微生物实验放线菌的形态观察

实验一：丝状微生物的鉴定

实验目的：

1、观察常见放线菌的基本形态特征。

2、观察镰刀菌与木霉的基本形态。

3、掌握埋片培养法培养放线菌。

4、掌握载片培养法培养丝状真菌。

5、学会用显微镜观察未染色样品。

实验原理：

放线菌的菌落早期绒状同细菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。

放线菌一般由分枝状菌丝组成，它的菌丝可分为基内菌丝(营养菌丝)、气生菌丝或有孢子丝三种。放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生成串的分生孢子。孢子丝形态多样，有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等等。它们的形态构造都是放线菌分类鉴定的重要依据。

真菌的菌丝较放线菌粗，菌落疏松，主要用肉眼观察，必要时借助放大镜或显微镜。利用显微镜主要观察孢子的着生状态，孢子形状及菌丝有无横隔等。

3材料

3.1菌种

链霉菌（Streptomyces sp.）；诺卡氏菌（Nocardia sp.）；尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)；绿色木霉（Trichoderma viride）

3.2培养基

高氏1号培养基，PDA培养基。

3.3器皿

培养皿，载玻片、盖玻片、无菌滴管、镊子、接种环、小刀(或刀片)、水浴锅，显微镜，超净工作台，恒温培养箱。

4流程

4.1埋片培养法: 倒琼脂→切槽→接种→埋片→培养→镜检→记录绘图。

4.2载片培养法：滴琼脂→凝固→边缘接种→盖盖玻片→培养→镜检→记录绘图。

5步骤

埋片培养法：

1 向每个培养皿倒约20毫升高氏一号琼脂培养基，待凝固。

2 用无菌手术刀在琼脂平板上平行开两条槽，取出其中的琼脂培养基。

3 在槽的外侧边缘接种待鉴定的放线菌菌株。

4 将无菌载玻片呈与槽垂直的方向盖在平板上面，用镊子轻轻压下，使载玻片与琼脂平板接触。

5 放于28℃培养3天。

6 将载玻片从平板上取下，直接在显微镜下观察。

载片培养法：

1 将无菌载玻片放于洁净工作台。

2 向其上滴一滴溶化的PDA培养基，待凝固。（注意: 培养基的量不要太多，应尽量让其在载玻片上扩展开，降低培养基的高度，利于以后观察。）

3 在琼脂块边缘接种待鉴定真菌菌株。

4 用镊子夹取无菌盖玻片盖于琼脂块上。

5将载玻片放于无菌培养皿，用塑料袋密封，在塑料袋中放入一块吸水脱脂棉，保湿，28℃培养3天。

6将载玻片从培养皿取出，直接在显微镜下观察。

6 结果：1观察并绘制放线菌的菌丝丝形态，并指明其着生方式。

2比较不同放线菌形态特征的异同。

3 观察并绘制镰刀菌、木霉的孢子形态。

7 思考：

1在高倍镜或油镜下如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？

2同样为丝状微生物，为何观察菌丝形态所用的培养方法不一样？