痰液及下呼吸道分泌物培养简易操作规程
痰和呼吸道分泌物标本采集规范
痰和呼吸道分泌物标本采集规范一、微生物学【概述】痰标本采集方便，无创伤性，临床应用广泛，对病原学诊断具有重要价值。
痰标本的正确采集、处理是临床细菌检验成功的关键，标本采集与处理的规范化是准确、及时向临床提供重要的感染信息的基础。
目前咳痰标本仍是最常用、最简单的采样方法，必须指导或辅助患者深咳痰，及时送检，并通过镜检筛选合格标本。
损伤性采样技术仅在选择病例(抗生素治疗反应不佳；可疑特殊病原体感染，如寄生虫、痰菌阴性肺结核、混合感染或二重感染等)使用。
【操作方法】1、咳痰标本采集要求患者在清晨用药前留取，因为晨痰量多，且含菌量也多。
留取前刷牙，用清水漱口3次，以除去口腔内大部分杂菌，之后用力咳痰。
咳痰较困难者可用3％～5％氯化钠溶液雾化蒸气吸入进行导痰；对咳嗽乏力或昏迷患者，可用普通吸痰管经鼻腔或口腔吸引下呼吸道分泌物；对不能咳痰的婴幼儿或病重患者，如须采集痰标本做结核杆菌培养，可插胃管抽吸胃液标本送检，也可留取12～24h痰液，经漂浮浓集后检查，以提高结核杆菌检出率。
若做细菌或真菌培养，痰液必须盛于无菌容器内送检。
观察痰量应留取24h痰液，必要时在容器内加入少许防腐剂。
2、咽拭子采样上呼吸道感染可通过咽拭子获取标本。
标本采集前数小时内不得用消毒药物漱口或涂抹病灶局部。
用咽拭子采集标本时应小心、认真、准确，避免触及舌、口腔黏膜和唾液，以防污染。
如咽拭子标本发现致病菌，如肺炎链球菌、流感杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等，且数量较多时，提示有该菌所致感染存在。
3、纤维支气管镜抽吸采样以利多卡因做咽喉部局部麻醉后，插入纤维支气管镜(纤支镜)，达到肺炎病灶引流支气管内，纤支镜吸引口依次连接标本采集瓶或试管及负压吸引装置，用负压将下呼吸道分泌物经纤支镜吸人标本采集瓶内送检。
气管切开或气管插管患者也可用普通无菌吸痰管直接经人工气道插至大约叶支气管水平，接负压装置将痰液经吸痰管吸入标本采集瓶内。
纤支镜直视下可准确采集病灶部位的分泌物，但插入时纤支镜顶端和内孔常受咽喉部正常菌群污染，所以纤支镜吸引物常规培养结果不能完全代表肺部感染的病原体。
最新下呼吸道感染细菌学检验操作规范
下呼吸道感染细菌学检验操作规范—、相关临床知识临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌。
下呼吸道感染包括急性气管-支气管炎、慢性支气管炎急性发作、支气管扩张继发感染及肺实质感染（肺炎、肺脓肿）等。
病原体有细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次体和原虫等。
下呼吸道感染患者可有发热、咳嗽和咳痰，痰呈脓性、粘稠或血性，可伴有胸痛、气急，肺部闻及湿罗音、白细胞总数及嗜中性粒细胞比例明显增高，x线检查提示肺部有炎症性浸润或胸腔积液等体症，严重时可导致感染性休克和呼吸衰竭，因此临床诊断一般不难；细菌学检验能明确感染病原，并提供有关抗菌药物对分离菌的抗菌活性等信息，有助于疾病治疗、流行病学调查研究和医院感染的监测。
临床呼吸道标本中常见分离细菌见表1表1呼吸道标本中的常见分离细菌二、标本米集本室必须注意生物安全防护。
（一）采集方法1 •自然咳痰法以晨痰为佳，采集标本前应用清水、冷开水漱口或牙刷清洁口腔和牙齿，有假牙者应取下假牙。
尽可能在用抗菌药物之前采集标本。
用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖的容器中，标本量应》lml。
标本应尽快送检，不能及时送检的标本，室温保存w 2h o2•支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法均由临床医生按相应操作规程采集，但必须注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。
3 •小儿取痰法用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。
幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。
（二）标本验收遇有不合格标本，应及时与临床联系，报告不合格标本拒收的具体理由。
下呼吸道标本验收与拒收见表2o三、实验室检查（一）肉眼观察 观察痰液的颜色、粘度、有无血丝和是否呈脓性，如见有颗粒存在，则应注意可能 与放线菌属及奴卡菌属感染有关。
下呼吸道分泌物标本采集规程
新型冠状病毒感染的肺炎患者下呼吸道标本采集操作规程
下呼吸道标本分为三种：痰液、支气管细胞灌洗液、支气管分泌物，主要以痰液为主。
采集方法包括：自行咳痰法、吸引器经口鼻吸痰法、支气管镜下留取标本法。
一、目的：
取患者下呼吸道分泌物做病毒分离，以帮助诊断。
二、评估：
1、评估患者：
（1）双人核对医嘱，打印标签，准备无菌痰杯或一次性痰液收集器。
（2）核对患者，了解患者病情、咳嗽咳痰情况。
（3）向患者解释，取得配合。
2、评估环境：
安静整洁、宽敞明亮、室温适宜、光线充足。
三、操作前准备：
（1）人员准备：防护级别：三级防护（医用防护口罩、一次性帽子、防护服、护目镜、防护面屏、乳胶手套2双、防护靴套）。
（2）物品准备：治疗车上层：无菌痰杯或一次性痰液收集器、温开水、漱口杯、负压吸引装置一套（检查处于备用状态）、一次性吸引器连接管、密封袋2个、75%酒精、纱布数块、快速手消液、必要时备口咽通气道。
痰液常规检查标准操作规程
痰液常规检查标准操作规程【操作人员】经批准人授权的同志。
【部门主管】【质量控制员】【目的】保证测试结果的准确性。
【适用仪器范围】双目显微镜。
【该SOP变动程序】该标准操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后生效。
【应用范围】痰液常规检查的手工操作。
【标本采集】痰液标本收集法因检验目的不同而异，但所用容器须加盖，痰液勿污染容器外(用不吸水容器盛留)。
1．痰液的一般检查应收集新鲜痰，病人起床后刷牙，漱口(用3％H2O2及清水漱3次) 用力咳出器官深部痰液,勿混入唾液及鼻咽分泌物。
2．细胞学检查用上午9-10时深咳的痰液及时送检(清晨第一口痰在呼吸道停留时久，细胞变性结构不清)，应尽量送含血的病理性痰液。
3．浓缩法找抗酸杆菌应留24h痰（量不少于5ml)，细菌检验应避免口腔、鼻咽分泌物污染。
4．困难者用45摄氏度10%NaCl水溶液雾化吸入，刺激咳痰。
【一般性状检查】正常人一般无痰或仅有少量泡沫痰或粘液样痰。
1.颜色正常参考值：无色或灰白色。
临床意义：(1)黄色提示呼吸道化脓性感染，见于化脓性支气管炎、金黄色葡萄球菌性肺炎、支气管扩张、肺脓肿等；(2)红色或咖啡色因痰中含有血液或血红蛋白，见于肺癌、肺结核、支气管扩张等；(3)绿色痰可见于黄疸、吸收缓慢的大叶性肺炎或肺部铜绿假单胞菌感染；(4)铁锈色多因血红蛋白所致，见于大叶性肺炎或肺坏死等；(5)棕褐色见于慢性充血性心脏病肺淤血、阿米巴肺脓肿；(6)灰黑色因吸入大量煤炭粉尘或长期吸烟所致，见于各种肺尘埃沉着症。
(7)烂桃样或果酱样痰见于肺吸虫病。
2.性状正常参考值：稍粘稠状。
临床意义：(1)浆液脓性肺组织坏死、支气管哮喘、肺脓肿。
(2)粘液性支气管哮喘、大叶性肺炎等。
(3)血性肺结核、肺吸虫、支气管扩张、肺梗塞、肺癌。
(4)脓性肺脓肿、穿透性脓胸、支气管扩张。
3. 肉眼可见的异样物质(1)支气管管型：是由纤维蛋白、粘液等在支气管内塑型而成的白色、灰白色树枝状。
口鼻吸痰法操作流程与注意事项
口鼻吸痰法操作流程与注意事项引言口鼻吸痰法是一种用于排除呼吸道分泌物的常用方法。
它通过将抽吸管置于患者的口腔或鼻腔中，通过负压抽吸的方式将痰液吸出，达到清除呼吸道分泌物，改善呼吸道通畅的目的。
本文将详细介绍口鼻吸痰法的操作流程和注意事项。
操作流程准备工作在进行口鼻吸痰法之前，需要进行一系列的准备工作，杜绝交叉感染的发生： 1. 洗手：保持双手洁净，使用肥皂和流动水洗手，或者使用含酒精的手消毒剂进行手部消毒。
2. 配置器材：准备好所需的器材，包括负压抽吸设备、抽吸管、吸痰瓶、无菌手套和口罩等。
患者准备1.与患者进行沟通，解释操作过程，获得患者的配合。
2.让患者坐起来或半卧位，将患者的头稍微后仰，以便于痰液顺利流出。
3.为患者佩戴好口罩，避免在操作过程中吸入细菌。
抽吸操作1.戴好无菌手套，拿起抽吸管，将其慢慢插入患者的口腔或鼻腔。
对于有气管切开或鼻胃管的患者，可以直接将抽吸管插入相应的导管。
2.检查抽吸管的位置是否正确，确保其没有刺激到患者的咽喉或气管壁。
3.打开负压抽吸设备，设置适当的吸引力，通常为80-120毫米汞柱。
4.轻轻吸痰，注意保持吸痰管的负压状态，避免痰液回吸或溢出。
5.在吸痰的过程中，可以适当地在患者的背部轻拍或揉搓，以协助痰液流出。
6.吸痰时间应控制在15-20秒左右，每次吸痰可重复2-3次。
7.完成吸痰后，关闭负压抽吸设备，慢慢拔出抽吸管。
8.患者咳嗽或打嗝时，应及时停止吸痰，待咳嗽或打嗝结束后再继续吸痰。
收尾工作1.将吸出的痰液倒入无菌吸痰瓶中，并密封好。
2.将使用过的器材进行正确处置，避免交叉感染的发生。
3.脱下手套，进行手卫生。
注意事项在进行口鼻吸痰法时，需要特别注意以下几点： 1. 操作过程中应注意呼吸道的通气状态，防止出现窒息。
2. 操作前后要给予患者足够的时间恢复呼吸，避免过度刺激。
3. 患者的呼吸和心率等生命体征应被临床人员随时观察，如有异常应及时采取应急措施。
20呼吸系统标本细菌学检验标准操作规程
规范呼吸道标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2
呼吸道标本培养和涂片检查。
3
3.1
3.2
3.2.1
3.2.2
3.2.3
3.2.4
3.2.5
3.3
3.3.1
3.3.2
3.3.3
3.3.4
3.3.5
3.3.6
3.4
采集标本后立即送到实验室，放置时间不应超过2小时。
4
4.1
4.2
4.3
5
参见《质量管理程序》。
6.3
6.3.1
6.3.2
6.3.3
6.3.4
6.3.5
7
8
8.1
8.2
9
9.1
9.2
9.3
10
上呼吸道标本培养生长的细菌是否与疾病有关，需各方面综合分析，排除常居菌后，才可作出正确的判断。下呼吸道的痰液应是无细菌的，而经口腔咳出的痰带有多种上呼吸道的正常寄生菌（如草绿色链球菌）.若从病人痰标本中查见致病菌或条件致病菌，提示可能有呼吸道细菌感染。肺炎链球菌是肺炎最常见的致病菌.儿童细菌性肺炎多为流感嗜血杆菌所致.医院获得性肺炎的常见病原菌是革兰阴性杆菌，主要有肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、沙雷菌属和肠杆菌属细菌等。肺结核由结核分枝杆菌引起的。嗜肺军团菌引起军团菌病，肺部厌氧感染大多是脆弱类杆菌及梭杆菌属的细菌等。疑典型形态细菌所致肺部感染时，常先做痰液和支气管分泌物涂片、染色镜检（如肺部结核痰液徐片、抗酸染色，镜检找抗酸染色阳性结核分枝杆菌），有助于细菌培养检查。
11
如查出抗酸杆菌阳性，则应及时向临床报告并作出传染病报告。
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痰液及下呼吸道分泌物培养简易操作规程
.痰液及下呼吸道分泌物培养标准操作流程1 观察标本合格后操作。
一般为晨痰，再留取痰之前刷牙、反复漱口，应从气管深部咳出痰，吐进无菌容器内送检。
涂片白细胞小于10，上皮细胞大于25为不合格痰，相反白细胞大于25，上皮细胞小于10-25为合格痰标本。
2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3 接种环灭菌—待冷却后—取痰液—接种到血平板、中国兰平板（或麦康凯平板上）。
平板划线分离培养：（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。
（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。
（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养18-24小时。
4观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。
5 做药敏试验-------报告结果。
便培养标准操作流程1.收取有粘液或脓血、稀水粪便标本。
2.点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3.接种环灭菌—待冷却后—取粪便—接种到血平板、SS平板、中国兰平板（或麦康凯平板上）。
平板划线分离培养：（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。
（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域的划线应接触上一区域的接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。
（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板的底部向上）于35°C培养。
4培养18-24小时后观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还是杆菌后鉴定种属。
5 做药敏试验-------报告结果。
尿培养标准操作流程1 收取晨尿第一泡清洁中段尿。
（把外阴用肥皂清洗一遍，再用清水清洗两遍，待干或用干净布擦干）用导尿管的病号需新换导尿管后取标本2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3 接种环灭菌—待冷却后将标本混匀，用定量接种环取尿液1ul(大约一接种环）—接种到血平板，接种环灭菌---待冷后取标本接种到中国兰平板（或麦康凯平板上）。
临床痰培养及下呼吸道标本采集指征、采集方法、注意事项和标本运送指南
临床痰培养及下呼吸道标本采集指征、采集方法、注意事项和标本运送指南采集指征有下列体征采集体征：①咳嗽、咳痰，痰液可为脓性、血性、铁锈色或红棕色胶胨阳痰。
②咯血包括泡沫血痰、鲜血和痰中带血等。
③呼吸困难，呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛。
④发热伴白细a胞增高尤其是中性粒细胞或CRP、PCT明显增高。
⑤胸部影像学检查提示有感染可能。
采集方法1、自然咳痰法。
以晨痰为佳，咳痰前先用冷开水、纯净水反复漱口三次，然后用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰杯中，1h 内送检，尽可能在用抗菌药物之前采集标本。
标本量应＞1ml。
痰量少或无痰者可采用雾化吸入加温至45℃的10%Nacl水溶液，对难于自然咳痰患者可用无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。
2、对昏迷、重症、难治或伴免疫抑制或疑是厌氧菌引起的可采用纤维支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、支气管肺泡灌洗法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法采集标本，注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群污染。
3、小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将棉拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上。
幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。
注意事项痰标本不能及时送检者，可暂存4℃冰箱。
室温下延搁数小时定植于口咽部的非致病菌呈过度生长而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率则明显下降。
标本运送不能及时送检的标本，室温保持＜2h,4℃冰箱保存＜12h。
一般每天只需做一次。
痰及下呼吸道标本失效无意义：1、咽拭子、咳痰、吸出分泌物做厌氧菌培养无意义。
2、申请填写完整无误，标本标识必须唯一。
3、标本容器必须符合规定。
4、痰标本呈水样或唾液样，不能有明显食物残渣、灰尘纸屑。
痰培养标本采集与运送标准操作规程
痰培养标本采集与运送标准操作规程目的：正确采集痰培养标本并运送内容：一. 标本来源:痰/气管抽吸物（TA）、支气管肺灌洗吸出液、支气管刷子、气管内管、肺穿刺或活组织等。
二. 容器：洁净、广口、无菌、加盖、密封、防渗漏。
不含防腐剂和抑菌剂,一次性使用。
三. 采集方法清晨痰量多，含菌量亦大，嘱病人先用洁口液,再用清水漱口，以除去口腔中细菌，深吸气后用力咳出1－2口痰于培养皿或瓶中，痰量极少可用45℃10%氯化钠溶液雾化吸入导痰。
建立人工气道,如气管切开或气管插管者,戴无菌手套或用无菌镊子取一次性无菌专用吸痰管,一头缓慢插入气管致隆突（叶支气管）水平,一头接电动吸引器,螺旋式抽吸，吸引痰液.四.注意事项1．以清晨第二口痰为佳。
防止唾液及上呼吸道分泌物污染.2．在抗生素使用前采集价值高。
3．连续采集3～4次,采集间隔时间〉24h。
五.结果判断1．正常人体的下呼吸道是无菌的,上呼吸道有正常菌群栖居。
2．合格痰的涂片镜检鳞状上皮细胞〈10个/低倍视野，白细胞〉25个/低倍视野，或两者比例小于1：2。
5。
3．连续两次分离出相同的病原菌可认为是感染病原菌。
4．经纤维支气管镜和人工气道吸引采集分泌物分离出的细菌可认为是感染病原菌.5．痰液与血液或胸水中分离到相同病原体,有诊断意义.6．痰培养常见病原菌为肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、厌氧性球菌、结核分枝杆菌等。
7．痰中的病原菌不少属于机会致病菌,应根据病情判断。
六.临床微生物标本送检的注意事项1．标本及时送检避免干燥，不能及时送检者可暂存4℃冰箱。
如在室温下放置数小时,则定植于口咽部的非致病菌过度生长，而肺炎球菌和流感嗜血杆菌检出率则明显下降。
故标本采集后送检时间不得超过2小时。
2．送检标本应注明来源、检验目的和采样时间，使实验室能正确选用相应的培养基和适宜的培养环境。
3．送检期间要予以安全防护：放标本的容器必须防漏,禁止将渗漏的标本送往实验室.。
痰标本采集与运送标准操作规程
痰标本采集与运送标准操作规程一、痰液标本痰培养仅用于下呼吸道感染，主要是肺部感染的诊断。
但它不是诊断肺部感染的最佳标本。
血培养、肺泡灌洗液或经气管吸取物的培养结果更加准确。
痰标本不能进行厌氧菌培养。
痰标本采集前，要判断患者是否有能力配合完成深部咳痰。
要向患者充分说明口腔清洁、深咳、避免口咽部菌群污染的意义，指导患者如何正确留取痰标本。
二、痰标本的采集时间1．采集标本的最佳时机应在使用抗菌药物之前。
2．宜采集清晨痰液。
三、采集方法1.自然咳痰法：嘱咐患者先用温开水漱口数次，以减少长居菌的污染（有假牙的病人应先取下假牙），然后用力咳出气管深部的痰液，吐入无菌痰杯中立即送检。
2.诱导咳痰：对无痰、少痰或痰浓不易咳出者，可用3%生理盐水5ml 雾化吸入5min 后留取痰液；对于小儿可采取轻压胸骨柄的方法。
3.体位引流：支气管扩张症患者，清晨起床后进行，可采集大量痰标本。
4.对咳嗽乏力或晕迷病人，可用吸痰管经鼻腔或口腔抵达气管腔内取痰。
5.双侧肺部感染伴人工气道如气管切开或气管插管患者，可用吸痰管经人工气道插至支气管水平取痰。
6.对重症、难治或伴免疫或疑似厌氧菌引起的医院内肺部感染，可采用环甲膜穿刺经气管吸引（TTB）、经胸壁毛刷（PSB）或防污染支气管肺泡（PBBL）采集无口咽部菌群污染的痰液，进行精确的感染病原学诊断。
7. 支气管镜下采集法：由临床医师利用支气管镜取气管刷洗物支气管肺泡灌洗液等标本，臵于无菌痰杯后立即送检。
（四）注意事项1.常规细菌培养及鉴定标本须在常温下2 小时内送至微生物实验室，疑为嗜血杆菌感染、肺炎链球菌感染，标本采集后应立即送检。
2.标本内切勿混入唾液及鼻咽分泌物，标本量>1ml,一天仅需送检一次。
3.气管镜标本和痰标本一般不适用于厌氧菌培养及鉴定，痰标本不理想时可考虑采集支气管肺泡灌洗液标本。
下呼吸道感染细菌学检验操作规范
（一）标本采集方法
2.支气管镜采集法、防污染毛刷采 集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸 壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法， 均由临床医生按相应操作规程采集，但 必须注意采集标本时尽可能避免咽喉部 正常菌群的污染。
（一）标本采集方法
呼吸困难 呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛。
真杆菌、丙酸杆菌、乳酸杆菌
3.小儿取痰法 用弯压舌板向后 尚合格可用于细菌培养
表1 呼吸道标本中常见分离菌
革兰阳性菌
革兰阴性菌
草绿色链球菌、肺炎链球菌、 韦荣球菌
化脓性链球菌
脑膜炎奈瑟菌、其他奈瑟菌
表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、卡他、消化链球菌、消化球菌、沙雷菌、变形杆菌
肠球菌
大肠埃希菌及其他肠杆菌科细菌
真杆菌、丙酸杆菌、乳酸杆菌 百日咳鲍特菌、不动杆菌
标本标识必须唯一，并与申请单相符，未标采集时间、部位或检验要求等拒收。
6的10g/L胰酶溶液等），放置35°C待充分液化再行接种。 幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。
（二）标本验收与拒收
遇有不合格标本应及时与临床联系，反 馈不合格标本拒收的具体理由。
下呼吸道细菌学检验标本验收与拒收见 下：
1.呼吸道有大量的正常菌群存在，咽拭 子、咳痰、吸出的分泌物厌氧菌培养无意义。
（二）标本验收与拒收
2.申请单填写应完整无误。标本标识必须 唯一，并与申请单相符，未标采集时间、部 位或检验要求等拒收。
3.痰标本呈水样或唾液样，拒收。
4.涂片白细胞和鳞状上皮细胞计数：白细 胞＜10／低倍镜和鳞状上皮细胞＞25／低倍 镜，表示该标本已污染正常菌群，建议重送 标本。
（二）显微镜检查 下呼吸道细 菌学检验的标本均需涂片革兰染色进 行常规的白细胞和鳞状上皮细胞显微 镜下计数和细菌学检查，其目的是判 别送检的标本是否合适做细菌培养， 并初步判定有否病原菌、病原菌的数 量及其类别，有助于初步报告、选择 培养基和对培养结果的综合分析。
下呼吸道感染细菌培养操作规范解读
下呼吸道感染细菌培养操作规范解读引言：下呼吸道感染是指细菌侵入呼吸道，引发炎症反应和感染。
细菌培养是诊断下呼吸道感染的重要方法之一，它可以确定感染的微生物种类以及对药物的敏感性，指导合理的抗感染治疗。
下面对下呼吸道感染细菌培养操作规范进行解读。
一、培养基选择：制备培养基是进行细菌培养的重要环节。
常见的下呼吸道感染细菌培养基有血琼脂培养基、MacConkey琼脂培养基、巴斯德培养基等。
血琼脂培养基适用于大多数细菌的培养，MacConkey琼脂培养基可用于选择性培养革兰阴性杆菌，巴斯德培养基则常用于痰液的培养。
二、样品采集：样品采集是细菌培养的前提，因此操作规范的制定对准确采集样品至关重要。
下呼吸道采样的常见方法包括痰液、支气管肺泡灌洗液和支气管肺泡灌洗液。
痰液是最常见的样品，正确的采集方法是由患者自行深呼吸后，咳出痰液至少5mL以上。
支气管肺泡灌洗液和支气管肺泡冲洗液的操作需要经验丰富的医护人员进行。
三、样品运输：样品运输是培养质量的重要环节。
样品需要尽快送至实验室进行处理，少数情况下可以在运输过程中使用冷藏剂保持样品的新鲜度。
样品应由医护人员妥善包装，标明患者信息、采集日期、样品性质等。
四、样品处理：样品进入实验室后，需要进行处理以提取细菌。
首先，将样品进行离心，然后用生理盐水洗涤，使样品含有细菌的液体分离。
接下来，可以进行细菌培养的操作。
五、细菌培养：细菌培养是最关键的步骤，操作规范对培养结果的准确性和可重复性具有重要影响。
常用的细菌培养方法有涂布法、点菌法、渗透法等。
涂布法适用于不同类型的细菌，点菌法适用于分离杂菌，渗透法适用于培养一些特定菌株。
细菌培养需要进行一系列步骤，如选取合适的培养基，调节pH值，控制培养温度和培养时间等。
六、结果的解读：培养结果需要经过专业人员进行解读，判断感染的微生物种类和数量，以及对药物的敏感性。
常见的痰液培养结果包括呼吸道常见细菌（如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等）、革兰阴性杆菌（如大肠杆菌、克雷伯氏菌等）以及其他细菌（如金黄色葡萄球菌等）。
呼吸道标本细菌学检验标准操作规程
呼吸道标本细菌学检验标准操作规程1目的规范呼吸道标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2适用范围呼吸道标本培养和涂片检查。
3标本3.1标本类型：痰、咽拭子、支气管肺泡灌洗吸出液、支气管冲洗液或刷子、肺穿刺等。
3.2标本采集3.2.1采集时间：以晨痰为好；支气管扩张症病人，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰标本。
3.2.2自然咳法：在留取痰之前，用清水反复漱口，应从气管深处出痰，吐入无菌容器内。
3.2.3气管镜下采集法：在病灶附近用导管吸或用支气管刷直接取得标本。
3.2.4气管穿刺法：在环甲膜下穿刺抽取痰液，收集标本，适用于厌氧菌培养。
3.2.5棉拭采集法：用无菌棉拭子轻轻擦拭病人鼻咽部黏膜，留取标本，置无菌试管内送检。
3.3标本拒收标准3.3.1申请单姓名、科别、床号与标本的标签不符。
3.3.2痰标本呈水样或唾液样。
3.3.3痰涂片白细胞<10/低倍视野，上皮细胞>25/低倍视野。
3.3.4标本容器溢漏，无瓶盖。
3.3.5痰标本留取放置时间太长，超过2小时。
3.3.6未用指定的无菌容器作细菌培养。
3.4标本保存采集标本后立即送到实验室，放置时间不超过2小时。
4试剂、仪器4.1革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。
4.2VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡、革兰阴性菌药敏卡、革兰阳性菌鉴定卡、革兰阳性菌药敏卡、药敏纸片等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
培养箱4.3接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2等。
5细菌鉴定和药敏监控参见《质量管理程序》。
6检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6.1肉眼观察：包括颜色、黏度、有无血丝或脓。
6.2涂片检查：可以确定标本是否适合做细菌培养，直接涂片镜检，依据低倍镜下观察白细胞和上皮细胞数目多少来评定。
并可初步判定是否有病原菌存在。
痰标本镜下分类分级白细胞（个）上皮细胞（个）A>25<10B>25<25C<10>25注：A、B两种情况的痰标本适合做培养，C不合格，应重新留标本。
痰培养标本采集方法及注意事项
痰培养标本采集方法及注意事项痰培养是一种常见的临床检查方法，用于检测呼吸道感染病原体。
正确的痰培养标本采集方法和注意事项对保证检测结果的准确性至关重要。
下面将介绍痰培养标本采集的方法和注意事项。
一、痰培养标本采集方法：1.采集时间：最佳采集时间是早上起床后，患者尚未进食或漱口。
2.患者准备：患者应先漱口，以清除口腔中的细菌。
然后深呼吸几次，以刺激喉部分泌物，并咳嗽2-3次。
3.采集器具：可用无菌的宽口塑料杯作为痰培养容器，避免使用铁罐、玻璃瓶等容器，以免残留的细菌影响培养结果。
4. 采集过程：患者在咳嗽时将痰直接咳出到容器中，或者在漱口后用唾液吐痰至容器中，以保持采集的痰液的干净和无菌。
采集量应达到2-5ml为宜，以保证培养的条件。
二、痰培养标本采集注意事项：1.避免污染：采集标本时要避免口腔的污染，患者可以先漱口，然后再咳嗽或吐痰类似的方法将痰液采集到容器中。
注意不要将痰液和唾液混在一起，以免影响病原体的检测结果。
2.采集时机：痰培养的最佳时机是早上起床后，此时呼吸道分泌物较多，容易采集到足够的标本。
如果患者口干舌燥，可以喝一些水以增加分泌物的量。
3. 采集量：痰液的采集量应达到2-5ml，以充分满足检测的需要。
如果痰液量不足，可以多次采集或者进行刺激咳嗽后再采集，但是注意避免过度刺激引起不适。
4.容器选择：选择无菌、宽口、密封性良好的容器作为痰液的采集容器。
避免使用金属容器，因为金属容器可能含有微量的抑菌剂，对病原体的生长产生干扰。
5.标本传送：采集完痰液后，应及时将标本送往实验室进行培养，以保证标本的新鲜度和培养结果的准确性。
标本可以存放在4°C的冰箱中，但是加热前要再次加热至室温。
6.严格遵守感染控制措施：在痰液采集过程中，医务人员要严格遵守感染控制措施，包括佩戴口罩、手套等防护用具，避免交叉感染的发生。
总结起来，痰培养标本的正确采集方法和注意事项包括避免污染、选择合适的采集时机、保证足够的采集量、选择无菌的容器、及时送往实验室进行培养，同时医务人员要严格遵守感染控制措施，以确保痰培养结果的准确性。
微生物痰标本处理标准操作程序
痰标本处理标准操作程序1呼吸道标本细菌培养检测结果的准确、可靠。
2深部痰标本或下呼吸道分泌物。
3无菌痰杯或咽拭子。
4BD Phoenix 100 全自动细菌分析仪。
55.1 标本采集5.1.1 采样时机：在抗生素药物使用之前采集清晨第一次痰液送检。
a) 痰标本：最好在应用抗菌药物之前采集标本。
以晨痰为最好。
对支气管扩张症或与支气管相通的空洞患者，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰液。
b)下呼吸道分泌物、支气管纤维镜刷片：也宜早晨空腹采集为佳。
5.1.2 采集方法a) 痰液标本采集患者清晨起床后，用清水反复漱口后用力自气管咳出第一口痰于灭菌容器内，立即送检。
对于痰量少或无痰的患者可采用雾化吸入加温至 45℃的10%NaCl 水溶液，使痰液易于排出。
对咳痰量少的幼儿，可轻轻压迫胸骨上部的气管，使其咳嗽，将痰收集于灭菌容器内送检。
b) 环甲膜穿刺吸痰对于一些疑难、病情危重或免疫受损患者继发肺部感染可用一些侵入性诊断技术采集下呼吸道标本。
若采用环甲膜穿刺吸痰法取痰液标本，藉套管针自环甲膜插入消毒塑料管吸取分泌物，作病原体培养，不受口腔、咽部病原体的污染，可较准确地反映下呼吸道及肺部感染的病原菌。
本方法简便实用，阳性率高，结合定量培养可能区别假阳性。
但本检查有轻微创伤性，并发症包括皮下气肿、气管内出血等。
有出血倾向、严重心血管疾病者禁用。
c)纤维支气管镜采集法经(纤支镜)直接吸引下呼吸道分泌物，由于纤支镜通过口咽部时同样受到污染，因此认为也不比咳出的痰更好。
经纤支镜以附刷的双层套导管方式直接采集肺部分泌物，进行细菌、真菌、厌氧菌培养和免疫荧光等检查，往往能可靠地找到感染病原体。
由于其效果尚无法达到完全不受污染的情形，所以应进行定量培养，其细菌浓度＞103cfu/ml 则有意义。
经过临床评估，此种采样方式临床应用价值颇高。
采样时防污染标本刷取样应深入，且应多方向旋转及上下移动，这样取痰可提高痰培养的敏感性。
医院三基操作流程—人工气道留取痰培养标本流程
项目
内容
评分
目的
1留取痰液标本行微生物及药敏检查
5
2提供临床诊断依据，指导抗生素使用
5
评估
1评估病人意识，配合程度，解释目的注意事项
5
2评估呼吸道分泌物
5
准备
1护士:着装规范，洗手戴口罩
5
2病人:翻身拍背后予平卧
5
3环境:安静、整沽，温度适宜
5Байду номын сангаас
4用物：吸引器、痰液收集器、条形码、无菌手套
5
流程
1携用物至床旁，核对床号、姓名
5
2按吸痰操作流程，评估准备吸引用物
5
3无菌操作下打开痰液收集器
5
4打开吸引开关，连接痰液收集器（避免污染）
5
5戴无菌手套，吸引抽取痰标本
5
6脱手套并分离痰液收集器吸痰管端
5
7取下痰液收集器，将无菌痰杯盖旋紧密闭，关闭吸引开关
5
8粘贴条形码，再次核对床号、姓名
5
9安置病人舒适体位，整理用物
5
10洗手，条形码确认送检，临时医嘱单签字
终末
处理
一次性用物置于医用垃圾袋，整理治疗车，吸引装置按吸痰流程处理
4
注意
事项
1取下吸痰管时防止污染痰杯
5
2标本采集后及时送检
5
简易吸痰器的操作流程
简易吸痰器的操纵流程之杨若古兰创作【目的】清除患者呼吸道分泌物，坚持呼吸道通畅.【筹办】1、护士：着装整洁、洗手、戴口罩.2、用物：吸痰盘（内有一次性吸痰包2个、一次性医治碗、生理盐水、听诊器、手电筒、一次性压舌板（包纱布）.须要时备开口器、舌钳.）吸引安装一套3、评估：患者病情、痰液地位、黏稠度及能否配合操纵.【操纵流程】1、携用物至床旁，医治盘放于床头桌，吸引安装置于患者床头.2、向患者或家属解释吸痰目的及可能发生的不良反应,并取得患者及家属的配合.3、协助患者头部偏向护士一侧，检查口腔、鼻腔粘膜，取下活动义齿.4、安装吸引器，打开负压开关，将吸引器负压调至0.04-0.06Mpa，试通畅，备用.吸氧的患者加大氧流量.5、打开吸痰包，戴手套，铺医治巾，连接吸痰管，试通畅.6、吸痰：先吸口咽部，再吸口腔；吸双侧鼻咽部至鼻腔.插管深度适宜，零压进、负压出，由深至浅摆布扭转提出，每处吸引终了后，均冲洗吸痰管；每处抽吸很多于3秒钟，冲洗吸痰管并分离，冲洗接头，拔出压脉带备用，关闭小开关.昏迷患者使用压舌板帮忙患者张口.7、擦净口鼻分泌物，检查口、鼻腔粘膜有没有损伤.（吸氧患者酌情调节氧流量）8、观察病情，协助患者取舒适卧位.9、清算用物，洗手，做记录.【留意事项】1、按照无菌操纵准绳，插管动作轻柔、敏捷.2、吸痰前评估患者病情、痰液地位、黏稠度及能否配合操纵；根据动脉血气分析结果、肺部听诊、胸片、病人咳嗽反应等判断是否须要吸痰及痰液潴留的部位.听诊部位：双侧肺尖（锁骨上窝），双侧肺底（腋中线第八肋间）.听诊顺序为：右上、左上、左下、右下.3、吸痰指征：听诊双肺有痰鸣音、呼吸机的吸气峰压添加、患者血氧饱和度降低.4、选择合适的吸痰管，成人普通10—12号.小儿吸痰管5—8号，最大10号.5、未行机械通气病人吸痰前后应给予高流量吸氧，行机械通气的病人吸痰时应将呼吸机调至吸痰模式.吸痰时间每次不宜超出15秒，如痰液较多，须要多次吸引，应间隔3-5分钟，患者耐受后再进行.吸痰时将吸痰管末端反折，零压进负压出.6、吸痰过程中要留意观察病情如面色、呼吸情况、有没有特殊不适，心电监护病人同时观察其心率、血氧饱和度、血压等变更，如病人发生紫绀、心率降低等缺氧症状，应立即停止吸痰，加大吸氧流量，通知大夫，给予对症处理.7、观察痰液的性质、色彩、量、气味，如有异常应及时取深部痰液标本检验，为临床用药提供可靠材料.如果患者痰液黏稠，应酌情采纳各种湿化措施，便于痰液吸出.8、神志清醒病人，操纵前做好解释工作取得配合，清除紧张.病情危重、生命体征不波动者，吸痰前应向病人家属告知，须要时签署特殊医治和谈书，同时床边备简易呼吸器、气管插管用物或气管切开包等急救设备.9、若采取鼻塞吸氧，调节氧流量时应先将鼻塞取下，再进行调节.10、吸引的并发症：低氧血症、肺不张、气道损伤、心律失常、颅内压增高、咳嗽和支气管痉挛等，严重者可呼吸、心跳骤停 .。
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、痰液及下呼吸道分泌物培养标准操作流程
1 观察标本合格后操作。
一般为晨痰，再留取痰之前刷牙、反复漱口，应从气管深部咳出痰，吐进无菌容器内送检。
涂片白细胞小于10，上皮细胞大于25为不合格痰，相反白细胞大于25，上皮细胞小于10-25为合格痰标本。
2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3 接种环灭菌—待冷却后—取痰液—接种到血平板、中国兰平板（或麦康凯平板上）。
平板划线分离培养：
（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。
（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域得划线应接触上一区域得接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。
（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板得底部向上）于35°C培养18-24小时。
4观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还就是杆菌后鉴定种属。
5 做药敏试验-------报告结果。
便培养标准操作流程
1、收取有粘液或脓血、稀水粪便标本。
2、点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3、接种环灭菌—待冷却后—取粪便—接种到血平板、SS平板、中国兰平板（或
麦康凯平板上）。
平板划线分离培养：
（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。
（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域得划线应接触上一区域得接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。
（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板得底部向上）于35°C培养。
4培养18-24小时后观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还就是杆菌后鉴定种属。
5 做药敏试验-------报告结果。
尿培养标准操作流程
1 收取晨尿第一泡清洁中段尿。
（把外阴用肥皂清洗一遍，再用清水清洗两遍，待干或用干净布擦干）用导尿管得病号需新换导尿管后取标本
2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3 接种环灭菌—待冷却后将标本混匀，用定量接种环取尿液1ul(大约一接种环）—
接种到血平板，接种环灭菌---待冷后取标本接种到中国兰平板（或麦康凯平板上）。
(抗菌素治疗患者应增加一个10ul接种。
)
4 平板单区划线法：用灭菌接种环在血平板与中国兰（或麦康凯）平板得中间位置
单区划线（这种方法适合菌落计数，假如细菌多不容易分出单个菌落。
）
5划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板得底部向上）于35°C培养18-24小时。
6观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还就是杆菌后鉴定种属。
7 做药敏试验------报告结果。
注：接种1ul尿量者，菌落数乘以10，接种10ul尿量者，菌落数乘以100、即为每ml尿液中所含有得细菌数（CFU/ml）,如菌落数生长过多无法计数则报告大于100000 CFU/ml、
分泌物培养标准操作流程
1 在无菌环境下用一次性拭子快速取分泌物或脓液标本。
2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
平板划线分离培养：
（1）用拭子将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。
（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域得划线应接触上一区域得接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。
（3划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板得底部向上）于35°C培养18-24小时。
3观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还就是杆菌后鉴定种属。
4 做药敏试验——报告结果。
穿刺液培养标准操作流程
1 收取合格得穿刺液标本。
（咨询下就是否按要求取得标本）
2 点燃酒精灯，尽量保证无菌中间。
3 将穿刺液接种到增菌培养液进行培养。
（穿刺液含细菌数量较少，因此，必须做增
菌培养）
4 培养18-24小时候后，用酒精消毒培养液瓶口，用五毫升注射器抽取0、5毫升液体打入血平板、巧克力平板（CO2环境中以分离嗜血杆菌）中国兰平板（或麦康凯平板上）
接种环灭菌—待冷却后。
平板划线分离培养：
（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。
（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域得划线应接触上一区域得接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。
（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板得底部向上）于35°C培养18-24小时。
5观察菌落特征涂片染色，确定阳性菌、阴性菌、球菌还就是杆菌后鉴定种属。
6 做药敏试验-------报告结果。
注：标本经增菌转种平板后，经35°C24-48小时孵育后，如无细菌生长，平板还应继续孵育至第3天、如怀疑有奴卡菌，平板应持续孵育7天证实无菌生长，才能报告阴性、
血培养标准操作流程
1 用严格无菌技术静脉采血法采集2套外周血，作培养标本。
2 检查培养瓶确保它们被安全放置，检查瓶子上得标签确认与申请单上得患者资料就是否一致。
3 保证获得适量得血液、小孩最少3ML,大人最少5ML,正常应该就是10ML。
4 放入35°c孵育7天。
5 孵育至3天后与5天后分别用酒精消毒培养液瓶口，用五毫升注射器抽取0、5毫升液体打入血平板、巧克力平板（CO2环境中以分离嗜血杆菌）中国兰平板（或麦康凯平板上）
接种环灭菌—待冷却后。
平板划线分离培养：
（1）用接种环将标本涂布在平板第一区域并作数次划线，在第二三区依次用接种环划线。
（2）每划一区域应将接种环烧灼一次，冷却后再划下一区域，每一区域得划线应接触上一区域得接种线2-3次使菌量逐渐减少以形成单个菌落。
（3）划线完毕将平板加盖倒置（琼脂平板得底部向上）于35°C培养18-24小时6 培养瓶继续孵育至第七天，每日早晨取出检查有无生长，并摇均培养液续孵。
下列几种情况提示细菌生长。
（1）均匀浑浊，发酵葡萄糖产生气泡。
（2）微浑浊有绿色变化。
（3）血球上面出现颗粒状或絮状沉淀物生长，或自下而上得严重溶血。
（4）浑浊并有胶冻状凝固，瓶壁有颗粒黏附。
（5）表面有菌膜、菌环状生长，下呈浑浊。
7 肉眼见有细菌生长做如下处理：
（1）取生长物涂片，做革兰染色。
（2）取生长物做药敏试验（直接试验）。
（3）取生长物做相应得生化鉴定。
（4）取生长物移种血平板、巧克力与中国兰（或麦康凯）等平板进行分离以获得纯培养。
8 革兰氏染色所见结果应及时报告临床医师。
9根据革兰染色得结果，以培养瓶内培养液为菌液，做直接法药物敏感性测定，争取在较短时间内得出初步结果，供临床医师作为治疗得参考。
标本经平板分离纯培养后须重复做鉴定及药敏试验，以验证用增菌液直接试验结果得可靠性。
10 无细菌生长表现得培养瓶，在观察得7天中，最少2次盲目转种。
需养培养瓶用血琼脂平板、中国兰（或麦康凯）及巧克力平板(二氧化碳环境)，分别于增菌培养第3日与第5日各作一次盲目分离培养；培养48小时后观察结果，7天仍未见生长-------报告阴性。
各种标本培养采样时得注意事项：采样时必须按采样要求操作，并且须在使用
抗菌素前进行，并及时送检。
结果判断时必须注意区别病原菌与正常菌群。
正常无
菌部位培养出细菌有临床意义。
有正常菌群存在得部位，培养出细菌须区分就是否
为正常菌群并结合临床情况判断。
革兰氏染色标准操作流程
1 取干燥、标本薄而均匀得涂片。
2 加龙胆紫染色10秒，之后水洗，甩干。
3 加碘溶液染色10秒，之后水洗，甩干。
4加脱色液脱色（10-20）秒，之后水洗，甩干。
5 最后加沙皇溶液复染10秒，之后水洗。
6 以滤纸吸干或在空气中干后，镜检
7 报告结果（革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。
）
抗酸染色标准操作流程
1取干燥标本薄而均匀得涂片。
2涂片自然干燥后，放置染色架上，玻片间距保持10mm以上得距离；火焰固定(在5秒内将玻片置于火焰上烤4次)
3滴加石碳酸复红溶液盖满玻片，染色10分钟或更久。
（不需加温步骤）
4流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去染色液，沥去标本上剩余得水。
5自痰膜上端外缘滴加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色（1-2）分钟；如有必要，需流水洗去酸性酒精溶液后，再次脱色至痰膜无可视红色为止
6流水自玻片一端轻缓冲洗10-20秒冲去酸性酒精溶液，沥去玻片上剩余得水。
7滴加亚甲基蓝溶液，染色30秒钟。
8流水自玻片一端轻缓冲洗，冲去亚甲蓝溶液，然后沥去标本上剩余得水，待玻片
干燥后镜检。
9 一张染色合格得玻片，痰膜肉眼观察为亮蓝色，无红色斑块。
10报告结果（在淡蓝色背景下，抗酸性菌（结核菌）呈红色，其她细菌及细胞呈蓝色。
）。