淀粉的国标测定方法
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淀粉的国标测定方法
测定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法(酶-直接法)
一、酶水解法
1.原理
样品经除去脂肪及可溶性糖类后,其中淀粉用淀粉酶水解成双糖,再用盐酸将双糖水解成单糖,最后按还原糖测定,并折算成淀粉。
2.适用范围
GB5009.9-85,适用于所有含淀粉的食物。
3.仪器
(1)回流冷凝器
(2)水浴锅
4.试剂
除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯。
(1)乙醚
(3)碘溶液:称取3.6 g碘化钾溶于20 ml水中,加入1.3 g碘,溶解后加水稀释至100 ml。
(4) 85 %乙醇。
(5)其余试剂同《蔗糖测定方法》
5.操作方法
5.1 样品处理
称取2~5 g样品,置于放有折叠滤纸的漏斗内,先用50 ml乙醚分5次洗除脂肪(注:如果脂肪含量少,此步骤可免),再用约100 ml85 %乙醇洗去可溶性糖类(注:此步骤目的是去除可溶性糖),将残留物移入250 ml烧杯内,并用50ml水洗滤纸及漏斗,洗液并入烧杯内,将烧杯置沸水浴上加热15 min,使淀粉糊化,放冷至60 ℃以下,加20ml淀粉酶溶液,再55~60 ℃保温1h,并时时搅拌(注:温度过高,淀粉酶的活性破坏)。然后取1滴此液加1滴碘溶液,应不现兰色,若显兰色,再加热糊化并加20ml淀粉酶溶液,继续保温,直至加碘不显兰色为止。加热至沸,冷后移入250ml容量瓶中,并加水至刻度,混匀,过滤。(注:此时淀粉已水解成双糖,过滤可去除残渣和纤维素)弃去初滤液,取50 ml滤液,置于250ml 锥形瓶中,加5 ml 6 mol/L盐酸,装上回流冷凝器,在沸水浴中回流1h,冷后加2滴甲基红指示剂,用5mol/L氢氧化钠溶液中和至中性,溶液转入100 ml容量瓶中,洗涤锥形瓶,洗液并入100ml容量瓶中,加水至刻度,混匀备用。(淀粉在沸水浴条件下糊化是淀粉水解的第一步反应,然后在淀粉酶的作用下,分解成短链淀粉、糊精、麦芽糖等低聚合的糖,所以在淀粉酶解后需用酸进一步水解得到葡萄糖。)
5.2 测定
按《还原糖的测定方法》操作。同时量取50 ml水及与样品处理时相同量的淀粉酶溶液,按同一方法做试剂空白试验。
6.计算
X1=
(A1-A2)
×0.9
×100 (1)
m1×
V1
×
V3
×1000
V2 100
式中: X1--样品中淀粉的含量,%;
A1--测定用样品中还原糖的含量。Mg;
A2--试剂空白中还原糖的含量,mg;
0.9--还原糖(以葡萄糖计)换算成淀粉的换算系数;
m1--称取样品质量,g;
V1--水解用样品溶液体积,ml;
V2--样品定容总体积,ml;
V3--测定用样品处理液的体积,ml。
二、酸水解法
1.原理
样品经除去脂肪及可溶性糖类后,其中淀粉用酸水解成具有还原性的单糖,然后按还原糖测定,折算成淀粉。
2.适用范围
本法适用于含淀粉的食物
3.仪器
(1)水浴锅。
(2)高速组织捣碎机:1200 rpm。
(3)皂化装置并附250 ml锥形瓶。
4.试剂
除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯。
(1)乙醚。
(2) 85%乙醇溶液。
(3) 6mol/L盐酸溶液。
(4) 10mol/L氢氧化钠溶液。
(5) 2.5mol/L氢氧化钠溶液。
(6)甲基红指示液:0.2 %乙醇溶液。
(7)精密pH试纸。
(8) 20 % 乙酸铅溶液,
(9) 10 % 硫酸钠溶液。
(10)其余试剂同还原糖的测定。
5.操作方法
5.1样品处理
洗液合并于容量瓶中,加水稀释至刻度。过滤,弃去初滤液20 ml,滤液供测定用。
5.2 测定
按还原糖的测定步骤操作。
6.计算
X 2=
(A
3
-A
4
)
×0.9
×100 ……………
( 1 )m
2
×50 ×V2×1000
250 100
式中: X2--样品中淀粉的含量,%;
A3--测定用样品中还原糖的含量。mg;
A4--试剂空白中还原糖的含量,mg;
m2--称取样品质量,g;
V2--测定用样品处理液的体积,ml。
500--样品液总体积,ml;
0.9--还原糖(以葡萄糖计)换算成淀粉的换算系数;
(注:酸水解能分解部分半纤维素,形成具有还原力的单糖,如木糖、阿拉伯糖等,可影响分析结果。为了比较正确地测定食物中淀粉含量,建议采用淀粉酶糖化淀粉,除去不可溶性的残渣后,再用酸水解使之成为葡萄糖,然后测定其含量,最后换算成淀粉。
三、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法(酶-直接法)
1.原理
样品先在37℃下经α-淀粉酶水解,使可消化淀粉转化成葡萄糖,用80%乙醇提取,未水解的抗性淀粉部分经沸水浴凝胶化后,在淀粉葡萄糖苷酶转化成葡萄糖,用葡萄糖氧化酶法分别测定葡萄糖含量,再换算成可消化淀粉和抗性淀粉含量。
2.适用范围
参考Englyst和Champ的方法。适用于所有含淀粉食物的测定。
3.仪器
(1)恒温水浴箱
(2)温箱
(3)分光光度计
4.试剂
除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯。
(1) 0.1mol/L乙酸缓冲液(pH 5.0):称取14.28 g 乙酸钠(CH3COONa·3H2O)溶于水中,加入2.7ml 冰乙酸,并调节pH 5.0,用水定容至1 L。
(2)酶溶液:分别称取4gα-淀粉酶溶液(α-amylase,Sigma公司)、1g淀粉葡萄糖苷酶溶液(amyloglucosidase,Sigma 公司)和0.3g转换酶(invertase,Sigma公司)溶液于研钵中,用 0.1mol/L 乙酸缓冲液研磨制成匀浆,并调节体积为100ml。3000rpm离心5min,取上清液。
(3)淀粉葡萄糖苷酶溶液:称取2 g 淀粉葡萄糖苷酶(amyloglucosidase, Sigma 公司),加100 ml0.1 mol/L 乙酸缓冲液研磨成匀浆。3000 rpm离心5 min,取上清液。
(4) 80%乙醇:800ml 乙醇加水至1L。
(5) 4mol/L氢氧化钾溶液:称取224g氢氧化钾,用水溶解并加至1L。
(6) 2 mol/L乙酸溶液:量取冰乙酸118ml,加水至1L,混匀。