牛磺酸对四氯化碳所致大鼠肝硬化门静脉高压的影响

牛磺酸对四氯化碳所致大鼠肝硬化门静脉高压的影响目的观察牛磺酸對四氯化碳所致大鼠肝硬化门静脉高压的影响，探讨其作用机制。

方法采用四氯化碳复合法制备肝硬化门静脉高压大鼠模型。

实验大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和牛磺酸低、中、高剂量组，各给药组给予相应药物灌胃。

治疗4周后，生化分析仪测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和总胆红素（TBIL）含量；ELISA测定大鼠血清肝纤4项[Ⅳ型胶原（CⅣ）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）]含量以及肝组织羟脯氨酸（HYP）水平；血流动力学法测定大鼠门静脉压（PVP）、门静脉血流量（PVF）、平均动脉压（MAP）并测定心率（HR）；硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO）含量，化学比色法测定内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性，放射免疫法测定环鸟苷酸（cGMP），紫外-可见分光光度计测定超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量；HE染色观察大鼠肝组织病理形态。

结果与模型组比较，牛磺酸中、高剂量组大鼠血清ALT、AST和TBIL含量显著降低（P＜0.05，P＜0.01），CⅣ、PC Ⅲ、HA及HYP含量显著降低（P＜0.05，P＜0.01），牛磺酸高剂量组LN含量显著降低（P＜0.05）；牛磺酸中、高剂量组大鼠PVP、PVF显著降低（P＜0.05），牛磺酸高剂量组MAP显著升高且HR显著降低（P＜0.05）；牛磺酸中、高剂量组大鼠肝组织NO含量显著升高（P＜0.05，P＜0.01），牛磺酸高剂量组eNOS活性、cGMP含量显著升高（P＜0.05）；牛磺酸中、高剂量组大鼠肝组织SOD、GSH-Px活性显著升高且MDA含量显著降低（P＜0.05，P＜0.01）；牛磺酸各剂量组大鼠肝组织病变明显改善，其中牛磺酸高剂量组效果最为显著。

结论牛磺酸对肝硬化门静脉高压大鼠具有抑制作用，其机制可能与牛磺酸保肝降酶，抑制氧化应激损伤，上调eNOS表达、提高NO含量，改善肝功能有关。

Abstract：Objective To investigate the effects of taurine on rats with CCl4-induced portal hypertension；To discuss its mechanism of action. Methods CCl4 compound method was used to prepare portal hypertension rat models. Experimental rats were randomly divided into normal group，model group，positive medicine group and low-，medium- and high-dose taurine groups. Each medication group was given relevant medicine for gavage. After four-week treatment，biochemical analyzer was used to detect the contents of ALT，AST and TBIL；ELISA was used to detect the contents of CⅣ，PCⅢ，LN，HA and the level of HYP in serum；hemodynamic method was used to detect PVP，PVF，MAP and HR；nitrate reduction method was used to detect the contents of NO，chemical colorimetry was used to detect the activity of eNOS，hepatic tissue；the activity of SOD，GSH-Px and the content of MDA in hepatic tissue；HE staining was used to observe the histopathological changes of the hepatic tissue. Results Compared with the model group，the contents of ALT，AST and TBIL in serum in medium- and high-dose taurine groups decreased significantly （P＜0.05，P＜0.01）；the contents of CⅣ，PCⅢ，HA and HYP in serum in medium- and high-dose taurine groups decreased significantly，and LN in high-dose taurine group decreased significantly （P＜0.05，P＜0.01）；the PVP，PVF in medium- and high-dose taurine groupsand the HR in high-dose taurine group decreased significantly （P＜0.01），and the MAP in high-dose taurine group inecreased significantly （P＜0.05）；the content of NO in hepatic tissue of medium- and high-dose taurine groups increased significantly （P＜0.05，P＜0.01）；the activity of eNOS and the content of cGMP in high-dose taurine group increased significantly （P＜0.05）；the activity of SOD，GSH-Px in hepatic tissue of medium- and high-dose taurine groups increased significantly and the content of MDA decreased significantly （P＜0.05，P＜0.01）；the hepatic tissue histopath-ological changes of low-，medium- and high-dose taurine groups were significantly improved，especially the high-dose taurine group. Conclusion Taurine has inhibitory effects on rats with portal hypertension，which perhaps are related to its effects on enzyme activity inhibition and hepatic tissue protection，inhibiting the damage of oxidative stress，upregulating eNOS expression，enhancing the content of NO and improving liver function.Key words：taurine；CCl4；cirrhosis；portal hypertension；rats肝硬化患者多伴有门静脉高压，是影响肝硬化患者预后的重要因素。

牛磺酸是一种含硫β-氨基酸，是牛黄的重要成分，并且广泛存在于动物组织细胞中。

现代药理研究表明，牛磺酸具有促进胆汁排泄、抗氧化、保护心血管、抑制肝组织纤维化等生物学作用[1-4]。

本实验采用四氯化碳复合法制备肝硬化门静脉高压大鼠模型，观察牛磺酸对四氯化碳所致大鼠肝硬化门静脉高压的影响，探讨其作用机制。

1 实验材料1.1 动物雄性清洁级SD大鼠96只，7周龄，体质量200～250 g，河北省实验动物中心，许可证号SCXK（冀）2008-1-003。

饲养于室温22～25 ℃、相对湿度60%～70%的环境，人工光照明暗交替12 h/12 h。

1.2 药物牛磺酸，美国Sigma公司，批号140213，含量≥98%；复方鳖甲软肝片，内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司，批号20140624。

1.3 主要试剂与仪器丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和总胆红素（TBIL）检测试剂盒，深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）检测试剂盒，南京建成生物工程研究所；Ⅳ型胶原（CⅣ）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、层粘连蛋白（LN）、透明质酸（HA）、羟脯氨酸（HYP）、一氧化氮（NO）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、环鸟苷酸（cGMP）检测试剂盒，北京博奥森生物工程有限公司。

BS380生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司），紫外-可见光分光光度计（日本岛津），DNM-9602酶标仪（上海圣科仪器设备有限公司），AOWERLAD-85型八道生理记录仪（AD公司），光学显微镜（日本Olympus）。

2 实验方法2.1 造模、分组及给药大鼠皮下注射40%四氯化碳0.3 mL/100 g，3 d注射1次，并给予高脂高胆固醇饲料喂养，15%乙醇作为饮用水，6周后病理检查证实肝硬化大鼠模型制备是否成功。

选取80只成模大鼠，随机分为模型组、阳性药组和牛磺酸低、中、高剂量组，每组16只，并另取16只同龄正常大鼠作为正常组。

取牛磺酸精确称量，用生理盐水配制成浓度为300 mg/mL溶液为中剂量，150、600 mg/kg牛磺酸溶液分别为低、高剂量；取复方鳖甲软肝片准确称量，用生理盐水配制成浓度为270 mg/mL的溶液。

各给药组均腹腔注射相应剂量药液2 mL/kg，正常组和模型组腹腔注射等量生理盐水，每日1次，连续4周。

2.2 血清丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶和总胆红素含量测定腹腔注射乌拉坦麻醉，开腹、经腹主动脉取血，1500 r/min离心10 min，取血清，生化检测仪测定大鼠血清ALT、AST、TBIL含量。

严格按试剂盒说明书进行操作。