芍药苷的体外代谢性质_谭妍

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芍药苷抗抑郁的相关研究进展

2019第二十一卷第五期★Vol. 21No.5芍药昔抗抑郁的相关研克进展**收稿日期:2018-10-12修回日期：2019-05-12* 国家科学技术部科技重大新药创制专项(2017ZX09301064)：柴芍皂昔软胶囊有效成分脑影像示踪技术及其药理机制研究，负责人:乔明琦，* * 通讯作者：乔明琦，本刊编委，教授，博士生导师，主要研究方向：肝脏象生理病理与情志致病机理研究。

夏小雯1,孙亚，宋春红，乔明琦2**(山东中医药大学中医药经典理论教育部重点实验室济南250355)摘要：芍药昔是一类单菇类化合物，由于其作用广泛，药效快，毒性低等优点，成为近年来研究的热点。

抑郁症作为二十一世纪人类健康的一大杀手，发病机理复杂，目前临床治疗药物种类繁多，且副作用大，急需开发新药物。

抑郁症的发生是由于单胺类神经递质、能量代谢和炎症途径三个复杂的方面相互关联共同导致的，一般西药无法满足治疗需求。

芍药昔作为天然药物具有多靶点多通路等优点，能够抗炎、镇痛、抗氧化、保护神经细胞，在抗抑郁实验研究方面效果显著。

本文通过查阅中国知网,pubmad 等网站，将近10年文献进行归纳、概括，从芍药昔调节单胺类神经递质、保护神经细胞、抗氧化、改善各项生理指标等方面对芍药昔的抗抑郁作用进行综述。

关键词：芍药昔抗抑郁单胺类神经递质神经保护doi ： 10.11842/wst.2019.05.012 中图分类号：R971+43 文献标识码：A1963年Shibatas 从芍药根中分离得到了芍药昔叫开启了对于芍药昔的药理作用研究。

芍药昔的分子量为480.45,分子式是C23H2Q ”，是芍药总昔的主要组成成分。

目前普遍认为芍药昔具有神经保护、抗炎抗溃疡、清热止痉利尿、扩张血管、镇痛镇静等药理作用。

近年来实验发现芍药昔对于抑郁症动物及细胞模型疗效显著，它能够抑制神经元损伤，调节神经内分泌系统，增强单胺类神经递质的释放。

芍药苷药物代谢动力学研究进展

芍药苷药物代谢动力学研究进展王春;魏伟【摘要】Total glucosides of paeony (TGP)is used to treat rheumatoid arthritis(RA)as the first immunoregulatory drug in clinic.The efficacy of TGP in treating RA patients is definite, which is accompanied with mild adverse reaction and slow effects simultaneously.Paeoniflorin (Pae ),the main constituents of TGP,has a bioavailability of 3% ~4%,which may be served as the main reason for its slow effects.Therefore,in this paper,the pharmacokinetics of Pae as well as its influencing factors were re-viewed on basis of pulished papers.In addition,some problems about Pae were also discussed.%白芍总苷（total glucosides of paeony，TGP）是临床上第一个用于治疗类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的抗炎免疫调节药，其治疗 RA 疗效肯定、不良反应少，但起效较慢。

芍药苷（paeoniflorin，Pae）是TGP 主要药效成分之一，生物利用度约为3％～4％，提示 Pae 吸收差可能是TGP 起效较慢原因之一。

该文参考近年来相关文献，概述 Pae 药代动力学过程及其影响因素，并就一些存在的问题进行初步探讨。

芍药苷

芍药苷提取及结构鉴定一.文献综述:赤芍为毛茛科植物芍药(paeonia lactiflora Pall．)或川赤芍(P．veitchii lynch)的干燥根。

赤芍有免疫调节作用，临床常用于肿瘤和血瘀症的治疗，尤以肝病常见【1】。

国内外研究表明，其主要有效部位为赤芍总苷【1,2】，赤芍总苷中的主要成分为芍药苷，芍药苷具有扩张血管、镇痛镇静、抗炎抗溃疡、解热解痉、利尿、抗应激性溃疡病、扩张冠脉血管、对抗急性心肌缺血以及抑制血小板凝聚等多方面作用，而且毒性小，临床已用于治疗冠心病。

国内外对赤芍的化学成分进行了较多的研究但对从赤芍中提取主成分芍药苷工艺过程,可包括超声波提取【3】、水煎煮【4】、微波提取【5】等，使用的提取溶剂包括水、乙醇、甲醇等【6】。

提取成分中主要有芍药苷亚硫酸酯、芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷、五没食子酰基葡萄糖、儿茶素、没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯和蔗糖。

在纯化过程多为用液液分配法，硅胶或树脂柱法，来除去非芍药苷成分。

而结构鉴定现在多为核磁共振。

芍药苷的化学式：理化性质：酸性下稳定，碱性下不稳定吸湿性无定形棕褐色粉末熔点：196℃芍药苷为水溶性的有效成分【7】参考文献：【1】许惠玉．赤芍总甙对荷瘤鼠细胞因子及诱导细胞凋亡影响因素的实验研究[D]．黑龙江医药大学硕士学位论文，2005：22．【2】刘超，王静，杨军．赤芍总甙活血化瘀作用的研究[J]．中药材，2000，23(9)：557．【3】陈赞，瞿海斌．超声强化水提赤芍中芍药苷的工艺研究[J]．中国现代应用药学杂志，2005，22(7)：607．【4】蒋宇利．正交试验优选赤芍水煎煮工艺[J].现代中药研究与实践，2003，17(5)：48．【5】范文成，叶晓红，李向军，等．微波提取赤芍中芍药苷的实验研究[J]．中成药，2008，30(1)：137【6】路小平．赤芍中芍药苷提取溶剂的选择[J]．时珍国医国药，2006，17(6)：1017．【7】汤羽，梁海燕. 赤芍中芍药苷的提取方法研究文章编号：1006—2882(2007)02—137—02二.实验目的和意义：目的:从赤芍中提取芍药苷和对其进行结构鉴定。

芍药苷对人黑素细胞生物活性及迁移的影响

芍药苷对人黑素细胞生物活性及迁移的影响王艺淳;林新瑜;王芳;廖恒利;刘伟;陈明懿【摘要】Objective:To determine the effects of paeoniflorin on biological activities and migration of mel￣anocytes. Methods:A melanocytes culture system was established and proliferation activity, tyrosinase activi￣ty, melanogenesis and migration were detected by MTT, L-DOPA, NaOH method and transwell assay respec￣tively. Results:The paeoniflorin improved the melanocytes proliferation and tyrosinase activity, in whichthe effects were the most obvious at the c oncentration of 10 μg/mL. The paeoniflorin promoted the synthesis of melanin, which was the most obvious at the concentration of 50μg/mL. Paeoniflorin promoted the migration of melanocytes obviously at the concentration of 20μg/mL. There were significant differences between the paeon￣iflorin groups and the control groups ( P<0.05) . Conclusion:The paeoniflorin is the principal active compo￣nent of radix paeoniae alba that promoting the migrationof melanocytes.%目的：：确定芍药苷对人黑素细胞生物活性及迁移的影响。

芍药苷代谢

口服四物汤后大鼠体内受食物和性别影响的芍药苷药物动力学民族医药药理学相关性:四物汤(中文Si-Wu-tang Shimotsu-to在日本),广泛使用在亚洲东部,是由朝鲜当归(当归尾),川芎(露有川芎),芍药(芍药苷)和地黄(熟地黄)。

芍药苷,四物汤活性成分之一,具有抗血小板、抗炎、抗癌和神经保护功能。

然而,至今还没有关于性别和食品摄入的对芍药苷药物动力学影响的信息。

研究目的:本研究是对食品和性别是否会影响口服四物汤后的大鼠体内芍药苷的药物动力学进行调查。

材料与方法:雄性和雌性老鼠口服单剂量四物汤，相当于80mg/kg的芍药苷。

高效液相色谱法测定血浆中芍药苷的浓度。

用方差或T检验来评估每组的数据差异结果:芍药苷的药动学参数没有显著的性别差异。

然而,最大血浆浓度(Cmax 0.47±0.29ug/ml到1.10±0.35ug/ml),浓度-时间曲线下面积(AUC0-N 1.41±0.89 h·ug/mL 到3.12±1.61 h·ug/mL)，服药老鼠的相对生物利用度(Frel=2.21)与禁食大鼠(P ＜0.05) 相比显著增加。

结论:综上所述, 当口服四物汤时，食物摄入量可以影响芍药苷的吸收速度和程度。

此外,本研究演示了一个在传统草药研究中简易制备高效液相色谱的方法。

简介传统中草药常用于预防和治疗各种疾病(Tilburt and Kaptchuk, 2008).中草药常进行组合或处方来改进和加强效力和效果。

四物汤，一味由当归尾,露有川芎,芍药和熟地黄1:1:1:1混合的传统草药，传统上被用于治疗心血管疾病等，用于改善血液不足,促进血液循环,调节月经,缓解疼痛。

最近,许多研究人员报道了四物汤新的药理活性，包括止痒、抗炎和抗癌症。

四物汤的主要生物活性成分包括酚类物质，萜苷、生物碱、苯酞和环烯醚萜苷类(Wang et al., 2009)。

芍药苷-是中药芍药的主要有效成分,是一种单萜类糖苷化合物,具有多种生物活性

芍药苷-是中药芍药的主要有效成分，是一种单萜类糖苷化合物，具有多种生物活性芍药苷-是中药芍药的主要有效成分，是一种单萜类糖苷化合物，具有多种生物活性，如抗氧化、抗自由基损伤、抗血小板聚集、改善微循环、免疫调节等，且毒副作用小。

芍药苷作为白芍总苷的主要成分，已被广泛应用于类风湿关节炎的临床治疗。

学术术语来源——芍药苷对骨髓间充质干细胞增殖的影响文章亮点：1芍药苷作为一种天然活性成分，具有补血及免疫抑制作用，对类风湿关节炎等自身免疫性疾病表现出一定的疗效，但其具体作用机制仍不明确，实验旨在通过观察芍药苷对间充质干细胞增殖及表达细胞因子的作用，从细胞水平探讨芍药苷的补血及免疫调节机制。

2研究发现，芍药苷促进骨髓间充质干细胞增殖的同时，可使骨髓间充质干细胞高表达白细胞介素6基因，并促进其细胞外分泌白细胞介素6。

由此说明，芍药苷或许是通过促进骨髓或外周血中骨髓间充质干细胞的增殖，促使其高分泌白细胞介素6等细胞因子进而影响造血细胞及免疫细胞的功能。

关键词：干细胞；骨髓干细胞；芍药苷；骨髓间充质干细胞；细胞增殖；白细胞介素6主题词：骨髓；间质干细胞；细胞增殖；白细胞介素6摘要背景：研究显示芍药苷具有补血及治疗自身免疫性疾病的功效，骨髓间充质干细胞对机体的造血及免疫功能也起着重要的作用，但芍药苷对骨髓间充质干细胞的增殖及细胞因子的分泌和表达有何影响报道较少。

目的：探讨芍药苷对人骨髓间充质干细胞增殖及白细胞介素6表达的影响。

方法：采用密度梯度离心法和贴壁培养法体外分离培养人骨髓间充质干细胞，用流式细胞术和成脂及成骨诱导法鉴定人骨髓间充质干细胞生物学特性，MTT 法检测不同浓度芍药苷对人骨髓间充质干细胞增殖的影响，ELISA 法测定芍药苷干预人骨髓间充质干细胞后培养上清液中白细胞介素6的分泌水平，RT-PCR 检测芍药苷干预后白细胞介素6 mRNA的表达情况。

结果与结论：成功分离出骨髓间充质干细胞，具有成骨、成脂分化潜能。

中药苷类及其代谢产物的脑组织分布研究

中药苷类及其代谢产物的脑组织分布研究很多中药有效成分以苷的形式存在，近年来，中药苷类生物利用度低的问题引起了广泛关注。

经不同途径给药后苷类及其代谢产物的组织分布情况直接影响其疗效。

随着中药苷类用于脑部疾病防治的报道日益增多，苷类的脑组织分布规律研究显得尤为重要。

据报道，苷在体内各组织广泛分布，有些苷可以到达脑组织，有些苷却不能进入脑组织。

该研究对苷类及其代谢产物对脑部疾病的作用、在脑组织的分布情况和剂型对药物脑组织分布影响的近年报道进行了综述，以期为该类中药在脑部疾病防治中的研究及其新药研发提供一定的参考。

标签：中药；苷类；苷元；代谢产物；脑组织苷类（glycosides）又称配糖体，是糖或糖的衍生物与另一类非糖物质通过糖的端基碳原子连接形成的化合物。

苷中的非糖部分称为苷元（genin）或配基（aglycone）。

苷元几乎包括各种类型的天然化合物，苷类在植物中的分布范围甚广，很多中药有效成分以苷的形式存在。

苷类成分多为水溶性分子，较之苷元，苷的脂溶性减弱，挥发性降低，毒副作用降低；其透膜能力也随之减小，吸收降低，排泄加快，最终导致生物利用度低[1]，这可能是某些中药苷类药理作用较弱的原因。

虽然糖基部分有一定的共性，但苷元的结构类型差别很大，形成的苷类在性质和生物活性上各有不同，在植物中的分布情况也不一样。

按苷键原子的不同，苷类可以分为氧苷、硫苷、氮苷和碳苷。

氧苷是数量最多，最常见的苷类；氮苷是在生物化学领域中是十分重要的物质，如腺苷、鸟苷、胞苷等；碳苷多为黄酮、蒽醌类化合物，其水溶性小，难于水解的共同特性。

1.苷类及其代谢产物对脑部疾病的作用近年来研究发现，中药及其有效成分具有显著的神经保护作用。

研究表明[2]，芍药苷神经保护机制与活化腺苷A1受体、改善胆碱能神经功能、平衡离子通道、抑制氧化应激、抑制神经细胞凋亡、促进神经生长、作用于胶质细胞及可透过血脑屏障密切相关。

1.1.老年性痴呆老年性痴呆（也称阿尔兹海默病，Alzheimer′s disease，AD）是一种神经退行性疾病。

大鼠肠道菌群对芍药苷体外代谢转化的研究

大鼠肠道菌群对芍药苷体外代谢转化的研究为研究肠道菌群对芍药苷在体内吸收和代谢的影响，该课题在离体培养的大鼠肠道菌群中，加入芍药苷进行厌氧孵育，分析芍药苷在48 h内的变化过程，探讨体外大鼠肠道菌群对芍药苷的代谢转化。

采用UPLC监测芍药苷在不同孵育时间点的变化，色谱条件为：WelchromTM C18色谱柱（4.6 mm×100 mm，5 μm），流动相0.1%甲酸（A）-乙腈（B），梯度洗脱，流速0.4 mL·min-1，柱温30 ℃；同时运用UPLC-Q-TOF-MS/MS对转化产物进行分析鉴定（ESI离子源，正离子模式检测），结合化合物精确相对分子质量和MS裂解碎片信息，并辅以保留时间及文献数据对代谢产物进行结构解析，分析芍药苷肠道代谢规律。

结果发现孵育24 h后，芍药苷已经完全被代谢转化，得到的代谢产物包括芍药内酯苷、芍药内酯苷元、脱酰基-芍药内酯苷、脱酰基-芍药内酯苷元和芍药内酯B等。

通过代谢途径分析发现，离体的大鼠肠道菌群先将芍药苷转化成芍药内酯苷，然后通过脱葡萄糖、脱苯甲酰基和四元环裂解重排等多个途径被进一步代谢，将芍药苷逐步转化生成相对分子质量更小、疏水性更强的代谢产物，从而更好被肠道吸收。

标签：芍药苷；肠道菌群；生物转化[Abstract]In order to clarify the effect of intestinal flora on the absorption and metabolism of paeoniflorin in vivo，the metabolism of paeoniflorin by rat intestinal flora was studied under the in vitro anaerobic condition. Paeoniflorin was incubated with rat anaerobic intestinal flora for 48 h，and UPLC was used to detect the changes of paeoniflorin at different incubation time points under the following chromatographic conditions：WelchromTM C18 chromatographic column （4.6 mm×100 mm，5 μm），with 0.1% formic acid（A）-acetonitrile（B）as the mobile phase for gradient elution. The flow rate was 0.4 mL·min-1，and column temperature was 30 ℃. UPLC-Q-TOF-MS with positive ion mode（ESI ion source）was applied to investigate the structural characterization of metabolic products. The structures of the metabolites were identified by accurate molecular weight，TOF-MS/MS fragmentation information，combined with retention time and literature data review，and the intestinal metabolic rules were then analyzed. After incubation for 24 h，the paeoniflorin was metabolized completely，and the resulting metabolites（albiflorin，albiflorinaglycone，deacylate albiflorin，deacylate albiflorin aglycone and paeonilactone-B）were detected in rat intestinal flora. The metabolic pathway analysis showed that the isolated rat intestinal flora first transformed peoniflorin into albiflorin，and then further metabolized by glucose removal，phenyl group removal，or four-membered ring pyrolysis and rearrangement. Paeoniflorin was gradually transformed into more hydrophobic metabolites with smaller molecular mass，which were better absorbed by the intestinal tract.[Key words]paeoniflorin；intestinal bacteria；metabolismdoi：10.4268/cjcmm20162021赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍P. veitchii Lynch.的干燥根，性苦，微寒，具有清热凉血、散瘀止痛、清泻肝火之功，可用于温毒发斑，血热吐衄，肝郁胁痛，经闭痛经，目赤肿痛，痈肿疮疡[1]。

芍药苷论文：从白芍中提取及分离芍药苷和芍药内酯苷

芍药苷论文：从白芍中提取及分离芍药苷和芍药内酯苷【中文摘要】白芍是我国传统中药,芍药苷和芍药内酯苷是白芍中的重要活性成分,具有各自独特的药理价值。

本文用溶剂提取法从白芍原料药中获得粗提物,通过正交设计法、均匀设计法和球面对称设计法优化提取有效成分的提取液料比例、提取溶剂、提取时间、提取温度;用大孔吸附树脂层析法从白芍粗提物中提取芍药苷和芍药内酯苷混合物,比较两种树脂AB-8、D101的提取效果,并考察洗脱液的比例和洗脱体积;用模拟移动床色谱(SMBC)精细分离芍药苷和芍药内酯苷,主要进行切换时间、流动相、洗脱流速的选择,并考察了模拟移动床分离运行的稳定性。

实验结果表明:白芍中有效成分的溶剂提取的最佳条件为:甲醇浓度为90%,提取液料比为10～12倍,提取时间为180min,提取温度为40℃;用D101树脂对白芍粗提物中芍药苷和芍药内酯苷进一步提取,梯度洗脱方案为:去离子水(2170mL)-20%甲醇水溶液(1250mL)-60%甲醇水溶液(980mL)-纯甲醇(700mL);模拟移动床分离芍药苷和芍药内酯苷的工作参数为:分离柱为4根色谱分离柱(ID×L=1.0×20.0cm),固定相为ODS(20μm),工作模式1-1-2,洗脱流动相甲醇:水=30:70(v/v),切换时间25min,进样浓度0.1g/mL,进样流速0.1 mL/min,洗脱流速2.0mL/min,冲洗流速4.0mL/min,室温下实验,得到的产品芍药苷的含量大于92%,芍药内酯苷的含量大于90%,该SMB分离过程能够稳定运行。

【英文摘要】Radix Paeoniae Rubra is one kind of Chinesetraditional medicine. Peaoniflorin and Albiflorin are important active components in Radix Paeoniae Rubra, each of which has unique pharmacological value. In this paper, the crude extract was firstly obtained from Radix Paeoniae Rubra by solvent extraction. The extract conditions including liquid-solid ratio, extraction solvent, extraction time and extraction temperature were optimized by orthogonal design, uniform design and spherical symmetric design, respectively. Then, the mixture of Paeoniflorin and albiflorin was separated by macroporous resin from the crude extract, the separation results were compared using two types of resin, AB-8 and D101. The eluent and elution volume were also selected. Paeoniflorin and albiflorin were further purified by simulated moving bed chromatography(SMBC). Switching time, the mobile phase, elution flow rate, and other parameters were selected, and the operation stability of SMB was investigated. Experimental results showed that the optimized extracting conditions were as follows: methanol concentration 90%, liquid-solid ratio 10～12, extraction time 180min, extraction temperature 40℃. The gradient elution was used in the separation of the two components by D101 resin, elution program was deionized water (2170mL) -20% methanol in water (1250mL) -60% methanol in water(980mL) - Pure methanol (700mL). The mixture of Paeoniflorin and Albiflorin was finally separated by simulated moving bed, and the main process parameters were as follows: four chromatographic column (ID×L = 1.0×20.0cm), stationary phase was 20μm ODS packing; mobile phase was methanol: water=3:7(V/V); eluent flow rate 2.0mL/min; purging flow rate 4.0 mL/min; injection flow rate 0.1mL/min; feed concentration 0.1g/mL; switching time 25 min; operating at room temperature. Under the above conditions, the mixture was separated by SMB, and more than 92% and 90% content of Paeoniflorin and Albiflorin were obtained, respectively. The SMB separation process was stable.【关键词】芍药苷芍药内酯苷模拟移动床色谱大孔吸附树脂【英文关键词】Paeoniflorin Albiflorin SMBC Macroporous resin【目录】从白芍中提取及分离芍药苷和芍药内酯苷中文摘要4-5ABSTRACT51. 绪论8-251.1 本课题的研究背景8-141.1.1 芍药概述及其主要组分简介8-101.1.2 芍药苷的理化性质及药理作用10-111.1.3 芍药内酯苷的理化性质及药理作用11-121.1.4 前人关于芍药苷和芍药内酯苷提取分离的研究工作12-141.2 本课题采用的主要技术手段14-211.2.1 溶剂提取法的简介及应用14-151.2.2 大孔吸附树脂的简介及应用15-161.2.3 模拟移动床技术及应用16-211.3 中药研究及中药现代化21-241.3.1 中药研究的意义21-221.3.2 中药研究的方法22-231.3.3 中药现代化的目的及意义23-241.4 本课题的研究内容及意义24-252. 实验部分25-382.1 实验仪器及试剂25-262.1.1 实验仪器25-262.1.2 实验试剂262.2 分析条件的建立及标准曲线的绘制26-272.2.1 高效液相色谱分析条件的建立262.2.2 标准曲线的绘制26-272.3 芍药中有效组分的溶剂提取27-312.3.1 正交设计法下的溶剂提取实验28-292.3.2 均匀设计法下的溶剂提取实验292.3.3 球面设计法下的溶剂提取实验29-312.3.4 提取溶液的浓缩及干燥312.4 白芍粗提物中芍药苷及芍药内酯苷的提取31-332.4.1 大孔吸附树脂的预处理312.4.2 树脂的吸附量和吸附率的测定31-322.4.3 两种树脂的分离效果比较322.4.4 梯度洗脱各阶段洗脱体积的实验322.4.5 吸附分离溶液的后处理32-332.5 芍药苷及芍药内酯苷的模拟移动床分离实验33-382.5.1 SMB 原料的配制332.5.2 模拟移动床分离柱的填充、对称性比较和柱效测定33-342.5.3 模拟移动床分离芍药苷及芍药内酯苷操作参数的初步选择34-372.5.4 模拟移动床分离稳定性的考察372.5.5 模拟移动床分离产品的后处理37-383. 实验结果和讨论38-623.1 芍药苷和芍药内酯苷的标准曲线及拟合方程383.2 芍药中有效组分的溶剂提取38-443.2.1 正交设计溶剂提取38-393.2.2 均匀设计溶剂提取39-423.2.3 球面设计溶剂提取42-433.2.4 三种溶剂提取设计方法的比较43-443.3 白芍粗提物中芍药苷及芍药内酯苷的大孔吸附树脂提取44-503.3.1 两种树脂对芍药苷的吸附量和吸附率比较44-463.3.2 两种大孔吸附树脂对白芍粗体物中芍药苷及芍药内酯苷的提取46-483.3.3 两种大孔吸附树脂的分离效果比较483.3.4 洗脱液比例及洗脱体积的确定48-493.3.5 洗脱液的后处理49-503.4 模拟移动床色谱分离芍药苷和芍药内酯苷50-623.4.1 模拟移动床分离柱的柱效及对称性50-513.4.2 固定相ODS 吸附实验结果51-523.4.3 洗脱流动相比例对分离结果的影响52-533.4.4 洗脱流速的选择53-543.4.5 切换时间（ts ）对分离结果的影响54-573.4.6 冲洗流速的选择573.4.7 温度对模拟移动床分离区间的影响57-593.4.8 模拟移动床分离工艺参数593.4.9 模拟移动床分离稳定性的考察59-624. 实验结论62-63参考文献63-68致谢68-69攻读学位期间发表的学术论文目录69。

芍药苷提取分离研究报告2

芍药苷提取分离研究报告2【前言】芍药苷主要来源于毛茛科植物芍药根,牡丹根,紫牡丹根。

关于芍药的使用，我国很早就有书面记载，始载于《神农本草经》，“主邪气腹痛，除血痹，破坚积，寒热疝瘕，止痛利小便，意气”。

我国明间用于治疗胸腹腰肋疼痛，自汗盗汗，阴虚发热，月经不调，崩漏带下。

现代研究表明其主要有效部位为芍药总苷，赤芍提取物含芍药甙(Paeoniflorin)、芍药内酯甙(Albiflorin)、氧化芍药甙(Oxypaeo- niflorin)、苯甲酰芍药甙(Benzoylpaeoniflorin)、芍药吉酮(Paeoniflorigenone)、芍药新甙(Lactiflor- in)、胡萝卜甙（Daucosterol），赤芍精（d-儿茶精，d-Catechin）及没食子鞣质（Gallotannin），苯甲酸（Benzoic acid），挥发油、脂肪油、树脂、糖、淀粉、黏液质、蛋白质等，主要成分为芍药苷，其具有镇静、解痉、抗炎、抗应激性溃疡病、扩张冠脉血管、对抗急性心肌缺血以及抑制血小板凝聚等多方面的作用，而且毒性小。

临床上已试用于治疗冠心病，老年性疾病，增强体质与免疫功能、抗炎止咳、祛痰平喘等方面，尤其是老年慢性呼吸道疾病的治疗中可作辅助药物。

【理化性质】芍药苷（Paeoniflorin）又名芍药甙，化学名为：β-D-Glucopyranoside,5,6-[(benzoyloxy)methyl ].tdtrahydro-5-hydroxy-2-methyl-2,5-methano-1H-3,4-dioxacyclobuta[cd]peta len-1a(2H)-yl,[laR-(1aα,2β,3aα,5a,5aα,5bα)]- 分子式C23H28O11,分子量480.45，熔点 196℃。

本品为吸湿性无定形粉末，四醋酸酯为无色针状结晶，属蒎烷单萜苷，极性较大。

药典记载，芍药苷遇香草醛会显现蓝紫色。

赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的代谢及药动学研究进展

赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的代谢及药动学研究进展刘玉峰;孙珊珊;朱丽君;胡延喜;马海燕;李鲁盼;卢晓丹【摘要】药物代谢是药物研发过程的重要环节,对于深入探讨药物的药效基础及在体内的代谢规律至关重要.芍药苷和芍药内酯苷是赤芍的主要活性成分,具有广泛的药理作用.文章通过查阅国内外文献,就其体内、体外代谢及药代动力学方面进行综述,介绍了芍药苷和芍药内酯苷体内、体外代谢机制,旨在为赤芍的研发和临床给药提供科学依据,同时也为其他药物的代谢研究提供参考.【期刊名称】《辽宁大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(045)004【总页数】8页(P296-303)【关键词】芍药苷;芍药内酯苷;体内代谢;体外代谢;药代动力学【作者】刘玉峰;孙珊珊;朱丽君;胡延喜;马海燕;李鲁盼;卢晓丹【作者单位】辽宁大学药学院,辽宁沈阳110036;辽宁大学药学院,辽宁沈阳110036;辽宁大学药学院,辽宁沈阳110036;辽宁大学药学院,辽宁沈阳110036;辽宁大学药学院,辽宁沈阳110036;辽宁大学药学院,辽宁沈阳110036;沈阳市120中学化学组,辽宁沈阳110031【正文语种】中文【中图分类】R9670 引言赤芍是我国传统中药材，为毛莨科植物芍药(Paeonia lactiflom Pall.)或川赤芍(Paeonia veitchii Lynch.)的干燥根[1].具有散瘀止痛、清热凉血、保肝、抗血栓、抗肿瘤等广泛的药理作用[2-5].赤芍中含有大量单萜苷，被认为是赤芍的主要活性成分[6,7]，尤以芍药苷和芍药内酯苷研究最为广泛[8,9].现代药理研究表明芍药苷具有镇痛[10]、抗炎[11]、降糖[12]、抗低血压[13]和抗血栓[14]的功效.芍药内酯苷具有镇静、镇痛、抗惊厥，提高免疫力，抗抑郁，解毒等作用[15-18].芍药苷和芍药苷内酯苷的化学结构如图1所示.图1 芍药苷和芍药内酯苷化学结构式药物代谢研究是探索药物在机体作用下发生化学结构转化的过程[19].它是药物研发的重要环节，贯穿药物研究的整个过程.其意义在于能够使我们更清楚地了解药物在体内的代谢过程，阐明代谢物的结构，弄清药物发挥药效的化学基础及毒副作用的机制等.药代动力学，简称药动学，是运用数学原理和方法，通过药代动力学参数探讨药物在生物体内的吸收、分布、代谢和排泄情况，从而确定药物给药剂量、给药时间等[20,21].这些研究将为药物的研发和临床给药提供更科学的依据.本文在前人工作的基础上，结合近几年文献报道，从体外代谢、体内代谢、药代动力学三个方面对赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的研究进行介绍.1 芍药苷和芍药内酯苷的药物代谢研究1.1 药物代谢简介药物代谢又称药物的生物转化，是指药物分子被机体吸收、分布后，在机体药酶的作用下发生不同程度的化学结构变化，主要包括Ⅰ相和Ⅱ相代谢.Ⅰ相代谢是药物经过氧化、还原、水解后连接某些集团(如-OH、-NH2、-COOH、-SH等)，使得药物极性和亲水性增强；Ⅱ相代谢是药物与一些内源性的的大分子物质(如葡萄糖醛酸、硫酸、甘氨酸等)结合或经乙酰化、甲基化后排出体外[22,23].药物进入机体后主要以两种方式进行消除：一种是药物不经任何代谢直接以原型随尿液和粪便排出体外；另一种是药物在体内经过代谢后，再以代谢产物形式随尿液和粪便排出体外.其意义就在于能够把外源性的物质包括毒物和药物，在体内酶的作用下或与机体内源性物质结合，使其发挥作用后失活，最终被排出体外.在此过程中，药物的药理活性或消失或降低或增强，也可能产生毒性物质[24].因此，国内外大量学者从药物代谢产物的生成及其代谢途径、代谢规律等方面对药物代谢进行了研究.药物的代谢研究总体上可以分为体内代谢研究和体外代谢研究.药物的体内代谢研究主要是从整体水平上进行的，给予动物一定剂量的药物后，药物在酶的作用下在体内发生一系列生物反应并通过排泄器官排出体外，主要是肝胆、肾、肠道排泄，然后相应的收集血样、胆汁、尿液、粪便等，进行检测分析[25,26].这种方法可以综合的考虑体内各种因素对于药物的影响，能够全面真实地反映药物在体内代谢的整体特征.由于体内代谢面临着如：体内生物样本成分复杂、内源性杂质较多、药物代谢量较少、检测技术要求较高等困难，因此人们把注意力也转移到体外方法的研究上，该方法操作简单、易于重现、能够较真实地模拟体内环境[27,28]，主要方法有：肠道菌温孵培养[29]、微生物转化[30,31]和肝微粒体温孵培养等方法[32].样品成分的分析通常使用高效液相(HPLC)，高效液相串联质谱(HPLC-MS)等技术进行检测，因为该技术具有较高的灵敏度和准确性，既能对代谢产物进行初步的分析、分离和结构鉴定，又能对药物进行定量分析[33-35].1.2 芍药苷和芍药内酯苷的体外代谢研究1.2.1 肠内菌的代谢研究图2 芍药苷在肠内菌中的代谢产物代谢素I和代谢素II的可能转化机制芍药苷是赤芍的活性单体成分之一，在心脑血管方面有非常显著的作用.近几年研究表明，芍药苷口服给药后，直接吸收的很少，生物利用度较低[36,37]，在临床应用过程中受到很大的限制.此外有文献报道，芍药苷静脉给药后主要以原型从肾脏排泄，离体肝灌流结果显示它几乎不能被代谢[38].无菌大鼠和普通大鼠灌胃芍药苷，芍药苷在血浆中的动力学参数表明它在肺、肠壁和肝脏中几乎不能被转化和吸收[39].基于上述文献的报道，芍药苷药理作用可能是由其代谢物产生的，且主要在肠内菌中被代谢[40].因此研究芍药苷的肠内菌代谢产物，对于深入了解其药效机制意义重大.日本学者Masao Hattori等人[39]成功在人肠内菌体外培养液中得到了芍药苷代谢产物芍药苷代谢素(Paeonimetabolin)I、II、III.芍药苷代谢素I 为主要代谢产物，是一对立体异构体，分别为7S构型和7R构型.芍药苷代谢素II 只出现在转化前期，芍药苷代谢素III的量很少，结构至今尚未鉴定[41].根据芍药苷代谢素I、II的结构，推测它们可能的形成机制[42]如图2所示.近几年人们对芍药苷在肠内菌温孵培养深入研究[43]，发现芍药苷在人肠内菌中代谢反应较复杂，既有简单的氧化、水解反应，又有重排及结合反应.水解反应主要是在芍药苷分子上发生了脱糖和脱苯甲酰反应，得到苷元或去苯甲酰芍药苷代谢产物.氧化反应主要是芍药苷的葡萄糖分子被氧化成葡萄糖醛酸.重排反应是芍药苷在肠内菌的作用下蒎烷结构发生改变，转化成芍药苷代谢素I和芍药苷代谢素II[39].结合反应主要是芍药苷经过代谢后在糖的6位上结合了葡萄糖或苯甲酰基.作为赤芍单萜苷中的另一种活性成分芍药内酯苷，也具有广泛的药理活性，相比芍药苷，芍药内酯苷无半羧醛结构，但有内酯结构，是芍药苷的同分异构体.基于芍药苷的代谢特性，有学者开展芍药内酯苷在健康成人粪便的肠内菌体外代谢研究[44,45]，发现芍药内酯苷在肠内菌中产生两种转化产物，分别为芍药内酯A(paeonilactone A)和芍药内酯B(paeonilactone B).代谢时程研究表明，芍药内酯苷在24 h内被完全代谢，芍药内酯B作为芍药内酯苷的代谢中间体很快产生，在达到最大浓度后逐渐减少并消失.而芍药内酯A的生成则迟于芍药内酯B，当检测不到芍药内酯B时，芍药内酯A的生成量达最大，约相当于芍药内酯苷的60%多.根据转化产物和芍药内酯苷的结构特性，推测它们的转化过程如图3所示.图3 芍药内酯苷在人肠内厌氧性细菌的可能转化机制1.2.2 肝微粒体的代谢研究药物口服进入机体后，会在体内各种酶的作用下发生水解、氧化、还原、结合等代谢反应，由于肝脏中含有参与药物代谢的庞大酶系(其中最重要的是CYP450酶系)，因此肝脏是药物代谢的重要场所.在药物体外代谢研究中，以肝脏为主要器官的代谢模型具有强大的优势，被广泛应用[46].肝微粒体代谢模型就是从动物肝脏内获取肝微粒体，体外模拟动物体内的温度和生理环境，在氧化还原辅酶的作用下，与药物发生代谢反应.通过液质检测的技术对代谢产物进行结构鉴定，发现芍药苷在肝微粒体中代谢物较少，以I相代谢为主，主要发生氧化、水解和开环等反应，此外，蒎烷结构和酯键是主要代谢位点[43].1.3 芍药苷和芍药内酯苷的体内代谢研究由于药物与机体作用后,主要以原型或代谢产物的形式经胆汁、尿液或粪便排出.研究药物的体内代谢可以综合的考虑体内各种因素对药物的影响，能够更全面更真实地反映药物在生物体内代谢的整体特征.芍药苷的体内代谢研究主要是大鼠口服给药后，经过一段时间间隔，收集大鼠血液、尿液、粪便等生物样本，然后通过液质联用的方法对样本进行分析，结果显示[47]，芍药苷在体内的代谢产物有芍药内酯苷、4-O-甲基去苯甲酰芍药苷、乙酰化芍药苷、芍药苷代谢素I葡萄糖醛酸异构体II、芍药苷代谢素I葡萄糖醛酸异构体I、氧化芍药苷代谢素II葡萄糖苷，以及葡萄糖醛酸和硫酸结合物等，可见芍药苷在体内代谢时发生了水解、氧化、开环和结合等反应，且在尿液和粪便中的代谢产物主要是葡萄糖醛酸和硫酸的结合物.Cao等人[25]对芍药苷和芍药内酯苷也进行了体内代谢研究，通过检测大鼠的尿液和胆汁样本，发现芍药苷在体内代谢中产生了芍药苷代谢素I、芍药苷代谢素II、氧化芍药苷、去苯甲酰芍药苷和葡萄糖醛酸结合产物，同样可以看出糖苷键、酯键、苯环是芍药苷的主要代谢位点.而芍药内酯苷与芍药苷的代谢产物有很大的相似性，这可能与二者结构的相似性有关.二者的代谢都以水解和结合反应为主，对于芍药苷来说，另外的代谢途径是苯环的氧化和葡萄糖醛酸的结合；而芍药内酯苷以酯键的水解为主要代谢步骤，其次为糖苷键的水解和葡萄糖醛酸的结合，且芍药内酯苷在体内能被转化成芍药苷.2 芍药苷和芍药内酯苷的药代动力学研究2.1 药代动力学简介药代动力学是一门用数学分析手段来处理药物在体内动态过程的学科，其目的在于揭示药物在体内吸收、分布、代谢和排泄过程中“血药浓度-时”或“量-时”的变化，有助于了解药物的代谢规律及毒性或潜在的风险，为临床用药的有效性和安全性提供实验依据[48].通常使用HPLC-MS等技术测定口服或静注给药后大鼠的血浆药物浓度，以此来计算该药的药代动力学参数，主要包括[49]：药峰浓度(Cmax)、达峰时间(Tmax)、半衰期(t1/2)、药时曲线下面积(AUC)、清除率(CL)、表观分布容积(Vd)、生物利用度(F)、平均驻留时间(MRT)等.Cmax是衡量药物吸收程度的一个重要指标；Tmax反映药物进入体内的速度，吸收速度快则达峰时间就短；t1/2直观反映了药物从体内消除的速度；AUC是衡量药物在人体内被利用程度的一个重要参数，反映药物进入人体循环的相对量；CL反映药物或代谢物经肾被排出体外的速度；Vd反映了药物在体内分布广窄的程度，数值越高表示分布越广；F是评价药物吸收程度的重要指标.MRT表示药物分子在体内平均停留时间.2.2 大鼠赤芍灌胃给药芍药苷和芍药内酯苷的药代动力学研究Feng，Jiang等人[50-52]利用赤芍提取物将大鼠灌胃给药，于给药后5，10，15，20，30，60，90，120，180，240，360，540 min采血.得到的血液一般用甲醇或乙腈等有机试剂涡旋、离心除去蛋白，进行液质定量检测.质谱条件为：多反应离子监测模式(MRM)；定量的离子对信息(负源)：芍药苷m/z 525.2→121.0，芍药内酯苷m/z 525.2→121.0，栀子苷(内标) m/z 433.2→225.1[50]；正源：芍药苷m/z 498→179，芍药内酯苷m/z 481→197，栀子苷(内标) m/z389→209[53]；于双慧等[53]通过大鼠赤芍灌胃给药，检测结果显示芍药苷和芍药内酯苷的药时曲线趋势一致，Tmax 、t1/2非常接近，在大鼠体内都呈现出吸收快、消除亦快的特点，根据药动学过程二者均符合二室开放模型.Feng[50]等人也得出相似的结果.芍药苷和芍药内酯苷的这种药动学行为的相似性可能与其结构相似有关.两者作为赤芍的有效活性成分，这种药动学行为有利于及时发挥药效，达到治疗的目的.赵朕雄[20]通过对ICR小鼠口服给药芍药内酯苷，研究其在不同时间段，药物在鼠不同组织内的分布情况，结果显示芍药苷在肠、胃、肝中分布较多，肺、心、脑中分布较少，该研究为解释药物的药理活性提供了依据.例如，现代药理学研究[51,54-55]表明，芍药内酯苷具有抗抑郁的活性，其血液浓度在纳克级即可发挥药效，被列为抗抑郁的候选药物.原因可能是由于芍药内酯苷的结构，使其具有一定的脂溶性，能透过血脑屏障，在大脑中有分布，为其发挥保护脑神经的药效提供物质基础.结合对其药动学的研究，作为抗抑郁药，芍药内酯苷的半衰期较短，需要药剂学延长其药效时间.2.3 大鼠赤芍静注给药芍药苷和芍药内酯苷的药代动力学研究He等人[56]利用赤芍提取物将大鼠静注给药，研究正常大鼠和脑缺血再灌注模型大鼠芍药苷的药动学性质.芍药苷给药量为60 mg/kg，分别在0，5，10，15，30，60，90，120，240 min采血.药动学参数表明，较正常组大鼠，芍药苷在脑缺血再灌注模型大鼠中药物作用时间更长，代谢更慢，血药浓度更高，且分布更广.导致上述的原因，可能是由于脑缺血再灌注模型中大鼠体内的一些酶和跨膜转运的能力发生改变.通过对芍药苷正常组和模型组大鼠研究，发现药物在模型组中停留时间更长，药物浓度更好，因此可达到对大鼠脑缺血再灌注模型损伤的保护，但这种病理模型下药物的累积作用，也为该药在临床使用时的安全性和有效性提供指导. 何峰等人[52]通过赤芍水提物将大鼠静脉给药，来研究芍药内酯苷和赤芍中其他两种含量较少的单萜成分(氧化芍药苷和苯甲酰芍药苷)在体内的代谢情况.研究发现，这三种成分在大鼠体内均符合二室药动学模型，且药物在体内的分布和消除都比较迅速，但三者的分布容积存在较大的差异，氧化芍药苷和苯甲酰芍药苷是芍药内酯苷的10～20倍.就清除率而言，苯甲酰芍药苷>氧化芍药苷>芍药内酯苷，即芍药内酯苷被代谢的速度最慢，在体内停留的时间最长.此外，芍药内酯苷药时曲线下面积要明显大于苯甲酰芍药苷和氧化芍药苷，这可能不仅与三者在赤芍提取物中的含量有关，还可能与芍药内酯苷在体内清除率低、分布容积小而增加了其在血浆中的暴露量有关.三者在大鼠体内的药动学参数的差异性在一定程度上反映了中药多成分、多作用机制的特征，因此开展多指标成分药动学研究，更有利于了解中药在体内全面的代谢过程，为中药科学用药提供依据.3 结语研究药物代谢及药动学性质在药物研发过程中的地位越来越重要.通过研究芍药苷和芍药内酯苷在体内的代谢规律，鉴定其代谢物的结构，可深入了解药物在体内发挥药效的物质基础；通过对芍药苷和芍药内酯苷的药代动力学研究可清楚地认识药物在体内的吸收、分布、代谢、排泄规律，从而科学地阐述药物的安全性与有效性，预防不良反应，指导医师正确用药.本文从药物代谢角度出发结合药代动力学研究，总结了芍药苷和芍药内酯苷的体内外代谢研究进展，并从口服和灌胃角度探讨了芍药苷和芍药内酯苷在体内的代谢规律.参考文献：【相关文献】[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[Z].北京：中国医药科技出版社，2015：158[2] 吴杨峥.川赤芍中单萜苷类成分的分离及其抗肿瘤活性研究[D].泉州：华侨大学，2013.[3] 杨柳，许舜军，吴金雄，等.白芍、赤芍的比较研究概况[J].中药新药与临床药理，2011(05)：577-580.[4] Matsuda H,Ohta T,Kawaguchi A,et al.Bioactive constituents of Chinese natural medicines.VI.Moutan cortex.(2):structures and radical scavenging effects of suffruticosides A,B,C,D,and E and 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快速测定白芍中三种芍药苷类化合物含量的方法[发明专利]

专利名称：快速测定白芍中三种芍药苷类化合物含量的方法专利类型：发明专利
发明人：王瑞,黄山君,王峥涛,石燕红,杨莉,杨娜
申请号：CN201110321308.2
申请日：20111020
公开号：CN102495143A
公开日：
20120613
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开一种快速测定白芍中三种芍药苷类化合物含量的方法，属于医药技术领域。

该方法包括如下步骤：(1)对待测白芍样品进行预处理；(2)通过高效液相色谱法或超高效液相色谱法测定经预处理后的白芍样品中芍药苷亚硫酸酯、芍药苷和芍药内酯苷的含量。

该测定方法简便快速、准确度好，可用于白芍中芍药苷类化合物的多成分含量测定。

申请人：上海中医药大学
地址：201203 上海市浦东新区蔡伦路1200号
国籍：CN
代理机构：上海伯瑞杰知识产权代理有限公司
代理人：吴瑾瑜
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芍药苷

芍药苷提取及结构鉴定一.文献综述:赤芍为毛茛科植物芍药(paeonia lactiflora Pall．)或川赤芍(P．veitchii lynch)的干燥根。

赤芍有免疫调节作用，临床常用于肿瘤和血瘀症的治疗，尤以肝病常见【1】。

在纯化过程多为用液液分配法，硅胶或树脂柱法，来除去非芍药苷成分。

而结构鉴定现在多为核磁共振。

芍药苷的微生物转化研究

芍药苷的微生物转化研究王晓玲【摘要】目的研究芍药苷的乳杆菌类微生物转化生成活性代谢产物芍药苷代谢素-I的优势菌株和转化条件.方法选择15株乳杆菌菌株对芍药苷进行微生物转化,以芍药苷代谢素-I的产量为指标,利用单因素法优化微生物转化工艺.结果发现有10株菌对芍药苷有转化活性,L.brevis AS 1.12的转化活性最高,利用波谱法对芍药苷代谢产物进行了鉴定.结论利用L.brevis AS 1.12转化芍药苷为芍药苷代谢素-I的最优条件:温度为37℃、转化时间为6 h、pH值为7.5、底物浓度为5 mg/m1.【期刊名称】《西南民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(037)003【总页数】6页(P425-430)【关键词】芍药苷;微生物转化;乳杆菌【作者】王晓玲【作者单位】西南民族大学少数民族药物研究所,四川成都610041【正文语种】中文【中图分类】R284微生物转化是通过微生物细胞或酶对复杂的底物进行结构修饰, 也就是利用微生物代谢过程中产生的某个或某一系列的酶对底物进行的催化反应[1]. 芍药苷为芍药的主要有效成分, 具有镇痛解痉、抗炎、抗应激性溃疡、扩张冠脉血管、对抗急性心肌缺血以及抑制血小板聚集等多方面的作用[2]. 近年研究表明, 口服芍药苷后直接吸收很少, 生物利用度低, 提示芍药苷在肠道首先被肠内菌降解, 其代谢物起到芍药苷的药理作用[3]. 日本的Masao Hattori等首先报道了芍药苷在人肠内菌体外培养液中转化成芍药苷代谢素-I、Ⅱ、III(Paeonimatabolin-I、Ⅱ、III见图1)[4], 芍药苷代谢素-I为主要产物, 芍药苷代谢素-II只在转化前期出现, 芍药苷代谢素-III极少, 至今未鉴定结构.药理学研究表明芍药苷代谢素-I (ED: 41.3 mg, 静注)对遗传性癫痫E1小鼠的中枢性痉挛显示比芍药苷(ED:>100 mg, 静注)有更强的拮抗作用[5], Ola Ahmed Heikal等人用酶免疫分析法定量测定了口服芍药苷后大鼠血浆中的芍药苷和其主要代谢物芍药苷代谢素-I的血药浓度(doses: 0.5 mg和5 mg/kg). 芍药苷代谢素-I的血药浓度远大于芍药苷的血药浓度, 说明口服芍药苷后, 芍药苷代谢素-I是血液中的主要化合物, 也是主要的活性成分,试验证明芍药苷代谢素-I的口服生物利用度几近100%[7].故以芍药苷代谢素-I为活性物质研制具有自主知识产权的新药有着很好的前景. 而短乳杆菌分布广泛, 更是人体消化系统尤其是小肠中的主要细菌[8]. 因此本文报道了利用乳杆菌发酵生产芍药苷代谢素-I的工艺研究,为进一步新药研究与开发提供依据.1. 1 主要试剂和仪器主要仪器: Perkin-Elmer 341旋光仪, Perkin-Elmer FTIR红外光谱仪, Bruker AV-600核磁共振仪(TMS为内标),Finnigan LCQDECA 质谱仪, CAGMA TLC scaner 3薄层色谱扫描分析仪, 薄层层析(GF254)和柱层析硅胶(160-200,200-300目)均为青岛海洋化工厂产品.冷冻离心机(HITACHI 20PR-52D型), 医用型净化工作台(CSW-CJ-2FD型), 光照培养箱(LRH-250-G型),高压蒸汽灭菌锅, 旋转蒸发仪(BüCHI R114).主要试剂: 酵母膏(上海酵母厂)、葡萄糖(食品级河北健民淀粉糖业有限公司)、蛋白胨(飞天牌)、乙酸乙酯、磷酸二氢钾、氯化钠(分析纯成都化学试剂厂)、西红柿(市售)、Twen-80(中国化学试剂三厂)、芍药苷(本课题组分离鉴定)微生物: 中国科学院微生物研究所, 轻工业发酵研究所保藏菌种植物乳杆菌Lactobacillus plantarum AS 1.11, AS 1.12, AS 1.13, AS 1.3, AS 1.550, AS 1.551.短乳杆菌Lactobacillus brevis AS1.7, AS 1.1, IFFI 6004, IFFI 6009, IFFI 6024, IFFI 6026, IFFI 6042.奢酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus IFFI 6005, IFFI6005-21. 2 培养基所有培养实验均在番茄培养基中进行.番茄培养基的配制方法:将200克去蒂新鲜番茄切碎, 煮沸, 纱布过滤, 滤液加酵母膏7.5 g, 葡萄糖10 g, 蛋白胨7.5 g, 磷酸二氢钾 2 g, Twen-80 0.5 ml, 混匀, 加自来水至1000 ml, 用10%氢氧化钠调pH 7.5, 115℃灭菌30min.1. 3 实验方法1.3.1 细胞培养先将菌种接种于20 ml厌氧管, 37 ℃培养箱培养24 h作为种子液备用.在超净台上按10%接种量把液体菌种接入装满培养基的8层纱布包扎的三角瓶, 37 ℃培养箱培养24 h. 将培养好的液体培养物于5000 rpm离心30 min, 弃去上层清液, 用生理盐水洗涤细胞一次, 称重, 用于微生物转化.1.3.2 微生物转化实验(a) 胞外酶、胞内酶分析: 分别取适量细菌培养物离心上清液及细菌菌体同缓冲液制成的菌悬液, 加入相同浓度的底物芍药苷进行保温6小时, 用乙酸乙酯萃取三次, 萃取液浓缩, 做TLC分析, 结果培养物离心上清液反应系统未检出芍药苷代谢素-I 的存在, 而细菌菌悬液反应系统中则检出芍药苷代谢素-I的存在, 因此本催化酶应在细胞内, 应取细菌的细胞作酶促转化反应.(b) 筛选试验: 将细胞悬浮于磷酸盐缓冲液(pH 7.5), 加入芍药苷底物0.8 mg, 于37℃在厌氧条件下转化6小时, 用乙酸乙酯萃取转化液3次, 萃取液浓缩至干, 以甲醇5 ml定容, 做薄层色谱分析.(c) 芍药苷代谢素-I、PF的定量分析方法[2]采用薄层色谱扫描法, 具体条件如下:薄层色谱扫描仪: 瑞士CAGMA-TLC Scaner 3薄层色谱扫描仪入射波长: 560 nm参比波长: 780 nm展开剂: 苯-氯仿-甲醇(5: 5: 1)(V/V)显色剂: 5%香草醛-浓硫酸溶液显色温度及时间: 105℃, 3～5分钟(d) 扩大实验: 将转化活性最高的菌株做扩大培养(1000 ml), 细胞加上底物芍药苷40 mg, 用于微生物转化,转化液用乙酸乙酯萃取, 用于分离标准品.分离及纯化: 将乙酸乙酯萃取部分以硅胶(160－200目)拌样, 上硅胶柱(200－300目), 以乙酸乙酯－甲醇(10: 1)洗脱, 得化合物15的油状物(18 mg), 化合物16 (24mg).1. 4 转化产物的分离鉴定化合物1是一对差向异构体(见图2), 在普通条件下不易分开, 但是在NMR上可以完全辨别开来, 以下是其R、S异构体的鉴定数据.化合物1a: 淡黄色油状物, +ESI-MS给出分子离子峰m/z 198[M]+,180[M−H2O]+; 1H-NMR: δH 1.12 (3H, d, J2.5Hz和13.7, 3.7Hz), 2.49 (1H, m, -CH-CO-), 2.69 (2H, s, -CO-CH2-), 5.17 (1H, br s, -O-CH-O-). 13CNMR数据与文献报道一致[2] (见表1-4), 因此鉴定化合物1a为S-芍药苷代谢素-I(S-paeonimetabolin-I).化合物1b: 淡黄色油状物, +ESI-MS给出分子离子峰m/z 198[M]+,180[M−H2O]+; 1H-NMR: δH 0.90 (3H, d, J =7.5 Hz, H-8), 1.29 (3H, s, H-10), 2.07 (1H, br q, J = 7.5Hz, H-7), 2.15, 2.35 (each 1H, dd, J = 13.5, 2.5Hz和13.5,3.4Hz, H-5), 2.60, 2.64(2H, Abq, J=17.7Hz, H-2), 2.65(1H, m, H-4),5.14(1H, br s, H-9). 13CNMR数据与文献报道一致[2] (见表1), 因此鉴定化合物1b为R-芍药苷代谢素-I(R-paeonimetabolin-I).以下将芍药苷代谢素-I简写为PM-I, 芍药苷简写为PF.1.5 活性菌株的筛选对15株试验菌进行转化活性筛选, 按每克湿细胞生成的化合物1(PM-I)在TLC上显色情况, 做薄层扫描分析, 以峰面积计算, 最高的为5分计算, 转化结果列于表2. 结果表明L. brevis AS 1.12的转化活性最高, 因此将其作为优势菌株, 进行转化条件的研究.1.6 芍药苷的微生物转化条件的优化经过预实验表明, 影响转化率的因素主要有: 温度、缓冲液的pH值、底物浓度和转化时间四个因素. 定下其中三个的量, 考察剩下一个因素对转化率的影响.a. 转化温度的影响将缓冲液pH定为7.0、转化时间定为6 h、底物浓度为5 mg/ml, 考察不同温度对转化率的影响. 生成的PM-I按峰面积最高为5分计算, 结果见表3和图3.以上结果表明转化温度定在37℃较为合适, 与人类的体温接近. 以上结果表明, pH 值在7.5时, 比较合适.b. pH的影响将温度定为37℃, 转化时间为6 h, 底物浓度为5mg/ml考察不同pH值下的影响; 计算方法同上, 结果见表4和图4.c．底物浓度的影响将温度定为37℃、转化时间为6 h、pH为7.5 考察不同底物浓度对PM-I的影响,计算方法同上, 结果见表5和图5.上述结果表明, 底物浓度为5mg/ml时, 较为合适.d. 转化时间对转化的影响将温度定为37℃、底物浓度为5mg/ml、pH为7.5, 考察不同时间对转化率的影响, 计算方法同上, 结果见表6和图1-14.以上结果表明, 转化时间为6小时较为合适.从上面5个单因子实验得到的数据可以得出以下优化结果: 温度为37℃、转化时间为6 h、pH值为7.5、底物浓度为5 mg/ml.根据以上的研究结果, 确定工艺路线如下:本论文从15株纯培养中筛选出10株对芍药苷具有转化活性的菌株, 其中Lactobacillus plantarum AS.1.12转化活性最好, 从转化液中分离鉴定了芍药苷代谢素-I, 利用单因素试验对转化条件进行了优化, 确定了目前相对合理的工艺条件, 为寻找活性更好的化合物及创新药物的研究提供了理论基础.【相关文献】[1] 占纪勋. 青蒿素等五种天然活性成分的微生物转化研究[D]. 杭州: 浙江大学, 2002.[2] 姜清华, 邓晶晶, 吴琼, 菅凌燕.芍药苷的药代动力学研究进展[J]. 实用药物与临床, 2010,13(6):451-458.[3] 杨秀伟, 郝美荣, 服部征雄. 中药成分代谢分析[M]. 北京: 中国医药科技出版社, 2003: 266-270.[4] MASAO HATRORI, YUE-ZHONG SHU, MINEO SHIMIZU, et al. 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芍药内酯苷或芍药苷用于预防和或治疗肾性贫血的用途[发明专利]

专利名称：芍药内酯苷或芍药苷用于预防和/或治疗肾性贫血的用途
专利类型：发明专利
发明人：张作光,田晖
申请号：CN202080072908.7
申请日：20201120
公开号：CN114585368A
公开日：
20220603
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：芍药内酯苷、芍药苷或含有芍药内酯苷或芍药苷的组合物在制备用于增加内源性促红细胞生成素的药品、保健品、食品营养剂或食品添加剂中的用途；芍药内酯苷、芍药苷或含有芍药内酯苷或芍药苷的组合物在制备用于通过上调内源性促红细胞生成素预防和/或治疗原发性贫血、继发性贫血或肾性贫血的药品、保健品、食品营养剂或食品添加剂中的用途。

芍药内酯苷、芍药苷源于药食同源的白芍药材，是天然存在的单体药物，与现有技术的其他化合物药物相比，具有更高的安全性和患者依从性。

申请人：张作光
地址：100013 北京市朝阳区兴化路2号院2号楼1门202
国籍：CN
代理机构：北京泛华伟业知识产权代理有限公司
代理人：郭广迅
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白芍中芍药苷和芍药内酯苷在大鼠血浆中含量测定及药动学研究

白芍中芍药苷和芍药内酯苷在大鼠血浆中含量测定及药动学研究曾洁;华丽萍;黄彬;张玉琴;徐伟;林羽【期刊名称】《中国中医药信息杂志》【年(卷),期】2018(025)002【摘要】目的建立测定大鼠血浆中芍药苷和芍药内酯苷含量的高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)方法,并用于研究其在大鼠体内的药动学特征.方法采用HPLC-MS/MS方法,色谱柱为Ultimate RXB-C18(2.1 mm×100 mm,3μm),流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液(30:70,V/V),流速0.3 mL/min,柱温30℃,进样量5μL,检测波长230 nm;定量离子对为:m/z 525→120.9(芍药苷和芍药内酯苷)、m/z 433→224.8(内标物栀子苷).8只雄性SD大鼠,给予6 g原药材/kg白芍汤灌胃,分别于0、5、10、20、30、45、60、90、120、180、360、540、720 min眼眶静脉取血0.5 mL,测定血药浓度,采用DAS V2.1.1药动学软件计算其主要药动学参数.结果芍药苷和芍药内酯苷分别在40～8000 ng/mL和40～10000 ng/mL范围内线性关系良好(r值分别为0.9996和0.9995),日内和日间精密度RSD均小于6％,提取回收率分别为92.33％～95.43％和88.65％～95.62％,基质效应分别为99.29％～107.86％和93.79％～104.05％,方法学考察均符合要求.主要药动学参数:芍药苷、芍药内酯苷Cmax分别为(8.50±2.01)、(4.13±0.72)μg/mL,tmax分别为(10.00±1.73)、(20.00±2.11)min,t1/2分别为(142.98±30.11)、(127.68±35.74)min.结论本研究所建立的HPLC-MS/MS方法简单可行、准确可靠、灵敏度高、专属性强,可应用于研究与分析芍药内酯苷和芍药苷在大鼠体内的药动学特征.【总页数】6页(P89-94)【作者】曾洁;华丽萍;黄彬;张玉琴;徐伟;林羽【作者单位】福建中医药大学康复医疗技术国家地方联合工程研究中心,福建福州350122;福建中医药大学药学院,福建福州 350122;福建中医药大学康复医疗技术国家地方联合工程研究中心,福建福州 350122;福建中医药大学药学院,福建福州350122;福建中医药大学药学院,福建福州 350122;福建中医药大学药学院,福建福州 350122【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.白芍中芍药苷的含量测定及白芍提取物的抗氧化作用研究 [J], 孙雪2.白芍中芍药内酯苷和芍药苷制备工艺研究 [J], 吴修红;马艳春;何录文;孙畅;杨恩龙;孙晖3.不同种质和不同部位白芍原植物中芍药苷和芍药内酯苷的含量测定 [J], 周学刚;陈淑欣;魏东华;孙世芹;宗鸣4.赤芍中芍药苷和芍药内酯苷的代谢及药动学研究进展 [J], 刘玉峰;孙珊珊;朱丽君;胡延喜;马海燕;李鲁盼;卢晓丹5.HPLC-MS/MS测定大鼠血浆中的芍药苷及其药动学研究 [J], 武洁;姚楠;王大为因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HPLC法测定新疆芍药和窄叶芍药芍药苷含量终稿

HPLC法测定新疆芍药和窄叶芍药根中芍药苷的含量马英高婷婷谭勇* 田丽萍魏雯王珊珊王恒（石河子大学药学院，新疆石河子，832002）[摘要] 目的：测定并比较新疆芍药和窄叶芍药根中芍药苷的含量。

方法：采用HPLC，PLATISIL C18色谱柱（5 μm，250×4.6 mm），流动相:乙腈-0.1%磷酸水溶液(17:83)，流速：1.0 mL·min-1，柱温30℃，检测波长230 nm；结果：窄叶芍药芍药苷的含量为2.56%，新疆芍药芍药苷为2.45%。

结论：窄叶芍药根中芍药苷含量较高，为充分利用芍药植物资源提供参考依据。

[关键词] 新疆芍药；窄叶芍药；芍药苷芍药为毛茛科芍药属(Paeonia lactiflora Pall）的一种常见传统中药，常以根部入药。

我国约分布有8个种以及6个变种[1,2]，在新疆西北部阿尔泰及天山山区主产有新疆芍药(P. sinjiangensis K.Y. Pan)和窄叶芍药(P. anomala L.)的两个种。

现代药理研究表明，芍药苷为芍药根中的主要活性成分，其具有护肝、抗病毒及降压镇痛、清热解痉等作用[3-6]。

目前对新疆芍药和窄叶芍药中芍药苷研究鲜有报道。

因此，本研究采用高效液相色谱法对新疆芍药和窄叶芍药根中芍药苷的含量进行测定和比较，为新疆芍药和窄叶芍药的内在质量评价及其资源的开发利用提供科学依据。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 仪器与试剂Water 2695 高效液相色谱仪；KQ 3200 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Sartorius BP211D 十万分之一分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

甲醇、乙腈均为色谱纯（SK Chemicals公司）；水为重蒸去离子水。

1.1.2 对照品及供试药材对照品：芍药苷（购自成都曼思特生物科技有限公司，批号MUST-11081801）。

药材：芍药样品采自于新疆塔城地区裕民县，经石河子大学药学院李鹏副教授分别鉴定为毛茛科新疆芍药(P. sinjiangensis K.Y. Pan)和基金项目：国家自然科学基金（30860022），石河子大学“263”青年骨干教师项目（YX07011）与石河子大学研究生精品课程（2012yp-kc06）资助。

芍药苷的水解动力学研究

收稿日期:2009 04 20; 修订日期:2009 08 02基金项目:科技部国际科技合作项目(No .2008DFA31050)作者简介:刘倩(1978 ),女(汉族),吉林桦甸人,现任华北煤炭医学院讲师,博士学位,主要从事中药化学研究工作.*通讯作者简介:李继安(1962 ),男(汉族),河北廊坊人,现任华北煤炭医学院教授,博士学位,主要从事中西医结合临床工作.芍药苷的水解动力学研究刘倩1,刘永刚2,李继安1*,喇万英1(1.华北煤炭医学院,河北唐山 063000; 2.北京中医药大学中药学院,北京 100102)摘要:目的考察芍药苷在不同p H 条件下的水解情况。

方法D i a m onsil-C 18色谱柱(250mm 4.6mm,5 m );流动相为乙腈-0.1%的甲酸水溶液(15 85);检测波长为230n m;进样量为10 ;l 柱温为室温,流速为1.0m l !m i n -1。

结果芍药苷对照品在0.0215~0.215 g 范围内,进样量与峰面积间呈良好的线性关系,r =0.9999,并得到不同p H 条件下的水解动力方程。

结论芍药苷的水解符合一级动力学模型。

在不同p H 条件下,芍药苷的水解速度不同。

关键词:芍药苷; 水解动力学; 高效液相色谱中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1008 0805(2010)03 0543 01St udy on H ydrolysis K i n etics of PaeoniflorinL IU Q ian 1,L IU Y ong gang 2,L I J i an 1*,LA W an y i n g1(1.N orth China C oalM edical Universit y ,Tang s han 063000,China;2.C ollege of Trad itional Chinese Phar m a cology,B eijing University of Trad itional ChineseM edicine,B eijing 100102,China )Abst ract :O bjective T o i nvesti gate t he hydrolysis kine ti cs o f P aeon iflor i n i n d ifferent p H v al ues .M ethod s D ia m onsil-C 18co l u m n(250mm 4.6mm,5 m )w as used w i th the use o f t he aceton i tril er -0.1%for m ic ac i d (15 85)as t he m ob ile phase ,thefl ow rate was 1.0m l !m i n -1and the detection wave length w as set at 230n m.Resu lts P aeoniflorin w as w ell separated ,the li nearrang e o f paeoniflorin w as 0.0215~0.215 g (r =0.9999).H ydro l ysis k i neti cs equations in d ifferent p H va l ues was obta i ned .Conc l u sion The deg rada ti on fo llo w s pseudofirst-o rder k i netics .H ydro l ys i s rate is different i n var i ous p H va l ues .K ey w ords :P aeon ifl or i n ; H ydro l ysis K i netics; HPLC 白芍为毛茛科植物芍药Paeonia lacti f l ora P al.l 的干燥根,有平肝止痛,养血调经,敛阴止汗的功能[1]。