高纯度质粒大量快速提取试剂盒(离心柱型)操作方法及步骤说明书
高纯质粒小量提取试剂盒(柱离心型)
高纯质粒小量提取试剂盒（柱离心型）(Plasmid Minispin HP Kit Ver.2)产品说明：本试剂盒在常规柱离心质粒提取技术的基础上，改进了硅基质膜材料和试剂配方，使质粒DNA获得高效、专一吸附。
经过两步洗涤，可清除蛋白质、基因组DNA、RNA和其他杂质。
新增基质平衡液处理步骤，可进一步提高硅胶膜的DNA吸附能力，获得稳定的质粒产量。
适合于从1~3 ml培养液中提取质粒DNA。
高拷贝菌液可获得质粒DNA约5~30 μg，可应用于各种常规实验如酶切、PCR、测序、连接、转化和体外转录等操作，并可用于细胞转染工作。
产品内容与储存方法：名称数量保存条件Buffer P1（重悬液）20 ml RTBuffer P2（裂解液）20 ml RTBuffer P3（结合液）30 ml RTBuffer PE（平衡液）30 ml RTBuffer PWT （洗涤液T）* 30 ml RTBuffer PW （洗涤液）** 20 ml RTElution Buffer（洗脱液）10 ml RT离心柱及套管100套RTRNase A 20 mg/ml 0.1 ml -20℃试剂盒可作100次质粒小量提取。
常温运输，室温保存。
RNase A于-20℃保存，首次使用时加入Buffer P1中混匀，置4℃保存。
*Buffer PWT（洗涤液T）在首次使用时加入异丙醇30 ml混匀。
**Buffer PW（洗涤液）在首次使用时加入无水乙醇80 ml混匀。
有效期1年。
所需其它试剂：使用者需准备加入洗涤液的无水乙醇和异丙醇。
操作方法：1)收菌：取过夜培养菌1~3 ml菌液，装入1.5ml 或2ml离心管中，12,000 x g于室温离心2 min沉淀菌体，完全弃除上清。
2)重悬：加入200 µl Buffer P1，充分混悬震荡菌体沉淀10~15 sec，使其完全分散开，至无絮块存在。
3)裂解：加入200 µl Buffer P2，轻轻颠倒离心管3~5次，室温放置2~3 min，使细菌完全裂解，溶液透明。
质粒快速提取试剂盒
质粒快速提取试剂盒试剂盒组成●STE缓冲液（溶液1）●Lysis Buffer（溶液2）●3M NaAc，pH 4.8（溶液3）●结合缓冲液●浓缩漂洗液●洗脱缓冲液●离心吸附柱●废液收集管●RNaseA （10mg/ml）●产品说明书实验准备：●使用本试剂盒之前，请在每5ml溶液1中加入150ul RNaseA（10mg/ml），使RNaseA终浓度达到0.2mg/ml。
溶液1使用完毕后，请立即至于4℃保存。
如果溶液1放置时间过长（超过两个月），提取的质粒可能会有RNA污染。
这时可在步骤一后直接加入1－5ul RNaseA（10mg/ml），即可除尽RNA的污染。
有RNA污染的质粒，可加入0.5ul RNaseA（10mg/ml），37℃作用10分钟，此操作不会影响其他后续实验。
●浓缩漂洗液在使用前请按照1：3的比例加入无水乙醇，混匀后方可使用。
●在每次提取质粒实验前，请检查溶液2及结合缓冲液是否有高盐结晶。
如有结晶，请将其瓶盖拧松后置于微波炉中档连续加热约30秒，高盐结晶充分溶解后再使用。
实验操作步骤：1．收集2－3ml菌液沉淀于1.5ml离心管中。
加入100ul溶液1，振荡至彻底悬浮。
●为了获得高质量的质粒DNA，培养细菌的时间不宜过长，一般为12小时；●细菌沉淀中加入溶液1后，一定要彻底悬浮，否则抽提质粒DNA的纯度及得率会大大降低2．加入150ul溶液2，立即轻柔颠倒离心管数次，使菌体充分裂解，裂解后得菌体变得清亮。
随后将离心管室温放置1－2分钟（时间勿超）。
3．加入150ul溶液3，立即温和颠倒离心管数次，室温放置5分钟。
12000rpm离心12分钟。
●要获得更好得质粒提取效果，请于步骤2和步骤3后，冰上放置。
4．将500ul结合缓冲液加入离心柱中。
然后将步骤3的上清加入离心吸附柱中（尽量去除杂质），混匀。
12000rpm离心30秒钟。
倒掉废液收集管中得溶液。
5．加入750ul漂洗液于离心吸附柱中，12000rpm离心1分钟。
高纯度质粒小提试剂盒使用说明书
高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit(目录号：HS0103)产品包装试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml)150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml)50个（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。
若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。
加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。
产品简介本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。
菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。
通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。
北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。
所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。
产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。
2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。
质粒提取试剂盒说明书
质粒抽提：质粒抽提方法即去除RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
实验原理：提取质粒DNA的方法有很多种，从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取，从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取，从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等，各种不同的方法各有其优缺点，根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。
详细内容请参考《分子克隆实验指南》。
另外，复旦大学生化与分子生物学实验室一篇文章，提供了质粒提取机理的详细解说。
碱裂解法人们使用碱与SDS裂解法从E. coli（大肠杆菌）中分离制备质粒DNA已有30多年的历史。
将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。
尽管碱性溶剂使碱基配对完全破坏，闭环的质粒DNA双链仍不会彼此分离，这因为它们在拓扑学上是相互缠绕的。
只要OH-处理的强度和时间不要太过，当pH值恢复到中性时，DNA双链就会再次形成。
在裂解过程中，细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物，后者被十二烷基硫酸盐包盖。
当用K+取代Na+时，复合物会从溶液中有效地沉淀下来，离心除去变性剂后，就可以从上清中回收复性的质粒DNA。
在SDS存在的条件下，碱水解是一项非常灵活的技术，它对E. coli的所有菌株都适用，并且其细菌培养物的体积可以从1-500mL 以上。
煮沸法煮沸法是将细菌悬浮于含有Triton X-100和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中，然后加热到100℃使其裂解。
加热除了破坏细菌外壁，还有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA 变性。
但是。
闭环质粒DNA链彼此不会分离，这是因为它们的磷酸二酯骨架具有互相缠绕的拓扑结构。
当温度下降后，闭环DNA的碱基又各就各位，形成超螺旋分子，离心除去变性的染色体DNA和蛋白质，就可从上清中回收质粒DNA。
威格拉斯生物技术(北京)有限公司 质粒大量提取纯化试剂盒
1) 从大量的菌液或菌体提取质粒时，可按比例提高Buffer I、Buffer II和Buffer III的用 量，以充分裂解菌体，提高质粒的回收量和纯度。
2) 提取步骤7和纯化步骤5中，充分溶解沉淀对提高质粒产量和纯度非常重要。 3) 操作中要动作轻柔，防止机械剪切可能对DNA的损失。 4) 可在纯化的各个步骤前后留取数微升的DNA溶液，最后电泳鉴定比较提取和纯化
4 l）
0.5 ml -20℃
试剂盒可作20次（<150ml菌液/次）质粒提取纯化。常温运输。RNase A于-20℃保存， 首次使用时加入Buffer I中混匀，置4℃保存。Buffer IV与Buffer VI置4℃保存，其余溶 液保存于室温。有效期6个月。
0.5 ml Buffer I，完全溶解沉淀团块（可用宽口吸管轻轻吹打辅助溶解）。移入新 的1.5 ml离心管中，室温放置10~20 min。 8) 质粒粗提物用台式离心机室温高速离心2 min，上清移入新的1.5 ml离心管中。
质粒纯化： 1) 0.5 ml质粒粗提液中加入100 μl Buffer IV（杂质清除液A），轻轻混匀，12,000 x g
电话：（010）58941231, （010）58941232 传真：（010）58941232
网址：
电子邮件：runon@
如在步骤6未见沉淀担心dna丢失可保留上清液待完成全部操作后电泳鉴定以确定是否获得终产物数百微克高纯度的质粒dna离心后沉淀在管的侧壁上可能无法看到明显团块
威格拉斯生物技术（北京）有限公司
质粒大量提取纯化试剂盒
(Plasmid Maxprep Kit)
产品说明：
本试剂盒用碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA，采用全新技术，通过几次离心去除 蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质，获得高质量的质粒DNA。纯化DNA的OD260/280 通常在1.9左右，可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的 工作中。纯化过程均在Eppendorf管中操作，方法简单，不需特殊设备，无需过柱， 不用酚氯仿抽提；无论细菌裂解释放出的质粒在1mg以下还是在10mg以上, 基本都可 完全回收，不必担心质粒DNA的丢失。本方法提取纯化质粒DNA，对质粒损伤小， 即使是10kb甚至100kb以上的大型质粒或超大型质粒，只要碱裂解法能够提取，就可 以有效纯化。纯化过程约需1.5~2小时。
质粒提取试剂盒提取步骤
质粒提取试剂盒提取步骤1、用1.5 ml离心管收集5-6 ml菌液。
12,000 rpm离心1min，弃上清。
●应根据所培养菌体的浓度与质粒的拷贝数，确定收集的菌液量。
菌量过大可能导致溶菌不充分，纯化时会影响质粒纯度。
菌体的体积与质粒拷贝数参见注意事项。
2 、加入250 μl溶液Ⅰ/RNase A混合液，漩涡剧烈振荡直至菌体完全重新悬浮。
室温静置1- 2min。
●初次使用本试剂盒时，请将RNase A全部加入到溶液Ⅰ中，均匀混合后于 4℃保存。
可保存6 个月。
●不要残留细小菌块。
菌体悬浮充分与否将决定质粒DNA 得率的高低。
●室温静置1-2 min 是为使溶液中的RNA 被充分降解。
3 、加入250 μl溶液Ⅱ，轻柔地反复颠倒混匀5-6次。
室温放置1-2 min，使菌体充分裂解，直至形成澄清的裂解溶液。
●若溶液Ⅱ出现沉淀，请于37℃保温溶解。
待恢复至室温后使用。
沉淀的出现不会影响质粒DNA 的纯化结果。
●不可剧烈混和，否则会使染色体DNA 断裂。
●此步骤不宜超过5 min。
4、加入350 μl溶液Ⅲ，立即轻柔地反复颠倒混匀5-6次。
此时会出现白色絮状沉淀。
5 、12,000 rpm 室温离心10 min，收集上清。
6 、将上清置于DNA纯化柱中，静置1-2 min。
●如果收集的上清液过多，超过DNA 纯化柱容积（800 μl），可将上清分次加入DNA 纯化柱中。
7、 12,000 rpm 离心1 min，弃滤液。
●此时质粒DNA 被吸附于DNA 纯化柱的硅胶膜上。
8 、加入500 μl 溶液HB（异丙醇），12,000 rpm 离心1 min，弃滤液。
●此步骤的作用是将硅胶膜上吸附的蛋白、盐等杂质洗脱，以获得高质量质粒DNA。
9 、加入500 μl溶液Wash DNA buffer，12,000 rpm 离心1 min，弃滤液。
●溶液W 初次使用前用无水乙醇按1: 1.5 稀释，即含60%乙醇。
质粒大提试剂盒说明书
北京索莱宝科技有限公司质粒大提试剂盒说明书货号：D1110规格：10次保存：常温保存，复检期一年。
试剂盒内容：RNaseA(10mg/ml)1ml溶液Ⅰ60ml溶液Ⅱ60ml溶液Ⅲ80ml漂洗液2×15ml洗脱液30ml吸附柱10个收集管(50ml)20个说明书1份产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。
离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，一般从50-100ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取200-300μg高纯度高拷贝的质粒DNA，提取率达85-90%。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。
溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
操作步骤:第1页共3页1.收集50-100ml过夜培养的菌液11000rpm离心10分钟，尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。
2.向留有菌体沉淀的离心管中加入5ml溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA)，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。
3.向离心管中加入5ml溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
注意：①翻转一定要温和，以免污染细菌基因组DNA。
②作用时间不要超过5分钟，以免质粒受到破坏。
4.向离心管中加入7ml溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀(如菌液过多，可在此步放置5分钟，以尽可能的降解RNA)。
11000rpm离心10分钟，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，注意尽量不要吸出沉淀。
无内毒素质粒大量快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://EndoFree Plasmid Maxi Kit无内毒素质粒大量快速提取试剂盒目录号：PL13试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次(PL1301)RNaseA（10mg/ml）-20℃750µl溶液P1 4℃77 ml溶液P2 室温77 ml溶液N3 室温77 ml内毒素清除剂-20℃25 ml漂洗液WB 室温25 ml X 2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱DC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
内毒素清除剂常温运输，4度可以保存一个月，长期保存放-20℃。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100ug/ml）置于4℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会混杂有微量RNA 残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，粗提物通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素，然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
快速，方便，从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-1.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80-90 %。
高纯总 RNA 快速提取试剂盒（RLT-离心柱型） 说明书
高纯总RNA快速提取试剂盒（RLT-离心柱型）GK3091 20次GK3092 50次一.试剂盒组成Components GK3091 GK3092GenClean Column 2.0-ml Collection TubeRLT Solution aRW SolutionRPE Solution bDEPC-WaterProtocol202014ml15ml5ml2ml1copy505035ml30ml12ml4ml1copya. 在收到试剂盒后，应将RLT Solution取出存放于4ºC。
b. RPE Solution在首次使用前，必须加入4倍体积的无水乙醇。
无水乙醇必须是新开封的，保证无RNase污染。
用户自备试剂、材料：无水乙醇、70%乙醇(DEPC-H2O配制，植物和丝状真菌用)、PBS(动物细胞用)、液氮(植物和丝状真菌用)、RNase-free的Eppendorf管和Tips。
二．基本原理幼嫩组织和对数生长期的细胞生长旺盛，含有大量的RNA。
RLT Solution能使细胞裂解，释放出RNA的同时灭活RNase。
GenClean柱中的膜能选择性的与RNA结合，而蛋白等杂质不能结合，经RW Solution和RPE Solution的几步洗涤后结合在膜上的RNA用DEPC-H2O洗脱，可用于各种分子生物学实验。
三. 主要特点1. 安全，整个过程没有用酚和氯仿抽提，无须担心酚和氯仿对皮肤和呼吸道的腐蚀。
2. 纯度高，本试剂盒抽提得到的RNA样品可用于任何分子生物学操作。
3. 快速，整个抽提过程只需要20分钟。
四. 操作步骤表1 不同组织和细胞最大使用量样品最大使用量动物细胞 1x107动物组织 50mg细菌 1x109酵母 1x107植物组织 100mg丝状真菌 100mg为获得最佳的结果，采用的样品数量一定要合适。
可以参考表1。
细胞培养物、细菌菌体、酵母以及真菌菌丝应该在对数生长期收集，动物和植物样品应该取生长旺盛的幼嫩部位。
AxyPrep质粒大量提取试剂盒操作步骤
AxyPrep质粒大量提取试剂盒操作步骤AxyPrep Maxi Plasmid Kit (AXYGEN) AxyPrep质粒大量提取试剂盒操作说明实验准备:, 检查Buffer S1中是否已加入RNaseA。
, 检查Buffer W2中是否已加入无水乙醇。
, 检查Buffer S2是否出现沉淀，如有沉淀，在37?水浴中溶解沉淀，再平衡至室温。
,注意,Buffer S2不用时请立即盖紧，防止被空气中的CO中和。
, 2, 将Buffer S1，Buffer S3K和Buffer B放置4?预冷。
, 将洗脱液Eluent放置65?水浴中预热。
实验步骤:1. 将待提取的质粒对应菌液在5mL含有对应抗性的LB培养液中扩增培养过夜。
2. 次日，将5mL培养后的菌液接种至200mL含有对应抗性的LB培养液中扩增培养过夜。
3. 将菌液分装至5个50mL离心管中，每管40mL，4? 3000×g离心5min，彻底弃净上清。
4. 加入Buffer S1(已加RNaseA，4?预冷)，每管4mL，共20mL，涡旋充分重悬菌体。
5. 加入Buffer S2，每管4mL，共20mL，温和晃动混匀，室温作用5min。
6. 加入Buffer S3K(4?预冷)，每管4mL，共20mL，温和晃动混匀，室温作用5min。
7. 加入Buffer B(4?预冷)，每管4mL，共20mL，温和晃动混匀。
8. 4?10000×g离心10min，小心取上清至新管，最终合并为2管。
9. (可选步骤)再次4? 10000×g离心10min，小心取上清至新管。
10. 将上步收集的上清全部加入Maxiprep syringe filter中，将注射器芯从上方推入，下方用纯化柱(Maxiprep column)盛接滤液。
11. 推注注射器芯，将液体滤至纯化柱中，同时在纯化柱下方连接输液器(预先剪除输液针)，并用10mL注射器负压反复抽吸，直至液体滤尽。
质粒提取试剂盒提取步骤
质粒提取试剂盒提取步骤
一、质粒抽提
1、细胞抽提：将细胞培养物加入或移植到一种含有高浓度酸性剂的6-8mm离心管里，将细胞离心至半浸没，以保持溶液沉积在离心管壁上。
2、除去膜：添加浓酸溶液（如硫酸氢钠（NaHSO3）），膜结构会被溶解，使其细胞表面的结构被破坏，从而除去细胞的膜。
3、去染色：添加RNA隔离试剂，脱去细胞染色物质以获得高纯度的RNA质粒。
4、离心：离心至接近干旱，并移除液体，这时的混合液中已只剩下RNA质粒。
5、抹拭：将离心管倒过来，将质粒在管壁上均匀抹拭，这时的RNA 质粒就会在管壁上附着。
6、冷冻干燥：将管子放到冰上，将管子中的水分蒸发冷冻干燥，使RNA质粒固定在管壁上。
7、溶解：最后，将RNA质粒溶解到可以用于后续实验的溶液中。
二、PCR扩增：
1、PCR建库：将抽提的DNA放入PCR管中，加入PCR反应混合液（包括DNA聚合酶、dNTPs和MgCl2），并添加特长引物，即可进行PCR 反应。
2、PCR扩增：使用PCR反应温度循环加热并添加高分子量DNA来将DNA片段扩增。
3、电泳：将PCR配型片段送到电泳仪中，使用添加特异性引物的特定电泳条件，检测和鉴定基因突变。
试剂盒使用说明
*质粒小量提取试剂盒产品说明：■本产品采用经典的硅胶膜及碱裂法技术，硅胶膜柱可以在高盐、低pH值情况下高效可逆的结合DNA, 而蛋白及其它杂质不被结合而被除去,被结合的核酸在低盐、高pH值情况下可被洗脱出来.该试剂盒具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需半个小时便可完成。
使用本试剂盒可从1～5 ml的过夜培养的菌液中纯化得到1～40μg的高纯度质粒DNA(OD260/OD280 = 1.8～2.0)，此质粒DNA可直接用于DNA序列分析以及各种酶促反应等。
试剂盒组成：产品编号GS001-1 GS001-2 GS001-3试剂盒组成纯化次数50次100次200次RNaseA（10mg/ml）150μl 300μl 600μl溶液Ⅰ15ml 30ml 60ml溶液Ⅱ15ml 30ml 60ml溶液Ⅲ20ml 40ml 80ml溶液PB 30ml 50ml 100ml溶液W 30ml 2×30ml3×40ml溶液Eluent 5ml 10ml 20mlDNA纯化柱50个100个200个溶液W初次使用前用无水乙醇按1：1.5稀释，即含60%乙醇。
用途：提取用于酶切、转化、测序、PCR等试验用质粒。
保存：初次使用本试剂盒时，请将RNase A全部加入到溶液Ⅰ中，均匀混合后4℃保存。
溶液Ⅱ：室温保存，若出现沉淀，请于37℃保温溶解，待恢复至室温后使用。
其他试剂：室温保存。
操作步骤：1.用1.5 ml离心管收集1.5-5ml菌液，12000rpm离心60秒，弃上清。
(应根据所培养的菌液的浓度确定收集的菌液量)2. 加入250µl溶液Ⅰ/RNase A混合液，漩涡振荡使菌液完全重新悬浮。
(菌液重新悬浮对于获得高产量是非常重要的,为使RNA被RNase A充分降解,让悬浮菌液静置1-2分钟3. 250µl溶液Ⅱ，温和反复颠倒混匀4-10次,室温放置1-2分钟,以获得澄清的裂解液。
中提试剂盒说明书
实验操作步骤1.将过夜培养内含高拷贝质粒的细菌25-50ml，或内含低拷贝质粒50-100ml细菌, 5000转/分, 离心10分钟，彻底去除上清。
2.加入1.5 ml Solution I，用枪头或振荡器充分悬浮细菌。
3.加入3 ml Solution II，立即上下颠倒5－10次，使细菌裂解，室温放置至溶液呈透明状。
注意：不能用振荡器混，也不能用力混，否则会出现Genomic DNA污染。
4.加入6 ml Solution III，立即上下颠倒5－10次，使之充分中和, 室温放置5分钟。
注意：步骤2和3在冰上操作效果更佳。
注意：不能用振荡器混，也不能用力混，否则会出现Genomic DNA污染。
5.12,000 x g高速离心10分钟（速度高些更好，取决于离心机和离心管的类型）。
6.将3SM柱放入50ml收集管，将步骤5中的部分上清转移到3SM柱中；如离心后溶液表面没有漂浮物，上清可以直接倒入3SM柱。
室温放置5分钟；12000x g离心2分钟。
注意：转移上清时不要吸取沉淀，否则会出现Genomic DNA和蛋白质污染。
7.取出3SM柱，去掉收集管中的废液，将3SM柱放入同一支收集管中，吸取5 ml Wash SolutionI 到3SM柱，12000x g离心2分钟。
8.取出3SM柱，去掉收集管中的废液，将3SM柱放入同一支收集管中，吸取5 ml Wash Solution II 到3SM柱，12000x g离心2分钟。
9.取出3SM柱，去掉收集管中的废液，将3SM柱放入同一支收集管中，吸取5 ml Wash Solution 到3SM柱，12000x g离心2分钟。
(Wash Solution中需要加入50ml乙醇)。
10.重复步骤9一次。
11.取出3SM柱，去掉收集管中的废液，将3SM柱放入同一支收集管中，12000转/分室温离心2分钟。
12.将3SM柱放入干净的50ml的离心管中，加1000-1500ml TE室温下放置2分钟，12000x g 离心2分钟。
质粒提取试剂盒说明书
1使用前，在试剂盒中加入一小管核糖核酸酶到溶液一中。
保存在4°C2向dnawas缓冲液浓缩液中添加60 ml 100%乙醇，并在室温下储存除此之外，还需要一台容量为13000×G的离心机无核酸酶离心管无菌去离子水或te缓冲液纯乙醇操作步骤：（萃取过程在室温下进行）1在10-20ml试管中，将携带所需质粒的大肠杆菌接种于5mllb培养基lb（含50μg/ml 氨苄西林）中，37℃≤0.2培养12-16h，需要注意的是，常规的质粒提取使用的是Enda 阴性的大肠杆菌，如DH5α和JM109。
2取1.5～5ml常温菌液10000×g，离心1分钟，除去上清液。
三。
加入250.0.8l溶液I（含RNase A），用旋涡振荡器摇匀，直至细胞完全悬浮。
（用移液管再消耗）4加入250.0.8l溶液II，轻轻转动离心管4-6次，得到澄清的热解溶液。
最好在室温下孵育2分钟。
剧烈的混合会切断染色体DNA，降低质粒的纯度。
（储存溶液II时应拧紧盖子）5加入350.0.8l溶液III，轻轻倒置并混合几次，直到出现白色絮状沉淀6在室温下以13000×g离心10分钟后，会形成白色沉淀并迅速进入下一步7小心处理上清液，并用2ml离心管转移到干净的吸收柱中。
确保没有沉淀物和细胞碎片被吸入。
在10000×g室温下离心1分钟，直至裂解液完全通过吸收柱8取纯化后的蛋白质，在离心条件下，取剩余蛋白1.500×1.0，进行离心分离。
如果下一步不需要高纯度质粒，如酶消化等筛选方法，这一步可以省略9滤液弃去，用100%乙醇稀释的750.0.8l洗涤缓冲液冲洗吸收柱，在10000×g离心1分钟，滤液丢弃。
注意：浓缩前必须用纯乙醇稀释洗涤液。
参见标签中的方法如果结冰，使用前必须恢复到室温10此步骤可选：加入750.0.8l洗涤缓冲液清洗吸收柱1113000×g吸收柱必须离心2分钟，以确保去除乙醇。
离心柱型dna提取试剂盒的基本流程
离心柱型dna提取试剂盒的基本流程
1. 样品的准备
在进行DNA提取之前，首先需要准备样品。
样品可以是血液、唾液、组织、细胞等，但
是需要根据样品的性质选择合适的提取方法。
一般来说，采用离心柱型DNA提取方法的
样品需要先经过离心、洗涤等处理，去除其中的细胞碎片、蛋白质和其他杂质。
2. DNA的溶解
将样品中的细胞溶解在含有离子表面活性剂的缓冲液中，使DNA从细胞核中溶解出来。
通常情况下，使用蛋白酶K进行细胞溶解，加速DNA的释放。
3. DNA的结合
将DNA溶解液加入离心柱中，离心柱上的硅胶膜能够特异性地结合DNA，将其分离出来。
此步骤是离心柱提取法的关键步骤，也是DNA提取的核心步骤。
4. 杂质的去除
经过上一步骤，DNA和其他细胞组分已经成功地分离出来，接下来需要对离心柱中的杂
质进行去除。
通常会使用洗涤缓冲液进行洗涤，从而将杂质彻底去除。
5. DNA的洗脱
经过洗涤之后，将离心柱插入含有洗脱缓冲液的离心管中，通过离心将DNA洗脱出离心柱。
此时，得到的洗脱液中含有纯度较高的DNA，可以用于后续的分子生物学实验。
6. DNA的保存
将洗脱后的DNA溶液保存在-20℃或更低的温度下，以防止DNA的降解。
此外，也可以
将DNA进行分装，并标记好相关信息以便后续实验使用。
总结来说，离心柱型DNA提取试剂盒的基本流程包括样品的准备、DNA的溶解、DNA的
结合、杂质的去除、DNA的洗脱和DNA的保存。
通过这些步骤，可以快速、高效地从样
品中提取出高质量的DNA，为后续的实验研究提供充分的保障。
离心柱型dna提取试剂盒的基本流程
离心柱型dna提取试剂盒的基本流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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质粒 DNA 提取及纯化试剂盒 说明书
质粒DNA提取及纯化试剂盒使用说明书产品简介GBpure Plasmid试剂盒是质粒DNA提取领域中的突破性进展，它有效结合了细胞裂解，杂质去除，及质粒纯化等功能。
无需过柱，不用酚氯仿抽提，确保所提质粒DNA高产量、高质量。
并且可按用户需求灵活制定容量大小。
产品特色●简单:添加GBpure Plasmid试剂使细胞裂解，释放DNA，及杂质去除有效结合起来。
●延展性: 一盒GBpure Plasmid试剂盒可以进行：Miniprep, Midiprep或Maxiprep;无需购买额外的试剂盒。
●方便:无需过柱，无需过滤，无需高效液相色谱法，无需超速离心机，无需特殊设备。
●无毒性:无酚、氯仿，无饱和正丁醇，无溴化乙锭，无氯化铯。
●快速:一分钟完成菌体沉淀，五分钟完成颗粒细菌碎片，10分钟完成沉淀质粒DNA，整个过程只需30分钟。
●高纯度:A260/A280 = 1.7-1.8. 所得质粒DNA无任何抑制剂，可应用于所有分子生物学的操作。
●高产量: 从1 ml (mini), 10 ml (midi), 100 ml (maxi) 的过夜培养基中获得大约5 μg,50 μg, 500 μg的DNA质粒。
●质优价廉订购信息与储存条件室温保存。
有效期12个月。
使用限制：本产品属科研专用。
不用于人类或动物的诊断、治疗。
GBpure Plasmid MiniPrep Protocol从1-2 ml过夜细菌培养中提取5-10 μg质粒DNA操作方法1.取1- 2 ml过夜培养菌液，装入2 ml离心管中，室温最大速度（14,000 × g）离心1 min沉淀菌体，完全弃除上清。
2.加入300 μl Buffer P1 重悬液，充分混匀震荡菌体沉淀10-15 sec，使其完全分散开，至无絮块存在。
3.加入300 μl Buffer P2 裂解液，轻轻颠倒离心管3-5次，室温放置1 min，使细菌完全裂解，此时溶液应呈透明。
质粒大提说明书Qiagen
质粒大提说明书QiagenOrder: 010-********Toll-free: 800-990-6057 /400-810-6057TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD 版本号: DP141210产品内容产品组成 DP117 (10 preps)平衡液BL (Buffer BL) 30 ml溶液P1 (Buffer P1) 100 ml溶液P2 (Buffer P2) 100 ml溶液P4 (Buffer P4) 100 ml漂洗液PW (Buffer PW) 70 ml洗脱缓冲液TB (Buffer TB) 30 mlRNase A (100 mg/ml) 500 μl过滤器CS1 (Filtration CS1) 10个吸附柱CP6 (Spin Columns CP6) 10个收集管(50 ml) (Collection Tubes 50 ml) 20个储存条件该试剂盒置于室温(15-25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2-8℃。
2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10 min ，以溶解沉淀。
第一次使用前将RNase A 加入溶液P1中，混匀后置于2-8℃保存，可稳定保存12个月以上。
单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月以上。
EndoFree Maxi Plasmid Kit无内毒素质粒大提试剂盒（离心柱型）目录号：DP117本试剂盒采用独特的硅胶膜吸附技术，高效专一地结合质粒DNA。
同时采用特殊的溶液P4和过滤器CS1，可有效的去除内毒素、蛋白等杂质；整个提取过程仅需1h，方便快捷。
使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化和转染多种细胞等实验。
推荐每次菌液使用量：高拷贝质粒推荐使用量为100 ml，得率一般在500-1500 μg左右；低拷贝质粒推荐使用量为200 ml，得率一般在200-600 μg左右。
质粒大量抽提试剂盒说明书
宁波保税区西区创业大道7号2C-1,315800, 电话：+86-574-86822306 传真：+86-574-26893101, sales@质粒大量抽提试剂盒使用说明书质粒大量抽提试剂盒使用说明书（（离心法离心法））产品编号 产品名称包装 DNAP002质粒大量抽提试剂盒（离心法）6×包装清单包装清单：：Solution Ⅰ（溶液Ⅰ） 60ml Solution Ⅱ（溶液Ⅱ） 60ml Solution Ⅲ（溶液 Ⅲ） 84ml Wash Solution （冲洗液） 21ml Elution Buffer （洗脱液）9ml Affinity Column （质粒纯化柱）6个 Collection Tube （废液收集管） 6个 Instrution （说明书）1份操作步骤操作步骤：：1. 取40ml 过夜培养菌液，放于Collection Tube 中，11,000－13,000rpm 离心2分钟，离心速度低时应适当延长离心时间。
2. 弃上清，再加入40ml 菌液，重复步骤1。
弃上清，离心1分钟，用吸头吸干多余液体。
3. 加10 ml 含RNase A 的Solution Ⅰ，用吸头冲打沉淀或用振荡器使菌体充分混悬。
4. 加10 ml Solution Ⅱ，上下翻转混合6－10次，使菌体充分裂解，形成清亮溶液。
5. 加14 ml Solution Ⅲ，上下翻转混合6－10次，于4℃静置10分钟，应见大量白色沉淀生成。
6. 于4℃，11,000rpm 离心30分钟。
离心期间，将Affinity Column 放在Collection Tube 中。
7. 将上清倒入准备好的Affinity Column 中，11,000 rpm 离心2分钟。
也可将过柱液重新倒回AffinityColumn 中，11,000 rpm 离心2分钟，以增加回收率。
8. 弃过柱液，加8.4ml Wash Solution 于Affinity Column 中，11,000 rpm 离心2分钟。
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杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://
HighPure Plasmid Maxi Kit
高纯度质粒大量快速提取试剂盒
目录号：PL12
试剂盒组成、储存、稳定性：
试剂盒组成保存10次(PL1201)
RNaseA（10mg/ml）－20℃750µl
溶液P1 4℃77 ml
溶液P2 室温77 ml
溶液N3 室温77 ml
去蛋白液PE 室温63 ml
第一次使用前按说明加指定量乙醇
漂洗液WB 室温25 ml X 2
第一次使用前按说明加指定量乙醇
洗脱缓冲液EB 室温20 ml
吸附柱DC 室温10个
收集管（50ml）室温10个
本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:
1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100μg/ml）
置于4℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热
几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时
盖紧盖子。
产品介绍：
本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附
量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌
株如JM系列、HB101也可以轻松去除。
有效防止了质粒被核酸酶降解。
3.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
快速、方便，从
150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-1.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80 %左右。
4.获得的质粒产量高、超螺旋比例高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、
体外转录、测序等各种分子生物学实验。
注意事项
1.所有的离心步骤如未加另外说明均在室温完成，使用转速可以达到12,000 x g，带
50ml转头的台式离心机。
2.提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
如果所提质粒为低拷贝
质粒或大于10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、N3的用量，洗脱缓冲液应在70℃预热。
可以适当的延长吸附和洗脱的时间，提高提取效率。
3.得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。
OD260
值为1相当于大约50μg/ml DNA。
电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。
本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。
4.质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知道。
处于环状或超螺旋状态的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。
5.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。
也可以使用水洗
脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。
用水洗脱，质粒应该保存－20℃。
质粒DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：
⇨第一次使用前请先在漂洗液WB瓶和去蛋白液PE瓶中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
⇨将RNase A全部加入溶液P1中，混匀。
每次使用后置于2-8℃保存。
1.取150-200 ml (最多不超过300 ml)过夜培养的菌液，12,000 x g（约10,000rpm），
离心1-2分钟，尽可能的倒干上清，收集菌体。
收集超过50毫升菌液，可以离心弃上清后，在同一个50ml管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。
2.用7.5ml溶液P1重悬菌体沉淀，移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。
如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
3.加7.5ml的溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解，室温放置4-5分钟。
温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时间不应超过5分钟！以免质粒受到破坏。
此时菌液应变得清亮粘稠。
如果很浑浊，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
4.加7.5ml溶液N3，立即温和地上下翻转6 -8次，充分混匀此时会出现白色絮状沉
淀。
12,000 x g离心10-15分钟，小心取上清至新管，避免吸取到漂浮的白色沉淀。
加入溶液N3后应该立即混匀，以免产生SDS的局部沉淀。
5.向上清中加入0.5体积异丙醇（约10ml）后充分颠倒混匀后分多次（每次不超过
15ml）转入吸附柱DC中（吸附柱放入收集管中），12,000 x g离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
直到所有混合溶液通过此吸附柱。
6.加入10ml去蛋白液PE（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 x g离心1分钟，
弃掉废液。
此步骤为了去除痕量核酸酶等杂质，如所用菌株为JM系列、HB101等endA菌株或野生型菌株，核酸酶含量丰富，应加此步骤；如所用菌株为XL-1 Blue、Top10和DH5α等缺陷型菌株，核酸酶含量低，则可略过此步骤。
7.加入10ml漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 x g离心1分钟，
弃掉废液。
再加入10ml漂洗液WB，重复漂洗一次。
8.将吸附柱DC放回空收集管中，最高速（最好大于12,000 x g）离心3分钟以干燥
基质膜上残留乙醇，用枪头吸除内圈压环和柱壁之间可能残留的乙醇，打开盖子室温晾干3-5分钟。
该步骤为彻底去除吸附柱中残留乙醇，残留乙醇抑制下游反应并且严重降低洗脱效率，降低质粒产量。
9.取出吸附柱DC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加1-2ml洗脱
缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热可提高产量），室温放置3分钟，12,000 x g离心3分钟。
推荐：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置3分钟，12,000 x g离心3分钟。
洗脱两遍可提高浓度约10%。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要质粒浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是需注意体积过小降低质粒洗脱效率，减少质粒产量（最小不应少于1ml）。