.3.肠杆菌科的标准菌株，可以再挑出单个菌落接种于营养斜面上，孵育培养后，可以在2-8℃冰箱中保存三个月。
8.标准菌株的质控8.1.观察传代复苏后标准菌株菌落形态及培养基特征，看是否与预期菌株相符。
20呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程
规范呼吸道标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2
呼吸道标本培养和涂片检查。
3
3.1
3.2
3.2.1
3.2.2
3.2.3
3.2.4
3.2.5
3.3
3.3.1
3.3.2
3.3.3
3.3.4
3.3.5
3.3.6
3.4
采集标本后立即送到实验室，放置时间不应超过2小时。
4
4.1
4.2
4.3
5
参见《质量管理程序》。
6.3
6.3.1
6.3.2
6.3.3
6.3.4
6.3.5
7
8
8.1
8.2
9
9.1
9.2
9.3
10
上呼吸道标本培养生长的细菌是否与疾病有关，需各方面综合分析，排除常居菌后，才可作出正确的判断。下呼吸道的痰液应是无细菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球菌）.若从病人痰标本中查见致病菌或条件致病菌，提示可能有呼吸道细菌感染。肺炎链球菌是肺炎最常见的致病菌.儿童细菌性肺炎多为流感嗜血杆菌所致.医院获得性肺炎的常见病原菌是革兰阴性杆菌，主要有肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、沙雷菌属和肠杆菌属细菌等。肺结核由结核分枝杆菌引起的。嗜肺军团菌引起军团菌病，肺部厌氧感染大多是脆弱类杆菌及梭杆菌属的细菌等。疑典型形态细菌所致肺部感染时，常先做痰液和支气管分泌物涂片、染色镜检（如肺部结核痰液徐片、抗酸染色，镜检找抗酸染色阳性结核分枝杆菌），有助于细菌培养检查。
11
如查出抗酸杆菌阳性，则应及时向临床报告并作出传染病报告。
编写：审核：批准：
日期：年月日
6
AYL-S7-343 脓及伤口标本细菌学检验标准操作规程3.0
准操作规程1.目的规范脓及伤口标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2．适用范围脓液培养或涂片检查。
3.标本3.1 标本类型脓液。
3.2 标本采集。
3.2.1 开放性脓肿和脓性分泌物用无菌盐水或75％酒精擦去表面渗出物，用拭子深入溃疡深处采集2支拭子，一支为涂片检查用，1支作培养用。
3.2.2 大面积烧伤的创面分泌物用灭菌棉拭取多部位创面的脓液或分泌物，置灭菌试管内（注明采集部位）送检。
3.2.3 封闭性脓肿消毒局部皮肤或粘膜表面后，用注射器抽取，将脓液注入多功能培养瓶或无菌试管内送检。
疑为厌氧菌感染时，应作床边接种或置厌氧运送培养基内送检。
3.3 标本拒收标准。
3.3.1 标本标识与化验申请单不符。
3.3.2 标本不是无菌留取。
3.3.3 送标本的时间在采集标本后超过2小时。
4.试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3％过氧化氢、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。
4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性细菌药敏卡（GNS）、革兰阳性细菌鉴定卡(GPI)、革兰阳性细菌药敏卡(GPS)、真菌鉴定卡(YBC)、药敏纸片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。
5.细菌鉴定和药敏质控参见《质量管理程序》。
6.检验步骤接受标本后。
立即对标本进行编号、登记。
6.1 涂片检查革兰染色镜检，报告“查见革兰X性菌，形似XX菌”或报告“未查见细菌”。
6.2培养6.2.1 一般细菌培养标本接种血琼脂平板和麦康凯琼脂平板(或EMB、中国蓝琼脂平脓及伤口标本细菌学检验标准操作规程板)，35℃培养18～24小时后，根据菌落特性和形态染色，作出初步判断，再按各类细菌的生物学特性进行鉴定。
6.2.2厌氧菌培养取脓液标本接种厌氧血琼脂平板及其他厌氧选择平板，置于厌氧环境培养，根据生长情况及涂片染色结果，按厌氧菌生物学特性进行鉴定。
呼吸道标本的处理分解
培养结果结合涂片判断定置菌或致病菌
3、前列腺液标本别离出凝固酶阴性葡萄球 菌或革兰阳性小杆菌，涂片未见到，可能 是污染细菌，应建议重送标本。
4、当涂片中见到的细菌，并由细菌吞嗜现 象存在，在培养时别离出该细菌可推测为 致病菌。〔涂片应注明细菌是细胞内或细 胞外〕
第二十七页，共九十一页。
培养结果结合涂片判断定置菌或致病菌
5、涂片报告的日期和培养报告日期要对应 便于医生判别结果的参考价值。
6、并每一视野可见到>20个/油镜或该菌占 所见到细菌的50%，可推测是标本中的优势 菌。
第二十八页，共九十一页。
第三局部 别离培养标准草案 有了合格的标本是保证培养成功的 重要条件，但如果没有适宜的别离 培养基和培养环境同样不能获得好 的结果，为此制定如下根本条例以 保证致病菌别离成功。
〔5〕小儿采集痰标本：用压舌板刺激咳嗽使肺部和器 官的分泌物喷出，用拭子采取标本送检，如不能立即送 检应种入输送培养基。
第二十页，共九十一页。
厌氧培养标本采集标准条例
1. 痰标本的厌氧培养标本采集：必须用气管 穿刺法获得痰液，从口腔吐出的痰标本不 能用于厌氧培养。
2. 尿标本的厌氧培养标本采集：耻骨上膀胱 穿刺获得尿标本可用于厌氧菌培养
内容简介
上呼吸道标本标准操作程序〔SOP〕 下呼吸道标本标准操作程序〔SOP〕 痰标本的标准化操作〔草案〕
第二页，共九十一页。
上呼吸道标本处理程序
大局部步骤需要在生物平安柜内接种
细菌性咽炎的实验室诊断
原理
大多数上呼吸道感染是由病毒引起的。细菌性咽炎经常是 由化脓性链球菌引起。但重度的会厌炎和喉气管炎那么是 例外，其一般是由于b型流感嗜血杆菌引起。
1、尿培养别离出3种以上的细菌，或别离 出凝固酶阴性葡萄球菌、革兰阳性棒状杆 菌等非定义为致病菌的细菌，涂片未见到， 应在报告中提示可能是污染细菌建议结合 临床表现考虑结果的参考价值。
AYL-S7-34血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程3.0
编写者：沈继录审核者：批准人：生效日期:２0１２、1、1文件发放范围：微生物组文件年度审核审核者：审核者: 审核者: 审核者：日期：日期: 日期：日期:1.目得规范血液及骨髓标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2。
适用范围血液及骨髓。
3。
标本3、1 标本类型血液及骨髓。
3、２标本采集3.2.1 采血时间抗菌药物治疗前,发热初期或高峰时抽血。
3．2。
2 采血频率对怀疑菌血症得成年病人,推荐同时在不同部位采集２～3套(每套包括一瓶需氧瓶、一瓶厌氧瓶或者两套需氧瓶),对感染性心内膜炎与真菌血症则应多次采集；婴幼儿病人,推荐同时在不同部位采集2套，可不做厌氧培养。
3。
2。
3 采血量以培养基得1／10为宜,成人一次采血5～10 ｍｌ,婴幼儿为１～2 ｍ1.３。
2。
4 骨髓标本用骨髓穿刺针从髂骨采集.3、3标本拒收标准3 3.１血培养瓶破裂或有明显污染.３ 3 2 培养瓶标识与化验申请单不符。
3。
３ 3用过期得培养瓶采集标本、采血量不足等。
3.3.4 对于不合格标本，应及时通知采集人员重新留取标本。
３、4 标本保存采集标本后立即送到实验室,不能及时送检可置室温,切勿放冰箱.冬季血培养瓶在送检过程中应采取一定得保暖措施。
4。
试剂、仪器4、1 革兰染液、氧化酶试剂、3%过氧化氢、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等.４、2 BACＴ/Aｌerｔ 3D或BACTEC 900０全自动血培养系统、VＩTEK鉴定系统。
成人需氧血培养瓶、厌氧血培养瓶、儿童血培养瓶、革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药敏卡(（ＧNS)、革兰阳性菌鉴定卡（GＰＩ)、革兰阳性菌药敏卡（GPS)、真菌鉴定卡(YBC）、药敏纸片、ATＢ板条等。
4、3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、C02培养箱等。
4、4 试剂得有效期与使用参照试剂说明书。
５.细菌鉴定与药敏质控参见《质量管理程序》。
6。
检验步骤接收标本后,立即对标本进行编号、登记。
AYL-S7-336 脑脊液标本细菌学检验标准操作3.0
脑脊液标本细菌学检验标准操作1.目的规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2.适用范围脑脊液培养。
3.标本3.1标本类型脑脊液。
3.2标本采集3.2.1可发生在不同年龄。
成人一般表现为发热、头疼、恶心、呕吐、颈项强直和反射增强；婴儿和新生儿为不明确和无特异性，对婴儿不明原因的发热，应怀疑为脑膜炎。
这种情况下建议检查脑脊液。
3.2.2 标本采集由临床医生以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液3-5ml，盛于无菌容器中送检。
脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶，迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易死亡。
因此，脑脊液无论涂片或培养，必须于采集后立即送检。
3.3 标本拒收标准3.3.1 标本标识与化验申请单不符。
3.3.2 标本未用无菌试管留取。
4. 试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、中国蓝平板、相关生化试剂等。
4.2 VITEK鉴定系统；GPI、GNI、NFC、YBC、ANI、BAC、GNS-120、GPS-106均购于法国生物梅里埃。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。
5.细菌鉴定和药敏质控参见《质量管理程序》。
6. 检验步骤接受标本后，立即对标本进行编号、登记。
6.1 肉眼观察和涂片检菌6.1.1 首先观察脑脊液的外观，除结合性脑膜炎、无菌性脑膜炎外，其他细菌引起的化脓性脑膜炎，脑脊液多呈明显混浊，经抗生素治疗后，亦可不混浊或轻度混浊。
外观浑浊或脓样脑脊液可直接涂片，无色、透明的脑脊液，应300r/min离心10-15分钟后取沉淀物涂片、革兰染色、镜检。
根据染色及形态特征，常可初步提示细菌的种类。
6.1.2 革兰染色：混浊或脓性脑脊液可直接涂片，染色镜检，无色透明的脑脊液，应以3000r/min 离心，10~15min,取沉淀物涂片，行革兰染色，镜检.。
根据染色及细菌形态特征，常可初步提示感染细菌的种类。
如：（1）检到革兰阴性、凹面相对的球菌，而大小着色深浅常不一致。
AYL-S7-350 霍乱弧菌检验标准操作规程3.0
霍乱弧菌检验标准操作规程1．概述霍乱弧菌可分为古典生物型和EL-Tor生物型；根据菌体抗原(即O抗原)又可分为155个血清群，其中O1血清群和O139血清群能引起霍乱的发病和流行，是霍乱的病原菌。
2．标本类型粪便标本。
3．鉴定3.1 形态与染色革兰阴性，菌体弯曲呈弧形或逗点状。
3.2 培养特性在TCBS琼脂平板上呈黄色的菌落。
在双氢链霉素洗衣粉琼脂平板上形成中心呈灰褐色的菌落。
3.3 生化反应氧化酶试验阳性；发酵葡萄糖、蔗糖、甘露醇，不发酵乳糖和L阿拉伯糖；动力、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、霍乱红、硝酸盐还原和黏丝试验均阳性；精氨酸双水解酶试验阴性。
3.4 鉴别要点3.4.1 与气单胞菌属、邻单胞菌属的鉴别见表5—41。
表5—41弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属鉴别的关键性试验试验霍乱弧菌拟态弧菌气单胞菌属邻单胞菌属O/129敏感试验（150ug）S R S氨苄西林（10ug）S R R黏丝试验+ - -肌醇- - +精氨酸- + +注：“+”为90％以上菌株阳性，“一”为90％以上菌株阴性，“s”为敏感，“R”为耐药3.4.2 确诊O1群霍乱弧菌必须具备的条件①涂片为革兰阴性弧菌或杆菌。
②TCBS等选择培养基上典型的菌落特征。
③动力试验阳性，符合生化特性。
④O1群霍乱弧菌诊断血清凝集试验阳性。
3.5操作步骤3 5.1 在碱性蛋白胨水(pH 8.6)中，37℃培养6～8小时后转种TCBS平板。
3.5.2 玻片凝集试验从TCBS琼脂平板或双氢链霉素洗衣粉琼脂平板上挑取可疑菌落，与霍乱多价诊断血清做玻片凝集试验，以生理盐水做阴性对照，诊断血清凝集、生理盐水不凝者为阳性。
做初步鉴定试验后，将此高度怀疑菌送疾病预防控制中心(CDC)做最后鉴定。
4．药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100一$20最新版本文件。
5．质量控制见《质量管理程序》。
6．检验结果解释与分析初次分离时采用pH 8.6的碱性蛋白胨水增菌，6～8小时，液体呈均匀混浊，表面群菌其O抗原中的ABC因子，又可进一步将其分为小川(AB)、稻叶(AC)形成菌膜。
呼吸道感染细菌学检验操作规范
细菌培养
01
02
03
04
培养基选择
根据不同病原体选择适宜的培 养基，如血琼脂、巧克力琼脂 等。
标本采集
采集呼吸道分泌物、痰液、肺 泡灌洗液等作为培养样本。
培养条件
菌落鉴别
在恒温（35-37℃）条件下进行 培养，观察菌落生长情况。
根据菌落的形态、染色特性、 生化反应等指标鉴别细菌种类 。
药敏试验
分子生物学检测
细菌学快速检测
采用自动化仪器和试剂盒进行细菌学 快速检测，如免疫分析仪、干式生化 分析仪等。
利用PCR等分子生物学技术检测病原 体核酸，具有快速、敏感的优点。
05
结果报告与解读
结果报告的格式与内容
检验结果
包括细菌培养、药敏试验等结果， 应详细记录。
检验报告单
应包括患者基本信息、送检标本类 型、检验项目、检验结果及结论等。
事故应急处理
制定实验室事故应急处理预案 ，并定期进行演练，确保在发 生事故时能够迅速、有效地应
对。
THANK YOU
感谢聆听
检验报告时间
应在规定时间内出具检验报告，并 注明报告时间。
结果解读与临床意义
解读依据
根据细菌培养和药敏试验结果， 结合患者临床表现和实验室检查 指标进行综合分析。
临床意义
为医生提供细菌种类、耐药性及 感染部位等信息，指导临床用药 和治疗方案制定。
结果报告的注意事项
准确性
确保检验结果的准确性，避免误差和误报。
样本稀释
将采集的样本进行稀释， 以便后续的细菌分离和培 养。
样本预处理
对稀释后的样本进行预处 理，如添加抗菌药物，以 抑制其他微生物的生长。
下呼吸道感染细菌学检验操作规范
培养基选择问题
总结词
培养基是细菌生长的媒介，不同的培养基适合不同的细菌，因此选择适合的培养 基是关键。
详细描述
针对下呼吸道感染的常见病原菌，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌等 ，应选择含有适量的血液、血清、抗生素和碳源的培养基。同时，培养基的pH 值和渗透压也要适宜，以确保细菌的正常生长。
药敏试验误差
增菌
在适当的培养基中对样本 进行增菌，以促进细菌的 生长。
分离纯化
将增菌后的样本进行分离 纯化，得到单一菌落。
细菌培养
选择培养基
根据不同的细菌选择适宜的培养基，以保证细菌 的生长和分离。
培养条件
设定适宜的温度和湿度等培养条件，保证细菌的 正常生长。
观察记录
对培养的细菌进行观察和记录，包括菌落形态、 染色特性等。
PART 02
下呼吸道感染细菌学检验 操作流程
样本采集
01
02
03
采集时间
在抗生素使用前采集下呼 吸道感染的样本，以避免 抗生素对细菌的影响。
采集方法
根据感染部位选择合适的 采集方法，如痰液、支气 管肺泡灌洗液等。
注意事项
采集过程中要严格遵守无 菌操作原则，避免交叉感 染。
样本处理
预处理
去除样本中的杂质，如痰 液中的唾液、食物残渣等 。
药敏试验的方法包括纸片法、稀 释法和自动化仪器法等，应根据
具体情况选择合适的方法。
药敏试验结果应准确、可靠，为 临床医生提供准确的抗生素选择
依据。
结果报告要求
结果报告应及时、准确，以便临床医 生及时了解患者病情和治疗情况。
结果报告应包括细菌种类、药敏试验 结果等信息，以便临床医生选择合适 的抗生素进行治疗。
五呼吸系统标本微生物检验
支气管肺泡灌洗液
应尽快送检，室温下不超过2小时； 如不能及时送检，应4℃保存，不超 过24小时。
呼吸系统感染常见微生物
01
02
03
细菌
肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、 金黄色葡萄球菌、卡他莫拉菌
等。
病毒
呼吸道合胞病毒、流感病毒、 副流感病毒、腺病毒等。
真菌
白色念珠菌、曲霉菌等。
04
其他微生物
支原体、衣原体等。
定期演练和培训
定期组织实验人员进行应急演练和培训，提高应对生物安全事件的 能力和水平。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
肺炎链球菌检验
通过血平板培养、Optochin敏感试验和胆汁溶菌试验等方法进行 鉴定。
流感嗜血杆菌检验
采用巧克力平板进行分离培养，并通过卫星现象、X因子和V因子依赖 试验等方法进行鉴定。
05 微生物检验结果解读与临 床意义
检验结果解读原则及注意事项
遵循微生物学原则
在解读检验结果时，需遵循微生物学的基本原则，包括微生物的 种类、数量、生长特性等。
高度的敏感性和特异性。
真菌学检验
1 2 3
直接镜检
采集患者的呼吸道分泌物或组织样本，在显微镜 下直接观察真菌的形态和结构特征，以初步判断 真菌的种类。
培养法
将样本接种于适当的培养基上，进行真菌培养， 观察真菌的生长情况和菌落特征，以鉴定真菌种 类。
血清学检测
利用特异性抗体与真菌抗原的结合反应，进行血 清学检测，如凝集试验、沉淀试验等，以辅助诊 断真菌感染。
病毒
如流感病毒、呼吸道合胞病毒等，病毒感染一般采取对症治疗和支持治疗。
真菌
如白色念珠菌、曲霉菌等，真菌感染多见于免疫力低下患者，治疗需考虑抗真菌药物。
全国临床检验操作规程(第4版) 第四章细菌检验 页码
全国临床检验操作规程(第4版) 第四章细菌检验页码全国临床检验操作规程（第4版）中的第四章为细菌检验。
细菌检验是临床检验中的重要内容之一，可以帮助医生确定感染病原体的种类、数量和药物敏感性，对于临床诊断和治疗具有重要意义。
本章节将介绍细菌检验的操作规程和相关要点。
细菌检验的操作规程主要包括标本采集、细菌培养与鉴定、药敏试验等内容。
首先，标本采集是细菌检验的重要环节之一。
常见的细菌感染标本包括血液、尿液、粪便、呼吸道分泌物等，采集标本时要注意避免污染，并使用无菌材料和技术进行操作。
细菌培养与鉴定是细菌检验的核心内容。
在合适的培养基上培养标本，通过观察菌落形态、颜色、大小等特征，以及鉴定菌株的生物学和生化特性，来确定感染病原体的种类。
在培养过程中，要注意严格控制培养条件，避免细菌的交叉污染。
药敏试验是细菌检验的另一重要环节。
通过在培养基上加入不同的抗生素，观察并记录细菌的生长情况，以判断细菌对不同抗生素的敏感性。
药敏试验可以指导医生选择合适的抗生素治疗感染，并预测抗生素的疗效。
在细菌检验中，操作人员要具备丰富的实验技术和专业知识，并遵循操作规程，确保结果的准确性和可靠性。
同时，要根据实际工作情况，选择合适的检测方法和设备，保证检验的高效性和可行性。
除了以上内容，全国临床检验操作规程（第4版）第四章还介绍了细菌检验质量控制、细菌检验结果的解读与报告等内容。
其中，质量控制是确保细菌检验结果准确可靠的关键环节。
操作人员要熟悉质控方法和标准，并进行规范的质控操作，以确保检验结果的准确性和可比性。
综上所述，全国临床检验操作规程（第4版）第四章详细介绍了细菌检验的操作规程和相关要点。
细菌检验在临床诊断和治疗中具有重要意义，通过细菌检验可以确定感染病原体的种类、数量和药物敏感性，指导医生制定治疗方案。
操作人员应熟悉操作规程，遵循标准操作程序，并进行质量控制，以确保检验结果的准确性和可靠性。
临床微生物学下呼吸道感染细菌学检验操作规范ppt课件
ppt课件.
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三、实验室检查
❖ （一）肉眼观察 观察痰液的颜色、粘度、有无血 丝和是否呈脓性，如见有颗粒存在，则应注意可能 与放线菌属及奴卡菌属感染有关。 （二）显微镜检查 下呼吸道细菌学检验的标本均 需涂片革兰染色进行细胞学和细菌学显微镜检查， 其目的是判别送检标本是否适合做细菌培养，并初 步判定有否病原菌、病原菌的数量及其类别，有助 于初步报告、选择培养基和对培养结果的综合分析。 推荐判别标本合格的标准见表2
❖2. 咯血 喉以下的呼吸道出血为咯血，包括泡沫血痰、 鲜血和痰中带血等
❖3. 呼吸困难 呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛
❖4. 发热伴白细胞增高尤其是中性粒细胞或CRP明显 增高
❖5. 胸部影像学检查提示有感染可能
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二、标本采集与验收
❖ 对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭 疽、肺鼠疫等）的患者采集检验标本时必须 注意生物安全防护。痰液是临床微生物学检 验最常见的标本，但不是下呼吸道感染的最 佳标本。
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2.最终结果
❖ 报告应包括送检标本肉眼观察的结果、涂片 革兰染色白细胞和鳞状上皮细胞计数、细菌 学镜检的描述性报告、分离致病菌的鉴定结 果、药敏试验结果。
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❖ (1)痰标本涂片革兰染色后白细胞和鳞状上皮细胞计数、 细菌学镜检未发现有临床诊断意义结果（可不用初步报 告）：细菌分离培养为正常菌群时，最终检验结果应报 告“正常菌群”生长。若无菌生长应报告经48小时培养 无细菌生长，有意义的培养基(巧克力平板、血平板)， 再置2天仍无生长可弃之。但对偶然分离的“优势可疑 病原菌”，还需做药敏试验，并及时与临床联系，最终 检验报告应包括标本肉眼观察结果，涂片革兰染色白细 胞和鳞状上皮细胞计数及细菌学镜检的描述性报告，细 菌鉴定的规范细菌名称和药敏试验结果。但应提示所报 告的结果请结合临床进行分析。
呼吸道标本细菌学检验标准操作规程
呼吸道标本细菌学检验标准操作规程1目的规范呼吸道标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2适用范围呼吸道标本培养和涂片检查。
3标本3.1标本类型：痰、咽拭子、支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子、肺穿刺等。
3.2标本采集3.2.1采集时间：以晨痰为好；支气管扩张症病人，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰标本。
3.2.2自然咳法：在留取痰之前，用清水反复漱口，应从气管深处出痰，吐入无菌容器内。
3.2.3气管镜下采集法：在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。
3.2.4气管穿刺法：在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。
3.2.5棉拭采集法：用无菌棉拭子轻轻擦拭病人鼻咽部黏膜，留取标本，置无菌试管内送检。
3.3标本拒收标准3.3.1申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。
3.3.2痰标本呈水样或唾液样。
3.3.3痰涂片白细胞<10/低倍视野，上皮细胞>25/低倍视野。
3.3.4标本容器溢漏，无瓶盖。
3.3.5痰标本留取放置时间太长，超过2小时。
3.3.6未用指定的无菌容器作细菌培养。
3.4标本保存采集标本后立即送到实验室，放置时间不超过2小时。
4试剂、仪器4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。
4.2VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡、革兰阴性菌药敏卡、革兰阳性菌鉴定卡、革兰阳性菌药敏卡、药敏纸片等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
培养箱4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2等。
5细菌鉴定和药敏监控参见《质量管理程序》。
6检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6.1肉眼观察：包括颜色、黏度、有无血丝或脓。
6.2涂片检查：可以确定标本是否适合做细菌培养，直接涂片镜检，依据低倍镜下观察白细胞和上皮细胞数目多少来评定。
并可初步判定是否有病原菌存在。
痰标本镜下分类分级白细胞（个）上皮细胞（个）A>25<10B>25<25C<10>25注：A、B两种情况的痰标本适合做培养，C不合格，应重新留标本。
呼吸道微生物学检验的标准操作程序
呼吸道微生物学检验的标准操作程序1 检验目的做疾病的病原学诊断，查找于疾病有关的病原菌以及了解微生物与疾病的关系，指导临床治疗及预后和流行病学的调查。
2 原理正常人的下呼吸道是无菌的，上呼吸道有正常菌群栖居，上呼吸道栖居群有，a、r链球菌，微球菌，奈瑟菌，嗜血杆菌，表皮葡萄球菌等。
3 标本要求（1）标本类型：痰液等（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置，室温运输并立即送检。
（4）标本拒收状态：非无菌方式采集的标本或未按要求部位采取的标本。
4 容器和添加剂类型均使用灭菌器皿盛放标本5 试剂（1）试剂名称：革兰氏染液、氧化酶试剂、3%触酶、血平板、中国蓝平板、SS平板、柯玛嘉平板、相关生化试剂等。
6仪器设备：（1）接种针、接种环、酒精灯（2）梅里埃ATB药敏鉴定仪（3）显微镜、SPX-150B型生化培养箱、超净工作台、台式离心机、天平7 校准程序(送市计量质量检测研究所校准)8 标本的处理（1）.接种前需做涂片染色，依镜检WBC和鳞状上皮细胞数的比值等情况，判断标本是否合格。
白细胞上皮细胞A >25 <10B >5 <25C >10 <25A、B两种情况的痰适合做培养，C不适合，应重留标本（2）.培养基选择：血平板，巧克力平板，麦康凯或中国蓝平板。
（3）.特殊培养基：真菌培养等。
9 操作步骤呼吸道分泌物肉眼观察培养前处理涂片检查血琼脂平板巧克力平板伊红美蓝/中国蓝或麦康凯必要时可增加一作厌氧培养CO环境下培养需氧培养35℃，18-24h观察菌落和涂片染色镜检各种鉴定试验药物敏感性实验报告10 质量控制：参加我科质量管理小组组织的各项质量控制活动11 患者检验结果的可报告区间11.1 未检出致病菌时应报告“正常菌群生长”。
11.2 检出致病菌时同时，报告正常菌群的情况。
如:草绿色链球菌+，奈瑟菌+，肺炎克雷伯菌2+此报告表明肺炎克雷伯菌在数量上多余正常菌群，诊断为病原菌。
呼吸道标本的细菌学检验
除脑膜炎和淋病奈瑟菌外的其 他奈瑟菌、其他嗜血杆菌 脑 膜炎奈瑟菌
流感嗜血杆菌、百日咳鲍特菌 肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌 铜绿假单胞菌、 脑膜炎奈瑟 菌
流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、 大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、 产气肠杆菌、嗜肺军团菌
报告：
1、发现致病菌，报告：检出XX细菌
2、平板上均为正常菌群生长，无可疑致病菌生 长，报告：未检出致细菌
正常菌群 上呼吸道常见致病菌 下呼吸道常见致病菌
a和γ链球菌、微球菌、表皮葡萄球菌、 四联球菌、白喉以外的棒状杆菌、乳 杆菌 化脓性链球菌、金黄色葡萄球 菌
白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌 白色念 珠菌 化脓性链球菌、金黄色葡萄球 菌
肺炎链球菌 白喉棒状杆菌、结核分 枝杆菌 厌氧菌、放线菌、奴卡菌
吕氏美兰六常见致病菌革兰阳性细菌革兰阴性细菌正常菌群a和链球菌微球菌表皮葡萄球菌四联球菌白喉以外的棒状杆菌乳杆菌化脓性链球菌金黄色葡萄球除脑膜炎和淋病奈瑟菌外的其他奈瑟菌其他嗜血杆菌膜炎奈瑟菌上呼吸道常见致病菌白喉棒状杆菌结核分枝杆菌白色念流感嗜血杆菌百日咳鲍特菌肺炎克雷伯菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌脑膜炎奈瑟下呼吸道常见致病菌肺炎链球菌白喉棒状杆菌结核分枝杆菌厌氧菌放线菌奴卡菌流感嗜血杆菌肺炎克雷伯菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌产气肠杆菌嗜肺军团菌1发现致病菌报告
实验十五 呼吸道标 本的细菌学检验
一、目的要求
1.掌握呼吸道标本的细菌学检验程序和方法。 2.掌握痰标本的采集方法。 3.掌握抗酸染色的方法
下呼吸道感染细菌学检验操作规范(1)
下呼吸道感染细菌学检验操作规范(1)下呼吸道感染细菌学检验操作规范近年来，下呼吸道感染病例不断增加，给医疗卫生事业带来了严峻的挑战。
为了确保下呼吸道感染病例的快速、准确、可靠的检测和诊断，制定下呼吸道感染细菌学检验操作规范，将有助于提高检验水平和工作效率，本文将针对细菌学检验操作规范进行详细介绍。
一、检验前准备1. 确定样本种类：本次检验需使用的下呼吸道标本种类有：痰、咽拭子或喉拭子等。
2. 样本采集：根据患者的情况进行样本采集，采集时要求患者咳嗽并咳出深部痰液，若患者不配合，则可采用吸痰管等工具进行痰液采集。
同时也可以采用喉拭子或者咽拭子进行标本采集。
3. 样本处理：对采集的样本，应及时送到检验室进行处理，加工前需要做出相应的标签，记录样本采集时间、采集标本证号、病人基本信息等。
二、操作流程1. 样本处理(a) 痰液标本处理方法：对于痰液标本，先进行分液处理，即分离痰液中的黏液、脓液、红细胞和有机杂质等。
然后以0.9%氯化钠溶液洗涤一次，摇匀后进行离心（5000r/min，10min）。
(b) 咽拭子或喉拭子标本处理：将采集的咽拭子或喉拭子样本转移到含有0.9%氯化钠溶液的离心管中，然后离心（5000r/min，5min），离心后取上清液进行下一步检验。
2. 检测**(a) 涂片制备：将上述处理后的纯化液采用无菌钢丝圈或无菌载玻片刷取标本并均匀涂在两张干净的干燥擅菌片上，干燥后送至乙醇固定。
(b) 染色：采用Gram染色方法进行染色，首先用碘酒凝固后，将菌片在床头火上迅速脱色，用80%乙酸洗去多余的碘酒和颜料，再冲洗水清洗，细心观察染色质量，必要时要反复染色。
(c) 细菌形态观察：观察染色后菌的形态。
非典型革兰氏染色细胞如需观察需通过进一步检验的手段，如选择恰当的培养基及培养条件等。
(d) 培养：将涂片标本在含有相应营养物质的培养基上培养，观察菌落的形态及生理生化特性，以进行分类鉴定。
常用的培养基及相应的菌种分类可参见《常用细菌分类鉴定表》。
医院细菌室标本操作流程作业指导书
医院细菌室标本操作流程作业指导书1、标本的接受1.1、标本接受的时间：原则上全天任何时间均可。
1.2、标本的接受：接受标本者要认真核对标本的数量、标本与检验单要求是否相符以及标本的质量等。
1.3、把接受的标本编号。
2、临床标本的接种2.1、检验目的为细菌培养+药敏试验的各临床标本的培养基选择2.1.1 标本类型培养基血血培养瓶中段尿血平板、麦康凯平板、巧克力平板脑脊液血培养瓶、血平板、巧克力平板穿刺液血培养瓶、血平板、麦康凯平板、巧克力平板胆汁血平板、巧克力平板、麦康凯平板呼吸道标本血平板、麦康凯平板、巧克力平板粪便标本SS平板、MAC平板和血平板病灶分泌物血平板、巧克力平板、麦康凯平板2.1.2、生殖器标本根据临床医生所写的检验项目接种相应的平板及操作：淋球菌培养接种淋球菌平板；念珠菌培养接种沙保罗培养基：支原体培养则按《支原体培养的操作规程》操作；作普通细菌培养，则接种血平板和巧克力平板；衣原体抗原检测的按《衣原体抗原检测的操作规程》进行检验。
2.2、接种的方法：中段尿标本无菌取10ul，在血平板的中间做垂直划线，然后分离划线。
其他际本做分区划线。
2.3、检验目的为找抗酸杆菌的按《找抗酸杆菌的操作规程》进行检验。
3、所接种的平板必须写上标本的编号和接种的日期，然后根据要求进行培养。
4、标本的培养条件、温度、时间平板培养条件、温度、C02浓度、时间血平板孵箱、35—37℃、18—24小时巧克力平板孵箱、35—37℃、18—24小时淋球菌平板孵箱、35—37℃、18—24小时沙保罗平板孵箱、28—31℃、24—36小时其他的平板孵箱、35—37℃、18—24小时5、根据生长在平板上的细菌菌落形态、菌落涂片、染色、镜检等来综合判断细菌形态和染色性质，按各属鉴定的作业指导书进行各菌属的常规鉴定及药敏试验。
6、结果的报告6.1、确认细菌鉴定及药敏试验结果后，进行检验验单结果报告的存盘、打印。
7、对各类细菌培养标本除特殊要求外，我室一般操作完后按要求进行无害化处理。
标准操作规程(SOP)——呼吸道标本采集
标准操作规程（ＳＯＰ）——一、目的本SOP是为了保证呼吸道标本采集的操作的规范性以及确保采集标本的质量而制定。
二、范围适用于中国国家流感中心的所有技术人员进行呼吸道标本的采集。
三、程序（一）生物安全要求采集疑似人高致病性禽流感病例和不明原因肺炎病人呼吸道标本时，采集人员需以BSL-3级防护；一般流感样病例，呼吸道标本的采集以BSL-2级防护。
具体参见“生物安全个人防护SOP”。
（二）材料1．无菌拭子：聚丙烯纤维头的拭子2．15-mL离心管3．常用的采样液配制：常用的上呼吸道采样液有：pH7.4～7.6的Hank's或MEM液400mL。
加入庆大霉素(50 mg/mL)0.8mL，多粘菌素B(250μg/mL)3.2mL。
加入抗菌素以后重新调节pH值为7.4，配制好以后，分装每个采样管2～3mL，-20℃冻存。
4．压舌板（三）实验步骤1．采集呼吸道标本呼吸道标本：包括鼻拭子、咽拭子、鼻咽抽提物、鼻洗液、咽漱液。
最佳采集时间为发病后的前3天，不超过7天。
（1）鼻拭子：采集者左手扶住患者的下颌部，右手持无菌拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。
以另一拭子擦拭另侧鼻孔。
将拭子头浸入采样液中，在采样液中挤压拭子头部数次，用力折断拭子的尾部，将拭子的尾部弃去。
（2）咽拭子：左手用压舌板压住患者的舌头。
右手持无菌拭子擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入采样液中，在采样液中挤压拭子头部数次，用力折断拭子的尾部，将拭子的尾部弃去。
亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中。
（3）漱口液：用10mL生理盐水漱喉。
漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。
然后，用平皿或烧杯收集洗液。
（4）鼻洗液：让患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 mL生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。
然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。
重复此过程洗两侧鼻孔。
（5）鼻咽抽取物：常用于采集气管和支气管分泌物。
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1．目的
规范呼吸道标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2．适用范围
呼吸道标本培养和涂片检查。
3．标本
3.1 标本类型痰、咽拭、支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子、肺穿刺等。
3.2 标本采集
3.2.1 采集时间以晨痰为好；支气管扩张症病人，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰标本。
3.2.2 自然咳痰法在留取痰之前，用清水反复漱口，应从气管深部咳出痰，吐入无菌容器内。
3.2.3 气管镜下采集法在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。
3 2．
4 气管穿刺法在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。
3.2.5 棉拭采集法用无菌棉拭子轻轻擦拭病人鼻咽部黏膜，留取标本，置无菌试管内送检。
3.3 标本拒收标准
3.3.1 申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。
3.3.2 痰标本呈水样或唾液样。
3.3.3 痰涂片白细胞<10／低倍视野，上皮细胞>25／低倍视野。
3.3.4 标本容器溢漏，无瓶盖。
3.3.5 痰标本留取放置时间太长，超过2小时。
3.3.6 未用指定的无菌容器留痰作细菌培养。
3.4 标本保存采集标本后立即送到实验室，放置时间不应超过2小时。
4．试剂、仪器
4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3％过氧化氢、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。
4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡(GNI+)、革兰阴性细菌药敏卡(GNS)、革兰阳性菌鉴定卡(GPI)、革兰阳性细菌药敏卡(GPS)、真菌鉴定卡(YBC)、药敏纸片、ATH板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。
5．细菌鉴定和药敏质控
参见《质量管理程序》。
6．检验步骤
接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6.1 肉眼观察包括颜色、黏度、有无血丝或脓。
6.2 涂片检查可以确定标本是否适合做细菌培养，直接涂片镜检，依据低倍镜下观察白细胞和上皮细胞数目多少来评定(表5-29)。
并可初步判定是否有病原菌存在。
表5-29痰标本镜下分类
注：A、B两种情况的痰标本适合做培养，C不合格，应重新留标本
6.2.1 一般细菌涂片挑取脓性或血性痰液制成薄而均匀的涂片，革兰染色后镜检。
6.2.2 结核分枝杆菌涂片参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》。
6.2.3 放线菌及诺卡菌涂片将痰液用生理盐水洗涤数次，如含血液，则加水溶解红细胞，然后挑取黄色颗粒或不透明的着色斑点，置载玻片上，覆以盖玻片，轻轻挤压，置高倍镜下观察其结构，如见中央为交织的菌丝，末端呈放线状排列，则揭去盖玻片，干燥后作革兰及萋一尼染色镜检。
如查见中间部分的菌丝为革兰阳性，而四周放射的末端为革兰阴性，萋一尼染色为非抗酸性者，可报告为“找到革兰阳性杆菌疑似放线菌”。
萋尼染色弱阳性则报告“找到革兰阳性杆菌疑似诺卡菌”。
6.3 分离培养
6.3.1 培养标本的选择应选择黏液脓痰作涂片，排除不合格标本。
6.3.2 痰标本培养前处理 用无菌盐水将痰洗涤或加入等量的1％胰酶溶液，使痰液均质化后备用。
6.3.3 接种 处理后痰液接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯(或EMB 、中国蓝)琼脂平板，念珠菌显色板，置5％～10％CO2环境中，35 ℃培养18～24小时。
6.3.4 根据菌落及形态特点，作出初步判断，然后按各类细菌特征进行生化鉴定，并同时作药物敏感试验。
6.3.5 结核分枝杆菌培养：参见《分枝杆菌属》
7.操作流程
8.结果报告
8.1 报告的各菌种可注明各自所占比例情况,可分为纯培养、大量、中等量、少量。
8.2 未检出致病菌时应报告“正常菌群”。
9.注意事项
9.1 痰标本一般不可采用肉汤或高选择性培养基进行增菌培养。
9.2 草绿色链球菌为口腔和鼻咽部的正常菌群，其毒力很低，但由拔牙等原因造成的局部损伤而侵入血流，可引起亚急性细菌性心内膜炎等感染，故从血液中分离出草绿色链球菌有临床意义。
9.3 咳痰标本不做厌氧菌培养。
10.临床意义
上呼吸道标本培养的细菌是否与疾病有关，需各方面综合分析，排除常居菌后，才可作出正确的判断。
下呼吸道的痰液应是无菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球菌）。
若从病人痰标本中查出致病菌或条件致病菌，提示可能有呼吸道细菌感染。
肺炎链球菌是肺炎常见的致病菌。
儿童细菌性肺炎多为流感嗜血杆菌所致。
医院获得性
肺炎的常见病原菌是革兰阴性杆菌，主要有肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、沙雷菌属和肠杆菌属细菌等。
肺结核由结核分枝杆菌引起的。
嗜肺军团菌引起军团菌病，肺部厌氧感染大多是脆弱类杆菌及梭杆菌属的细菌等。
疑典型形态细菌所致肺部感染时，常先做痰液和支气管分泌物涂片、染色镜检（如肺部结核痰液涂片、抗酸染色、镜检找抗酸杆菌），有助于细菌培养检查。
11.危急值报告
如查出抗酸杆菌阳性,则应及时向临床报告并作传染病报告。
文件更改记录。