食品中维生素C的测定

（二）总抗坏血酸测定（二硝基苯肼法） 1. 实验原理 用酸处理过的活性炭把还原型Vc全部 氧化成二酮古洛糖酸，它与二硝基苯肼作 用生成红色的脎，脎的生成量与Vc总量成 正比。 2. 实验器材 ⑴ 组织捣碎机。 ⑵ 恒温水浴锅。 ⑶ 721分光光度计。
⑷ 100ml容量瓶。 ⑸ 刻度吸管。 ⑹ 100ml 锥形瓶。 3. 实验试剂 ⑴ 85%硫酸溶液（水）。 ⑵ 2% 2,4-二硝基苯肼（硫酸）。 ⑶ 2%、1%草酸溶液。 ⑷ 10%硫尿溶液（乙醇）。 ⑸ 活性炭（用盐酸处理）。 ⑹ 标准维生素C应用液（100µg/ml）。
4.操作步骤 1. 样品提取：称取匀浆4g加1%草酸稀释后 倒入100ml容量瓶，并以1%草酸冲洗烧杯 并入容量瓶稀释至刻度，过滤。 2. 氧化：样品取滤液约25ml置100ml锥形瓶 中，加活性炭0.5g振摇30s后过滤，取滤 液10ml，加1%草酸10ml混匀。. 3. 标样制备:取标准VC应用液约25ml于 100ml锥形瓶中，加活性炭0.5g振摇60s后 过滤,取滤液10ml于100ml容量瓶中，加 1%草酸定容. 4. 脎的生成：
4. 操作步骤 ⑴ 样品处理：洗净剪碎，称取100g，放入捣 碎机；按1﹕1加入2%草酸制成匀浆。 ⑵ 称取匀浆液10g，用50ml 具塞量筒以1% 草酸定容。 20ml 100ml ⑶ 取约20ml 上清倒入100ml 锥形瓶，加白陶 土一勺。同时用1%草酸20ml 加陶土一勺， 作为空白。 ⑷ 取上清液过滤，取滤液 5ml，以标定的二 氯酚靛酚滴定至溶液呈淡红色，纪录用量。 ⑸ 还原型Vc的计算：
还原型Vc（mg/100g）=100（V1-V0）T/ W V0 滴定空白耗用染料的量（ ml）。 V1 滴定样品耗用染料的量（ ml）。 W 样品质量（g）。 T 单位体积（ml）的染料相当于维生素C 的量（mg）。 思考题：①还原型抗坏血酸还原染料后，本 身变成什么物质？②为什么整个操作过程 要迅速，样品要浸泡在2%草酸溶液中？③ 滴定时以15秒粉红色不褪为终点，不足或 多于15秒会如何？
小时， 置37℃恒温水浴保温 小时，取出置室温下，A管 ℃恒温水浴保温3小时 取出置室温下， 管 空白）加二硝基苯肼0.5mHale Waihona Puke Baidu。 （空白）加二硝基苯肼 。
⑷ 脎的溶解：各管置冰浴中缓慢加入85%硫 酸2.5ml,边加边振摇。取出试管，室温下放 置30分钟于490nm波长下比色，以A管调零， 测各管的光密度。 ⑸ 绘制标准曲线：以光密度为纵坐标，维生 素C为横坐标绘制标准曲线。 ⑹ 计算： 样品总维生素C含量(mg/100g)=100C/1000W C为样品相当于标准抗坏血酸µg数；W为用 于测定的样液中所含样品的g 数。 （三）实验结果及结果分析
实验二、食品中维生素C测定
一、实验目的 掌握滴定法和比色法测定维生素 C的原理；熟悉操作方法。 （一）还原维生素C测定（二氯酚靛酚滴 定法） 1. 实验原理 二氯靛酚染料在酸性溶液中呈红 色，被维生素C还原后红色消失。一 定量的样品提取液还原标准染料的量 与样品中维生素C的量成正比。
2. 实验器材 ⑴ 组织捣碎机。 ⑵ 5.0ml 微量滴定管。 ⑶ 100ml 容量瓶。 ⑷ 50ml 具塞量筒。 3. 实验试剂 ⑴ 1%、2%草酸溶液。 ⑵ 白陶土。 ⑶ 标定好的二氯靛酚溶液。
脎的生成
管 号 0 1 2 3 4 A B C 标准(ml) 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 标准 标准含量(µg) 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 标准含量 样品滤液(ml) 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 样品滤液 1%草酸 草酸(ml) 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 草酸 10%硫尿 滴) 1 硫尿(滴 1 1 1 1 硫尿 二硝基苯肼(ml)0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 二硝基苯肼 0.0 0.0 0.0 2.0 2.0 2.0 0.0 0.0 0.0 1 1 1 0.0 0.5 0.5