EM菌分离筛选及培养

EM菌分类组成

1.细菌总数：（大致测定EM菌原液中细菌的种类和数量）

培养基：肉膏蛋白胨培养基(培养细菌)牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，氯化钠5g/L，琼脂 15-20g， pH7.0-7.2 分离纯化：

混菌法：30℃ 24-48h，原液培养基菌落总数为6498个/mL，乳酸菌光合细菌一般不生长。

结论：由表 3.2 可知 EM有效微生物由多种菌构成，且原液浓度较大。考虑到

菌种相互间的生长抑制作用，选用原液到10-4稀释液来进行培养分离，挑取不

同菌落划线纯化，然后革兰氏染色芽孢染色（有无芽孢及芽孢着生位置）。

2.光合细菌的生长分离

2.1通过在不同配方的培养基上培养光合细菌，挑选出最适合光合细菌生长的培养基，见表

3.3。

2.2 各种培养基上光合细菌的生长状况

各种培养基上光合细菌的生长情况不同，见表 3.4-表 3.6。①基本培养基上光

合细菌的生长情况，见表 3.4。培养基上菌落数：原液 4 800 个；10-1稀释液166个；10-2 稀释液 1 个，基本成比例关系。在现有培养条件下，基本培养基适合光合细菌的生长，原液的菌落数较多，有 4 800 个，但种类不多，只有 3 种。

②富集培养基

中只有原液培养基上长出 10 个菌落。由实验可知，在现有条件下，富集培养基

不适合光合细菌的生长。

培养基上菌落数：原液 969 个；10-1稀释液 75 个；10-2稀释液 14 个，基本成比例关系。由实验可知，在现有培养条件下，酵母膏培养基适合光合细菌的生长，种类较多，且菌落较大。④生长因子培养基上光合细菌生长情况，见表 3.6。由实验可知在现有条件下，生长因子培养基适合光合细菌的生长，菌落数多且种类也较多。

结论：①通过比较得出，富集培养基在现有培养条件下

不适合光合细菌的生长；基本培养基、酵母膏培养基、

生长因子培养基均适合光合细菌的生长。其中酵母膏培

养基和生长因子培养基上培养出的光合细菌种类较多

且菌落数量较大，更适合光合细菌的生长。②EM 有效

微生物原液中光合细菌的种类和数量都较大，为优势菌

种。

2．2．3 光合细菌的划线分离用生长因子培养基作光合细菌的划线分离，共划线分离出 4种光合细菌。见表 3.7。

结论：通过比较得出，1 号菌长得最好，2 号菌种长得较好，且由前面的实验可知，

这两种菌在基本培养基、酵母膏培养基、生长因子培养基上均可生长，菌落数较多。

说明在 EM有效微生物原液中，1、2 号菌数量较多，是优势菌种。

2．2．4 革兰氏染色

对 1、2 号菌种进行革兰氏染色，结果呈紫色，为革兰氏阳性菌；进行芽孢染色，

有芽孢。

3.乳酸菌的生长分离

2．3．1 选择适合乳酸菌生长的固体培养基

乳酸菌的分离培养选用了番茄汁培养基，乳酸菌生长效果良好且有浓郁的乳酸香味。2．3．2 番茄汁培养基上乳酸菌的生长情况

番茄汁培养基呈深绿色，培养基上长出乳白色菌落，且由于乳酸菌的代谢作用产生代谢产物，使培养基变为黄色。乳酸菌菌落开始表面较光滑，随后表面出现紧密分布的小颗粒。

乳酸菌在番茄汁培养基上共长出 4 种乳酸菌，每种菌落数量都较多。培养基上菌落数：原液 4 200 个；10-1 稀释液 2 330 个；10-2稀释液 960 个； 10-3稀释液 124 个。通过培养基颜色变化范围、菌落多少及大小，可基本得出菌落数与菌液浓度成正比。见图3.2。

分别从番茄汁培养基上挑取四种形态不同的菌落进行划线接种分离[119]，见表 3.9；乳酸菌划线分离生长情况见图 3.3。从图 3.3 可以看出，四种菌落划线分离后生长情况均较好。

结论：乳酸菌在番茄汁培养基划线分离的 4 种乳酸菌，每种菌落数量都较多，说明EM有效微生物原液中乳酸菌的种类和数量都较大，为优势菌种。

2.3.4 革兰氏染色

对乳酸菌番茄汁培养基划线分离出的四种乳酸菌进行革兰氏染色及芽孢染色，

4.酵母菌的生长分离

4.1 选择适合酵母菌生长的固体培养基

通过在不同的培养基上培养酵母菌，从而选择在现有条件下最适合酵母菌生长的培养基[120]。见表 3.12。

马铃薯葡萄糖培养基呈浅土黄色，与马铃薯颜色相同，培养基上菌落与培养基同色略

浅，菌落表面光滑但不亮，有较浓的酒香。培养基上菌落数：原液，无法计数；10-1

稀释液 2 400 个；10-2 稀释液 600个；10-3稀释液 48 个，基本成比例关系。见图

3.4。

豆芽汁葡萄糖培养基呈浅黄色，培养 48 小时后，培养基上菌落数仍较少，仅原液培养

基上长出 15 个菌落，菌落浅黄色，表面光滑但不亮。

结论：①在马铃薯葡萄糖培养基中酵母菌长势较好，菌落数量很多。说明在EM 有效微

生物原液中酵母菌的数量较多；②现有条件下马铃薯葡萄糖培养基更适合酵母菌的生长，

而豆芽汁葡萄糖培养基不适合酵母菌的生长。

2.5.2 划线分离

从马铃薯葡萄糖原液培养基上挑取三种形态有差异的菌落，用马铃薯葡萄糖培养基进行

划线接种分离，见3.13和3.5。酵母菌划线分离培养 24h 后，三个培养基上长出的菌

落从形态上看形状、颜色、大小、表面光滑度均相同：浅黄色透明，圆形菌落，直径

3-5mm，

2.5.3 革兰氏染色

将划线分离的三种菌落进行革兰氏染色及芽孢染色，结果均为紫色，即为革兰氏阳性

菌且均无芽孢，进一步证实了划线分离的实际上是一种菌。

6 丝状菌的分离:

丝状菌是一些不同类的有丝状结构的菌种

的总称，典型的代表是霉菌。马丁培养基是用于丝状菌特

别是霉菌培养的典型培养基，因此选用马丁培养基来培养

丝状菌。马丁培养基：葡萄糖 1g，蛋白胨 0.5g，三水合磷

酸二氢钾 0.1g，七水合硫酸镁 0.05g，孟加拉红（1mg/mL）

0.33mL，琼脂 1.5-2g，水 100mL，自然 pH，0.056MPa 灭菌

30 分钟，再加入 2%去氧胆酸钠溶液2mL，链霉素溶

液 10 000u/mL0.33mL 马丁培养基上马丁培养基呈浅红

色，培养足够长的时间后，原液培养基边缘及中间零星长出直径

约 2mm 的突起菌落，菌落表面不光滑，有密集乳白色微颗粒。菌

落从形态看，不像丝状菌菌落，且数量很少。反复几次，

结果都一样。见图 3.6。结论：以上结果表明 EM 有效微生物原液中丝状菌的种类和数量

都较少，不是优势菌种。

7.乙酸菌的分离

2.7.1 乙醇培养基上乙酸菌的生长状况

乙酸菌的培养选用乙醇培养基，培养出的乙酸菌数量较多，且有淡淡的乙酸酸味。乙

醇培养基无色透明，加入菌液后呈菌液的淡黄色，乙酸菌的生长状况良好，见表 3.14。

乙醇培养基上长出菌落部分，培养基凹下且有小洞出现，可能是由于乙酸菌菌落产气

引起的或者是乙酸菌菌落消耗培养基造成的。原液培养基上菌落数较少，而 10-1、10-2

稀释液培养基上菌落数明显多于原液培养基，则可能是由于原液培养基菌液浓度太高，

而营养物浓度不够，生长时相互间有抑制作用造成的。

2.7.2 划线分离

从原培养基中挑取三种形态有差异的乙酸菌菌落，仍用乙醇培养基进行划线分离。

见表 3.15。划线分离培养 24h 后，均长出乙酸菌菌落，菌落数较多。见表 3.16。