组织及血液酸性磷酸酶(ACP)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
酸性磷酸酶(ACP)检测
迪信泰检测平台
酸性磷酸酶（ACP）检测
酸性磷酸酶（Acid phosphatase, ACP）是一种是非特异性磷酸单酯酶，可以催化几乎所有的磷酸单酯的水解反应，生成无机磷酸和相应的醇、酚、糖等，还可以催化磷酸基团的转移反应，并直接参加磷代谢，在钙、磷的消化、吸收和分泌过程中发挥了重要的作用。
诱导并分泌酸性磷酸酶是植物应对低磷环境的重要适应性反应之一，血清酸性磷酸酶活力已成为诊断和监测多种疾病重要手段。
迪信泰检测平台采用生化法，结合相应的酶类的试剂盒可以高效、精准的检测酸性磷酸酶的活性变化。
此外，我们还提供其他酯酶类的检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定酸性磷酸酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. 酸性磷酸酶活性信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
酸性磷酸酶的
4000rpm，10min离心
（溶解ACP，
沉淀杂蛋白） 上清液 IV
EDTA9ml，饱和硫酸铵 10ml /100ml上清液 IV，
4000rpm，10min离心
2倍体积预冷甲醇
（ 沉淀ACP）
缓慢搅拌
沉 淀（酶纯化物）
蒸馏水溶解，洗涤 4000rpm，10min离心
上清液 V （酶液）
二、 ACP的比活性分析 1.各上清液中蛋白质含量测定
原理：染料结合比色法——CBBG-250， max=595nm；
步骤：标准曲线制作
各上清液中总蛋白测定（做平行管，进 行重复实验，减少随机误差。
2.各上清液中ACP活性测定
酚-4-AAP显色法:以磷酸苯二钠为底物，由 ACP催化生成苯酚，在碱性条件下苯酚与4AAP缩合最终生成红色醌类化合物，max = 510 nm；
上清液I 中ACP的比活性
各上清液中ACP的活性 总体积 酶的回收率= 上清液I中ACP的活性总体积
还可以计算蛋白回收率，反映纯化效果，代表方法的特异性。
三、 ACP的动力学分析 1. 时间进程（t-A ）曲线
酚生 A 成量
时间（t）
ACP的 t-A 曲线
2. 酶浓度-速度（[E]-A）曲线
反应 速度
实验安排
1. 实验分组 2. 实验时间安排 3. 实验内容选择与分工 4. 实验报告书写
活性测定的原理、方法和影响因素； 4. 熟悉酶活性测定的条件选择和方法建立。
试剂与器材
一、ACP的分离纯化试剂：见实验 教材P31； 二、ACP动力学分析试剂：见实验 教材P35；
三、器材：普通离心机，721分光光 度计，恒温水浴箱，研钵等。
实验内容
过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法
过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC0090规格：50T/48S 产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体0.33mL×2瓶，4℃保存；用时每瓶加入5mL 试剂一；用不完的试剂4℃保存一周；试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。
POD 催化H 2O 2氧化特定底物，在470nm 有特征光吸收。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水操作步骤：一、粗酶液提取：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至470nm，蒸馏水调零。
2、测定前将试剂一、二和三37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min。
3、样本测定表试剂名称（µL）测定管样本15蒸馏水270试剂一520试剂二130试剂三135在1mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录470nm下30s时的吸光值A1和1min30s 后的吸光值A2。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液使用说明
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液使用说明货号：G4561有效期：6个月有效。
产品内容：名称规格（4×10ml）保存试剂(A):TRAP固定液50ml4℃避光试剂(B):TRAP孵育液B1:AS-BI Buffer1ml-20℃避光B2:GBC染色液0.1ml4℃避光B3:TRAP Buffer9ml RT避光临用前，按B1:B2:B3=10:1:90混合，即为TRAP孵育液，即配即用。
试剂(C):苏木素染色液10ml4℃避光试剂(D):甲基绿染色液10ml RT避光产品说明：酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。
溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。
各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5～5.5。
存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase，TRAP)均在细胞滤泡中，并不是释放入血液。
血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞，因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态。
抗酒石酸酸性磷酸酶染色液以萘酚AS-BI为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸和萘酚，萘酚不重氮盐偶联生成有色产物，定位于细胞质中，若细胞内的ACP有抗酒石酸的活性，则呈阳性反应。
该染色液可用于新鲜血涂片、细胞涂片，亦可用于冰冻切片、石蜡切片。
自备材料：1、蒸馏水、恒温箱2、载玻片、推玻片3、光学显微镜操作步骤(仅供参考)：(一)血液、细胞涂片：1、推片：取新鲜血液或骨髓涂片置于载坡片上，推玻片于载玻片保持30度，置于血液或细胞滴液的正前方，稍往后移不血液或细胞滴液接触使后者沿推片下缘散开，再匀速沿载玻片平面平稳向前滑动至铺满血膜为止。
2、自然晾干，TRAP固定液4℃固定30s～3min，多数情况下30～60s即可。
柠檬酸合酶(CS)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法
柠檬酸合酶（CS）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC1060规格：10T/5S产品简介：CS（EC 2.3.3.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中，是三羧酸循环第一个限速酶，是三羧酸循环主要调控位点之一。
CS催化乙酰CoA和草酰乙酸产生柠檬酰辅酶A，进一步水解产生柠檬酸；该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB，在412nm处有特征吸光值。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
产品内容：提取液：液体5mL×1瓶，-20℃保存；试剂一：液体2.5mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：液体0.1mL×1支，-20℃保存；试剂三：液体25mL×1瓶，4℃保存；试剂四：粉剂×1支，4℃保存，临用前加入1mL双蒸水，用不完的试剂仍4℃保存；试剂五：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入500μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；试剂六：粉剂×1支，-20℃保存，临用前加入1.5mL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；操作步骤：一、样本前处理组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：1称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL提取液和10μL试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2将匀浆液600g，4℃离心5min。
3将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
4上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的CS。
5在沉淀中加入200μL试剂一和2μL试剂二，反复吹打充分混匀，用于CS测定。
6柠檬酸合酶酶活即沉淀和上清液中的酶活之和。
二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、试剂三置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中预热10min左右（保证无沉淀）。
土壤酸性磷酸酶(soil acid phosphatase)活性测定试剂盒(分光光度法)使用说明
土壤酸性磷酸酶（soil acid phosphatase）活性测定试剂盒（分光光度法）使用说明货号:BC0140规格:50T/48S产品简介：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。
土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据最适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。
酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。
产品内容：试剂一：液体×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
用前加50mL蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体×1瓶，4℃保存。
试剂四：粉剂×1支，4℃避光保存。
临用前加1152μL无水乙醇（自备），48μL蒸馏水充分溶解。
（变褐色后不能再使用）标准品：液体×1支，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。
操作步骤：一、粗酶液提取：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。
8000rpm，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。
二、测定步骤：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。
2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL蒸馏水，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A空白管。
3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL标准液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A标准管。
4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL上清液，100μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水830μL，混匀后室温静置30min，于660nm 测定吸光度，记为A测定管。
土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4048
土壤酸性磷酸酶（S-ACP）活性检测试剂盒说明书注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：UPLC-MS-4048规格：50T/48S可见分光光度法产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件试剂一液体21mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1瓶2-8℃保存试剂三液体11mL×1瓶2-8℃保存试剂四粉剂×2支2-8℃保存标准品液体1mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：用前加50mL蒸馏水充分溶解，2-8℃保存8周；2、试剂四：临用前取1瓶加576μL无水乙醇（自备），24μL蒸馏水充分溶解，用不完的试剂可以2-8℃保存2周（变褐色后不能再使用）；3、标准品：0.5μmol/mL苯酚标准液。
产品说明：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。
土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据最适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。
酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。
Phenyl Disodium Phosphate S-A CP,H+Phenol+Na2HPO4Phenol+2,6-Dibromobenzoquinone Chlorimide Alkaline Conditions Indoxyl(660nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、分析天平、研钵、可调式移液器、冰、蒸馏水、30-50目筛、乙醇和甲苯（不允许快递）。
实验十一 酸性磷酸酶(ACP)的
二 实验原理
细胞内酸性磷酸酶+作用底物（外加的，含有磷
酸酯，在PH=5.0） → PO43-+Pb2+(外加底物中含 有的) → Pb 3（PO4）2↓无色+S2- → PbS↓棕黑色。 通过一定的条件，保持酶的活性，最后通过有色 沉淀PbS反馈出酸性磷酸酶的存在部位。
网状细胞：酸性磷酸酶
酸性磷酸酶精浆酸性磷酸酶酸性磷酸酯酶碱性磷酸酶偏低碱性磷酸酶偏高磷酸酸性碱性磷酸酶骨碱性磷酸酶血清碱性磷酸酶磷酸酶实验十Βιβλιοθήκη 酸性磷酸酶（ACP）的显 示方法
1.实验目的
2.实验原理
3.试剂与器材
4.操作方法
5.注意事项
6.作业与思考
一、实验目的
1.了解细胞内生物大分子在细胞内存在的部
位。 2.学习酶化学检测方法。
则呈阴性。
温度：37℃，保持酶的活性。 片子注意晾干。
六、作 业与思考
1.图示巨噬细胞中酸性磷酸酶的分布区域。
2.在什么情况下，细胞中酸性磷酸酶会图示 巨噬细胞中酸性磷酸酶的分布区域。 发生变化？
肝再生过程中酸性磷酸酶(ACP)分布及活动性变化
三、试剂与器材
1.材料：小鼠。
2.试剂：淀粉溶液、Gomori硝酸铅作用液、1
％硫化铵溶液等。
3.器材：显微镜、注射器、解剖用具、恒温 水浴锅、载玻片、盖玻片等。
四、操作方法
1.实验前4~6天用无菌注射器取3%淀粉溶液 1ml注射于小鼠腹腔内，每天一次，以激活 吞噬细胞。
2.断颈出死小鼠，抛开腹腔，吸取腹腔液制 备涂片。 3. 10%福尔马林中固定5min。
四、操作方法
4. 放入37℃ACP作用液中处理30min。
alp试剂盒 说明书
碧云天生产的碱性磷酸酶检测试剂盒(Alkaline Phosphatase Assay Kit)是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血清、血浆、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性的试剂盒。
碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase)，也称碱性磷酸酯酶，可以在碱性条件下催化磷酸酯键的水解。
哺乳动物中，肝脏、胆管、肾脏、骨头和胎盘中的碱性磷酸酶活性比较高。
常见的碱性磷酸酶包括肠道碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, intestinal, ALPI)、非组织特异性碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme, ALPL)和胎盘碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, placental type, 也称placental alkaline phosphatase, PLAP)。
干细胞，如iPS中，碱性磷酸酶的活性很高，常被用作iPS成功诱导的标志。
另外，分化的结肠癌细胞中碱性磷酸酶的活性也会显著升高，被当作结肠癌细胞分化程度定性和定量的指标。
此外，血清中碱性磷酸酯酶的升高，被称作高碱性磷酸酶血症(hyperalkalinephosphatasemia)，被认为和恶性胆管阻塞(malignant biliary obstruction)、原发性胆管硬化(primary biliary cirrhosis)、原发性硬化胆管炎(primary sclerosing cholangitis)、肝淋巴瘤(hepatic lymphoma)和肝肉瘤(hepatic sarcoidosis)等肝胆疾病密切相关。
血清中碱性磷酸酶活性升高还和骨头生成密切相关，因为碱性磷酸酶是成骨细胞的副产物。
血清中碱性磷酸酶活性过低也和一些疾病相关。
儿童和孕妇血清中的碱性磷酸酶活性较普通人高一些。
血清中碱性磷酸酶活性范围在20-140U/L。
SOP文件酸性磷酸酶ACP染色
SOP文件酸性磷酸酶（ACP）染色1. 引言酸性磷酸酶（ACP）是一种重要的酶，广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。
ACP染色是一种常用的染色方法，可以用于检测细胞中ACP的表达和定位。
本文档旨在提供一份标准操作程序（SOP）文件，详细描述了ACP染色的实验步骤和注意事项。
2. 材料和试剂准备•ACP抗体：购买自可靠的供应商，存储在-20℃的冰箱中。
•PBS缓冲液：含有0.1%的Tween 20，pH 7.4。
•4%的多聚甲醛（PFA）：用于细胞固定。
•0.1%的Triton X-100：用于细胞渗透。
•3%的过氧化氢（H2O2）：用于抑制内源性酶活性。
•5%的牛血清白蛋白（BSA）：用于阻断非特异性结合位点。
•3,3’-二氨基苯基亚甲基环丙烷（DAB）底物液：用于显色反应。
3. 实验步骤3.1 细胞处理和固定1.将待检细胞培养在适当的培养基中，使其达到适当的生长状态。
2.使用适当的方法将细胞固定在载玻片上，例如用4%的PFA进行细胞固定，固定时间为15分钟。
3.用PBS缓冲液洗涤载玻片3次，每次洗涤5分钟。
3.2 抗原检出4.使用0.1%的Triton X-100进行细胞渗透，渗透时间为10分钟。
5.用PBS缓冲液洗涤载玻片3次，每次洗涤5分钟。
6.使用5%的BSA阻断非特异性结合位点，阻断时间为30分钟。
7.加入ACP抗体，适当稀释后，与载玻片反应，反应时间为1小时。
8.用PBS缓冲液洗涤载玻片3次，每次洗涤5分钟。
3.3 显色反应9.加入3%的H2O2抑制内源性酶活性，反应时间为10分钟。
10.加入DAB底物液进行显色反应，反应时间根据样品的不同，通常为5-30分钟。
11.用PBS缓冲液洗涤载玻片3次，每次洗涤5分钟。
4. 实验结果和分析使用光学显微镜观察载玻片下的细胞，如果目标细胞中有ACP的表达，则可见棕色的沉积物或颗粒。
通过比较不同实验组的染色结果，可以评估ACP的表达和定位情况。
5. 注意事项•所有步骤中的时间和温度应严格控制，以保证实验结果的准确性和可重复性。
临床检验技术士《专业实践能力》试题及答案解析一
临床检验技术士《专业实践能力》试题及答案解析一[单选题]1.脑膜炎奈瑟菌在普通光学显微镜下为（（江南博哥））。
A.双球菌B.链球菌C.葡萄球菌D.四联球菌E.八叠球菌参考答案：A参考解析：脑膜炎奈瑟菌为革兰阴性双球菌，菌体呈肾形，成对排列。
A项，双球菌是两个菌体成双排列的细菌，如脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌。
B项，链球菌是许多菌体黏连成链状的细菌，如溶血性链球菌。
C项，葡萄球菌是许多菌体无规律地堆积似一串葡萄的细菌，如金黄色葡萄球菌。
DE两项，4个菌体排列成正方形，称为四联球菌；8个菌体黏附成包裹状，称为八叠球菌。
[单选题]2.尿液标本放置时间过长，发生浑浊变化的主要原因是()。
A.尿液被污染，细菌生长B.尿液葡萄糖分解C.尿液蛋白质解析D.尿液细胞破坏E.尿液酸碱度改变参考答案：A参考解析：尿放置时间过长，盐类结晶析出、尿胆原转变为尿胆素、细菌增殖和腐败、尿素分解，均可使尿颜色加深、混浊度增高。
[单选题]3.下列关于免疫电泳技术的叙述，正确的是()。
A.在交流电场作用下的凝胶扩散试验B.在直流电场作用下的沉淀反应C.颗粒越大，泳动速度越快D.缓冲液pH大于蛋白质等电点时，蛋白质分子向阳极端泳动E.静电荷量越少，泳动速度越快参考答案：D参考解析：AB两项，免疫电泳技术实质上是在直流电场作用下的凝胶扩散试验，是电泳分析与沉淀反应的结合产物。
CE两项，颗粒即分子量越大，所带净电荷量越少，泳动速度越慢，反之越快。
D项，当缓冲液pH大于蛋白质等电点时，蛋白质成分常带较强的负电荷，在电场中向阳极移动。
[单选题]5.急性胰腺炎时，血中酶升高的是()。
A.谷丙转氨酶B.淀粉酶C.胆碱酯酶D.碱性磷酸酶E.酸性磷酸酶参考答案：B参考解析：A项，谷丙转氨酶也称丙氨酸氨基转移酶（ALT），常作为判断肝细胞损伤的灵敏指标。
B项，淀粉酶（AMY）主要由唾液腺和胰腺分泌，患者患有急性胰腺炎时，血和尿中的AMY显著增高。
酸性磷酸酶测定SOP_ACP临床意义_检验科生化项目SOP
严格按照标本接收程序签收标本。
4.3标本处理
以2500~3000r/min,离心6~10min，分离血清上机测定。如不能及时检测，分离血清于2-8℃保存。
4.4标本检测
4.4.1手工编排测试项目：样品按编号装入样品架，主屏幕按F1:ENTER DATA，在Position处输入样品所在样品架字母及所在位置号，按enter，在Patient Name处选择性输入病人名字，按enter，在Sample No处输入样品号，按enter，在Tests处使用检验键或检验组合键选择相应项目，根据需要选择相应的按键改变Mode（按F7:MEXT MODE选择样品管类型）、Priority（按F4:NEXT PRIORITY选择样品的处理模式）、Fluid（按F8:NEXT FLUID选择标本类型）。
Product和批号Lot，以及最低值校准液在样品架上的位置Start at Position，最后把校准液各个水
平的值按照由低到高的顺序输到对应位置，按F4：ASSIGN CUPS指定样品杯，校准液按顺序排列在样品架上，按F7：LOAD/RUN→F4：RUN或“RUN”运行键运行校准程序。
酸性磷酸酶测定
5.2校准条件
在室内质控失控、更换试剂批号、更换仪器主要配件或进行大保养后均需校准。无特殊情况校准周期为3个月。
5.3校准程序
主屏幕按F5:PROCESS CTRL→F1:CALIBRATION,按enter→F2:SET-UP＆RUN,按项目键选择所需要校准的项目名称METHOD，选中相应试剂批号LOT，输入操作者姓名Operator、校准液货号Calibrator
TMP ACP麝香草酚酞+无机磷酸盐
麝香草酚酞OH-麝香草酚酞阴离子
分解血液的酶-概述说明以及解释
分解血液的酶-概述说明以及解释1.引言1.1 概述血液是人体内非常重要的液体之一，其中含有各种酶，这些酶在血液中起到非常关键的作用。
酶是一类生物催化剂，能够加速化学反应的速率，而又不被反应消耗。
血液中的酶承担着分解、合成和调节许多重要物质的任务，从而维持人体正常的生理功能。
血液酶的类型繁多，包括水解酶、氧化酶、还原酶等。
这些酶在血液中的作用各有不同，但总体来说，它们都参与了人体生理过程中重要物质的代谢。
例如，胃蛋白酶、肠蛋白酶等消化酶能够分解食物中的蛋白质，并将其转化为氨基酸，为身体提供能量和营养物质。
在心脏肌肉细胞中存在的肌酸酶则是一种能够帮助储备和释放能量的酶，在运动时起到非常重要的作用。
此外，血液酶还参与了许多重要的生物调节过程。
例如，血糖酶能够调节血糖水平，使其维持在适当的范围内，防止血糖过高或过低对身体造成损害。
抗凝血酶和抗血栓酶能够防止血液凝结，维持血液的流动性，从而预防血栓形成和心脑血管疾病的发生。
总之，血液中的酶在人体正常生理功能的维持中起着重要的作用。
对血液酶的深入研究和了解不仅有助于对各种疾病的诊断和治疗，也为未来开展相关研究提供了方向和依据。
未来，我们可以继续深入挖掘血液酶的机制和功能，探索其在各种疾病中的作用，为人类健康做出更大的贡献。
1.2 文章结构文章结构：本文主要分为引言、正文和结论三部分。
在引言部分，我们将对分解血液的酶进行概述，并介绍文章的结构和目的。
首先，我们将提出合适的背景信息，以引起读者的兴趣和重视。
接着，我们将明确本文重点讨论的内容，并向读者介绍文章的整体结构和逻辑。
在正文部分，我们将详细探讨酶的定义和作用，以及血液中存在的酶种类。
首先，我们将解释酶的基本概念和特性，以便读者对酶有更清晰的认识。
然后，我们将介绍血液中常见的酶种类，包括其功能和作用机制。
这部分将对酶的分解血液过程进行深入研究，为后续的讨论提供基础。
在结论部分，我们将总结血液酶的重要性，并探讨未来的研究方向。
酸性磷酸酶检测试剂盒（PNP比色法）
酸性磷酸酶检测试剂盒（PNP比色法）酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(PNP 比色法)简介：酸性磷酸酶(acid phosphatase ，ACP)分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。
溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内，各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH 为4.5～5.5。
酸性磷酸酶是一个蛋白家族，哺乳动物中其分子量从18kD 到100kD 不等，该酶分为两类，一类为酒石酸盐敏感型，一类为氟离子敏感型。
溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型，而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。
Leagene 酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(PNP 比色法)(Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是利用Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物，在酸性条件下，可在酸性磷酸酶的作用下生成p -nitrophenol 。
在碱性条件下p -nitrophenol 呈黄色，产物黄色越深，说明酸性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过分光光度比色法(分光光度计)测定处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。
该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、比色杯2、水浴锅或恒温箱3、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：①血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，编号名称TE0034 60T Storage试剂(A): ACP Assay buffer 50ml 4℃ 试剂(B): pNPP2支 -20℃ 避光试剂(C): p -nitrophenol(10mM) 0.2ml-20℃ 避光使用说明书1份尿液通常也可以直接用于测定，冻存，用于酸性磷酸酶的检测。
生化第一题
【临床意义】
1.酸性磷酸酶（ACP）是作用类似ALP的磷酸酶（最适 pH在7.0以下），存在于人体不同组织，如前列腺、红细 胞、血小板、肾脏、肝脏、脾脏、胃、肌肉及骨髓等，主 要存在于细胞的溶酶体中，以前列腺含量最多。正常男性 血清中ACP有1/3～1/2来自前列腺，其余部分及女子血清 中的ACP可能来自血小板、红细胞、白细胞及破骨细胞等。 2.ACP测定主要用于诊断前列腺癌。前列腺癌时血清 ACP活力显著升高，转移性患者升高更加显著。 3．急性尿潴留、变形性骨炎、癌肿骨转移及甲亢时 ACP可轻度升高。此外，慢性粒细胞性白血病时，ACP同工 酶中的前列腺ACP(PAP）增高，而戈谢病、尼曼匹克病、 网状内皮细胞白血病或毛细胞白血病均为非PAP增高。是 否为抗酒石酸盐的非PAP增高为毛细胞性白血病的重要鉴 别要点。
NADH在340nm处有特征吸收峰，连续监测NADH消耗引起的 340nm吸光度变化,根据340nm处吸光度下降速率（－△A/min） 计算ALT活性
（二）定时比色法（两点法）
国内采用的比色测定法有三种： 赖氏法（30min） 金氏法（60min） 改良穆氏法（30min） 三种方法的原理、试剂、操作步骤和酶作用温度 都相似，单位定义和标准曲线绘制方法有差异。
以苄胺为底物，在O2和H2O参与下，MAO催化生成苄醛、NH3和 H2O2，产生的NH3再在谷氨酸脱氢酶催化下，与α-酮戊二酸 和NADH反应，生成谷氨酸和NAD+。在340nm波长下监测NADH吸 光度的下降速率，即可计算出MAO活力。
醛苯腙法
底物苄胺在MAO作用下氧化生成苄醛，苄醛与2，4-二硝基苯肼 反应生成醛苯腙，在碱性溶液中呈红棕色，在470nm比色测定。
Badson改良法
• ACP催化α-萘基磷酸盐，在pH4.5~6.0的条件 下释放无机磷酸盐。产物α-萘酚则偶联有色 的偶氮试剂，通过在450nm处监测偶氮化合 物生成的速率来测定ACP的活性。 • 反应式： ACP（pH5.3）
临床血液学检验(新)重点考试知识总结
1，出生后造血分为骨髓造血和淋巴造血2骨髓造血:骨髓的造血细胞大部分来源于肝脏，部分来源于脾脏。
骨髓是产生红细胞，粒细胞和巨核细胞的主要场所，骨髓也产生淋巴细胞和单核细胞4血细胞的分化是指分裂后产生新的子细胞在生物学性状上产生了新的特点，即通过特定基因的表达合成了特定的蛋白质，与原来的细胞有了质的不同。
这种分化过程是不可逆的，是血细胞失去某些潜能同时又获得新功能的过程。
5.血象和骨髓象检验是诊断血液系统疾病、观察疗效及病情的重要手段之一。
6粒细胞系统包括原始粒细胞、早幼粒细胞、中幼粒细胞、晚幼粒细胞、杆状粒细胞和分叶核粒细胞，粒细胞是由于胞质中常有许多颗粒而得名的。
颗粒从II型原始粒细胞开始出现，称为非特异性颗粒（又称为A颗粒、嗜天青颗粒、嗜苯胺蓝颗粒），从中幼粒细胞开始出现特异性颗粒（即S颗粒:中性颗粒、嗜酸性颗粒及嗜碱性颗粒。
早幼粒细胞其胞体直径12～25um,较原始粒细胞大。
8骨髓穿刺:最为理想的穿刺部位是髂骨上棘（包括髂骨前、髂骨后上棘）10判断骨髓增生程度:骨髓中有核细胞的多少可以反映出骨髓增生程度。
11.粒红比值是指各阶段粒细胞（包括中性，嗜酸性，嗜碱性粒细胞）百分率总和与各阶段有核红细胞百分率总和之比。
12骨髓增生程度:（1）增生极度活跃:反映骨髓造血功能亢进，常见于各种急性白血病、慢性粒细胞白血病、淋巴瘤白血病等。
（2）增生明显活跃:反映骨髓造血功能旺盛，常见于缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血、溶血性贫血、失血性贫血、（3）增生活跃，反映骨髓造血功能正常，见于多发性骨髓瘤（4）增生减低，反映骨髓造血功能降低（5）增生极度减低。
反映骨髓造血功能衰竭13.粒红细胞比值改变:（1）粒红比值增加:由粒细胞增多或有核红细胞减少所致。
（2）粒红比值正常:由粒细胞和有核红细胞比例正常或两系细胞同时增加或减少所致。
（3）粒红比值下降:由粒细胞减少或有核红细胞增多所致。
14.铁染色:（正常血细胞的染色反应）:骨髓中的铁分为细胞外铁和细胞内铁。
精浆酸性磷酸酶定量检测试剂盒(对硝基酚法)产品技术要求华康
医疗器械产品技术要求编号：精浆酸性磷酸酶定量检测试剂盒（对硝基酚法）2.性能指标2.1外观性状a）试剂盒标签应印制清晰、无错误；包装应清洁干净、无泄漏液体；组份组装应正确无误；b）保存液应为澄清透明，无絮状物、无肉眼可见颗粒的液体；c）样本稀释液液应为澄清透明，无絮状物、无肉眼可见颗粒的液体；d）底物（干片剂）复溶后应为澄清透明，无絮状物、无肉眼可见颗粒的液体；e）校准品 1 应为无色澄清透明，无絮状物、无肉眼可见颗粒的液体；f）校准品 2 应为淡黄澄清透明，无絮状物、无肉眼可见颗粒的液体；g）校准品 3 应为黄色澄清透明，无絮状物、无肉眼可见颗粒的液体；h）校准品 4 应为深黄色澄清透明，无絮状物、无肉眼可见颗粒的液体；i）质控液应为无色悬浮物；j）空白微孔板应清洁,孔底平整，无灰尘杂质。
2.2装量试剂盒液体组份平均装量不小于组份标签标示装量。
2.3试剂酸碱度试剂盒组份标本稀释液pH值范围4.8±0.1。
2.4校准品空白吸光度值（405nm）符合下表1要求。
表1 校准品吸光度值要求2.5精密度a)试剂盒重复性CV%≤15%。
b)试剂盒批间相对偏差R≤15%。
2.6准确度a)参考物质测试值相对偏差R不超过±15%。
b)质控液检测结果在靶值范围内。
2.7特异性干扰试验干扰率不超过±10%。
2.8线性范围a)在线性范围0～3200U/mL内,回归系数r≥0.990。
b)线性偏差X1～X3不超过±10%,X4、X5不超过±20%。
2.9最低检出限不高于12.5U/mL。
2.10空白吸光度不高于0.200。
2.11分析灵敏度介于0.600 OD～1.000 OD/(1000U/mL)单位浓度。
实验十五：酸性磷酸酶的显示课件
• 4．染色的方法: （1）利用化学原理进行的染色方法: 金属沉淀法 : 利用酶催化反应形成的分解产物与金属化合物反应，最终生成 有色沉淀，借此辨认所要检查的酶的活性。偶氮偶联法: 用人工 合成的酶底物在酶的作用下产生分解产物，后者与重氮盐结合形
成不溶性的偶氮色素。Schiff反应法: 游离的醛基可使Schiff试剂 中的无色红变为紫红色产物，这种反应通常用于显示多糖类（
，用标记抗体显示相应抗原。
• 5．酸性磷酸酶的显示方法: 酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）主要存在于巨噬细胞，定 位于溶酶体内。在溶酶体膜稳定完整时，底物不 易渗入，ACP活力微弱或无活性，经固定，在合 适pH条件下，膜本身变为不稳定，逐渐改变其渗 透性，底物可以渗入，酶活力被显示。ACP在酸 性条件下（pH4.7）可使作用液中的底物β-甘油磷 酸钠的磷酸根解离出来，进而与溶液中硝酸铅结 合形成磷酸铅沉淀，因其是难溶解的无色沉淀物 ，需要与黄色的硫化铵作用，生成棕黑色PbS沉 淀而被显示出来。
• 3．染色的作用: 由于正常的生物组织是无色透明的，因此无法在 光镜下进行观察。因此必须要对样品进行染色；染色剂可以渗透 到组织的间隙中，细胞中的蛋白质等成份可以吸附不同的色素粒 子；染色剂中的阳离子和阴离子可分别与细胞中的酸性、碱性物 质相结合。染色就是根据这些原理，利用染色剂与细胞内含物的 物理作用与化学作用，将细胞和组织染成各种不同的颜色；由于 染色剂的化学性质不同，以及固定材料时所用的固定剂不同，染 色剂对被染色的组织有一定的选择性，从而使某些部位染色很清 楚，而另一些部位可能完全不着色。例如，有些染色剂可染细胞 核，有些染色剂可染细胞质。
在荧光显微镜下对这些成分进行直接观察。放射自显影技术: 用 放射性核素标记化合物，使其在细胞中参与代谢，将带有标记的 代谢产物通过放射自显影技术显示出来，借以探测物质代谢途径
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组织及血液酸性磷酸酶（ACP）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法
注意：正式测定前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC2130
规格：50T/24S
产品内容：
提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体30mL×1瓶，4℃避光保存，变成蓝绿色不能使用。
标准品：液体1mL×1支，2μmol/mL酚标准液，4℃保存。
临用前蒸馏水稀释至0.5μmol/mL备用。
产品说明：
ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸，常见于巨噬细胞的溶酶体内。
ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。
在酸性环境中，ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚，苯酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应生成红色亚醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
称取约0.1g组织，加提取液1mL充分研磨，4℃、10000rpm离心10min，取上清液待测。
血液可直接用于测定，如果浓度高的话，用提取液稀释。
二、测定步骤：
1.分光光度计预热30min以上，调节波长到510nm，蒸馏水调零。
2.试剂一置于37℃水浴中预热30min以上。
试剂名称（μL）测定管对照管空白管标准管蒸馏水--100-
0.5μmol/mL标准品---100
上清液100---
试剂一200200200200
试剂二200200200200
混匀后置于37℃水浴中保温15min
试剂三600600600600
上清液-100--混匀后于510nm测定吸光度，分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。
三、ACP活性计算：
1.按蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
ACP(U/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(Cpr×V样)÷T =0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2.按样本鲜重计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
ACP(U/g鲜重)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(W÷V提取×V样)÷T =0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
3.按血液体积计算
活性单位定义：37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。
ACP(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷V样÷T
=0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)
C标准品：标准品浓度，0.5μmol/mL；V样：加入反应体系中上清液体积，0.1mL；
T：反应时间，15min；V提取：加入提取液体积，1mL；
W：样本鲜重，g。
注意事项：
1、试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。
2、试剂三变蓝绿色后不能再使用。
3、加入试剂三后必须立即混匀，否则显色不完全。
4、ACP不稳定，尤其在37℃和pH大于7的条件下活力丧失快，因此酸性磷酸酶样品一般需当天准备；血清样品中，每毫升血清中加入10mg柠檬酸氢二钠或者5mg硫酸氢钠，使pH降至6.5以下，或5mL血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。