芸香苷的提取、精制、水解和鉴定
实验二 槐米中芸香苷的精制、水解与检识
实验二槐米中芸香苷的精制、水解与检识【实验目的】1、学会运用重结晶的方法精制芸香苷,并进行水解.2、学会用显色反应检识黄酮类化合物.【实验原理】采用碱溶酸沉法提取,其原理是芸香苷结构中含有酚羟基,具酸性,能溶于碱水,当加入酸溶液后,则芸香苷沉淀析出.芸香苷的精制是利用其可溶于热水,难溶于冷水的性质与杂质分离.【实验材料】设备:电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、新华色谱滤纸、试管、试管架。
药品:芸香苷粗品、浓盐酸、蒸馏水、2%硫酸、95%乙醇、氨水、三氯化铝、浓硫酸、α–萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉醋酸镁【实验步骤】1. 芸香苷的精制:称一定重量的粗品，按约1∶200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。
抽滤，置空气中晾干或60℃～70 ℃干燥，得精制芸香苷，称重。
计算得率。
2. 芸香苷的水解:取芸香苷1 g,研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇(95%乙醇约15 ml)重结晶即得精制槲皮素。
4、检识：(1)Molish反应：取芸香苷少许置小试管中，加乙醇0.5 ml，加10%α-萘酚溶液1 ml振摇使溶解，沿管壁徐徐加入浓硫酸约0.5 ml，静置。
观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性。
以同法试验槲皮素，比较二者的不同。
(2)酸性实验：取小试管四支为一组，共二组，第一组每管中加入芸香苷1 mg，第二组每试管中加入槲皮素1 mg，每组分别加稀氨水、5% 碳酸氢钠溶液、5% 碳酸钠溶液和1% 氢氧化钠溶液各2 ml，振摇后，观察各管溶解情况，溶解的溶液应呈黄色。
再加盐酸数滴，黄色应褪去或变浅，并有沉淀或浑浊析出。
提取云香苷的实训报告
一、实验目的1. 熟悉云香苷的提取、精制、水解及检识的方法。
2. 培养学生对实验仪器的操作技能。
3. 提高学生对实验数据的处理和分析能力。
二、实验原理云香苷，又称芦丁，是一种黄酮类化合物，具有广泛的生物活性。
在植物界中，云香苷主要存在于槐米、玉米须、荞麦叶等植物中。
云香苷的提取、精制、水解及检识是研究其生物活性及其应用的重要步骤。
本实验采用碱溶酸沉法提取云香苷，该方法利用云香苷在碱性条件下可溶于水，而在酸性条件下可沉淀析出的特性。
通过水解反应，将云香苷分解为槲皮素和葡萄糖，进一步鉴定其结构。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：紫外光分析仪、水泵、试管、烧杯、回流提取器、抽滤瓶、锥型瓶、层析缸、蒸发皿、布氏漏斗等。
2. 试剂：槐米、2%硫酸、0.4%硼砂溶液、石灰乳、镁粉、浓盐酸、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等。
四、实验步骤1. 提取（1）称取槐米粉末5g，加入100mL 2%硫酸溶液，搅拌均匀，置于回流提取器中，加热回流1小时。
（2）取出提取液，用布氏漏斗过滤，收集滤液。
（3）将滤液用石灰乳调节pH至中性，静置过夜。
（4）取上清液，用浓盐酸调节pH至4.5，静置，待沉淀完全析出。
（5）用布氏漏斗过滤，收集沉淀。
2. 精制（1）将沉淀用少量甲醇洗涤，再用布氏漏斗过滤。
（2）将滤液置于蒸发皿中，蒸发浓缩至近干。
（3）加入少量甲醇溶解，转移至锥型瓶中，加入适量的活性炭脱色。
（4）过滤，收集滤液。
3. 水解（1）取上述滤液，加入适量的稀硫酸，加热回流2小时。
（2）取出，用石灰乳调节pH至中性，静置过夜。
（3）取上清液，用布氏漏斗过滤，收集滤液。
4. 检识（1）取上述滤液，加入适量的镁粉，滴加浓盐酸，观察颜色变化。
（2）取上述滤液，加入适量的三氯化铁溶液，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 提取通过碱溶酸沉法，成功提取了槐米中的云香苷。
在实验过程中，观察到沉淀的形成，表明云香苷在酸性条件下析出。
2. 精制通过活性炭脱色，成功去除滤液中的杂质，提高了云香苷的纯度。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定二.ppt
香苷的乙醇液作为供试液做芸香苷化学检识反应。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 1、盐酸—镁粉反应：取供试液2ml于试管中，加 入少许镁粉，再向试管中滴加浓盐酸数滴，观察 现象。
• 2、三氯化铝反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液 （注意相互不要晕染），其中一滴作为空白对照， 另一滴上面滴一滴三氯化铝溶液。观察二者颜色 变化，并在紫外灯下观察荧光。
• 3、氨熏反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液，其 中一滴作为空白对照，将另一滴点有供试液的部 分倒扣在浓氨水的瓶口上。观察二者颜色变化。
槐花中芸香苷的提取分 离、精制、鉴定（二）
Байду номын сангаас
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 一、实验目的：使芸香苷在水中重结晶，去除杂质达到精 制的目的。
• 二、实验原理：芸香苷粗品易溶于热水，难溶于冷水。 • 三、操作步骤： • （一）抽滤得到芸香苷粗品。 • （二）芸香苷的精制 • 取芸香苷粗品5/6份，置于500ml烧杯中，加蒸馏水300ml
槐米中芦丁(芸香苷)的提取分离及检识
结晶
静置液减压抽滤在 60-70温度下烘干 得粗品芸香苷 置于300ml蒸馏水 煮沸至芸香苷全部溶解 趁热抽滤 滤液放冷析晶
天然产物化学
水解 取精制芸香苷1g 置250ml圆底烧瓶中 加2%H2SO4溶液80ml 加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结晶， 即为槲皮素。放冷抽滤 沉淀物用蒸馏水洗至中性， 抽干水份，晾干称重，得粗制槲皮素
天然产物化学
提取
碱溶酸沉法
芸香苷分子中含有酚羟基，显弱酸性，能与 碱成盐而溶于碱液中加酸酸化后又可以沉淀 析出，因此可用碱溶酸沉法提取芸香苷。
天然产物化学
实验步骤
重复以上操作， 硼砂水150ml,时 间20min
加0.4%硼砂水200ml 加热微沸30min,用石 灰乳保持pH8-9
结晶
天然产物化学
天然产物化学
聚酰胺薄层色谱检识
点 样：（1）自制1%芸香苷乙醇溶液 （2）自制1%槲皮素乙醇溶液 对照品：1%芸香苷对照品乙醇溶液乙酯（3∶1∶0.5）
显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫 外灯下观察斑点颜色 （2）用氨水熏，记录斑点颜色和位置 结果：记录图谱，斑点颜色，计算芸香苷和槲皮素 Rf
天然产物化学
槐米中芦丁（芸香苷）的提取、分离和检识
天然产物化学
芦 丁
芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含 有三分子的结晶水，熔点为174~178℃， 无水物188~190℃。 溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200； 冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。 微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、 氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
天然产物化学
化学检识
• 取芸香苷和槲皮素约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成样 品溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 • （1）Molish反应 取样品溶液1ml，加10%α-萘酚溶液 1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸，静置， 观察并记录液面交界处颜色变化。 • （2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管 中，加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录颜色 变化。
芸香苷的提取、精制、水解和鉴定
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实验注意事项
• 1、提取过程中，加入硼砂的目的是为了保护芸香苷分子中 邻二酚羟基，以减少其氧化，并使其不与钙离子结合（钙 盐络合物不溶于水），使芸香苷不受损失，提高产率。 • 2、实验中应严格控制碱提取、酸沉淀的PH值。加入石灰 乳即可以达到碱性溶解提取的目的，还可以除去槐花米中 的多糖类、粘液质等，但碱性不宜过高（PH不超过10）， 因为在强碱性条件下煮沸，时间稍长就可促使芸香苷水解 破坏，降低产率；酸化时PH不可过低，否则会使芸香苷形 成样盐而降低产率。 • 3、水解时应随时加水，避免蒸干。
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• 实验器材： • 试药：槐花米、0.4%硼砂水溶液、石灰乳、蒸馏 水、浓盐酸、2%硫酸、乙醇、1%氢氧化钠溶液、 1%盐酸溶液、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、镁粉、 1%醋酸镁甲醇溶液、正丁醇、醋酸 • 仪器：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、 烧杯、层析筒、试管
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实验内容与方法：
• 一、芸香苷的提取 • 取槐花米20g（研碎），置于1000ml圆底烧瓶中， 加0.4%硼砂水溶液200ml，在搅拌下加石灰乳调PH8， 加热微沸30分钟，静置几分钟倾出上清液，用棉花 过滤，药渣同上重复一次。合并滤液用6N盐酸调 PH2~3，放置冰箱中析晶（一夜以上），待全部结 晶析出，抽滤，得粗芸香苷（滤饼用水洗3~4次）， 放置空气中自然干燥得粗品，称重、计算提取率。
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• 五、芸香苷及槲皮素的纸层析鉴定 • 层析材料：层析滤纸 • 点 样：（1）提取的芸香苷乙醇溶液 （2）提取的槲皮素乙醇溶液 • 展开剂：正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶5）上层溶液 • 显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在 紫外灯下观察斑点颜色 • （2）喷洒三氯化铝试剂后再观察斑点的变化
实验三中药化学成分提取槐米
实验三槐米中芸香苷的提取、精制和检识
一、目的要求
掌握芸香苷的主要性质及提取、分离精制和检识方法。
二、实验原理
根据芸香苷可溶于碱水，在酸性条件下又可沉淀析出，采用碱溶酸沉法提取。
根据芸香苷在冷水和热水中溶解度相差较大，以水为溶剂,采用结晶法进行精制。
三、实验方法
（一）芸香苷的提取
1.不锈钢锅中加500毫升水，加热至沸后加入槐米50克，
用石灰乳调pH值8-9，继续加热20分钟，随时补充损失的水分，趁热用纱布过滤，药渣再提取一次，两次滤液合并。
2.用浓盐酸调提取液使pH值2-3，放置过夜。
3.抽滤，将沉淀抽干，置于室温中自然干燥，得芸香苷粗品。
（二）芸香苷的精制
1.取芸香苷粗品2克置800毫升的烧杯中，加水约400毫升，
加热至沸，使芸香苷完全溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜，析晶。
2.抽滤，自然干燥，得芸香苷精制品。
（三）芸香苷的检识(要求写出反应现象)
1.氢氧化钠实验
取芸香苷少许置于试管中，加入2ml蒸馏水，振摇。
滴加2-3滴氢氧化钠溶液，芸香苷溶解，呈黄色澄明溶液。
再滴加盐酸溶液2-3滴，观察是否有沉淀生成。
2.α-萘酚—浓硫酸实验（Molish反应）
取芸香苷少许置干燥试管中，加2ml无水乙醇，振摇。
再滴加2-3滴α-萘酚溶液，振摇。
将试管倾斜，沿管壁滴加1ml 浓硫酸，观察两液面交界处颜色变化。
3.盐酸-镁粉实验
取芸香苷少许置于试管中，加入2ml 50%的乙醇，水浴加热溶解。
加入少许镁粉，再加入盐酸数滴，观察颜色变化。
写出碱提取酸沉淀提取芸香苷的流程
写出碱提取酸沉淀提取芸香苷的流程
1. 原料预处理：取槐花米（或其他含芸香苷的植物原料），洗净，晾干，粉碎成粗粉。
2. 碱提取：
- 将粗粉置于烧杯中，加入适量的0.4%硼砂水溶液，搅拌均匀。
- 再缓慢加入石灰乳（氢氧化钙乳液），调节pH值至8 - 9。
- 加热至微沸，保持该状态并搅拌提取一定时间（约30 - 60分钟）。
- 趁热过滤，得到碱提取液。
3. 酸沉淀：
- 在碱提取液中，边搅拌边缓慢加入稀盐酸，调节pH值至4 - 5。
- 随着酸的加入，可见芸香苷逐渐沉淀析出。
- 静置一段时间（如1 - 2小时），使沉淀完全。
- 过滤，得到芸香苷粗品沉淀。
4. 精制：
- 将芸香苷粗品沉淀用适量蒸馏水洗涤，以除去杂质。
- 再用乙醇进行重结晶，得到较纯的芸香苷晶体。
芸香苷实验报告
一、实验目的1. 掌握芸香苷的提取方法。
2. 学习黄酮类化合物的分离纯化技术。
3. 了解芸香苷的鉴定方法。
4. 培养实验操作技能和科学思维。
二、实验原理芸香苷（Rutin）是一种天然黄酮类化合物，广泛存在于槐米、山楂、茶叶等植物中。
本实验采用醇提法提取芸香苷，通过分离纯化得到较高纯度的芸香苷，并对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 槐米- 甲醇- 氢氧化钠- 碳酸钠- 盐酸- 硝酸- 氢氧化钠溶液- 醋酸铅溶液- 醋酸镁溶液- 香草醛溶液- 水合氯醛溶液- 蒸馏水- 硅胶2. 实验仪器：- 电子天平- 热水浴锅- 超声波清洗器- 烘箱- 分液漏斗- 抽滤装置- 显微镜- 紫外可见分光光度计四、实验步骤1. 芸香苷的提取：（1）称取干燥的槐米粉末10g，置于100mL三角瓶中。
（2）加入50mL甲醇，超声提取30分钟。
（3）过滤，收集滤液。
（4）将滤液浓缩至约5mL，加入适量的氢氧化钠溶液，调节pH值为8.5。
（5）静置过夜，使芸香苷沉淀。
（6）抽滤，收集沉淀。
2. 芸香苷的分离纯化：（1）将沉淀用适量甲醇溶解，加入适量的硅胶，搅拌均匀。
（2）将混合物倒入色谱柱中，采用柱层析法进行分离纯化。
（3）依次用不同极性的溶剂进行梯度洗脱，收集目标峰。
（4）将收集到的目标峰浓缩，得到纯化的芸香苷。
3. 芸香苷的鉴定：（1）紫外-可见光谱法：取适量纯化后的芸香苷，用甲醇溶解，测定其在254nm和364nm处的吸光度值。
（2）薄层色谱法：将纯化后的芸香苷点于薄层板上，用适宜的溶剂进行展开，与对照品进行对比，观察其斑点位置。
（3）红外光谱法：对纯化后的芸香苷进行红外光谱分析，与标准图谱进行对比，确定其结构。
五、实验结果与分析1. 芸香苷的提取：通过醇提法，从槐米中成功提取了芸香苷。
2. 芸香苷的分离纯化：采用柱层析法，从提取液中分离纯化了芸香苷。
3. 芸香苷的鉴定：通过紫外-可见光谱法、薄层色谱法和红外光谱法，对纯化后的芸香苷进行了鉴定，确认其为芸香苷。
槐花米中芸香苷的提取及
槲皮素粗品 槲皮素精制品
95％乙醇 重结晶
硫酸钡沉淀
滤液 浓缩至干，加 2～3ml乙醇溶解 糖供试液
注：抽滤瓶的使用：
①开始顺序：减滤纸（大 小应合适）→安装分液漏斗 （分液漏斗下斜口应对准抽气 口）→连接真空泵→打开真空 泵→抽滤。 ②结束时顺序：先拔掉抽 滤瓶上与真空泵连接的像皮管， 再拆除装置。否则真空泵中的 水回因为压力较抽滤瓶中空气 的压力大而流入抽滤瓶。
（六）注意事项
1．在提取前应将槐花米略捣碎，使芸 香苷易于被热水溶出。 2．在提取过程中，加入硼砂的目的是 使其与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络 合，既保护了邻二酚羟基不被氧化破坏， 又避免了邻二酚羟基与钙离子络合（芸香 苷的钙络合物不溶于水），使芸香苷不受 损失，提高收得率。
3．本实验直接用沸水由槐花米中提取 芸香苷，收得率稳定，且操作简便。如用 碱溶酸沉法提取，加入石灰乳可以达到碱 性溶解的目的，又可除去槐花7米中所含的 大量粘液质，但应严格控制其碱性pH8～9， 不可超过pH10。如pH值过高，加热提取过 程中芸香苷可被水解破坏，降低收得率。 加酸沉淀时，控制pH3～4,不宜过低，否则 芸香苷可生成yang盐而溶于水，也降低收 得率。
（五）芸香苷、槲皮素及糖的检识
实验名称 Molish反应 实验试剂 现象 芸香苷 槲皮素 紫色环 无现象
10%α-萘酚乙醇 溶液-浓硫酸 盐酸-镁粉反应 盐酸-镁粉 红色～紫红色 醋酸镁反应 1％醋酸镁甲醇 黄色荧光（紫外灯） 溶液（滤纸） 三氯化铝反应 1％三氯化铝乙 黄色荧光 醇溶液（紫外灯） 锆-柠檬酸反应 2％二氯氧锆甲醇溶液 黄色并 黄色 2％柠檬酸甲醇溶液3～4滴 褪色 不褪色
方法Ⅰ：水提取法
槐花米粗粉20g 加10倍量沸水煮沸20min，反 复2次，趁热脱脂棉滤过 药渣 滤液 静置过夜，滤过 滤液 芸香苷粗品
芸香苷的提取
点 样：提取的芸香苷与槲皮素的乙醇溶液和对照品的乙醇溶液。 展开剂：乙醇－水（7:3）或甲醇－水（8:2）。 展开方式：上行展开。 显 色：喷洒三氯化铝试剂前后，置日光及紫外灯光（365nm）下检视色斑 的变化。 观察记录：记录图谱及斑色颜色。 c. 糖的色谱鉴定 层析材料：定性滤纸。 点 样：糖的供试液及葡萄糖、鼠李糖对照品溶液。 展开剂：正丁醇－醋酸－水（4:1:5）上层溶液。 展开方式：上行展开。 显 色：苯胺－邻苯二甲酸试液，喷洒后先用电吹风冷吹至于，再吹热风 至出现斑点为止。 观察记录：记录图谱及斑点颜色。
2.色谱鉴定 a. 芸香苷和槲皮素的纸色谱 层析材料：定性滤纸。 点 液。 展开剂：正丁醇－醋酸－水（4:1:5）上层溶液。 展开方式：预饱和后，上行展开。 显 色：喷洒三氯化铝试剂前后，置日光及紫外光灯、 （365nm）下检视色斑的变化。 观察记录：记录图谱及斑点颜色。 b. 芸香苷与槲皮素的聚酰胺色谱 层析材料：聚酰胺薄膜。 样：提取的槲皮素承芸香苷的乙醇溶液和对照品的乙醇溶
3.芸香苷的水解 芸香苷的水解 取精制芸香苷1g，研细后置于250ml圆底烧瓶中，加入2% 硫酸100ml，加热回流30min，瓶中混浊液逐渐变为澄清的棕 黄色液体，最后生成鲜黄色沉淀。放冷沉淀，抽滤，保存滤 液（应为澄清无色液体），用做糖的检查，沉淀物为芸香苷 苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽干水分，晾干，称 重。粗制槲皮素再用50%乙醇重结晶得精制的含2分子结晶水 的槲皮素。 取芸香苷水解后的滤液10 ml，加饱和氢氧化钡溶液（或 碳酸钙粉末）中和至中性，滤去白色的硫酸钡沉淀，滤液水 浴60℃浓缩至2～3 ml，加2～3 ml乙醇溶解，作为糖的供试液。
四、鉴定 1.呈色反应 取芸香苷及槲皮素精品约10 mg，各用5 ml乙醇溶解，制成样品溶液， 按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 a. Molish反应 取样品溶液l ml，加10％α-萘酚溶液0.5 ml，振摇后斜置 试管，沿管壁滴加0.5 ml硫酸，静置，观察并记录液面交界处颜色变化。 b. 盐酸－镁粉反应 芸香苷与槲皮素溶液分别置于两试管中，加入金属 镁粉少许，盐酸2滴～3滴，观察并记录颜色变化。 c. 醋酸镁纸片反应 取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、槲皮素的乙醇 溶液，然后各加1％醋酸镁甲醇溶液两滴，于紫外光灯下观察荧光变化，记 录现象。 d. 三氯化铝纸片反应 在两张滤纸条上分别滴加芸香苷、槲皮素醇溶液 后，各加1%三氯化铝乙醇溶液两滴，观察颜色变化，记录现象。 e. 锆－柠檬酸反应 取样品溶液2 ml，加入2%二氯氧锆甲醇溶液3滴～4 摘，观察颜色，然后加入2％柠檬酸甲醇溶液3滴～4滴，观察并记录颜色变 化。
芸香苷的提取实验报告
芸香苷的提取实验报告简介芸香苷是一种天然的植物提取物，具有抗氧化和抗炎作用。
本实验旨在通过提取的方法从芸香苷植物中得到纯净的芸香苷。
实验步骤步骤一：准备实验材料和仪器1.芸香苷植物（鲜花或干燥花朵）2.乙醇（95%浓度）3.醋酸4.水5.滤纸6.漏斗7.烧杯8.试管9.量筒10.分离漏斗步骤二：提取芸香苷1.将芸香苷植物切碎或粉碎，以增加表面积，便于提取。
2.在烧杯中加入适量的乙醇，使芸香苷完全浸泡其中，静置一段时间。
3.使用量筒和滤纸，将含有提取物的乙醇溶液过滤到试管中。
4.将提取物加热至沸腾，以去除乙醇并浓缩提取物。
步骤三：纯化芸香苷1.将浓缩的提取物溶解在适量的水中，并加入少量醋酸。
2.使用分离漏斗，将溶液分离为两层。
芸香苷会在水层中。
3.将水层的溶液转移至烧杯中，然后加热至沸腾，以去除醋酸并浓缩芸香苷。
步骤四：结晶和干燥1.将浓缩的芸香苷溶液倒入试管中，然后放置在冰箱中冷却。
2.等待一段时间，芸香苷会结晶出来。
3.使用滤纸和漏斗，将结晶的芸香苷过滤出来，并放置在通风处晾干。
步骤五：称量和保存1.使用天平，称量得到的芸香苷的重量。
2.将芸香苷存放在干燥的容器中，并密封保存。
结论通过本实验，成功地从芸香苷植物中提取出纯净的芸香苷。
提取芸香苷的步骤包括准备实验材料和仪器、提取芸香苷、纯化芸香苷、结晶和干燥、称量和保存。
这一过程中需要注意使用适量的溶剂和控制溶剂的温度，以确保提取的有效性和纯度。
芸香苷的提取为进一步研究其抗氧化和抗炎作用提供了基础。
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定芦丁（Rutin）亦称芸香甙（Rutisude）,广泛存在于植物界中。
现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、养麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。
尤以槐花米和养麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。
槐花米为豆科植物槐（Sophora japonica L）的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~ 16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。
芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。
临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。
槐花米中主要化学成分的结构及性质：1. 芦丁（Rutin）淡黄色细小针状结晶，C ~178C （含三分子结晶），188C （无水物）。
溶解度：水：1:100（冷），1:200（热）甲醇：1:100（冷），1:9（热）乙醇：1:650（冷），1:60（热）吡啶：1:（冷），易溶（热）不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。
可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。
2. 槲皮素（Quercetin）即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313C ~314C （含2分子结晶水），316C （无水物）。
溶解度：乙醇：1:290（无水乙醇），1:23（热）可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。
不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。
3. 皂甙粗品为白色粉末，mp.210C ~220C （分解）。
易溶于水、吡啶，能溶于200咅的甲醇中。
酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。
（1）白桦脂醇（Betulin）无色针晶，°C ~252C。
能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯、乙醚等溶剂，难溶于石油醚及水。
(2) 槐二醇(Sophoradiol)无色针晶，C ~220C或224E。
能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中，难溶于水。
芸香苷水解液中糖的纸色谱检测条件优化
芸香苷水解液中糖的纸色谱检测条件优化槐米中芸香苷的提取、精制及对其水解液中糖的纸色谱鉴别是我校中药制药技术及药品质量检测技术等专业的学生必做的化学实验。
但多年来，采用径向纸层析方法，以传统的BAW上层展开系统即正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5，上层）进行展开，易出现鼠李糖条带严重扩散等问题，效果不理想。
本文对纸色谱展开条件进行了改进，确定乙酸乙酯-吡啶-水（10∶4∶0.5）为最佳展开剂，葡萄糖及鼠李糖条带清晰，显色明显，分离度良好，方法简单，重现性良好，可用此法快速鉴别葡萄糖和鼠李糖。
标签：芸香苷；葡萄糖；鼠李糖；径向纸层析芸香苷，又名芦丁，属黄酮类化合物，为中药槐米的主要有效成分，有凉血止血，清肝泻火，保护和恢复毛细血管弹性，减小毛细血管渗透性等功能。
芸香苷是由槲皮素的3位与一分子的芸香糖即rhaα1→6glc连接而成，槐米中芸香苷的含量不得少于15.0%[1]。
纸色谱法是分离、鉴定有机化合物的重要方法之一，按操作方法可分为垂直型和水平型两种[2]。
垂直型包括上行法和下行法，即将滤纸条垂直放置，使展开剂借助毛细管效应或重力作用向上或向下移动[3]；水平型即为径向纸色谱法，也称之为圆形纸色谱法，即将圆形滤纸水平放置，使展开剂由中心向四周扩散[4]。
多年来，我校采用碱溶酸沉法从槐树的花蕾中提取芸香苷并精制后水解，水解液中糖的鉴定均采用径向纸层析方法。
但在中药化学及天然药物化学的实验课上，中药制药、药物制剂等专业的多名同学采用传统的BAW系统上层溶液即正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5，上层）[5]进行展开，出现了较多的问题，实验效果不理想，主要表现为：鼠李糖环带出现严重扩散。
此类问题的出现并不完全是由学生的实验操作水平引起的，另展开系统中的采用的正丁醇具有特殊气味，令人难以接受，且刺激呼吸系统和皮肤，具一定毒性。
为此，笔者对葡萄糖和鼠李糖的纸层析展开条件进行了改进，较大程度的解决了上述问题。
1 实验部分1.1 仪器与试药WS70-1型红外线快速干燥箱，培养皿（Φ16cm）两个，毛细玻璃管（Φ0.5mm）；槐米购自沈阳市药材公司，使用前粉碎成粗粉，过20目筛；葡萄糖（中国药品生物制品鉴定所）；鼠李糖（中国药品生物制品鉴定所）；定性滤纸（Φ18cm）；吡啶（天津市科密欧化学试剂开发中心，分析纯）；乙酸乙酯（天津市百世化工有限公司）；其他药品均为国产分析纯药品，所用水为一次蒸馏水。
芸香苷与槲皮素的提取、分离及鉴定实验(含现象结论讨论)
芸香苷与槲皮素的提取、分离及鉴定实验（含现象结论及讨论）一、目的和要求1.通过芸香苷的提取与精制，掌握利用溶解度差异与酸碱性，提取黄酮类合物的原理和操作。
2.掌握黄酮苷水解制取黄酮苷元的方法。
3.了解黄酮类化合物的一般性质。
4.了解TLC及紫外光谱在黄酮类化合物鉴别中的应用。
二、实验原理1.利用芸香苷对冷水和热水的溶解度相差大的特性进行提取和精制。
2.黄酮苷可通过酸水解得到苷元和糖，且槲皮素在碱性溶液中可降解，反应结果可通过薄层色谱进行检识。
3.利用黄酮类化合物在紫外光下具有特定的吸收光谱可进行结构检识。
三、实验步骤（1）提取:热水粗提称取槐花米粗粉10 g，加150 ml沸水回流1h，滤布趁热过滤，稍冷却后，放冷析晶。
待全部析出后，离心(3000转，10 min)，减压抽滤，水洗3次，得粗制芸香苷。
（2）纯化:碱溶酸沉法碱溶酸沉法原理:芸香苷结构中的酚羟基与碱成盐后溶于水；加酸后析出。
，即石灰乳或石灰水。
酸:盐酸，硫酸。
常用碱液：Ca(OH)2优点:一方面可使含酚羟基化合物成盐溶解，另一方面可使含-COOH杂质形成不溶的沉淀。
注意:碱性不宜过强，以免破坏黄酮母核;酸化时，酸性不宜过强，以免形成佯盐而溶解。
将上述所得的芸香苷粗品置于烧杯中，加约50-80 ml的去离子水，再用石灰水调pH至8。
加入沸石，回流2~3 min，使充分溶解。
趁热棉花过滤，滤液滴加3M HCl调pH至7，放置于冰箱析晶，即析出沉淀。
减压抽滤，用少量去离子水洗沉淀2~3次，然后用少量乙醇洗1次，即得精制芸香苷。
上述所得精制芸香苷，少量用离心管冻存做后续鉴定，其余量做水解。
（3）芸香苷的水解取上述所得的精制芸香苷，置于250 ml圆底烧瓶中，放入沸石，加入2% 硫酸30 ml，加热回流40 min，瓶中浑浊液逐渐变为澄清的棕黄色液，最后生成鲜黄色沉淀。
放冷后减压抽滤，保存首道滤液(澄清无色液体)，作为糖的检查，沉淀物为芸香苷苷元(槲皮素)，用蒸馏水洗至中性，抽干水分，得到粗制槲皮素。
芸香苷的提取分离和鉴定
1、熟悉苷类化合物的提取、精制及鉴定方法。 2、掌握黄酮苷水解制苷元的方法。 3、掌握紫外光谱在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。
二、实验内容
• 芦丁的提取和精制 • 芦丁水解制取苷元槲皮素 • 化合物的检识 • 波谱鉴定
三、药材简介
槐米：豆科植物槐树的花蕾。 功效：止血药，治疗吐血，痔疮便血、子宫 出血、鼻血等，还常作为高血压的辅助用药。 主要化学成分：芦丁rutin，含量10%~20%。
核磁共振谱： 归属芦丁和槲皮素的氢谱和碳谱信号
四、基本原理
HO
O
OH OH
OR
OH
O
芦丁 R=-Glu-Rha
槲皮素 R=H
冷水：1：
8000 热水：1：200
五、提取、分离流程
槐米(压碎) 20 g 沸水300 ml, 加热30 min,棉花过滤 两次滤液合并
室温放置，析晶
抽滤
粗制芦丁
取 2 g，加水400 ml，煮沸 趁热抽滤 冷却后，析晶，抽滤
呈色反应 色谱分析
呈色反应
Molish 反应 盐酸-镁粉 反应 三氯化铝 反应
色谱分析
聚酰胺色谱：检测芦丁，槲皮素 展开剂： 甲醇－水（8：2） 显色剂：三氯化铝试剂
纸色谱：检测糖 开剂：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上层 显色剂：苯胺-邻苯二甲酸
波谱鉴定
紫外光谱：加入诊断试剂，分析光谱 数据，解析结构 参数：200～600 nm
精制芦丁
六、芦丁的水解
精制芦丁1 g 置于250 ml 圆底烧瓶， 加入2%H2SO4100ml， 加热回流30min
生成黄色沉淀（注意观察现象）
放冷，析晶，抽滤
滤液 取10ml,加饱和Ba(OH)2中和，
实验一槐花米中芸香甙的提取
实验一槐花米中芸香甙的提取、精制和检识芸香甙亦称芦丁（Rutin），广泛存在于植物界，已发现的芦丁植物至少在70种以上，以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多，本实验以槐花米作为提取芦丁的原料。
槐花米系豆科植物Sophora joponia L的未开放花蕾，其中芦丁含量高达23.5%，槐花开放后降至13.0%。
芦丁除用作治疗毛细管脆弱引起的出血症和高血病的辅助治疗剂外，还可作为制药原料，用于制造槲皮素（Ruercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啉芦丁、6-二乙胺基芦丁等。
槐花米中除含有芦丁外，还含有白桦脂醇（Betulin）、槐二醇（Sophoradiol）、皂甙以及槐花米甲、乙、丙素（Sophorin A、B、C）和多糖粘液质等。
芸香甙的结构一、槐花米主要成份的理化性质1. 芦丁：是槲皮素3位羧基与芸香糖（Rutinose）脱水缩合成的甙。
浅黄色粉末或极细的针状结晶，含3分子结晶水（C27H36O16·3H2O），mp ll7~178℃。
在110℃ 10mmHg下真空干燥12小时变成无水物，无水物易吸湿，可从大气中吸收约2.5分子水份。
无水芦丁在125℃变褐，在190~192℃变成胶状，当温度升至214~215℃发泡分解。
芦丁溶解度在冷水中1∶10000，热水中1∶200，冷乙醇中1∶300，热乙醇中1∶30，沸甲醇中1∶7，冷吡啶中1∶12，微溶于丙酮、乙醇乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
UV λmax nm：259，266（sh），299（sh）。
芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又析出，因此可以用碱溶液沉的方法提取芦丁。
芦丁分子因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露空气中，在光的作用下，能缓缓分解，变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解，硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的，故在碱性条件溶液中加热提取芦丁时，往往在加入少量硼砂，就是保护芦丁减少氧化分解。
芸香苷的提取实验报告
芸香苷的提取实验报告芸香苷的提取实验报告引言：芸香苷是一种天然的植物化合物，广泛存在于多种植物中，具有抗氧化、抗炎症、抗癌等多种生物活性。
本实验旨在通过提取技术，从植物中分离出芸香苷，并对其进行纯化和鉴定，为进一步研究其生物活性和应用提供基础。
实验材料与方法：材料：鲜芸香属植物叶片、无水乙醇、正己烷、二氯甲烷、硅胶、甲醇、醋酸乙酯、醋酸乙酯-甲醇（7:3）混合溶液。
方法：1. 将鲜芸香属植物叶片洗净，切碎并研磨成细粉。
2. 取适量植物粉末，加入无水乙醇，浸泡24小时。
3. 将浸泡液过滤，得到提取液。
4. 将提取液进行浓缩，得到浓缩物。
5. 用正己烷进行萃取，得到正己烷相和水相。
6. 将正己烷相进行浓缩，得到正己烷浓缩物。
7. 用二氯甲烷进行萃取，得到二氯甲烷相和水相。
8. 将二氯甲烷相进行浓缩，得到二氯甲烷浓缩物。
9. 将二氯甲烷浓缩物进行硅胶柱层析，用甲醇-二氯甲烷（7:3）混合溶液进行洗脱。
10. 将洗脱液进行浓缩，得到芸香苷纯品。
结果与讨论：通过以上实验步骤，成功从鲜芸香属植物叶片中提取并纯化出芸香苷。
首先，使用无水乙醇进行浸泡提取，可以将芸香苷从植物细胞中释放出来。
然后，通过正己烷和二氯甲烷的萃取，可以将芸香苷从提取液中分离出来。
最后，通过硅胶柱层析，可以进一步纯化芸香苷。
芸香苷的纯化程度可以通过高效液相色谱（HPLC）进行鉴定。
通过对纯品进行HPLC分析，可以得到芸香苷的保留时间和峰面积。
与标准品进行对比，可以确定芸香苷的纯度和含量。
芸香苷具有多种生物活性，包括抗氧化、抗炎症和抗癌等。
其抗氧化活性可以通过自由基清除实验进行评估。
通过添加不同浓度的芸香苷溶液，可以观察到其对自由基的清除效果。
此外，芸香苷还可以通过细胞实验评估其抗炎症和抗癌活性。
结论：本实验成功地从鲜芸香属植物叶片中提取并纯化出芸香苷。
通过HPLC鉴定和生物活性评估，可以进一步研究芸香苷的生物活性和应用。
芸香苷的提取与纯化技术对于深入研究其药理学作用和开发相关药物具有重要意义。
实验芸香苷的提起
【实验材料】槐花米、石灰乳、0.4%硼砂水溶液、浓盐酸、正丁醇、醋酸、氨水、乙醇、70%乙醇、1%氢氧化钠溶液、1%三氯化铝乙醇溶液、2%氯氧化锆甲醇溶液、2%枸椽酸甲醇溶液、10% α-萘酚乙醇溶液、浓硫酸、2%硫酸溶液、葡萄糖标准品、鼠李糖标准品、芸香苷标准品、槲皮素标准品、碳酸钡、氨制硝酸银试液、广泛pH试纸、中速层析滤纸（4cm×15cm）。
【实验原理】（一）芸香苷又名芦丁（Rutin），维生素P，紫槲皮苷。
分子式C27H30O16，分子量610.51。
浅黄色针晶（水），mp.176℃～178℃，[]23Dα+13.82°(乙醇)，[]23Dα-39.43°（吡啶）。
在各种溶剂中的溶解度为：难溶于冷水（1∶8000～10000）、可溶于热水（1∶200）、热甲醇（1∶7）、冷甲醇（1∶100）、热乙醇（1∶60）、冷乙醇（1∶650）、可溶于吡啶及碱性溶剂，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿及石油醚等溶剂。
由于分子中含有多个酚羟基，易被氧化，在空气中久置会使芸香苷颜色加深，尤其在碱性溶液中更易氧化。
OHOO glu OHOHO rha芦丁（二）槲皮素（Quercetin）又名栎精，槲皮黄素。
分子式C15H10O2，分子量 302.23。
为黄色针状结晶（稀乙醇），含2分子结晶水，在95℃～97℃成为无水物。
mp.314℃（分解）。
能溶于冷乙醇（1∶290），易溶于沸乙醇（1∶23），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸及吡啶等溶剂，不溶于水、苯、乙醚、氯仿及石油醚等溶剂。
（三）其他成分槐花米甲、乙、丙素（Sophorin A、B、C）、白桦脂醇（Betulin）、槐二醇（Sophoradiol）、单宁等。
本实验利用芸香苷分子结构中含有多个酚羟基，显弱酸性，能与碱作用生成盐而溶于碱水，加酸酸化后又能沉淀析出的性质，采用碱溶酸沉淀法进行提取。
利用芸香苷在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质，用水作溶剂进行重结晶精制。
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• 五、芸香苷及槲皮素的纸层析鉴定 • 层析材料：层析滤纸 • 点 样：（1）提取的芸香苷乙醇溶液 （2）提取的槲皮素乙醇溶液 • 展开剂：正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶5）上层溶液 • 显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在 紫外灯下观察斑点颜色 • （2）喷洒三氯化铝试剂后再观察斑点的变化
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• 四、芸香苷的检识反应 • 1．成盐反应 取芸香甙10mg左右，置试管中加 蒸馏水2ml，振摇，观察试管有无变化，滴加1%氢 氧化钠溶液数滴，振摇使芸香甙全部溶解成为黄色 澄明溶液，然后再滴加1%盐酸溶液数滴至成酸性 反应，溶液则由澄明转为混浊状态（若当时不出现 混浊时可放置片刻或放置冰箱中冷冻一定时间后再 观察）。
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实验注意事项
• 1、提取过程中，加入硼砂的目的是为了保护芸香苷分子中 邻二酚羟基，以减少其氧化，并使其不与钙离子结合（钙 盐络合物不溶于水），使芸香苷不受损失，提高产率。 • 2、实验中应严格控制碱提取、酸沉淀的PH值。加入石灰 乳即可以达到碱性溶解提取的目的，还可以除去槐花米中 的多糖类、粘液质等，但碱性不宜过高（PH不超过10）， 因为在强碱性条件下煮沸，时间稍长就可促使芸香苷水解 破坏，降低产率；酸化时PH不可过低，否则会使芸香苷形 成样盐而降低产率。 • 3、水解时应随时加水，避免蒸干。
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• 实验器材： • 试药：槐花米、0.4%硼砂水溶液、石灰乳、蒸馏 水、浓盐酸、2%硫酸、乙醇、1%氢氧化钠溶液、 1%盐酸溶液、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、镁粉、 1%醋酸镁甲醇溶液、正丁醇、醋酸 • 仪器：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、 烧杯、层析筒、试管
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• 2．呈色反应 • 取芸香苷和槲皮素约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成样品 溶液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 • （1）Molish反应 取样品溶液1ml，加10%α-萘酚溶液 1ml，振摇后斜置试管，沿管壁滴加0.5ml浓硫酸，静置， 观察并记录液面交界处颜色变化。 • （2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管中， 加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录颜色变化。 • （3）醋酸镁纸片反应 取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、 槲皮素的乙醇溶液，然后各加1%醋酸镁甲醇溶液两滴，于 紫外灯下观察荧光变化，记录现象。
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实验内容与方法：
• 二、芸香苷的精制 • 取2g加蒸馏水400ml，加热煮沸溶解，趁热 抽滤，滤液放置过夜，析晶，抽滤，得精制 芸香甙。烘干。
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实验内容与方法：
• 三、芸香苷的水解 • 取精制芸香甙1g，置250ml圆底烧瓶中，加 2%H2SO4溶液80ml，加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结 晶，即为槲皮素。放冷抽滤得结晶，滤液保留作为 糖的检查，沉淀物用蒸馏水洗至中性，抽干水份， 晾干称重，得粗制槲皮素。必要时可用稀乙醇重结 晶。
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实验内容与方法：
• 一、芸香苷的提取 • 取槐花米20g（研碎），置于1000ml圆底烧瓶中， 加0.4%硼砂水溶液200ml，在搅拌下加石灰乳调PH8， 加热微沸30分钟，静置几分钟倾出上清液，用棉花 过滤，药渣同上重复一次。合并滤液用6N盐酸调 PH2~3，放置冰箱中析晶（一夜以上），待全部结 晶析出，抽滤，得粗芸香苷（滤饼用水洗3~4次）， 放置空气中自然干燥得粗品，称重、计算提取率。
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实验二 芸香苷的提取、精制、 水解和鉴定
OH
HO
O OH O
OH O Glc-Rha
Rutinose
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实验二 芸香苷的提取、精制、 水解和鉴定
实验原理：
1.芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性， 在碱水中成盐增大溶解能力，用碱水为溶 剂煮沸提取，提取液加酸酸化后又成为游 离的芸香苷而析出。并利用芸香苷对冷水 和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。 2.黄酮苷可通过酸水解得到苷元和糖，并 可通过薄层色谱法进行检识。