医学免疫学实验课件-实验五 中性粒细胞吞噬检测
中性粒细胞吞噬功能测定 PPT课件
(1)仔细消毒后，每个班取5ml静脉血于肝素抗凝管内（轻轻摇匀）。
合液”置于洁净载玻片上，用另一载玻片推片，制成血涂片。
(4)待血涂片自然凉干后，用瑞氏染液染色。
瑞氏染色
瑞氏染液数滴覆盖血涂片上 染色1min 再加等量的
PH6.8 PBS与染液混合，染色10~15minΒιβλιοθήκη 用蒸馏水冲洗自然干燥
（平持玻片，在一端加水，使染料“漂走” ）
中性粒细胞：
A.在抗化脓性细菌感染中起重要防御作用；
B.引起感染部位急性炎症反应； C.参与超敏反应（如III型超敏反应），引 起机体免疫病理损伤。
细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能 ——小吞噬实验
将新鲜血液和细菌混合，经合适时间后涂片 染色，即能观察到被吞噬到中性粒细胞内但还未 被消化掉的细菌。
擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。
油镜观察
首先寻找中性粒细胞——观察胞质中有无吞噬的细菌。如染
色正确，可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色，而中性粒细
胞胞浆染成淡红色。
计算吞噬百分率和吞噬指数
注意事项
(1) 人类白细胞的吞噬活性在 37 ℃时最好，温度过高过低均 会使其吞噬能力减低。 (2)个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力亦不同。 (3)掌握好细菌与中性粒细胞的作用时间。 中性粒细胞对细菌的吞噬是一个非常迅速的过程，吞噬5min 时吞噬率达45%，10min时接近80%，20min 即达平台。 (4)取“细菌－全血”涂片时，要混匀后再取；制作血涂片要 求推出尾部，过厚或过薄，均不利观察。
生命周期短，不能分裂，靠“造血”补充；
胞核呈多叶状；胞质内有多种颗粒；
内含髓过氧化物酶、防御素、溶菌酶、组织蛋白酶、乳铁 蛋白、碱性磷酸酶等。 中性粒细胞特有，巨噬细胞没有这种酶， 为中性粒细胞在细胞化学上的标志。
中性粒细胞吞噬试验PPT课件
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8.计数
吞噬指数：观察200个中性粒细胞， 计算其中被吞噬的细菌总数，平均 每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为 吞噬指数。
200个中性粒细胞中吞噬的细菌总数
吞噬指数=
200
参考值：1.01-1.11
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2019/11/17
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5.推片 6.瑞氏染色 7.镜检 油镜检查：寻找中性粒细胞，如果染
色结果正确，可见细胞核 及被吞噬的细菌染成紫色， 而粒细胞的细胞浆则为淡红色。
7
8
8.计数
吞噬百分率：观察200个中性粒细 胞，计算其中吞噬有细菌的中性粒 细胞数，计算出吞噬细胞百分率。
200个中性粒细胞中吞噬细菌的细胞数数
X100%
实验六 中性粒细胞的吞噬作用
临床微免教研室
1
2
实验目的
1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理 和方法。 2.通过本实验理解机体的非特异性 免疫机制。
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实验原理
血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞， 通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个 步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞 及病原微生物等异物，是机体非特异 性免疫的重要组成部分。
4
实验材料
1.白色葡萄球菌8h培养物 2.抗凝人血（肝素抗凝管）、瑞氏 染液、蒸馏水 3.试管、玻片、采血针、酒精棉球、 吸管、滴管、显微镜、香柏油
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试验步骤 1.白色葡萄球菌培养物的准备 2.采血（2滴） 3.加菌液（用微量加样器取准备好的
菌液40ul加入肝素抗凝血试管内， 轻轻混匀） 4.37℃温育30min
中性粒细胞吞噬功能测定_PPT幻灯片
熟悉中性粒细胞的生物学特性及其意义、观察 机体的非特异性免疫现象
掌握血液中的中性粒细胞体外吞噬异物能力的 测定方法及用途
小吞噬细胞
即是中性粒细胞； 来源于骨髓造血干细胞； 占白细胞总数的60%~70%； 生命周期短，不能分裂；
中性粒细胞生物学特性：
A、在抗化脓性细菌感染中起主要 防御作用
B、引起感染部位急性炎症反应 C、参与超敏反应（如Ⅲ型超敏反 应），引起机体免疫病理损伤。
细胞核呈多叶状，胞质内含多种颗 颗粒粒内：含髓过氧化物酶、防御素、溶菌酶、
组蛋白酶、乳铁蛋白、碱性磷酸酶等。
中性粒细胞所特有，巨噬细胞没有这种酶， 为中性粒细胞在细胞化学法上的标志。
实验原理
吞噬细胞可以通过趋化、调理、吞入和杀菌等 步骤，能吞噬和消化衰老、损伤及病原微生物 等异物，是机体固有免疫的重要组成部分。在 一定条件下，将白细胞悬液与细菌混合，保持 一段时间后，取样涂片染色镜检，可以测定中 性粒细胞吞噬细菌的百分率和吞噬指数。该实 验可助诊断吞噬细胞功能障碍的疾病。
That’s all. Thank you!
注意事项
1、中性粒细胞吞噬活性在37℃时最好，温度过 高或者过低均会使其吞噬能力减低；
2、个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬 能力不同；
3、掌握好中性粒细胞与细菌的作用时间（中性 粒细胞对细菌吞噬非常迅速，5min左右吞噬率 达45%，10min左右接近80%，20min左右即达平 台）。
4、制片之前要混匀，涂片过薄、过厚都会影响 观察。
实验结果
在油镜下可细胞核及被吞噬的细菌被染成紫色， 而中性粒细胞的胞浆被染成淡红色。
被 吞 入 细 菌
指标检测
1、吞噬百分率= 100个中性粒细胞中吞噬了细菌的细胞数 100
免疫学实验 ppt课件
【实验结果】
吞噬细菌的中性粒细胞 数 吞噬百分率 100% 观察记录的吞噬细胞总 数
被吞噬的细菌总数 吞噬指数 观察记录的吞噬细胞总 数
医学课件
6
【实验思考】 1、在吞噬细胞中发现细菌时， 如何区别吞噬的细菌和粘附在吞噬 细胞表面的细菌？ 2、简述机体非特异性免疫的概 念及特点。
3．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以 采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。 用另一载玻片一端取适量血液加入抗抗A分型 试剂，并混匀；用另一端再取适量血液加入 抗抗B分型试剂，并混匀。用干棉签止血。 4．观察红细胞有无凝集发生。如有凝集， 可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均 匀分散。判定结果后把玻片放入消毒液中。
医学课件 27
【实验结果】 将玻片对着强光源，先观察 AFP 阳性 血清孔与抗体孔之间的白色沉淀线，然 后再观察待检血清孔与抗体孔之间是否 也有沉淀线出现，如有沉淀线，则表示 AFP试验阳性，否则AFP试验为阴性。
医学课件
28
【注意事项】 1 ．电泳时电流不宜过大，以免蛋白 变性。 2 ．抗原和抗体的电极方向不能搞错。 3 ．抗原和抗体的浓度要适当，抗原 太浓或太稀都不易出现沉淀线。 4 ．电泳所需时间与孔间距离有关， 距离越大，电泳时间越长。
血红蛋白吸管凹玱片载玱片采血针微量加样器湿盒显微镜恒温培养箱75酒精棉签香柏油二甲实验方法1用微量加样器吸叏肝素20ul加入洁净凹玱片2用酒精棉签消毒手指后刺破皮肤以血红蛋白吸管叏血40ul立即放入盛有肝素癿凹玱片凹孔内并充分混匀
免疫学实验课件
生化与免疫学实验室
医学课件
1
中性粒细胞的吞噬作用
【实验目的】
医学课件
31
【实验原理】 人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）包括淋 巴细胞和单核细胞。单个核细胞的体积、 形态和比重与外周血其他细胞不同。因此 利用一种介于1.075～1.090之间而近于等 渗的聚蔗糖-泛影葡胺（ficoll-hypaque） 混合分离液作密度梯度离心，离心后不同 比重的血细胞在分离液中呈梯度分布。从 而分离出PBMC。
免疫实验
《医学免疫学》实验课内容实验名称：中性粒细胞吞噬功能测定实验目的与要求：掌握中性粒细胞吞噬金黄色色葡萄球菌实验的操作过程；瑞氏染色的基本步骤及吞噬百分率的计算实验仪器、试剂：葡萄球菌培养液抗凝剂载玻片瑞氏染液水浴箱离心机注射器止血带消毒药水实验动物及来源：无实验原理：中性粒细胞具有非特异性的吞噬功能操作方法：1.采血：取人静脉血2毫升，放入含肝素的小试管中，混匀，防止凝血。
2.菌液制备：取葡萄球菌液，加生理盐水离心洗涤2～3次(2000r/min, 5～10min），去上清，留沉淀加入生理盐水，用比浊法配制到适宜浓度（1×107个/ml）。
3.混合温浴：将制备好的菌液0.5毫升加入到抗凝的人静脉血中轻轻混匀，置于37℃水浴箱中水浴30分钟（每10分钟轻摇匀一次）。
4.吸取混合悬液点在玻片上，制成血涂片，干燥后进行瑞氏染色，油镜下观察。
实验现象与数据：镜下可见中性粒细胞细胞核呈蓝色，被吞噬的葡萄球菌呈蓝（紫）色，计数200个中性粒细胞，并计算吞噬阳性细胞的百分率。
结果分析与结论：吞噬率＝吞噬细菌中性粒细胞/200个中性粒细胞×100%注意事项：1.菌液配备时注意无菌操作。
2.注意静脉血和菌液应按一定体积比混合，血﹕菌=5﹕1思考与创新：实验课教案实验名称：E-玫瑰花环形成实验实验目的与要求：掌握人T淋巴细胞形成E-花环的实验原理和操作方法；熟悉T淋巴细胞的功能检测方法。
实验仪器、试剂：淋巴细胞分层液（Ficou）、1%绵羊红细胞、肝素抗凝人血、无钙镁Hanks液、水平离心机、0.8%戊二醛、37℃水浴箱、显微镜、其他。
实验动物及来源：无实验原理：体外测定人外周血中T淋巴细胞数量的方法有多种,以玫瑰花环试验最为简易常用，T淋巴细胞数量的变化与机体的细胞免疫功能状态有一定关系。
人周围血液中T淋巴细胞表面有绵羊红细胞受体，与绵羊红细胞相遇时，在其周围形成花环样细胞团，凡能结合三个以上绵羊红细胞者称为E攻瑰花环形成细胞。
实验五 大吞噬实验(医学免疫学,人民卫生出版社第7版)
大吞噬实验
【实验材料】
1.试剂：6%无菌淀粉肉汤液：取肉汤培养基100mL，加 入水溶性淀粉6g，混匀，高压灭菌； 无菌Hanks液、生理盐水、瑞氏染液，蒸馏水
2.器材：显微镜、无菌注射器、载玻片、烧杯、吸管、 解剖剪、镊、解剖板
3.材料：体重22~25克健康小鼠、 2%鸡红细胞悬液：以生理盐水按红细胞比容配制
噬碱性粒细胞
噬酸性粒细胞
淋巴细胞
中性粒细胞
单核细胞
将染色后的涂片置于显微镜油镜下观察，绘图记录。 未被吞噬的鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞的吞 噬细胞
【检测指标】
随机观察100个巨噬细胞，分别计数吞噬有鸡 红细胞的细胞数和所吞噬的鸡红细胞总数，按下 述公式分别计算吞噬百分率和吞噬指数。
显微镜油镜的使用方法
• 采用一种和玻片折光率相
接近的介质如香柏油，加于标本 与玻片之间，使光线不通过空气， 这样射入镜头的光线就较多，物 象就可看得清楚。
先用低倍镜找到视野：粗调、细调 依次再进行中倍、高倍观察 油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后 a．将光线调至最强程度（聚光器提高，光圈全部开放）。 b．转动粗调节器使载物台下降，滴香柏油1小滴 （不要过多，不要涂开）于接物镜正下方标本上。 c．转动接物镜转换盘，使油镜头于镜筒下方。 d．俯身镜旁侧面在肉眼的观察下，转动粗调节器使油镜头徐徐浸入香柏 油内，轻轻接触玻片为止。 e．慢慢转动粗调节器，使载物台徐徐下降至见到标本的物象为止。 f．转动微调节器，使视野物象达到最清晰的程度。 g．左手徐徐移动推进器，并转动微调节器以观察标本。 h．标本观察完毕后，转动粗调节器将载物台下降，取下标本玻片。 先用擦镜纸擦去镜头上的油， 然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油， 最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原
医学免疫学实验课件-实验五 中性粒细胞吞噬检测
油镜观察
目 录 末页
肝素抗凝血：
外周血2ml + 肝素少量
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推血片：
1.左手的拇指和中指夹持载玻片的边缘，血滴 在离载玻片一端中4～5毫米处。
2.另取一边缘光滑平整的玻片作推片，将推片 一角置于血滴，向下使之接触到载玻片，使血液 均匀分散在推片与载片的接触处。
3.使推片与载玻片呈30～40°角，向另一端平 稳地推出。
目 录 末页
中性粒细胞吞噬功能的检测
吞噬细 菌的中 性粒细 胞
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光学显微镜油镜的使用和保护
一、油镜头的识别 镜头下缘有一圈白线，
并刻有100×、或oil字样。
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二、油镜的使用
检查染色标本时，光度宜强。 显微镜亮度开关调至最亮，光圈完全打开， 集光器上升与载物台相平。
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——细胞免疫检测技术
天然免疫功能测定
检测机体天然免疫功能的状态，是评价机体 免疫功能的重要组成部分。
目 录 末页
天然免疫功能测定
常用方法：
中性粒细胞吞噬功能检测 巨噬细胞吞噬功能检测 溶菌酶的测定 补体参与的反应
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中性粒细胞吞噬功能的检测
中性粒细胞吞噬细菌的现象称为小吞噬现 象，可以通过体外实验观察其吞噬细菌的情 况并测定吞噬功能。
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四、显微镜的维护
1.精密仪器要注意爱护，勿随意拆卸和碰撞。 2.细调节器是显微镜最精细的部分，不能往返 连续回转。 3.显微镜使用过程中，如发现问题应及时向老 师报告并进行登记，以便检修。
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三、油镜的使用原理
光线通过玻片与油镜头之 间的空气时，因介质密度不 同发生折射，使物象显现不 清。
中性粒细胞吞噬实验报告
中性粒细胞吞噬实验报告中性粒细胞吞噬实验报告细胞是生命的基本单位，它们在体内发挥着各种重要的功能。
其中，中性粒细胞是一类重要的白细胞，它们在机体的免疫防御中起着至关重要的作用。
为了更好地了解中性粒细胞的功能，我们进行了一项中性粒细胞吞噬实验。
实验目的：通过观察中性粒细胞对细菌的吞噬过程，探究中性粒细胞的吞噬能力以及其在免疫防御中的作用。
实验材料：1. 中性粒细胞培养液2. 细菌培养液3. 显微镜4. 培养皿5. 移液器6. 培养箱实验步骤：1. 准备中性粒细胞培养液和细菌培养液。
2. 取一块无菌培养皿，使用移液器将中性粒细胞培养液滴在培养皿中。
3. 添加适量的细菌培养液到培养皿中，使细菌均匀分布。
4. 将培养皿放入预热的培养箱中，以37摄氏度恒温培养。
5. 在各个时间点，取出培养皿，用显微镜观察中性粒细胞的吞噬情况。
6. 记录观察结果，并进行数据分析。
实验结果：经过观察，我们发现中性粒细胞对细菌的吞噬能力非常强大。
在实验开始的几分钟内，中性粒细胞迅速聚集到细菌附近，并开始将细菌吞入细胞内部。
随着时间的推移，越来越多的细菌被吞噬，中性粒细胞的数量也逐渐增加。
在实验结束时，几乎所有的细菌都被中性粒细胞吞噬。
实验分析：中性粒细胞的吞噬能力是机体免疫防御的重要组成部分。
通过吞噬细菌和其他病原微生物，中性粒细胞能够清除体内的病原体，维护机体的健康。
在实验中，我们观察到中性粒细胞对细菌的迅速吞噬过程，这证实了中性粒细胞在免疫防御中的重要作用。
中性粒细胞的吞噬过程是一个复杂的生物学过程，其中涉及到多种细胞因子和信号分子的调控。
这些因子和分子能够引导中性粒细胞朝向病原体，并促使细胞对其进行吞噬。
在实验中，我们没有对这些调控因子进行深入研究，但可以肯定的是，它们在中性粒细胞吞噬过程中发挥着重要的作用。
此外，中性粒细胞的吞噬能力也受到多种因素的影响。
例如，炎症反应和免疫系统的激活可以增强中性粒细胞的吞噬能力。
而某些疾病和病理状态则可能导致中性粒细胞吞噬功能的下降。
医学免疫学实验“小吞噬”.pptx
培养葡萄球菌
医学免疫学实验
烧灼接种环
取菌种
37℃，培养18～24h
接种
接种前 接种后
8
制备6%熟淀粉溶液
医学免疫学实验
称取6g淀粉
将淀粉倒入烧杯
量取10ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱml蒸馏水
将蒸馏水倒入淀粉中
搅拌均匀
9
加热煮熟，晾至室温
医学免疫学实验
实验前4小时
医学免疫学实验
建立无菌炎症小鼠模型
将放凉的熟淀粉 吸入注射器
腹水
血性腹水
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小鼠腹腔液印片制备
医学免疫学实验
做标记
印片
逐一印片
自然晾干
甲醇固定1min
美兰染色0.5min
细水冲片
吸去附水16
镜下观察吞噬现象
医学免疫学实验
正常小鼠印片（10*10）
中性粒细胞 渗出RBC
无有菌炎症小鼠印片（10*100）
细菌
无菌炎症小鼠印片（10*10）
无有菌炎症小鼠印片（10*100）
思考题
医学免疫学实验
小吞噬细胞为什么能游出血管发挥吞噬作用？ 实验中哪些因素会影响吞噬现象的观察？ 炎症发生前后小鼠腹腔大体形态有何变化？
医学免疫学实验
谢谢！
主要试剂 甲醇
美蓝染液 葡萄球菌菌液 6%熟淀粉等
器材 显微镜、培养箱、 电炉、注射器、 手术剪、镊子、
载玻片等
5
实验内容
医学免疫学实验
实验前一天
培养葡萄球菌 制备6%熟淀粉溶液
实验前4小时
建立无菌炎症小鼠模型
实验当天
建立有菌炎症小鼠模型 解剖小鼠 制备印片
观察腹腔脏器 观察吞噬现象
中性粒细胞功能测定
实验一、中性粒细胞吞噬功能测定Assay for Phagocytosis of Polymorphonuclear Leukocyte 【实验目的】•掌握中性粒细胞吞噬功能试验的原理；•熟悉中性粒细胞吞噬功能试验的操作方法；•通过本实验理解机体的非特异性免疫机制。
【实验原理】血液中的中性粒细胞通称小吞噬细胞，具有吞噬细菌和异物颗粒的能力，在体外将中性粒细胞与细菌或异物颗粒在一定条件下共同孵育后，显微镜观察可见中性粒细胞内有细菌或异物颗粒。
计数吞噬率和吞噬指数，可反映中性粒细胞的吞噬功能。
有助于对疑有吞噬细胞功能障碍的疾病作出诊断。
【材料和试剂】1.待测样本新鲜抗凝静脉血2.被吞噬物灭活白色葡萄球菌菌液（6×108/ml）。
3.试剂无菌生理盐水，甲醇，瑞氏－吉姆萨染液。
4.器材EP管，75%酒精棉球、载玻片，微量移液器、恒温箱，显微镜（香柏油，二甲苯）等。
【操作步骤】1.白色葡萄球菌液制备。
（已制备好）2.待测血标本制备：静脉采血5ml。
3.在EP管内加40微升血液，20微升菌液，混匀。
4.将EP管置37℃温育30min，每隔10min混匀一次。
5.取一小滴上述混合液，置于载玻片上，推成薄血片，晾干。
6.甲醇固定4-5min，滴加瑞氏-吉姆萨染液A液2-3滴，染色1-2min，再B液2-3滴，染色5-10min，水洗，晾干。
7.油镜下计数中性粒细胞(＞100个)、吞噬的细菌总数。
【推血片方法】取血混合液一小滴，放于载玻片的右端。
将推片置于血滴前端，与载玻片接触，成30°～40°角 向后拉动推片，使与血液接触 •待血液扩散形成一条线之后，以均速轻轻向前推动推片，则血液均匀地被涂于载玻片上而形成一薄膜。
取两张无油脂的洁净玻片，左手拇指及中指夹持载玻片，右手持推片。
30°血滴越大，速度越快、角度越大--血膜越厚良好的血片，血液应分布均匀，厚度适当。
对光观察时呈霓红色，血膜应位于玻片的中央，血膜两端留有空隙，以便注明病例编号、日期等。
实验四 中性粒细胞吞噬试验PPT课件
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（二）体外法
【实验材料】
1、白色葡萄球菌菌液（浓度6～10亿 /ml)
2、肝素溶液（25U/ml）；甲醇，碱性 美
蓝（或瑞氏）染液。
3、血红蛋白吸管，凹玻片，载玻片，采
血针，微量加样器，湿盒，显微镜，
恒温培养箱，75%酒精，棉签等。
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【实验方法】
1、用微量加样器，吸取肝素20ul加入凹玻片凹孔内。 2、用酒精棉签消毒手指后，刺破皮肤，以血红蛋白吸 管取血40ul，立即放入盛有肝素的凹玻片凹孔内， 并充分混匀。 3、用微量加样器取葡萄球菌菌液20ul加入上述凹玻片 凹孔内，充分混匀。 4、将凹玻片置于湿盒内，30℃温箱中30min，其间 每 隔10min摇匀一次。 5、取一小滴上述混合液，置于载玻片上，用另一载玻 片推成薄血片，待干。 6、滴加甲醇固定3min，水洗。 7、加碱性美蓝染色1～2min，水洗，印干。 8、置油镜下观察吞噬和未吞噬的白细胞并计数。
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【实验目的】 1、熟悉中性粒细胞吞噬实验的原理 和方法。 2、通过本实验理解机体的非特异性 免疫机制。
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【实验原理】
中性粒细胞具有吞噬杀菌功能，当与颗粒性 抗原物质（如葡萄球菌等）在体内或体外试 管中混合孵育一定时间后，颗粒性抗原物质 被吞噬杀灭，根据吞噬率、吞噬指数可反映 该细胞的吞噬功能。
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【实验结果】
吞噬百分 吞 观 率噬 察细 记菌 录的 的中 吞性 噬 数 数粒 细 10细 胞% 0胞 总
吞噬指数
被吞噬的细菌总数 观察记录的吞噬细胞 数总
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【实验思考】 1、在吞噬细胞中发现细菌时，如何区别 吞噬的细菌和粘附在吞噬细胞表面的 细菌？
医学免疫学实验课件-实验五 设计性实验
微生物鉴定
1. 取标本 2. 增菌培养
杆菌鉴定程序： 第一天
镜检、分离培养（SS和EMB培养基）
第二天
纯培养 (KIA培养基)
第三天
镜检、生化反应、血清学实验、药敏实验
第四天
观察结果，鉴定菌种
显微镜检内容
形态 排列 染色性 特殊结构
放大倍数：10×100
分离培养——平板分区划线
分区划线
结果
发展为剧烈跳痛；5天前左下颌突然肿胀，疼痛更加剧烈， 并向同侧耳颞部放射。经当地卫生院连续4天抗菌治疗（静 脉滴注青霉素），未见好转，局部疼痛和肿胀更加明显， 并有吞咽痛及开口轻度受限。患者体温升高，食欲减退， 精神疲惫。 既往史：左下后牙反复疼痛史1年；每次发作时，均可经抗生 素治疗后好转。 体检：患者急性痛苦面容，体温38.6度，左颌面部肿胀，下颌 骨下缘轮廓消失，皮肤紧张，压痛，皮温增高，肤色发红， 有波动感。开口度3cm。龈及前庭沟黏膜充血水肿，龈袋 内有脓液。口底黏膜充血水肿，舌运动轻度受限。 实验室检查：白细胞15000/ mm3，中性粒细胞90％。
变黄且培养基断裂——产酸产气 2. 观察黑色沉淀——产生硫化氢
杆菌：
生化反应：肠杆菌科细菌生化鉴定 （材料：肠杆菌科细菌生化编码鉴定管）
血清学鉴定：沙门菌属血清学鉴定 （材料：沙门菌属诊断血清）
肠杆菌科细菌生化编码鉴定管
球菌鉴定程序： 第一天
镜检、分离培养（血琼脂平板）
第二天
纯培养 (血琼脂平板和普通琼脂平板)
第三天 第四天
镜检、血清学实验、生化反应、药敏实验 观察结果，鉴定菌种
球菌：
生化反应：触酶实验P75，血浆凝固酶实验 P43，甘露醇实验
血清学鉴定：ASO
中性粒细胞和巨噬细胞吞噬功能测定
中性粒细胞和巨噬细胞吞噬功能测定实验报告使用油镜时，需在玻片上滴加香柏油的原理是由于自标本玻片透过的光线，因介质（玻片一空气一接物镜）密度不同，部分光线发生折射而散失（如图中A—A'）使射入物镜的光线减少，在使用高、低倍镜时，透镜的孔径比较大，影响尚不显著；但应用油镜头时，因透镜的孔径小，进入的光线则不够，致使物象显现不清。
当油镜与标本片之间加香柏油后，香柏油的折射率（n=1.515）和玻璃的折射率（n=1.52）相近似，因此可增加进入透镜的光线（如图中C—C'），使视野的亮度加强，物象也就看得清楚。
5. 瑞氏染色1）原理：瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。
瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物（天青）组成，其深于甲醇后，解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。
各种细胞由于其所含化学成分不同，对染料的力也不一样，因此，染色后各细胞呈现出各自的染色特点。
2）配制：（1）A液：瑞氏染粉0.1g，甲醇(AR）60ml。
将瑞氏染粉放入清洁干燥研钵中，先加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，将已溶解的染料倒入棕色试剂瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，甲醇全部用完为止。
染液配好后放于室温下，一周后即可使用。
（2）B液：瑞氏染液B液为磷酸盐缓冲液，其配制方法为：称取磷酸二氢钾（无水）0.3g，磷酸氢二钠（无水）0.2g；加蒸馏水至1000 ml使其溶解。
配好后的磷酸盐缓冲溶液应校正pH值，其范围在pH6.4～6.8即可，然后塞紧瓶口备用。
摇匀。
对小鼠进行及时止血，否则易失血过多而死亡。
3.向含血液的小试管加入菌液：向小试管加入菌液后用塑料吸管吹洗三次，充分混匀，使血液中的吞噬细胞和细菌充分接触，促进吞噬。
4.水浴：37℃水浴锅中保温20分钟，每隔10分钟取出小试管混匀1次，以使吞噬细胞与细菌充分接触和作用，促进吞噬。
（吞噬细胞的活性在接近体内温度的条件下最强，温度太高细胞活性下降且容易死亡）5.血涂片的制作：在载玻片的一端滴加一滴水浴后的血液，用另一个载玻片与载玻片间角度30°推片，用力匀，勿使太薄（白细胞多集中于边缘）或太厚（细胞重叠缩小）于玻片上影响标本的清晰度。
中性粒细胞吞噬功能试验ppt课件
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• 实验原理
中性粒细胞具有吞噬杀菌功能，当与颗粒性物质（如 葡萄球菌等）混合孵育一定时间后，颗粒性物质被吞噬杀 灭，根据吞噬率、吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能。
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• 实验方法
1、取样
2、孵育
① 肝素 0.02ml ② 无菌采血 0.04ml ③ 菌液 0.02ml
3、制片
4、镜检
单凹玻片
370C孵育30分 钟
湿盒
恒温箱
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3、制片 •取一小滴上述混合液，置于载玻片上，用另一载玻片推 成薄血片，待干。 •滴加甲醇固定5min，水洗。 •加碱性美蓝染色5min，水洗印干。
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4、镜检
红细胞 中性粒细胞 葡萄球菌
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• 油镜的使用 以香柏油为观察介质，微生物图像更清晰明亮。
医学检验·检查项目：中性炎症细胞吞噬试验_课件模板
验 内容课件模板
医学检验·各论：中性炎症细胞吞噬试验 >>>
简介：
中性粒细胞是机体免疫系统的重要组 成部分，可直接吞噬和杀灭多种病原微生 物、抗原抗体复合物。本试验主要用于诊 断中性粒细胞吞噬功能障碍性疾病。
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临床意义：
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相关疾病：
慢性细菌性前列腺炎、细菌性角膜炎、志 贺菌病、枸橼酸杆菌肺炎、细菌协同性坏 疽、老年人细菌性脑膜炎、肾皮质化脓性 感染、外阴炎、脓疱性细菌疹、新生儿化 脓性脑膜炎、细菌性阴道炎、小儿细菌性 痢疾、小儿细菌感染性口炎、细菌性肺炎、 细菌性肝脓肿、细菌性角膜溃疡、细菌性 痢疾、小儿尿路感染、膜性口炎、盲襻综 合征。
吞噬与杀菌功能缺陷，常见于慢性肉 芽肿、肌动蛋白功能不全症、膜糖蛋白缺 陷症、G6PD高度缺陷症、ChediakHigashi综合征等。对白色假丝酵母菌的 吞噬与杀菌缺陷，也见于较严重的白色假 丝酵母菌感染与恶性肿瘤患者。
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正常值： 吞噬率(n=50);(91.04±5.77)% 杀菌
率(n=50)：(32.72±7.83)% 最好根据本 实验室条件，自行调查。
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相关检查： 中性粒细胞核鼓槌小体、中性粒细胞杀菌 试验、中性粒细胞趋化试验。
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相关症状： 烧灼性疼痛、发热伴有腹痛、腹泻、恶心、 呕吐、发热伴尿频、尿急、尿痛、腰疼、 发热伴寒战、发热伴
医学免疫学实验小吞噬+大吞噬+E花环
操作步骤
3.弃上清，吸取白细胞层制片，自然干燥。 4.甲醇固定1~ 2min后，姬姆萨染色15~20min, 水洗，干燥。 5.油镜下计数200个淋巴细胞，观察淋巴细胞的 形态变化，计算淋巴细胞转化率。
结果判断
未转化的淋巴细胞
医学免疫学实验
实验内容
1.中性粒细胞吞噬功能测定试验 2.单核巨噬细胞吞噬功能试验（示教） 3.E花环形成试验（示教） 4.T淋巴细胞转化试验（示教）
吞噬细胞（phagocyte）：主要包括中性粒细 胞（neutrophil）和单核吞噬细胞 （mononuclear -phagocyte）两类。
3.水洗（勿先倒掉染液，应以流水冲去）。
4.吸水纸拍干水分，干燥。
（三）显微镜油镜镜检
五、注意事项
➢ 注射菌液时不要注射到皮下或腹腔脏器内，注 射后轻揉腹部，使液体在腹腔内分散均匀。
➢ 涂片应薄厚均匀适中，避免过薄或过厚。 ➢ 瑞氏染液染色时间不能过长以免染色过重。
A 红细胞 B 、H 淋巴细胞 C 、E、I 中性粒细胞 D 嗜酸性粒细胞 F 单核细胞 G 血小板 J 嗜碱性粒细胞
实验原理
植物血凝素(PHA)
T淋巴细胞
增殖分化 淋巴母细胞
体积变大 胞浆增多、空炮 核染色质疏松 核仁明显 有丝分裂
试剂与器材 ■1. RPMI1640 培养液。包含:小牛血清10%、 青霉素100u/m1 、链霉素100ug/m1,用无菌 的3% NaHCO3调pH 至7. 2~7.4。 ■2.植物血凝素(PHA)。用含10%小牛血清 的RPMI培养液稀释至500~ 1000ug/ml.
检测指标：
免疫细胞及其功能检验技术—吞噬细胞功能检测(免疫学检验课件)
正常值： NBT阳性细胞率应7%~15%
二、巨噬细胞功能检测
• 炭粒廓清试验：主要用于动物实验 • 吞噬功能检测：（吞噬鸡红细胞或白假丝酵母等） • 促凝血活性测定：
（一）炭粒廓清试验
在受检者前臂屈侧中央3㎜范围内，搔刮皮肤后， 用盖玻片压紧固定，在第2，5，8，12，24，36小时 各取样一次，染色观察中性粒细胞聚集开始时间、 聚集程度等。健康正常人一般2～3小时后开始聚集， 达50～100个，6小时可达1000个以上。
体外法--Boyden小室法
Boyden 小室
体外法--琼脂糖平板法
液混合，温育后涂片、固定和染色。在油镜下观察
中性粒细胞对细菌的吞噬情况，计数100个细胞中吞
噬和未吞噬细菌的中性粒细胞数，并记录吞噬的细
菌数。
吞噬率
吞噬细菌的中性粒细胞数 计数的中性粒细胞数
100%
吞噬指数
吞噬的细菌总数 吞噬细菌的中性粒细胞数
100%
（三）中性粒细胞杀伤功能检测 硝基蓝四氮唑（NBT）还原试验
正常小鼠肝中库普弗细胞可吞噬清除90％炭粒， 脾巨噬细胞约吞噬清除10％炭粒。据此给小鼠静脉注 射定量印度墨汁（炭粒悬液），间隔一定时间反复取 静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓 清的速度，判断巨噬细胞的功能。
主要用于动物实验
（二）巨噬细胞吞噬功能检测
巨噬细胞
＋
鸡红细胞或 白假丝酵母
孵育
等），B细胞（增殖、分泌抗体能力），NK（杀伤）， 中性粒细胞（趋化、吞噬、杀伤），巨噬细胞（吞噬 功能--炭粒廓清、鸡红细胞吞噬实验）
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瑞氏染色:
血涂片干燥后，涂面上滴瑞 氏染液7~8滴，3分钟。
+勿使染液干涸
用水冲洗
平持玻片，在一端 加水，使染料“漂” 走。
待干，镜检。
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油镜观察结果：
可见中性粒细胞吞噬葡萄球菌。 如染色正确，可见细胞核及被吞噬细菌染成 紫色，而中性粒细胞的细胞浆则为淡红色。
——细胞免疫检测技术
天然免疫功能测定
检测机体天然免疫功能的状态，是评价机体 免疫功能的重要组成部分。
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天然免疫功能测定
常用方法：
中性粒细胞吞噬功能检测 巨噬细胞吞噬功能检测 溶菌酶的测定 补体参与的反应
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中性粒细胞吞噬功能的检测
中性粒细胞吞噬细菌的现象称为小吞噬现 象，可以通过体外实验观察其吞噬细菌的情 况并测定吞噬功能。
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四、显微镜的维护
1.精密仪器要注意爱护，勿随意拆卸和碰撞。 2.细调节器是显微镜最精细的部分，不能往返 连续回转。 3.显微镜使用过程中，如发现问题应及时向老 师报告并进行登记，以便检修。
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中性粒细胞吞噬功能的检测
吞噬细 菌的中 性粒细 胞
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光学显微镜油镜的使用和保护
一、油镜头的识别 镜头下缘有一圈白线，
并刻有100×、或oil字样。
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二、油镜的使用
检查染色标本时，光度宜强。 显微镜亮度开关调至最亮，光圈完全打开， 集光器上升与载物台相平。
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三、油镜的使用原理
光线通过玻片与油镜头之 间的空气时，因介质密度不 同发生折射，使物象显现不 清。
若在油镜与载玻片之间滴 香柏油，则物象明亮清晰。
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四、显微镜的维护
1.使用完毕，用擦镜纸1 拭去镜头的香柏油。 2.擦镜纸2 上滴乙酸乙酯，擦拭镜头。 3.干净的擦镜纸3 擦拭镜头的乙酸乙酯。
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中性粒细胞吞噬功能的检测
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材料:
1.抗凝人血 2.葡萄球菌18小时肉汤培养物 3.其他 玻片、注射器、瑞氏染色液、
pH6.8PBS(缓冲液)。
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步骤:
取肝素抗凝血2滴（约0.2ml）
+
取葡萄球菌培养物1滴（0.1ml，12亿/ml）
混匀，37℃10分钟 取少量置于载玻片上，推成薄血片，干燥。
瑞氏染色
油镜观察
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肝素抗凝血：
外周血2ml + 肝素少量
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推血片：
1.左手的拇指和中指夹持载玻片的边缘，血滴 在离载玻片一端中4～5毫米处。
2.另取一边缘光滑平整的玻片作推片，将推片 一角置于血滴，向下使之接触到载玻片，使血液 均匀分散在推片与载片的接触处。
3.使推片与载玻片呈30～40°角，向另一端平 稳地推出。