食品中维生素C的测定
食品中维生素C的检测方法
食品中维生素C的检测方法
维生素C是机体正常生命活动所必需的有机化合物，作为一种理想的保健食品功能因子，被添加于各种保健食品及饮料中，因此对维生素C含量测定方法的研究也较多。
目前常规的维生素C含量测定方法有紫外分光光度法、碘量法等，但是维生素C具有较强的还原性，在中性和碱性环境下不稳定，遇热迅速分解，检测方法操作步骤复杂，具有试剂和试样溶液不稳定、灵敏度低、费时等缺点，尤其是有颜色的试样，其溶液颜色背景干扰大，对最终数据有影响。
高效液相色谱法具有高效、快速、稳定、灵敏度高的特点，能在较短时间内完成测定。
一、实验目的和要求
1、学习高效液相色谱外标法定量定性分析方法；
2、熟悉高效液相色谱的分析操作规程；
3、学习高效液相色谱检测食品中的维生素C的方法。
二、实验原理
在以维生素C标准品保留时间定性，采用外标法定量维生素C含量。
X=(A2×C)/A1
（X为样品中维生素C的含量单位为ug/mL，单位；A1为标样维生素C的峰面积；A2为样品中维生素C峰面积；C为维生素C标准液质量浓度。
）
三、仪器、试剂
1、仪器：岛津高效液相色谱仪、超声波清洗仪、超纯水制备仪、千分之一天平、离心机
2、试剂：维生素C标准品、醋酸、超纯水、橙汁
四、实验步骤
1、标准液的制备：
维生素C标准溶液配制:准确称取0.1219g维生素C，用0.1%醋酸溶液溶解，超声波振荡5min，再用0.1%醋酸定容至50mL，为标准溶液。
分别吸取标准溶液0.05，0.10，0.50，1.00，2.00，3.00mL于10mL容量瓶中，用0.1%醋酸溶液定容，进样测定。
2、样品的前处理：。
食品 维生素C测定 荧光光度法
法中提取液难配制以及存放时间不宜过长的缺点，而且简化了操作手续，提高了分析速度。
析 ３试剂 酸洗活性碳：取 １００ｇ活性碳，以 １０％的 ＨＣｌ５００ｍｌ加热煮沸 ２ｍｉｎ，以水洗涤 ３次（每 次 ５００ｍｌ），然后置 １２０℃下烘干备用；
９．５ １０．８ １２．２ １４．５ １６．９
中 硼酸－醋酸钠的影响：试验表明，作为掩蔽剂的硼酸－醋酸钠溶液在加入空白管后，必
须放置 １５ｍｉｎ后，荧光强度才完全降到最低值，否则空白值会偏高。
国 工作曲线：试验表明，Ｖｃ含量在 ０～８０μｇ／１４ｍｌ范围内有良好的线性关系，其工作曲线
的回归方程为：
Ｆ＝１．９７４＋１．２８１，相关系数 ｒ＝０．９９９１
表 ５ 几种食品中 Ｖｃ的测定结果
Ｖｃ含量
回收率
（ｍｇ／ｍｌ）
（％）
２．３６
９１．９
１２２．６６
９２．０
０．２４８
９２．１
０．２２８
９３．２
平均回收率 （％） ９２．３ ９２．３ ９２．３ ９２．３
７参考文献 《食品与发酵工业》 １９９４ Ｎｏ．１
中 国 分 析 网
式中：Ｆ 相对荧光强度； Ｃ μｇ／１４ｍｌ。
分
由于本法中 Ｖｃ在 ０～８０μｇ／１４ｍｌ范围内有良好的线性关系，故本文采用直接定点比较
法来计算样品的 Ｖｃ总量。
析 式中：ＦＡ
Ｖｃ含量（ｍｇ／ｍｌ）＝ＦＦＡＳ－－ＦＦＡＳ００ ×Ｃ×Ｋ×
１ １０００
样品液的相对荧光强度；
网 ＦＡ０ 样品空白液的相对荧光强度；
以水定容至 ５０ｍｌ，取此定容液 ５０ｍｌ，从棉花过滤至 １００ｍｌ烧杯中，加入 ２ｇ活性碳，剧烈搅
食品中维生素C的测定
目录1 前言 (1)2 实验方案 (1)2.1 方案一： 2，6-二氯靛酚滴定法 (1)2.2 方案二：高效液相色谱法 (1)2.3 方案三：2，4-二硝基苯肼法 (2)3 方案讨论 (3)4 结果与分析 (3)4.1 标准曲线 (3)4.2 计算 (3)4.3 数据分析 (4)5 注意事项及说明 (4)参考文献 (5)致谢 (6)摘要维生素 C（抗坏血酸）是一种己糖醛基酸，有四种异构体，其中L-（+）-抗坏血酸的活性最强，极易被氧化。
它在细胞氧化、胶原蛋白的形成、铁离子由血浆到组织器官中的转运、肌体免疫及抗体形成中起着重要的作用。
测定维生素C常用的方法有2，6-二氯靛粉滴定法、2，4-二硝基苯肼法、荧光法及高效液相色谱法、极谱法等。
2，6-二氯靛酚滴定法测定的是还原型抗坏血酸，该法简便、快速，但易受其他还原物质干扰、对深色样液难辨终点；荧光法、高效液相色谱法及极谱法对实验仪器和技术的要求比较高，综合各方面本文采用2，4-二硝基苯肼法，利用分光光度计分别测定橙汁、猕猴桃汁、梨汁的汁，再根据标准曲线计算其维生素C含量。
关键词：维生素C 2，4-二硝基苯肼法分光光度计标准曲线ABSTRACTVitamin C (ascorbic acid) is a kind of hexose aldehyde group acid, there are four isomer, including L - (+) - ascorbic acid activity is the most powerful, extremely easy oxidation. It in cell oxidation, collagen formation, iron ion by plasma to tissue organs of transport, the body immune antibody formation and plays an important role. Determination of vitamin C commonly used methods 2, 6 - dichloro indigo powder titration, 2, 4 - dinitrobenzene hydrazine method, fluorescent method and high performance liquid chromatography, polarography, etc. 2, 6 - dichloro indophenol titration determination is reduced ascorbic acid, the method is simple, rapid, but vulnerable to other reducing substances interference, to brunet sample liquid failure to end. Fluorescence method, high performance liquid chromatography and polarographic method for experimental instrument and technology demand is higher, integrated various aspects based on the 2, 4 - dinitrobenzene hydrazine method, using spectrophotometer, respectively orange juice, kiwi fruit juice, pear juice juice, then according to the standard curve calculating the vitamin C content.Keywords：Vitamin C 2, 4 - dinitrobenzene hydrazine method spectrophotometer standard curve1 前言：本文介绍了靛粉滴定法、高效液相色谱法及2，4-二硝基苯肼法这三种维生素C含量的测定方法，通过分析比较并结合实验室的设备条件及对操作技术的要求，采用2，4-二硝基苯肼法。
实验九食品中维生素C的含量测定
实验九：食品中维生素C的含量测定方法一2,4–二硝基苯肼比色法测定抗坏血酸总量一、目的要求理解2,4–二硝基苯肼比色法测定抗坏血酸总量的基本原理。
学习其操作方法和了解影响测定准确性的因素。
二、实验原理总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2,4–二硝基苯肼作用生成红色脎，其呈色强度与总抗坏血酸含量呈正比，可进行比色定量。
三、仪器与试剂（一）试剂1、L硫酸：量取250mL浓硫酸小心加入700mL水中，冷却后用水稀释至1000mL。
2、85%硫酸：小心加900mL浓硫酸于100mL水中。
3、2% 2,4–二硝基苯肼：溶解2,4–二硝基苯肼2g于100mL L硫酸中，过滤。
不用时存于冰箱内，每次使用前必须过滤。
4、2%草酸溶液。
5、1%草酸溶液。
6、1%硫脲溶液：溶解1g硫脲于100mL1%草酸溶液中。
7、2%硫脲溶液：溶解2g硫脲于100mL1%草酸溶液中。
8、1mol/L盐酸：取100mL盐酸，加入水中，并稀释至1200mL。
9、抗坏血酸标准溶液：称取100mg纯抗坏血酸溶解于100mL 2%草酸溶液中，此溶液每毫升相当于1mg抗坏血酸。
10、活性炭：将100g活性炭加到750mL 1mol/L盐酸中，回流1h~2h，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子（Fe3+）为止，然后置于110℃烘箱中烘干。
（二）仪器1、恒温箱或电热恒温水浴锅。
2、可见光分光光度计。
3、捣碎机。
四、实验步骤1、样品处理（全部实验过程应避光）。
（1）鲜样的制备：称取100g鲜样即加入100mL 2%草酸溶液，倒入捣碎机中打成匀浆，称取~匀浆（含1mg~2mg抗坏血酸）倒入100mL容量瓶，用1%草酸溶液稀释至刻度，混匀。
过滤，滤液备用。
（2）干样制备：称取1g ~ 4g干样（含1mg~2mg抗坏血酸）放入乳钵内，加入等量的1%草酸溶液磨成匀浆，连固形物一起倒入100mL容量瓶内，用1%草酸溶液稀释至刻度，混匀。
特殊医学用途配方食品中维生素C含量的测定
品中的维生素 C 含量，研究本实验方法的精密度情况。
作者简介：郭文韬（1992—），男，汉族，陕西西安人，本科，助理工程师。研究方向：食品质量安全。
62 食品安全导C刊op202y1年r8i月ght©博看网 . All Rights Reserved.
分析检测
1.4.5 数据处理 采用常用软件 Excel 软件进行数据分析处理。
功效。在促进胆固醇排泄防止其在动脉内壁沉积方面也有重要 1.4 方法
的作用。维生素 C 广泛存在于植物组织中，新鲜的水果和蔬 1.4.1 样本的测定
菜中含量较为丰富，尤其是花菜、青辣椒、橙子、猕猴桃等果
样本的测定中，用样本溶液荧光值减去样本空白溶液
蔬。人体缺乏维生素 C 会引起相关疾病，但其摄入量只需满 荧光值后，可在标准曲线上查找对应的维生素 C 的质量浓度。
足机体正常需求即可，无需过量摄入。人体自身无法合成维生 1.4.2 待测液的制备
素 C，只能从食物或肠外营养供给，但其容易氧化，且在体内
按照 GB 5413.18—2010 中的方法绘制标准曲线，试剂
储存时间短。一些特殊的人群，如孕产妇，除正常的饮食摄取 添加量按表 1 进行，分别移取不同体积的标准溶液于 10 mL
关键词：维生素 C；荧光法；特殊医学用途配方食品
维生素 C 是一种水溶性维生素，是人体必需的营养素之 的配制方法参照国家标准《食品安全国家标准 婴幼儿食品
一，在维持正常的人体机能方面有着重要的作用。它参与了神 和乳品中维生素 C 的测定》（GB 5413.18—2010）中的方法
经介质、激素的生物合成，促进胶原蛋白的合成，具有抗癌的 进行。
回收实验：对已测得维生素 C 含量的样本，加入一定量的
实验九 食品中维生素C含量的测定
实验九 食品中维生素C 含量的测定1.实验目的学习并掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定食品材料中维生素C 含量的原理和方法。
2.实验原理维生素C 是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。
维生素C 能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维生素C 时则会出现坏血病，因而维生素C 又称为抗坏血酸。
水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。
不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。
测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。
维生素C 具有很强的还原性。
它可分为还原性和脱氢型。
金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化维生素C 氧化为脱氢型。
2,6-二氯酚靛酚（DCPIP ）是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如图：当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。
因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。
3.仪器及材料3.1仪器容量瓶、锥形瓶、微量滴定管、洗耳球3.2试剂（1）1%草酸溶液：草酸1g 溶于100ml 蒸馏水；2%草酸溶液：草酸2g 溶于100ml 蒸馏水。
（2）维生素C 标准储备液：准确称取20mg 维生素C 溶于1%草酸溶液中，移入100ml 容量瓶中，用1%草酸溶液定容，混匀，冰箱中保存。
（3）维生素C 标准使用液（0.02648mg/ml ）：吸取维生素C 贮备液5ml ，用1%草酸溶液稀释至50ml 。
标定：准确吸取上述维生素C 标准使用液25.0mL 于50mL 锥形瓶中，加入0.5mL 60g/L 碘化钾溶液，3～5滴淀粉指示剂 (10g/L)，混匀后用0.0010mol/L 标准碘酸钾溶液滴定至淡蓝色（极淡蓝色）为终点。
食品中Vc含量的测定方法研究
食品中Vc含量的测定方法研究食品中维生素C（Vc）的含量是衡量食品营养价值的一个重要指标。
正确测定食品中Vc的含量对于评估其营养价值、制定合理的膳食方案以及确保消费者的健康至关重要。
本文将探讨食品中Vc含量的测定方法的研究，介绍其中的一些常用方法和相关技术。
一、理论基础维生素C，即抗坏血酸，是一种水溶性维生素，对人体有重要的生理功能，如促进碳水化合物代谢、提高免疫力等。
由于人体无法自行合成维生素C，因此必须通过食物摄入。
因此，准确测定食品中Vc的含量对于饮食科学和营养学具有重要意义。
二、化学方法在食品中测定Vc含量的最常用方法是化学方法。
该方法是通过与还原剂（如碘溶液、二氧化碘溶液）反应，以间接测定Vc的含量。
这类方法的优点在于简单、可靠。
然而，存在一些缺点，如需要专业的实验室设备和较长的实验时间。
三、生物方法除了化学方法外，生物方法也被广泛应用于测定食品中Vc含量。
生物方法的原理是利用Vc对某些生物体的影响进行测定。
例如，利用离子选择电极和酶分析等生物材料，可以测定食品中Vc的含量。
生物方法的优点在于高效、准确、灵敏。
然而，该方法需要一定的专业知识和技术，并且使用复杂。
四、光谱法光谱法是一种测定食品中Vc含量的常用方法之一。
该方法利用Vc在特定波长下的吸收特性进行测定。
例如，紫外-可见光谱法可以测定Vc在245nm波长下的吸收强度，从而计算出Vc的含量。
光谱法具有测定快速、方便、准确的特点，无需破坏样品，适用于大批量样品的测定。
五、电化学法电化学法是测定食品中Vc含量的一种敏感和可靠的方法。
常用的电化学方法包括循环伏安法和差分脉动伏安法。
通过在特定电位下测定食品样品中Vc的还原峰高度，可以计算出Vc的含量。
与其他方法相比，电化学法具有灵敏度高、测定速度快、操作简单等优点。
综上所述，测定食品中Vc含量的方法有很多种。
根据具体的实验室条件和目的，选择适合的方法进行测定是非常重要的。
为确保测定结果的准确性和可靠性，还应注意合理选择样品的存储和处理方法，控制实验条件，进行质量控制，并根据实际情况进行相关统计分析。
实验四-测定食品中Vc的含量
实验三测定食品中Vc的含量一、能力目标1、熟练仪器的规范操作与检测；2、熟练标准工作曲线绘制；3、熟练原始记录、数据处理与报告。
二、原理根据维生素C具有对紫外光产生吸收、对碱不稳定的特性，在243nm处测定样品液与碱处理样品液两者吸光度值之差，并通过标准曲线，即可计算出维生素C的含量。
三、仪器与试剂1、仪器紫外可见分光光度计2、试剂1）10%HCl：取133mL浓盐酸，加水稀释至500mL；2）1% HCl：取22mL浓盐酸，加水稀释至100mL；3）1mol/L NaOH溶液：称取40g 氢氧化钠，加蒸馏水，不断搅拌至溶解，然后定容至1000mL。
4）维生素C标准使用液的配制：在分析天平上准确称取抗坏血酸10mg，加2mL 10%HCl，再蒸馏水定容至100mL，混匀，即为100 μg/mL维生素C标准溶液。
四、测定步骤1、维生素C标准系列溶液的配制及测定取6个50mL容量瓶，依序加入100μg/mL维生素C标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00mL，分别补加蒸馏水至50.0mL，摇匀。
以蒸馏水为空白，在243nm处测定标准系列维生素C溶液的吸光度。
2、样品中维生素C含量的测定（1）样品的测定：在两个盛有1.0～2.0mL10%HCl的50 mL容量瓶中，分别准确加入0.5～1.0mL样品液，用蒸馏水稀释至刻度后摇匀。
以蒸馏水为空白，在243nm处测定吸光度。
（2）待测碱处理液的制备与测定：分别准确吸取0.5～1.0mL样品液、10mL蒸馏水和3～4 mL1mol/L NaOH溶液依次放入50 mL容量瓶中，混匀，15min后加入3～4 mL10%HCl，混匀，加蒸馏水定容至刻度。
以蒸馏水为空白，在243nm处测定吸光度。
也可以碱处理待测液为空白，在243nm处测定样品提取液的吸光度。
五、数据记录及处理1．皿差的测定2．标准溶液吸光度测定以浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
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（二）总抗坏血酸测定（二硝基苯肼法） 1. 实验原理 用酸处理过的活性炭把还原型Vc全部 氧化成二酮古洛糖酸，它与二硝基苯肼作 用生成红色的脎，脎的生成量与Vc总量成 正比。 2. 实验器材 ⑴ 组织捣碎机。 ⑵ 恒温水浴锅。 ⑶ 721分光光度计。
⑷ 100ml容量瓶。 ⑸ 刻度吸管。 ⑹ 100ml 锥形瓶。 3. 实验试剂 ⑴ 85%硫酸溶液（水）。 ⑵。 ⑷ 10%硫尿溶液（乙醇）。 ⑸ 活性炭（用盐酸处理）。 ⑹ 标准维生素C应用液（100µg/ml）。
实验二、食品中维生素C测定
一、实验目的 掌握滴定法和比色法测定维生素 C的原理；熟悉操作方法。 （一）还原维生素C测定（二氯酚靛酚滴 定法） 1. 实验原理 二氯靛酚染料在酸性溶液中呈红 色，被维生素C还原后红色消失。一 定量的样品提取液还原标准染料的量 与样品中维生素C的量成正比。
2. 实验器材 ⑴ 组织捣碎机。 ⑵ 5.0ml 微量滴定管。 ⑶ 100ml 容量瓶。 ⑷ 50ml 具塞量筒。 3. 实验试剂 ⑴ 1%、2%草酸溶液。 ⑵ 白陶土。 ⑶ 标定好的二氯靛酚溶液。
4. 操作步骤 ⑴ 样品处理：洗净剪碎，称取100g，放入捣 碎机；按1﹕1加入2%草酸制成匀浆。 ⑵ 称取匀浆液10g，用50ml 具塞量筒以1% 草酸定容。 20ml 100ml ⑶ 取约20ml 上清倒入100ml 锥形瓶，加白陶 土一勺。同时用1%草酸20ml 加陶土一勺， 作为空白。 ⑷ 取上清液过滤，取滤液 5ml，以标定的二 氯酚靛酚滴定至溶液呈淡红色，纪录用量。 ⑸ 还原型Vc的计算：
4.操作步骤 1. 样品提取：称取匀浆4g加1%草酸稀释后 倒入100ml容量瓶，并以1%草酸冲洗烧杯 并入容量瓶稀释至刻度，过滤。 2. 氧化：样品取滤液约25ml置100ml锥形瓶 中，加活性炭0.5g振摇30s后过滤，取滤 液10ml，加1%草酸10ml混匀。. 3. 标样制备:取标准VC应用液约25ml于 100ml锥形瓶中，加活性炭0.5g振摇60s后 过滤,取滤液10ml于100ml容量瓶中，加 1%草酸定容. 4. 脎的生成：
脎的生成
管 号 0 1 2 3 4 A B C 标准(ml) 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 标准 标准含量(µg) 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 标准含量 样品滤液(ml) 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 样品滤液 1%草酸 草酸(ml) 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 草酸 10%硫尿 滴) 1 硫尿(滴 1 1 1 1 硫尿 二硝基苯肼(ml)0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 二硝基苯肼 0.0 0.0 0.0 2.0 2.0 2.0 0.0 0.0 0.0 1 1 1 0.0 0.5 0.5
还原型Vc（mg/100g）=100（V1-V0）T/ W V0 滴定空白耗用染料的量（ ml）。 V1 滴定样品耗用染料的量（ ml）。 W 样品质量（g）。 T 单位体积（ml）的染料相当于维生素C 的量（mg）。 思考题：①还原型抗坏血酸还原染料后，本 身变成什么物质？②为什么整个操作过程 要迅速，样品要浸泡在2%草酸溶液中？③ 滴定时以15秒粉红色不褪为终点，不足或 多于15秒会如何？
小时， 置37℃恒温水浴保温 小时，取出置室温下，A管 ℃恒温水浴保温3小时 取出置室温下， 管 空白）加二硝基苯肼0.5ml。 （空白）加二硝基苯肼 。
⑷ 脎的溶解：各管置冰浴中缓慢加入85%硫 酸2.5ml,边加边振摇。取出试管，室温下放 置30分钟于490nm波长下比色，以A管调零， 测各管的光密度。 ⑸ 绘制标准曲线：以光密度为纵坐标，维生 素C为横坐标绘制标准曲线。 ⑹ 计算： 样品总维生素C含量(mg/100g)=100C/1000W C为样品相当于标准抗坏血酸µg数；W为用 于测定的样液中所含样品的g 数。 （三）实验结果及结果分析