平板培养测数法
菌落总数计数方法
菌落总数计数方法菌落总数计数是一种常见且重要的实验方法，用于评估菌落的数量和密度。
菌落总数计数方法有多种，常见的包括平板计数法、薄层计数法、过滤膜计数法等。
下面将详细介绍这几种方法的原理和步骤。
平板计数法是最常见的菌落总数计数方法之一。
它的原理是将待测菌液均匀涂布在含有固体营养培养基的平板上，通过菌落的生长扩散形成可见的单个菌落，再通过对菌落进行计数并乘以稀释倍数，最后得到待测菌液的菌落总数。
具体步骤如下：1. 准备固体培养基。
根据所要检测菌落的要求，选择适当的培养基并准备好。
固体培养基一般含有琼脂或明胶等物质，可以提供营养物质和支持菌落的生长。
2. 制备合适浓度的菌液。
将待测菌种培养在含有适宜营养物质的液体培养基中，利用培养箱或摇床进行恒温、恒湿的培养，待菌液呈现合适浓度时即可使用。
3. 稀释菌液。
根据待测菌液的预估浓度，将适量的菌液和无菌生理盐水按一定比例进行稀释，以获得合适浓度的菌液。
4. 涂布菌落。
取一定数量的稀释后的菌液，利用灌注器或鱼鳞划线法将菌液均匀涂布在固体培养基的平板上。
为了保证菌液的均匀分布，可以采取旋转、摇动等方法。
5. 培养菌落。
将涂布好的平板置于恒温、恒湿的培养箱中进行培养。
根据菌种的不同，一般在30-37的温度下培养24-48小时。
6. 计数菌落。
在培养好的平板上，通过肉眼或借助显微镜仔细观察菌落的形态、大小、颜色等特征，并使用菌落计数器或放大镜进行计数。
根据菌落的密度和分布情况，可以选择在整个平板上计数，或者在特定区域计数后进行推算。
7. 乘以稀释倍数。
由于菌液在进行稀释时常用不同倍数的生理盐水进行稀释，所以在计算菌落总数时需要将计数结果乘以稀释倍数，以获得准确的结果。
薄层计数法是另一种常见的菌落总数计数方法。
它的原理是将含有待测菌液的液体培养基均匀地倒入培养基皿中，使其能够覆盖整个底面。
待液体凝固后，菌落会在培养基表面生长，并且可以通过视觉或显微镜观察和计数菌落。
平板菌落计数法
平板菌落计数法农资101 1031240125 周瑶实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验方法1、样品稀释液的制备准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20 min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml 无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液。
放菌液时吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液，否则稀释不准确，结果误差较大。
用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。
样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。
通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。
平板菌落计数法测定菌落总数的原理
平板菌落计数法测定菌落总数的原理1.准备琼脂培养基：将琼脂溶解在适当的营养液中，调整pH值，加热使其融化，然后冷却到约45-50℃。
2.预培养：将培养物从深层培养基中接种到含有一定营养液的试管中预培养，为后续培养做准备。
3.稀释：将预培养液根据菌落数量的预估结果进行适当稀释，使菌落分散。
4.接种：取适量稀释液，均匀地倒入装有琼脂的培养皿中，使培养基均匀铺满。
5.均匀涂布：将接种液均匀涂布于琼脂表面，避免产生气泡和划痕。
6.培养：将培养皿倒置，放在恒温箱中适当温度下培养一定时间，通常为24-48小时。
7.计数：在培养后的琼脂表面，用裸眼或放大镜观察并计数菌落，然后根据稀释倍数计算出原始菌落的总数。
1.琼脂培养基：通过熔化琼脂和添加适当的营养物，可以提供菌落生长所需的碳源、氮源等营养物质，以及适当的pH值和培养温度，使菌落能够在琼脂表面生长。
3.琼脂的稀释：通过适当的预估或实际试验，将预培养液稀释到合适的程度，使得在琼脂表面上的每个菌落之间有足够的距离，以防止菌落间的交叉叠加。
4.菌落计数：在培养后的琼脂表面，可以用裸眼或放大镜观察，计算出每个培养皿上的菌落数量。
根据稀释倍数，可以推算出原始菌落的总数。
1.简单易操作：操作方便，不需要复杂的设备和技术。
2.适用范围广：可用于测定各种微生物菌落总数，如细菌、真菌等。
3.直观准确：直接观察和计数菌落，结果客观准确。
4.含量测定：可以用于测定菌落的含量，有助于了解微生物的数量变化。
然而，平板菌落计数法也存在一些限制和注意事项：1.培养条件：受到琼脂培养基成分和条件的限制，一些微生物可能无法在琼脂表面生长。
2.杂菌干扰：在一些情况下，培养基表面可能有一些自然存在的杂菌或非细菌生物，这些杂菌可能会干扰菌落计数结果的准确性。
3.受限于稀释倍数：琼脂培养基的稀释倍数对菌落数量的计算有一定影响，过高或过低的稀释倍数可能会导致计数结果的误差。
4.菌落大小：一些微生物菌落较小或较大，可能会对计数结果产生一定的影响，需要注意估算和计数的准确性。
平板菌落计数法的步骤
平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，通过稀释液体样品、平铺在琼脂平板上、培养和计数菌落数量，可以确定原液中微生物的浓度。
这种方法可以应用于食品、环境和医药等领域的微生物数量测定，为微生物研究和质量控制提供了重要的手段。
平板菌落计数法的基本步骤如下：
1、准备无菌的培养基、试管、吸管、平皿、酒精灯等器材，以及待测的样品和适合的稀释液（如无菌水或盐水）。
2、将样品制成一系列的稀释液，通常采用10倍递增的稀释法，即每次取1mL的上一级稀释液加入9mL的稀释液中，充分混匀，得到下一级稀释液。
3、从每个稀释液中分别取出一定量（如0.1mL或1mL）置于灭菌平皿中，与已熔化并冷却至45℃左右的琼脂培养基混合，或者涂抹在已凝固的琼脂培养基上，使菌液均匀分布于培养基内。
4、在一定的温度下，培养一定的时间（通常为24至48小时），使菌液中的单个细胞生长繁殖成可见的菌落。
5、从每个平皿中计数菌落数量，选择菌落数在30至300之间的平皿，用计数器或计数板辅助计数，避免重复或遗漏。
6、根据计数结果和稀释倍数，计算原液中的菌落数量和浓度，通常用每毫升或每克的活菌数（CFU/mL或CFU/g）表示。
大肠菌群平板计数法的注意事项
大肠菌群是经常用来衡量食品卫生情况的重要指标，绝大部分食品都会要求检测的项目。
在食品微生物实验室里，大肠菌群和菌落总数的检测频次应该是最高的，但检测过程中总会有一些小问题困扰着大家，以下来讲解一下大肠菌群平板计数法的注意事项。
方法选择相比于MPN计数法，平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。
但大肠菌群多少算是含量较高呢国标里没有明确规定，但通常认为，产品大肠菌群以100CFU/g（mL）为界，超过这个含量一般认为是含量较高。
但具体什么时候选用平板计数法进行大肠菌群的检测，大部分情况还是要看你的产品执行的标准。
假如产品标准要求大肠菌群含量的单位为CFU/g（mL），那必须选用平板计数法。
若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就应选择MPN计数法，MPN法具体选用哪版国标此处不再赘述。
因此，根据自己产品的情况选择适当的检测方法。
培养基的要求平板计数法使用的培养基为结晶紫中性胆盐琼脂培养基，简称VRBA。
无论是国标，还是培养基的使用说明中都明确表示，VRBA是不需要进行灭菌的，煮沸2min即可使用。
特地点出这一点是因为很多朋友都在问VRBA的灭菌条件，对不灭菌的培养基不信任，害怕出现检测异常，那是因为这些小伙伴们对其中的原理不清楚。
大肠菌群的定义是在一定培养条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，因此大肠菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培养基煮沸的过程中，即使有大肠菌群存在也会被杀灭，所以从培养基带入污染的可能性是没有的。
当然盛装培养基的容器是需要进行灭菌的，以免容器引入污染。
另外，VRBA是一种选择性的培养基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用，而且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵的验证，因此VRBA培养基就不需要进行灭菌了。
但值得注意的是，VRBA需要现配现用，配制出的培养基应当在3h之内使用完毕。
稀释度的确定国标中要求选择2-3个适宜的连续稀释度。
平板计数法
稀释平板计数法实验目的学习稀释平板菌落计数的基本原理和方法。
实验内容用稀释平板菌落计数法对菌悬液进行计数。
实验原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2—3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水〔包括水源水〕等的含菌指数或污染程度的检测。
实验器材酿酒酵母菌悬液马铃薯培养基1m1吸管，平皿，试管，试管架，恒温培养箱等。
实验步骤1．无菌器材的准备(1) 无菌培养皿：取培养皿9套，包扎、灭菌。
(2) 无菌移液管的准备：取1m1移液管，在后部管口处用铁丝塞入棉花少许（长约1~1.5cm ），以防将菌液吸出，同时也可避免将外面的微生物吹入。
棉花要塞得松紧适宜吹时能通气但不使棉花滑下为准。
然后将移液管尖端放在4~5cm宽的长纸条一端呈45o角折叠纸条包住尖端，用左手捏住管身，右手将吸管压紧，在桌面上向前滚动，以螺旋式包扎起来，上端剩余纸条折叠打结后干热灭菌。
(3) 无菌水：取6支试管，分别装入4.5m1蒸馏水，加棉塞，灭菌。
2．样品稀释液的制备(1) 编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5m1无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
平板计数法
平板菌落计数法平板菌落计数法，是种统计物品含菌数的有效方法。
方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
目录一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明展开但是，由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu ：colony-forming units），而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
[1]编辑本段一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
编辑本段二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
医学：实验土壤中细菌总数的测定-平板计数
本实验的应用前景
本实验所采用的平板计数法具有广泛的应用前景，可 用于研究不同环境条件下土壤中细菌总数的变化规律。
通过深入探究土壤中细菌总数与环境因素之间的关系， 可以为农业生产、土壤保护和土地资源可持续利用提 供科学依据。
实验误差分析
随机误差
由于随机因素引起的误差，如取样不均匀、计数 误差等。
系统误差
由于实验方法、仪器或操作不当引起的误差，如 培养基质量、培养条件等。
误差来源分析
分析误差的来源，提出相应的改进措施，以提高 实验的准确性和可靠性。
结果可靠性评价
重复性检验
通过重复实验，比较实验结果的一致性和稳定性。
可信度评估
03
CHAPTER
实验步骤
土壤样品的采集与处理
1
ห้องสมุดไป่ตู้
采集具有代表性的土壤样品，并记录采样点的环 境信息。
2
将采集的土壤样品进行筛选和研磨，去除其中的 石块和杂质。
3
将处理后的土壤样品进行称重，记录其质量。
土壤样品的稀释与接种
根据土壤样品的质量， 计算所需的稀释液量。
将稀释后的土壤样品 接种到培养基中，确 保均匀分布。
制备菌悬液
将处理后的土壤样品与无 菌水混合，制备成菌悬液。
稀释菌悬液
将菌悬液进行适当稀释， 使每个菌落来源于一个细 菌。
接种培养
将稀释后的菌悬液接种到 培养基上，放入恒温培养 箱中培养。
掌握平板计数法测定土壤中细菌总数的操作步骤
计数菌落
培养一定时间后，观察并计数培养基 上的菌落数。
结果计算
mpn法和平板计数法的原理及适用范围
mpn法和平板计数法的原理及适用范围
MPN法和平板计数法是微生物检测中常用的方法，用于对水样或
其他样品中的微生物数量进行估算。
这两种方法都是基于微生物在特
定条件下的繁殖规律而设计的。
MPN法（Most Probable Number）是一种间接计数法，适用于微
生物含量较低的样品。
它基于微生物在液体培养基中的繁殖规律，通
过观察培养液的变化来估算微生物的数量。
具体操作时，样品通过稀
释系列，分别接种到多个培养管中，并根据培养管内是否有微生物生
长来判断MPN。
平板计数法是一种直接计数法，适用于微生物含量较高的样品。
它通过将样品均匀地涂布在含有固体培养基的平板上，使其中的微生
物形成可见的菌落。
然后，通过数个平板上的菌落数量，可以估算样
品中微生物的数量。
这种方法的优点是操作简单，但对于微生物数量
较低的样品不太适用。
MPN法和平板计数法的适用范围略有不同。
MPN法通常用于对含
有微生物数量较低的样品进行估算，例如食品、饮用水等。
平板计数
法则常用于对微生物含量较高的样品进行计数，例如污水、土壤等。
选择合适的方法取决于待测试样品的特性以及所需的灵敏度和准确性。
综上所述，MPN法和平板计数法是常用的微生物检测方法，通过
对微生物繁殖规律的研究来估算样品中微生物的数量。
两种方法各有
优势，适用范围有所不同，应根据实际需要选择合适的方法进行微生
物检测。
平板菌落计数法计算公式 例题
平板菌落计数法计算公式例题平板菌落计数法计算公式例题一、引言平板菌落计数法是微生物学实验室中常用的一种微生物计数方法，通过在琼脂平板上培养微生物，并根据菌落的形成情况来进行微生物数量的估算。
在本文中，我将介绍平板菌落计数法的计算公式，并通过一个具体的例题来加深理解。
二、平板菌落计数法的计算公式在进行平板菌落计数法时，通常使用以下计算公式来计算微生物的数量：N = n/d * 1/V其中，N 代表菌落总数（CFU/g或CFU/mL）n 代表在某一平板中被计数的菌落数d 代表对数稀释倍数V 代表每次接种的体积（mL）这个计算公式是通过对每个平板上的菌落数进行统计，并根据稀释倍数和接种体积来进行微生物数量的推算。
三、例题分析假设我们在实验室中进行了一次细菌计数实验，以确定某一食品样品中的细菌数量。
我们首先进行了系列的稀释，并将不同稀释倍数的样品接种在琼脂平板上。
在我们观察到的一张平板上，我们发现了以下菌落数：- 在1:10稀释倍数下，菌落数为30- 在1:100稀释倍数下，菌落数为18- 在1:1000稀释倍数下，菌落数为5假设每次接种的体积为1mL，则根据上述数据，我们可以进行如下的计算：N = (30/10) * 1/1 + (18/100) * 1/1 + (5/1000) * 1/1= 3 + 0.18 + 0.005= 3.185根据计算，我们可以认为在此食品样品中的细菌数量为3.185 CFU/mL。
四、总结与回顾通过这个例题的分析，我们加深了对平板菌落计数法的理解。
通过对不同稀释倍数下的菌落数进行计数，并根据计算公式进行推算，我们可以较为准确地确定样品中微生物的数量。
在实际操作中，我们需要注意稀释倍数和接种体积的准确控制，以避免出现较大误差。
五、个人观点和理解平板菌落计数法作为一种常用的微生物计数方法，在实验室中具有重要的应用价值。
通过对菌落的形态和数量进行观察，我们可以快速、准确地了解样品中微生物的数量，为食品安全、药品生产等领域提供了有力的数据支持。
大肠菌群平板计数法的注意事项
大肠菌群平板计数法的注意事项大肠菌群是经常用来衡量食品卫生情况的重要指标，绝大部分食品都会要求检测的项目。
在食品微生物实验室里，大肠菌群和菌落总数的检测频次应该是最高的，但检测过程中总会有一些小问题困扰着大家，以下来讲解一下大肠菌群平板计数法的注意事项。
方法选择相比于MPN计数法，平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。
但大肠菌群多少算是含量较高呢国标里没有明确规定，但通常认为，产品大肠菌群以100CFU/g（mL）为界，超过这个含量一般认为是含量较高。
但具体什么时候选用平板计数法进行大肠菌群的检测，大部分情况还是要看你的产品执行的标准。
假如产品标准要求大肠菌群含量的单位为CFU/g（mL），那必须选用平板计数法。
若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就应选择MPN计数法，MPN法具体选用哪版国标此处不再赘述。
因此，根据自己产品的情况选择适当的检测方法。
培养基的要求平板计数法使用的培养基为结晶紫中性胆盐琼脂培养基，简称VRBA。
无论是国标，还是培养基的使用说明中都明确表示，VRBA是不需要进行灭菌的，煮沸2min即可使用。
特地点出这一点是因为很多朋友都在问VRBA的灭菌条件，对不灭菌的培养基不信任，害怕出现检测异常，那是因为这些小伙伴们对其中的原理不清楚。
大肠菌群的定义是在一定培养条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，因此大肠菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培养基煮沸的过程中，即使有大肠菌群存在也会被杀灭，所以从培养基带入污染的可能性是没有的。
当然盛装培养基的容器是需要进行灭菌的，以免容器引入污染。
另外，VRBA是一种选择性的培养基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用，而且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵的验证，因此VRBA 培养基就不需要进行灭菌了。
但值得注意的是，VRBA需要现配现用，配制出的培养基应当在3h之内使用完毕。
平板菌落记数法的原理
平板菌落记数法的原理平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，它通过对菌落在平板上的生长情况进行观察和计数，来估算菌液中菌落的数量。
该方法的原理基于菌落在平板上生长的特性和规律，具有简便、快捷、精确的优点，被广泛应用于微生物学研究和实验室工作中。
平板菌落计数法的原理可以概括为以下几个步骤：1. 制备琼脂平板：首先，需要制备一种含有琼脂的培养基，琼脂是一种来源于海藻的多糖，具有凝胶状的特性。
将琼脂和适当的营养成分溶解在适量的水中，加热至溶解后，冷却并倒入培养皿中，使其凝固成为平板。
2. 均匀涂布菌液：将待测的菌液均匀地涂布在凝固的琼脂平板表面，可以使用铁环或平板计数器等工具来帮助涂布。
涂布时要尽量避免气泡的产生和过度涂布，以保证菌落的分散和生长。
3. 培养和生长：将涂布好的平板放置在适当的温度和湿度条件下，使菌落在琼脂平板上生长。
不同的菌种对于温度和湿度有不同的要求，因此需要根据具体菌种的生长特性来进行培养条件的调控。
4. 观察和计数：经过一段时间的培养后，菌落开始在琼脂平板上形成。
通常情况下，菌落会具有明显的形态特征，如大小、形状、颜色等，可以用肉眼或放大镜进行观察。
菌落计数时需要注意避免重复计数或漏计，可以使用计数板或计数器等工具来辅助计数。
通过以上步骤，我们可以得到菌液中菌落的数量。
根据菌落的数量和涂布的体积，可以计算出单位体积的菌液中菌落的数量，从而估算出整个菌液的菌落数量。
平板菌落计数法的优点在于操作简单、结果可靠、成本低廉。
相比于其他计数方法，如涂布计数法和过滤膜计数法，平板菌落计数法不需要特殊的设备和试剂，适用于大多数微生物的计数。
而且由于菌落在平板上生长的特性，每个菌落代表一个活菌，因此可以很好地估计菌液中活菌的数量。
然而，平板菌落计数法也存在一些局限性。
首先，该方法只适用于能够在琼脂平板上生长的菌种，对于一些特殊的菌种可能不适用。
其次，菌落的形成需要一定的时间，因此不能实时监测微生物的数量。
教你一招丨标准平板菌落计数法
教你一招丨标准平板菌落计数法检测食品中微生物数量，一般采用标准平板菌落计数法(SPC)对食品中的活的微生物进行菌落形成单位(CFU)数量的检测，即将部分样品取出混合均匀，用适当的稀释液进行梯度稀释，取一定量的稀释液涂布或倾注琼脂平板，在合适的温度下培养一定的时间，然后通过肉眼观察或电子计数器对所有可见菌落进行计数。
虽然日常检测大多采用倾注平板的方法，但是涂布法在检测热敏性菌体方面更有优势，能取得更好的计数结果，而且更适合于严格好氧菌。
涂布法的缺点是涂布时琼脂表面不干燥和培养后菌落蔓延导致无法计数。
(一)菌落计数器平板上的菌落个数可用肉眼直接观察进行计数，也可以借助仪器进行。
菌落计数器是一种数字显示式自动细菌检验仪器。
由计数器、探笔、计数池等部分组成，计数器采用CMOS集成电路精心设计， LED数码管显示，字高13mm,清晰明亮，配合专用探笔，计数灵敏准确。
黑色背景式计数池内，荧光灯照明，菌落对比清楚，便于观察。
菌落计数器分手动、半自动和全自动三种类型，可根据对精确度的要求，选择不同的计数器。
使用方法： (1)接通电源，平板去盖，皿底朝下放入计数器后开始计数，从平板的顶部开始计数，用方格线标记防止重复计数，利用这种机械式手动计数器，计数每一个菌落，无论多小或不典型。
(2)将探笔插入仪器上的探笔插孔内。
打开计数器，接通电源，计数池也内灯亮，并且显示窗内显示明亮，可以进行计数。
把待检的培养皿皿底朝上放入计数池内，并用探笔在培养皿底面对菌落进行计数，点到的菌落处被标上颜色，显示窗内数字会自动累加。
用放大镜仔细检查，确认点数无遗漏后，显示窗内的数字即为该培养皿内的菌落数。
使用注意事项：仪器要放在平整牢固的试验台上，点数时，探笔不要过于倾斜，轻点至有弹跳感，数字即可显示。
仪器应防尘，放大镜表面的灰尘，要用纯化水清洗后，再用镜头纸擦拭干净即可，另外还应防潮、防剧烈震动、防日光曝晒、防酸碱等，使用完后加防护罩。
平板菌落记数法的原理(一)
平板菌落记数法的原理(一)平板菌落记数法1. 引言平板菌落记数法（plate colony counting method）是一种常用的微生物学实验方法，用于定量测定微生物培养基上的菌落数量。
它是一种简单有效的方法，适用于各种微生物的鉴定与计数。
2. 实验原理平板菌落记数法基于菌落的形成原理进行操作。
当微生物被均匀涂布在固体培养基表面后，每个细菌或真菌细胞开始独立生长，最终形成一个个可见的菌落。
通过对菌落进行计数，可以推算出初始微生物的数量。
具体实验步骤如下：•准备培养基：根据实验需求选择适当的培养基，并按照指定的配方制备该培养基。
•涂布菌液：将待测菌液通过酒精灯的消毒棒均匀地涂布在培养基上。
•培养：将涂布后的培养基倒立放置，以避免菌落与试管壁接触污染。
将培养基置于适当的温度下培养，促进细菌或真菌的生长。
•计数菌落：在培养适宜时间后，用放大镜观察菌落，采用计数器对菌落进行计数。
•计算结果：根据计数结果以及相应的稀释倍数，推算出原始培养液中微生物的数量。
3. 注意事项在进行平板菌落记数法时，需要注意以下几点：•实验环境要维持洁净，避免外界微生物的污染。
•涂布菌液要均匀，避免过度或不足涂布导致菌落计数不准确。
•培养条件要合适，包括温度、湿度和培养时间等。
•计数时要耐心细致，避免重复计数或漏计。
•根据实验需要选择适当的稀释倍数，以避免菌落过于密集无法准确计数或过于稀疏难以观察。
4. 应用领域平板菌落记数法广泛应用于微生物学领域的各个方面，包括食品卫生检测、环境微生物学研究、药物抗菌性评价等。
•食品卫生检测：可以通过菌落计数的方法，评估食品样本中的微生物污染情况，指导食品质量控制。
•环境微生物学研究：可通过菌落计数了解土壤、水体、空气等环境中微生物的分布和变化趋势，为环境监测和生态学研究提供依据。
•药物抗菌性评价：可以通过菌落计数方法评估药物对微生物的抗菌效果，为药物研发提供数据支持。
5. 结论平板菌落记数法是一种简单可行的微生物计数方法，通过菌落计数可以对微生物的数量进行快速准确的测定。
微生物检测菌落总数测定方法
微生物学检验菌落总数的测定1 原理微生物活体数量的测定方法，常用平板培养计数法。
它是通过将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液，再取一定的稀释液接种，使其均匀分布于培养皿中特定的培养基内，最后根据在平板上长出的菌落数计算出每克（或mL ）样品中的活菌数量。
2 材料和仪器2.1 平皿：φ90mm 。
2.2 无菌锥形瓶：容量250mL ，500 mL 。
2.3 无菌吸管：1mL （具0.01mL 个度）,10mL （具0.1mL 刻度）或微量移液器及吸头。
2.4 灭菌锅。
2.5 恒温培养箱2.6 涂棒。
2.7 酒精灯。
2.8 超净工作台。
2.9 磁力搅拌器。
2.10 漩涡振荡器3 检验程序菌落总数的检验程序见下图。
方法①↙ ↘方法②↘ ↙4 操作步骤4.1 培养基和试剂的配制4.1.1 平板计数琼脂培养基：LB培养基（最常用）牛肉膏5g蛋白胨10g氯化钠5g琼脂20g蒸馏水1LpH 7.0～7.2将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH值，分装锥形瓶中，121℃高压灭菌30分钟。
4.1.2 无菌生理盐水的配制：称取8.5g氯化钠溶解于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌30分钟。
4.2 样品的稀释：4.2.1 固体样品：称取10g固体样品置于盛有90mL无菌生理盐水的无菌锥形瓶中（内装数粒无菌玻璃珠），在旋转式摇床上200r/min充分振荡30min，制成1：10的样品均液，即10-1稀释液。
4.2.2用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品均液1mL（吸取前需要摇匀1：10稀释液），缓慢加入盛有9mL无菌生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不能触及稀释液面），用漩涡振荡器振荡，混合均匀，制成1：100的样品稀释均液。
4.2.3按照4.2.2操作程序，制备10倍系列样品稀释液，每递增稀释一次，换用一次1mL无菌吸管或吸头。
4.2.4 根据对样品活菌数量的估计，选择3~4个适宜稀释度的样品均液（比如10-6，10-7，10-8，10-9稀释液）。
微生物数量测定
微生物数量测定在生物学和医学领域，微生物的数量测定是一个重要的实验技术。
通过对微生物数量的测定，我们可以了解生物体在不同环境中的适应性和生存能力，评估环境的健康状态，以及监测和治疗疾病等。
微生物数量测定的基本原理是利用单位体积或单位面积上的微生物细胞数，通过统计和计算得到微生物的数量。
常用的方法包括显微镜计数法、比浊法、平板计数法等。
显微镜计数法是一种直接计数法，通过显微镜观察并计数样品中的微生物数量。
该方法需要将样品均匀涂布在载玻片上，干燥后进行染色和固定，然后使用显微镜观察并计数。
该方法的优点是简单易行，适用于微生物数量较少的样品，但不适用于大量样品。
比浊法是一种通过测量样品的浊度来测定微生物数量的方法。
该方法是通过将样品与标准曲线进行比较，得出微生物的数量。
该方法的优点是快速、简便、准确度高，适用于大量样品的测定。
但是，该方法需要使用标准曲线，对于某些微生物可能不太准确。
平板计数法是一种通过培养微生物并计数菌落数量来测定微生物数量的方法。
该方法是将样品稀释后涂布在培养基上，培养一定时间后统计菌落数量，然后计算出微生物的数量。
该方法的优点是准确度高，适用于各种微生物的测定，但需要一定的培养时间和人力。
微生物数量测定的应用领域非常广泛，包括环境科学、医学、食品科学、农业科学等。
例如，在环境科学中，微生物数量测定可以用来评估污染物的毒性对生态环境的影响；在医学中，微生物数量测定可以用来监测和治疗疾病；在食品科学中，微生物数量测定可以用来控制食品的质量和安全；在农业科学中，微生物数量测定可以用来了解土壤的健康状况和作物的生长情况等。
微生物数量测定是一种重要的实验技术，广泛应用于生物学和医学等领域。
通过对微生物数量的测定，我们可以更好地了解生物体的适应性和生存能力，评估环境的健康状态，监测和治疗疾病等。
未来随着科技的不断进步和应用领域的不断拓展，微生物数量测定的方法和应用将更加多样化和精准化。
在生物学和医学领域，微生物的大小和数量的测定对于研究生命过程、疾病诊断和治疗等方面都具有重要的意义。
平板计数法
平板菌落计数法平板菌落计数法，是种统计物品含菌数的有效方法。
方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
目录一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明一、菌落总数介绍：二、检验方法三、说明展开但是，由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu ：colony-forming units），而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
[1]编辑本段一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
编辑本段二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
平板计数测定操作规程
1目的为建立平板计数测定操作标准，规范平板计数操作行为特制定本规程。
2范围本规程适用于本公司液态或固态产品的全部可成活细菌和芽孢数量进行计数的操作。
3职责操作人员、研发部技术总监对本规程负责。
4仪器及试剂4.1 仪器4.1.1菌落计数器4.1.2水浴锅4.1.3回旋振荡器4.1.4移液器及刻度吸管4.1.5喷雾干燥孢子稀释液4.2 培养基及缓冲液4.2.1平板计数琼脂培养基根据CPORX/SOP-R&D-002配制。
4.2.2磷酸缓冲液根据CPORX/SOP-R&D-001配制。
5程序5.1 细菌总数的标准平板计数程序5.1.1把经过滤的液体孢子中间物混合45秒钟。
根据计数最大化的需要来改变混合。
如果使用固态或其他液态产品可以省略这个步骤。
5.1.2量出1±0.01克(干燥或粘性液体样品)或1±0.01毫升 (液体样品)样品并转移到99毫升消毒磷酸盐缓冲物中(稀释度=10-2),如是喷雾干燥孢子则采用孢子稀释液。
为了从不均匀的样品中得到更有代表性的计数，有时必须称出更多样品（例如11±0.01克/99毫升=10-1稀释度）。
5.1.3如果是干燥产品，至少在室温下水化30分钟同时以每分钟100-200转的速度摇晃。
把第一次稀释瓶中的溶液转移到一个清洁的搅拌器中并低速搅拌。
把干燥的孢子混合90秒，所有其他产品混合15秒。
如果是液体产品则可以省略这一步骤。
根据计数最优化的需要改变混合。
5.1.4用1000μl吸管把1毫升样品转移到含有9或99毫升消毒磷酸盐缓冲物的试管或瓶子中（如果是固体产品那么就需要使用广口吸管以防止阻塞）。
5.1.5彻底混合。
5.1.6根据需要准备1:10或1:100的稀释液，以便最终使每个平板含有25-250个菌落。
5.1.7用100μl吸管从适当的平皿培养稀释液中转移3份0.1ml液体到每个包含适当平皿培养介质的皮氏培养皿表面。
5.1.8用预先消过毒的平板刮刀把0.1毫升液体分散在每个平皿的琼脂表面，操作方法是把皮氏培养皿放在手上，把平板刮刀放在琼脂上，旋转培养皿直到样品均匀分布到琼脂的表面为止。
稀释培养和稀释平板测数法
稀释培养和稀释平板测数法稀释培养测数法一、实验目的通过对好气性自生固氮菌的计数，了解稀释培养计数（MPN）的原理和方法。
二、实验原理最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。
其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。
本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。
见附表23-1）的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因不能使用平板计数时才采用。
MPN计数是将待测样品作一系列稀释，一直稀释到将少量（如lm1）的稀释液接种到新鲜培养基中没有或极少出现生长繁殖。
根据没有生长的最低稀释度与出现生长的最高稀释度，采用“最大或然数”理论，可以计算出样品单位体积中细菌数的近似值。
具体地说，菌液经多次10倍稀释后，一定量菌液中细菌可以极少或无菌，然后每个稀释度取3—5次重复接种于适宜的液体培养基中。
培养后，将有菌液生长的最后3个稀释度（即临界级数）中出现细菌生长的管数作为数量指标，由最大或然数表（见附录九）上查出近似值，再乘以数量指标第一位数的稀释倍数，即为原菌液中的含菌数。
如某一细菌在稀释法中的生长情况如下；稀释度 lO-3 10-4 10-5 lO-6 10-7 10-8重复数 5 5 5 5 5 5出现生长的管数 5 5 5 4 1 0根据以上结果，在接种lO-3—10-5稀释液的试管中5个重复都有生长，在接种lO-6稀释液的试管中有4个重复生长，在接种10-7稀释液的试管中只有1个生长，而接种10-8稀释液的试管全无生长。
由此可得出其数量指标为“541”，查最大或然数表得近似值17，然后乘以第一位数的稀释倍数（10-5的稀释倍数为100 000）。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
福建农林大学生命科学学院
福建农林大学生命科学学院
3 计数（下次实验）
细菌32-37℃， ℃ 细菌 真菌22-28℃， 真菌 ℃ 放线菌28-37℃ 放线菌 ℃
培养48h后取出培养平板，根据统计的菌落数，计算 出同一稀释度3个平板上的菌落平均数，按下列公式计算： 每毫升样品中菌落形成单位数（CFU）= 同一稀释度3次重复的平均菌落数×稀释倍数×5
福建农林大学生命科学学院
福建农林大学生命科学学院
福建农林大学生命科学学院
⑵ 涂抹平板计数法
涂抹平板计数法与混合法基本相同，所不同的是先将 培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后 用无菌吸管吸取0.2mL菌液对号接种在不同稀释度编号的 琼脂平板上，每个编号设三个重复。再用无菌刮铲将菌液 在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀 释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时， 也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20～ 30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温 培养，至菌落长出后即可计数。
五 注意事项
1、吸样量准确：无论是吸取菌液，还是将菌液吸入 平板均要准确； 2、混合均匀：在进行连续稀释时要将菌液充分混匀 后再吸取稀释液； 3、更换吸管：每个稀释度要更换一支吸管，不能用 1支吸管进行一系列稀释； 4、涂布均匀：菌落分散方能获得有效计数的结果。
福建农林大学生命科学学院
思考题
福建农林大学生命科学学院
三 实验材料
1．活材料：菜园土。 2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏Ⅰ号培 养基、马铃薯培养基 3．器材：99ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、 lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲 等。
福建农林大学生命科学学院
四 实验步骤
1．样品稀释液的制备 准确称取待测样品lg，放入装有 99ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置 摇床上振荡20 min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即 成10-2稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml， 移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀， 即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml， 移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释 液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、 10-8、10-9等一系列稀释菌液（如图）。
福建农林大学生命科学学院
实验二 平板培养测数法
一 实验目的
了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培 养法和混合平板培养法，认识细菌、放线菌、霉 菌、酵母菌的菌落特征。
福建农林大学生命科学学院
二 实验原理
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的 单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计 的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先 将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生 物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只 是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接 种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养 后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可 计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长 出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些成品检定 （如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食 品、水源的污染程度的检验。
福建农林大学生命科学学院
将实验结果填入下表中
计算结果时，常按下列标准从接种后的3个稀释度中选择一个合 适的稀释度，求出每克菌剂中的含菌数。 （1）同一稀释度各个重复的菌数相差不太悬殊。 （2）细菌、放线菌、酵母菌以每皿30-300个菌落为宜，霉菌 以每皿10-100个菌落为宜。
福建农林大学生命科学学院
1、平板菌落计数法中，为什么溶化后的培养基再冷 却至45℃左右才能倒平板？ 以防温度太高杀死培养基内的固氮菌 2、要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键？ 为什么？
福建农林大学生命科学学院
福建农林大学生命科学学院
福建农林大学生命科学学院
2、平板接种培养
平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两 种方法。 种方法。 （1）混合平板培养法 将无菌平板编上10-4、10-5、10-6号 码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求 吸取10-6稀释液各1ml放入编号10-6的3个平板中，同法吸 取10-5稀释液各lml放入编号10-5的3个平板中，再吸取10-4 稀释液各lml放入编号10-4的3个平板中（由低浓度向高浓 度时，吸管可不必更换）。然后在9个平板中分别倒入已 融化并冷却至45-50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使 菌液与培养基混合均匀，冷疑后倒置，适温培养。至长出 菌落后即可计数。
福建农林大学生命科学学院
测定土壤细菌数量时，采用10 测定土壤细菌数量时，采用10－4、 稀释度， 10－5、10－6稀释度，测定放线菌数 量时，采用10 量时，采用10－3、10－4、10－5稀释 测定真菌数量时，采用10 度，测定真菌数量时，采用10－2、 稀释度。 10－3、10－4稀释度。