(KJ201704)食品中亚硝酸盐的快速检测盐酸萘乙二胺法
食品分析与检验重要实验讲解
实验一：食品中亚硝酸盐的测定一、实验目的1. 掌握盐酸萘乙二胺比色法测定亚硝酸盐的原理2. 掌握分光光度计的使用、标准曲线的绘制及计算方法3. 了解分光光度计的构造二、实验原理样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，其最大吸收波长为538 nm，可测定吸光度并与标准比较定量。
三、仪器与试剂1. 仪器（1）分光光度计（2）小型胶肉机（3）恒温水浴锅2．试剂（1）亚铁氰化钾溶液(106g/L)：称取106.0g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至1000 mL。
（2）乙酸锌溶液(220g/L)：称取220.0 g乙酸锌，先加30mL冰醋酸溶解，用水稀释至1000 mL。
（3）饱和硼砂溶液(50g/L)：称取5.0g硼酸钠，溶于100mL热水中，冷却后备用。
（4）对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称取0.4ｇ对氨基苯磺酸，溶于100mL20 %（V/V）盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。
（5）盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL水中, 混匀后，置棕色瓶中，避光保存。
（6）亚硝酸钠标准溶液（200μg/mL）：准确称取0.1000ｇ于110℃～120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
（7）亚硝酸钠标准使用液（5.0 μg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00mL，置于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度。
四、实验步骤1. 提取称取2.50g经绞碎混匀的样品，于50mL烧杯中，加硼砂饱和溶液12.5mL饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约300 mL 将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。
2. 提取液净化在振荡上述提取液时加入5 mL 亚铁氰化钾溶液, 摇匀, 再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。
加水至刻度, 摇匀, 放置30min, 除去上层脂肪, 上清液用滤纸过滤, 弃去初滤液30mL，滤液备用。
《食品检验学实验》综合性实验教学指导方案
食品与生物工程学院《食品检验学实验》综合性实验教学指导方案实验课程名称：食品检验学实验综合性实验名称：食品中亚硝酸盐的测定(盐酸萘乙二胺法) 1、实验目的1)明确测定亚硝酸盐含量的意义，通过样品中亚硝酸盐含量的测定，评定该食品是否符合国家“食品添加剂”使用卫生标准。
2）掌握用比色法测定亚硝酸盐含量的原理和测定方法。
2．知识综合点与实验原理样品的前处理，（取样、称样、样液的制备等），样液的发色，721分光光度计的使用，标准曲线的制作，含量的计算。
亚硝酸盐在弱酸性条件下，能与芳香族胺，如对氨基苯磺胺，起重氮化反应，生成重氮盐，此重氮盐遇偶合试剂如盐萘乙二胺，则生成紫红色偶氮染料．此染料颜色深度与试液中亚硝酸盐的含量成正比，然后与标准比较定量．3．实验内容与课时安排比色法测定肉制品中亚硝酸盐的含量，4学时4．实验主要仪器与试剂主要仪器：组织捣碎机，分光光度计，水浴锅，500ml、50ml容量瓶，400ml烧杯，250ml三角瓶，吸管，玻璃漏斗等主要试剂：蛋白质沉淀剂：乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液，硼砂饱和溶液，发色试剂（0.4%对氨基苯磺酸溶液，0.2%盐酸萘乙二氦溶液），亚硝酸钠标准溶液(5µgNaN0／ml)25．实验步骤与方法测定方法：样品中亚硝酸盐的提取：(1)称取经捣碎混合均匀的样品5．0克，于50ml烧杯中，加入硼砂饱和溶液12．5ml，用玻棒搅和．(2)以70℃左右的蒸馏水约300ml，将上述样品全部洗入500ml容量瓶中．（3置沸水浴中，加热15分钟。
(4)取出，一面转动，一面滴加5ml亚铁氰化钾溶液，摇匀再滴加5ml乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。
(5)冷却至室温，用蒸馏水稀释至刻度．摇匀，放置片刻(约10分钟)。
（6)撇去上层脂肪，清液用干滤纸过滤于250ml锥形瓶中。
(7)弃去初滤液，并洗锥形瓶2—3次，然后收集清彻滤液作为试液。
亚硝酸钠标准曲线的绘制：(1)取洗涤干净的50ml纳氏比色管(或50ml容量瓶)6支(2)用5ml吸管分别准确吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.00、量0、1、2、3、4、5、7.5、10.0、2.50ml亚硝酸钠标准溶液于比色管内(相当NaN0212.5μg)。
亚硝酸盐的测定
亚硝酸盐的测定引言亚硝酸盐（NO2-）是一种常见的无机化合物，广泛存在于自然界和工业生产中。
亚硝酸盐具有一定的毒性和致癌性，因此对于食品、饮用水和环境中的亚硝酸盐含量的测定具有重要意义。
本文将介绍几种常见的亚硝酸盐测定方法。
一、萘乙酰氯法萘乙酰氯法是一种常用的亚硝酸盐测定方法。
该方法基于亚硝酸盐与萘乙酰氯反应生成偶氮化合物的特性。
具体步骤如下：1.准备样品溶液：将待测样品溶解于适量的蒸馏水中，并进行必要的预处理（如过滤和稀释）。
2.反应：将样品溶液与萘乙酰氯溶液混合，在酸性条件下反应。
3.萘乙酰亚硝酰胺的生成：亚硝酸盐与萘乙酰氯反应生成萘乙酰亚硝酰胺（偶氮化合物）。
4.测定：使用紫外可见光谱仪测定偶氮化合物的吸光度，利用标准曲线计算样品中亚硝酸盐含量。
萘乙酰氯法是一种灵敏度较高的测定方法，但由于偶氮化合物的产生需要较长的反应时间，因此该方法不适用于对亚硝酸盐含量要求较高的分析。
二、笨二腈法笨二腈法是一种常用的快速测定亚硝酸盐含量的方法。
该方法基于亚硝酸盐与笨二腈反应生成稳定的三唑化合物的特性。
具体步骤如下：1.准备样品溶液：将待测样品溶解于适量的蒸馏水中，并进行必要的预处理。
2.笨二腈处理：将样品溶液与笨二腈处理液混合，在酸性条件下反应。
3.反应生成三唑化合物：亚硝酸盐与笨二腈反应生成稳定的三唑化合物。
4.测定：使用紫外可见光谱仪测定三唑化合物的吸光度，利用标准曲线计算样品中亚硝酸盐含量。
笨二腈法是一种快速、简便的测定方法，适用于对亚硝酸盐含量要求较高的分析。
三、电化学法电化学法是一种基于电化学原理测定亚硝酸盐含量的方法。
该方法通过测定亚硝酸盐与电极的反应产生的电流或电势变化来确定亚硝酸盐的含量。
常用的电化学测定方法包括极谱法、循环伏安法和恒电流法等。
电化学法具有灵敏度高、选择性好、操作简便等优点，但也存在仪器设备成本高和对操作人员要求较高的缺点。
在实际应用中，根据实验要求和设备条件选择合适的电化学测定方法。
盐酸萘乙二胺分光光度法测定肉制品中的亚硝酸盐
盐酸萘乙二胺分光光度法测定肉制品中的亚硝酸盐姓名： 班级：食品科学学号：一 目的要求1 通过实验强化对紫外—可见分光光度法定量分析原理的理解；2 了解以紫外—可见分光光度法为基础的检测方法的建立思路；3 直观了解紫外—可见分光光度计的结构；4 掌握紫外－可见吸收光谱的测定方法；5 掌握利用标准曲线法进行定量分析的方法。
二 实验原理亚硝酸盐在食品生产中用作发色剂和防腐剂，允许用于肉及肉制品的生产加工中，使得肉与肉制品呈现良好的色泽。
其呈色机理是，亚硝酸盐与肌肉中的乳酸作用产生亚硝酸，而亚硝酸不稳定易分解产生一氧化氮，然后一氧化氮与肌红蛋白结合产生红色的亚硝基肌红蛋白，使肉制品产生稳定的红色。
但是过量的亚硝酸盐能够引起高铁血红蛋白症， 导致组织缺氧，还可使血管扩张、血压降低。
在酸性条件下，亚硝酸盐可与对氨基苯磺酸通过重氮化反应定量生成重氮盐，该重氮盐可进一步与盐酸萘乙二胺通过偶联反应生成紫红色偶氮染料，在特定波长处产生较强吸收：；通过测定该偶氮染料在特定波长下的吸光度，利用朗伯-比尔定律（A=KLc ）可确定样品中亚硝酸盐的质量浓度。
采用标准曲线法进行定量分析时，可对亚硝酸盐标准溶液系列进行上述反应，通过测定该系列的吸光度，利用excel 回归标准曲线，得到浓度和吸光度的关系，再将样品中亚硝酸盐测得的吸光值带到方程中算出其中亚硝酸盐的浓度。
三 仪器与试剂1 仪器Cary Eclipse 型紫外-可见分光光度计；BS 124S 电子分析天平。
2 试剂亚铁氰化钾[K 4Fe(CN)6·3H 2O]、乙酸锌[Zn(CH 3COO)2·2H 2O]、硼砂 [Na 2B 4O 7·10H 2O]、对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二胺，均为分析纯试剂。
四 实验步骤1 试剂配制亚铁氰化钾溶液：称取106.0 g 亚铁氰化钾，溶解于水后稀释至1000mL 。
NH 2SO 3H +NO 2-+2H N+NSO 3H+2H 2ON+NSO 3H+NHCH 2CH 2NH 2SO 3H NNHCH 2CH 2NH 2N乙酸锌溶液：称取220.0 g 乙酸锌，加30 mL冰乙酸溶于水，稀释至1000mL。
实验十二食品中亚硝酸盐的测定
实验十二、食品中亚硝酸盐的测定（盐酸萘乙二胺分光光度法）一、实验目的1.明确亚硝酸盐在食品中的作用以及限量标准。
2.掌握盐酸萘乙二胺法测定食品中亚硝酸盐的原理、操作步骤、注意事项二、实验原理样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色的染料，与标准系列比较定量。
三、仪器1. 722分光光度计，提前20min打开预热2. 组织绞碎机，菜刀，砧板 1-2套3. 50mL烧杯 500mL烧杯 3L大烧杯4. 电炉 2个5. 托盘天平6. 200mL容量瓶 500mL容量瓶7. 恒温水浴锅8. 25mL具塞比色管9. 滴管，漏斗，滤纸，吸小球10. 玻璃棒，温度计，标记笔，标签纸四、试剂（所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂。
）1、亚铁氰化钾溶液：称取106.0g亚铁氰化钾[K4Fe6(CN)·3H2O]，用水溶解后，稀释至1000mL。
2、乙酸锌溶液：称取22.0g乙酸锌[Zn(CH3C00)2·2H20]，加3 mL冰乙酸溶于水，并稀释至100mL。
3、饱和硼砂溶液：称取5.0g硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于100 mL热水中，冷却后备用。
4、对氨基苯磺酸溶液(4g/L)：称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于100 mL 20％的盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保分装。
5、盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100毫升水中，避光保存。
有致癌作用6、亚硝酸钠标准溶液（0.2g/L）：精密称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500ml容量瓶中，并稀释至刻度。
此溶液每ml相当于200µg亚硝酸钠。
7、亚硝酸钠标准使用液（0.2µg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5微克亚硝酸钠。
食品中亚硝酸盐检测方法对比分析
分析检测食品中亚硝酸盐检测方法对比分析王 媛（连云港市赣榆区综合检验检测中心，江苏连云港 222100）摘 要：作为一种使用频率较高的食品添加剂，基于亚硝酸盐本身毒性与致癌作用的考虑，应严格把控其在食品中的添加量，一旦过量添加会危害人体健康。
本文笔者将分析几种在实践工作中使用的食品亚硝酸盐检测方法，并以肉质食品为例探究两种不同检测方法的效果，旨在提升科学检测食品中亚硝酸盐的正确性。
关键词：食品安全；亚硝酸盐；检测方法亚硝酸盐指的是含有亚硝酸根离子（NO2-）的盐，亚硝酸钠是食品添加剂中最为常见的，颜色呈淡黄色，通常为颗粒状或粉末状，味偏咸且溶水性极高[1]。
亚硝酸盐本身具有很高的毒性，是引发食物中毒的高危性因素。
为了保证人们的生命健康，必须要高度重视食品安全问题，围绕相关食品安全要求和标准严格检测食品中亚硝酸盐的含量，将其控制在规定范围内。
1 食品中亚硝酸盐的检测方法应用分析1.1 盐酸萘乙二胺法绝大多数食品的亚硝酸盐检测都可采用盐酸萘乙二胺法，具体是将硼砂添加至食品中达饱和状态，充分搅拌后进入水洗、15 min加热、冷却处理环节，再将乙酸锌与亚铁氰化钾两种溶液加入，达到沉淀蛋白质与脱除脂肪的目的，将显色处理后的滤液进行吸光度比较，由此判断其中的亚硝酸盐含量。
检测试剂包括亚硝酸钠、对氨基苯硫酸、盐酸、盐酸萘乙二胺以及氢氧化钠[2]，检测仪器包括电子天平、紫外可见光光分度计。
配制试剂时，按要求取一定剂量的氨基苯碘酸溶液，与盐酸混合后保存在暗处，将盐酸萘乙二胺取出后混合在蒸馏水中并保存在暗处，将得到的亚硝酸钠加水搅匀，围绕吸光度展开显色时间对比、显色温度记录和样品pH值的分析。
1.2 光度分析法光度分析法也称紫外光度法，是一种较早投入到实际应用中且使用范围较广的检测手段，NO2-和Griess试剂中的C6H7NO3S发生化学反应形成重氨盐，随后再与另外两种物质乙二胺偶联、1-萘基生成红色燃料，最大的光度吸收范围值约为545 nm，在此范围内均可使用光度分析法。
6食品中亚硝酸含量的测定
实验六食品中亚硝酸盐含量的测定（盐酸萘乙二胺法）一、目的与要求：1、明确亚硝酸盐的测定与控制成品质量的关系。
2、明确与掌握盐酸萘乙二胺法的基本原理与操作方法。
二、原理：样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，生成的重氮化合物，再与萘基盐酸二氨乙烯偶联成紫红色的重氮染料，产生的颜色深浅与亚硝酸根含量成正比，可以比色测定。
反应式如下：三、试剂与仪器1、亚铁氰化钾溶液：称取106克亚铁氰化钾[K4Fe9(CN)5.3H2O]，溶于水后，稀释至1000毫升。
2、乙酸锌溶液：称取220克乙酸锌[Zn(CH2C00)2·2H20]，加30毫升冰乙酸溶于水，并稀释至1000毫升。
3、饱和硼砂溶液：称取50克硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于1000毫升热水中，冷却后备用。
4、0.4％对氨基苯磺酸溶液：称取0.4克对氨基苯磺酸，溶于100毫升20％(54ml浓盐酸46ml水)的盐酸中，避光保存。
5、0.2％盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100毫升水中，避光保存。
6、亚硝酸钠标准溶液：精密称取0.1000克于硅胶干燥器中干燥24小时的亚硝酸钠，加水溶解移入500毫升容量瓶中，并稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于200微克亚硝酸钠。
7、亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液6.25毫升，置于250毫升容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5微克亚硝酸钠。
8，研钵。
9、分光光度计。
四、操作方法：1、样品处理：称取5.0克经绞碎混匀的样品，置于50毫升烧杯中，加工12.5毫升饱和溶液，搅拌均匀，以70℃左右的水约30毫升将样品全部洗入500毫升容量瓶中，置沸水浴中加热15分钟，取出后冷至室温，然后一面转动一面加入5毫升亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5毫升乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加水至刻度，混匀，放置0.5小时，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤弃去初滤液30毫升，滤液备用。
亚硝酸盐的测定实验报告
一、实验目的本实验旨在学习亚硝酸盐的测定方法，了解亚硝酸盐在食品中的存在及其对人体健康的影响。
通过实验，掌握亚硝酸盐的提取、分离和定量分析方法，提高对食品中亚硝酸盐含量的检测能力。
二、实验原理亚硝酸盐（NO2-）是一种常见的食品添加剂，广泛应用于肉制品的加工中，具有发色、防腐和抗微生物作用。
然而，过量的亚硝酸盐摄入对人体健康有害，可能导致急性中毒、慢性疾病甚至癌症。
因此，对食品中亚硝酸盐含量的检测具有重要意义。
本实验采用盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐含量。
该方法基于亚硝酸盐与对氨基苯磺酸在酸性条件下发生重氮化反应，生成重氮盐，再与N-1-萘基乙二胺盐酸盐偶合形成玫瑰红色染料。
通过比色法测定染料的吸光度，可以计算出样品中亚硝酸盐的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 火腿肠样品- 试剂：对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐、盐酸、亚硝酸钠标准溶液等- 仪器：酸度计、分光光度计、离心机、移液器、容量瓶、试管等2. 实验步骤：1. 样品处理：将火腿肠样品剪碎，称取适量，加入蒸馏水溶解，搅拌均匀。
2. 提取：将样品溶液用酸度计调至pH 2.0，加入适量的亚铁氰化钾和乙酸锌，充分混合，静置30分钟，使蛋白质沉淀。
3. 分离：将上层清液转移至离心管中，离心分离蛋白质沉淀。
4. 测定：取一定量的上层清液，加入对氨基苯磺酸和N-1-萘基乙二胺盐酸盐，充分混合，静置15分钟，使染料形成。
5. 比色：用分光光度计测定染料的吸光度，与标准曲线比较，计算出样品中亚硝酸盐的含量。
四、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据亚硝酸钠标准溶液的浓度和吸光度，绘制标准曲线。
2. 样品测定：对火腿肠样品进行测定，得到样品中亚硝酸盐的吸光度。
3. 结果计算：根据标准曲线和样品吸光度，计算出样品中亚硝酸盐的含量。
五、实验讨论1. 实验过程中，酸度对亚硝酸盐的测定结果有较大影响。
实验过程中应严格控制酸度，确保测定结果的准确性。
2. 亚铁氰化钾和乙酸锌在实验中起到沉淀蛋白质和除去脂肪的作用，提高实验的灵敏度。
食品中亚硝酸盐的检测
分析与检测近年来，我国出现了三鹿奶粉、地沟油、染色馒头等一系列较为严重的食品安全问题，使得人们对于食品安全问题变得非常敏感，甚至很多人出现了对于食品安全问题的恐惧。
因此，我国的食品安全问题急需解决。
其中，一个重要的问题就是食品中亚硝酸盐的检测，过量使用亚硝酸盐会对人体造成严重的伤害，它的检测也就成为了人们关注的重点问题。
1 亚硝酸盐检测的常用方法1.1 光度法光度法主要是利用稀磷酸溶液中的依文思蓝-氯化钾与亚硝酸根离子进行一系列化学反应，然后根据亚硝酸根离子催化氯酸钾氧化吖啶橙的褪色反应来实现对食品中亚硝酸盐的检测。
这种检测方法具有操作简便、适用范围广、灵敏度高等优良特性，在检测过程中实现了无毒化的操作过程，在各种对于亚硝酸盐的高精度监测中经常会遇到，与我国建立的标准方法非常接近。
1.2 毛细管电泳法毛细管电泳法就是采用烙熔石英毛细管柱未分离通道，进行的一种外标法检测手段。
这种检测方式在国外已经有了很好的发展，在我国尚处于起步阶段，虽然我国并没有进行大规模的实验室操作，但是这种方法在精确度和先进性上还是值得研究的。
在亚硝酸盐检测的所有方法中，分光光度法及离子色谱法是目前国标检测方法中最常用的几种方式。
分光光度的操作比较简单，所需要的设备也比较简单，是目前实验室中较为常用的测定食品亚硝酸盐的方式。
但目前国标中的测量方式使用的是镉柱法，此种方式的操作比较复杂，设备要求也较高，存在很大的操作难度。
亚硝酸盐在低紫外区的吸收也是比较强的，亚硝酸盐被氨基磺酸破坏后甚至会直接消失，这都是很难控制的内容。
所以，在实际检测过程中，可以将样品通过盐酸萘乙二胺偶合法在可见光区测定样品中的亚硝酸盐含量。
这种方式中不涉及过多的还原操作，可操作性强，在实验室样品分析中有很好的运用。
笔者进行了肉制品中亚硝酸盐含量的测定和方法考察，希望为亚硝酸盐的检测寻求到科学合理、简单有效的操作方式，帮助食品行业得到很好的发展。
2 试验仪器与试剂2.1 仪器723型分光光度计（上海分析仪器厂）、JA5003电子天平（上海良华仪器仪表有限公司）。
KJ201704 食品亚硝酸盐盐酸萘乙二胺法
食品中亚硝酸盐的快速检测盐酸萘乙二胺法（KJ201704）1范围本方法规定了食品中亚硝酸盐的快速检测方法。
本方法适用于肉及肉制品（餐饮食品）中亚硝酸盐的快速测定。
2原理样品中的亚硝酸盐经提取后，在弱酸性条件下与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺反应生成紫红色偶氮化合物，其颜色的深浅在一定范围内与亚硝酸盐含量成正相关，通过色阶卡进行目视比色，对样品中亚硝酸盐进行定性判定。
3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。
3.1试剂3.1.1对氨基苯磺酸。
3.1.2盐酸萘乙二胺。
3.1.3盐酸。
3.1.4盐酸（20%）：量取20mL盐酸，用水稀释至100mL。
3.1.5对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%盐酸中，混匀，置棕色瓶中，临用新制。
3.1.6盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶解于100mL水中，混匀，置棕色瓶中，临用新制。
3.2参考物质亚硝酸钠参考物质中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1，纯度≥99%。
表1 亚硝酸钠中文名称、英文名称、CAS登记号、分子式、相对分子质量3.3标准溶液配制亚硝酸钠标准工作液（200µg/mL，以亚硝酸钠计）：精密称取适量经110℃—120℃干燥恒重的亚硝酸钠参考物质（3.2），加水溶解，移入250mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
3.4材料亚硝酸盐快速检测试剂盒：适用基质为肉及肉制品，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。
4仪器和设备4.1移液器：200µL，1mL。
4.2涡旋混合器或超声仪。
4.3电子天平或手持式天平：感量为0.01g和0.0001g。
4.4离心机。
4.5微孔滤膜：0.45μm（水系）。
5分析步骤5.1试样制备取适量有代表性样品的可食部分，充分粉碎混匀。
5.2试样的提取准确称取试样1g（精确至0.01g），置于离心管中，准确加水10mL，超声或涡旋振荡提取5min，静置10min。
盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐的原理
盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐的原理稿子一嘿，朋友！今天咱们来聊聊盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐的原理，这可有趣啦！你知道吗，亚硝酸盐这个小家伙，在咱们的生活里可不少见。
那怎么能准确知道它有多少呢？这就得靠盐酸萘乙二胺法啦！其实呀，这个方法的原理就像是一场“化学反应大冒险”。
先把样品处理一下，让里面的亚硝酸盐都能乖乖地跑出来。
然后呢，加一些特别的试剂进去，就像给它们穿上了特定的“衣服”。
这时候，神奇的事情发生啦！亚硝酸盐会和对氨基苯磺酸发生反应，一种中间产物。
这个中间产物再和盐酸萘乙二胺一相遇，“砰”的一下，就产生了一种有颜色的物质。
而且哦，这种有颜色的物质的颜色深浅和亚硝酸盐的含量是有关系的呢！含量越高，颜色就越深。
就好像是亚硝酸盐在跟我们玩一个“比颜色”的游戏，我们通过看颜色的深浅，就能知道它的多少啦！是不是很神奇？所以呀，通过这个方法，咱们就能清楚地知道样品里亚硝酸盐的情况啦，能更好地保障咱们的健康和安全呢！稿子二亲，咱们今天来唠唠盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐的原理哟！说起亚硝酸盐，它有时候藏在食物里，可不能小瞧它。
那怎么把它给揪出来呢？这就要靠咱们的好帮手——盐酸萘乙二胺法啦！这个方法的原理就像是一场魔法秀。
咱们先把要检测的东西准备好，让里面的亚硝酸盐都有机会现身。
接着，加入一些神奇的试剂，就像是给亚硝酸盐施了魔法。
它会和对氨基苯磺酸凑在一起，变成一个新的东西。
然后呀，盐酸萘乙二胺登场啦，它一来，就和前面形成的东西发生奇妙的变化，变出一种有颜色的家伙。
这颜色可不是随便变的哟，亚硝酸盐越多，颜色就越浓。
就好像颜色在告诉我们亚硝酸盐的秘密。
你看，通过观察这个颜色，我们就能知道亚硝酸盐到底有多少啦。
是不是感觉像在破解一个神秘的密码？用这个方法，咱们就能在生活中更好地把控亚硝酸盐，让我们吃得更放心，生活更健康哟！。
盐酸萘乙二胺测定亚硝酸盐的原理
盐酸萘乙二胺测定亚硝酸盐的原理
盐酸萘乙二胺测定亚硝酸盐的原理是基于亚硝酸盐与萘乙二胺在酸性条件下发生偶联反应生成偶氮化合物的特性。
具体原理如下：
1. 亚硝酸盐与盐酸萘乙二胺在酸性条件下反应生成偶氮化合物。
亚硝酸盐（NO2-）与盐酸萘乙二胺（NEDA）在酸性条件下发生偶联反应，生成偶氮化合物（R-N=N-R）。
2. 偶氮化合物在酸性条件下呈现出鲜艳的红色。
偶氮化合物具有强烈的吸收光谱，呈现出鲜艳的红色。
3. 通过测量红色溶液的吸光度来确定亚硝酸盐的含量。
根据比尔定律，溶液的吸光度与溶液中物质的浓度成正比关系。
因此，通过测量红色溶液的吸光度，可以确定亚硝酸盐的含量。
综上所述，盐酸萘乙二胺测定亚硝酸盐的原理是利用亚硝酸盐与萘乙二胺在酸性条件下发生偶联反应生成偶氮化合物，并通过测量偶氮化合物溶液的吸光度来确定亚硝酸盐的含量。
食品中亚硝酸盐的测定
三、仪器 1. 722 分光光度计 2. 组织绞碎机，菜刀，砧板 3. 50mL 烧杯
500mL烧杯 3L 大烧杯 4. 电炉 5. 托盘天平 6. 200mL容量瓶 500mL容量瓶 7. 恒温水浴锅 8. 25mL 具塞比色管 9. 滴管，漏斗，滤纸，吸小球， 10. 玻璃棒，温度计，标记笔，标签纸
若干，提前 20min 打开预热 1-2 套 2 个/组 1 个/组 2个 2个 1 个/组 1个 1 个/组 1-2 个 10 个/组 1 个/组 若干
四、试剂（所用试剂，除另有规定外，均为分析纯 试剂。）
1. 亚 铁 氰 化 钾溶 液 ： 称 取 106.0g 亚 铁 氰化 钾 分装，1 瓶/大
结果保留 小数点后 2 位有 效 数 字。
溶于 100mL 热水中，冷却后备用。
组
4、对氨基苯磺酸溶液(4g/L)：称取 0.4 g 对氨基苯磺酸， 分装，1 瓶/大 溶于 100mL 20％的盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保 组
存。
5、盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取 0.2 克盐酸萘乙二 分装，1 瓶/大
胺，溶于 100毫升水中，避光保存。有致癌作用
按下式计算： A
X = ——————— ×1000
v1
m ×—— ×1000 V2
式中:
X — 试样中亚硝酸盐的含量， mg/kg； V1— 测定时所取溶液体积，mL； V2 — 试样处理液总体积，mL；
m — 试样质量，g； A—试样测定液中亚硝酸盐的质量，µg；
部分食 品中亚硝 酸盐的限 量标准（ 以 NaNO2 计）
组
6、亚硝酸钠标准溶液（0.2g/L）：精密称取 0.1000g于
盐酸乙二胺法测定亚硝酸盐原理
盐酸乙二胺法测定亚硝酸盐原理
盐酸乙二胺法是一种常用的测定亚硝酸盐含量的方法。
其原理是通过亚硝酸盐与乙二胺（又称二乙胺）在酸性条件下发生反应生成深红色物质，利用该物质的吸光度与亚硝酸盐的浓度成正比的特性来测定亚硝酸盐的含量。
具体实验步骤如下：
1. 取待测溶液，加入适量的盐酸乙二胺。
2. 将溶液置于酸性条件下，可以加入酸性介质如硫酸或盐酸。
3. 在适当的温度下进行反应，一般为40-60°C。
4. 反应一段时间后，观察溶液颜色的变化。
亚硝酸盐与乙二胺反应生成的深红色物质是由于该物质吸收可见光谱区的光线而产生的。
5. 使用分光光度计或比色计测定深红色物质的吸光度。
6. 将吸光度与标准曲线或已知浓度的亚硝酸盐溶液进行比对，计算待测溶液中亚硝酸盐的浓度。
盐酸乙二胺法测定亚硝酸盐原理简单、灵敏度高，常用于饮用水、环境水样等中亚硝酸盐的测定。
精细化学品生产技术：盐酸蔡乙二胺法 — 亚硝酸盐测定
盐酸蔡乙二胺法 — 亚硝酸盐测定
2、分析步骤
（2）测定
吸取 40 .0m L上述滤液于50m L带塞比色管中，另吸取0.00、0.2 0、0.4 0、0.6 0、0.8 0、1.0 0,、1.50、2.00、2.50 mL亚硝酸钠标准使用液，分别置于50 mL带塞比色管中。于标准管与试样管中 分别加人2 mL对氨基苯磺酸溶液（4 g/L），混匀，静置3 min-5 min后各加人1 mL盐酸蔡乙二胺溶 液（2 g/L），加水至刻度，混匀，静置15 min，用2 cm比色杯，以零管调节零点，于波长538 nm处 测吸光度，绘制标准曲线比较，同时做试剂空白。
3、计算结果
盐酸蔡乙二胺法 — 亚硝酸盐测定
感谢观看
2、分析步骤
（1）试样处理
称取5.0g经绞碎混匀的试样，置于50m L烧杯中，加12.5m L硼砂饱和液，搅拌均匀，以70℃左 右的水约300mL将试样洗人500 mL容量瓶中，于沸水浴中加热15 min，取出后冷却至室温，然后一 面转动，一面加人5 ml亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加人5 mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻 度，摇匀，放置0.5h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液30 ml，滤液备用。
精细化学品检验技术 张军科
食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定
本标准规定了食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定方法。本标准适用于食品中亚硝酸 盐和硝酸盐的测定。亚硝酸盐方法检出限为1m g/kg，硝酸盐方法检出限为1.4 mg/kg。
盐酸蔡乙二胺法 — 亚硝酸盐测定
1、原理
试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再 与盐酸蔡乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比定量。
食品中亚硝酸盐测定盐酸萘乙二胺法实验
食品中亚硝酸盐测定盐酸荼乙二胺法实验实验4食品中亚硝酸盐测定（盐酸茶乙二胺法） A文稿归稿存档 DQS583-OLUI129一、实验原理制品中加入的亚硝酸盐产生的亚硝基与肌红蛋白反应，生产色泽鲜红的亚硝基肌红蛋白，使肉制品有美观的颜色。
同时亚硝酸盐也是一种防腐剂，可抑制微生物的增殖。
由于蛋白质代谢产物中仲胺基与亚硝酸反应能够生成具有很强毒性和致癌性的亚硝胺，因此，亚硝酸盐的使用量及在制品中的残留量均应按标准执行。
亚硝酸盐的测定方法主要是重氮偶合比色法，此外可与荧光胺偶合，测定其荧光吸收强度，或衍生后用气相色谱法测定。
H样品中抽提分离出亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下，与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与盐酸2—蔡乙二胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。
其颜色的深度与样品种亚硝酸含量成正比，故可比色测定。
二、试剂和器材①饱和硼砂溶液：5g硼酸钠溶于lOOmL热的重蒸水中，冷却备用。
②亚铁鼠化钾溶液：称取106g亚铁鼠化钾溶于水，并稀释至lOOOmLo③乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌，加30mL冰醋酸溶于水，并稀释至lOOOmLo④果蔬抽提液：溶解50g氯化汞和50g氯化锁于lOOOmL重蒸水中，用浓盐酸调整到pH值为lo⑤氢氧化铝乳液：溶解125呂硫酸铝于lOOOmL重蒸水中，滴加氨水使氢氧化铝全部沉淀。
用蒸懈水反复洗涤，真空抽滤，直至洗液分别用氯化钞!溶液检验不发生浑浊。
取下沉淀物，加适量重蒸水使之呈薄襁糊状，捣拌均匀备用。
©0. 4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%的盐酸溶液中，闭关保存。
⑦0.2%盐酸蔡乙二胺溶液：称取0.2g盐酸蔡乙二胺，溶于100mL重蒸水中。
⑧亚硝酸钠标准溶液（5微克每毫升）：精确称取0. 1000g亚硝酸钱，以重蒸水定容到500mLo再吸取此溶液25mL,以重蒸水定容到lOOOmL,此工作液每毫升含亚硝酸钠5微克。
实验十 食品中亚硝酸盐含量的检测
实验十 食品中亚硝酸盐含量的检测1.实验目的掌握盐酸萘乙二胺法检测肉制品中食品添加剂——亚硝酸盐的基本操作技术。
2.实验原理在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸奈乙二胺偶合生成紫红色化合物，颜色的深浅与亚硝酸盐含量成正比，其最大吸收波长为538nm ，可测定吸光度并与标准比较定量。
2HCl+NaNO 2+H 2N3H重氮化H 3SO-Cl----+NaCl 2H +2O2HCl .H 2NH 2CH 2+--N-Cl N3H偶合CHN 2CH 2NH 2H .2HCl N -H 3SON +HCl盐酸萘乙二胺紫红色3.仪器、试剂及材料3.1仪器50mL 小烧杯，752型分光光度计，250mL 容量瓶，1mL 移液管，25mL 具塞试管，洗耳球 3.2试剂（1）饱和硼砂溶液：溶解5g 硼酸钠于100mL 热水中，冷却后备用。
（2）硫酸锌溶液：溶解30g 硫酸锌于100mL 水中。
（3）对氨基苯磺酸溶液（0.4%）：溶解0.4g 对氨基苯磺酸于100mL20%盐酸中，避光保存。
（4）盐酸奈乙二胺溶液（0.2%）：溶解0.2g 盐酸奈乙二胺于100mL 水中，避光保存。
（5）亚硝酸钠标准溶液：精确称取0.1000g 亚硝酸钠（硅胶干燥中干燥24小时），加水溶解，移入500mL 容量瓶，并稀释至刻度，混匀，临用前吸取5.00mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀，此溶液每毫升相当5μg 亚硝酸钠。
（6）亚铁氰化钾溶液：称取10.6g 亚铁氰化钾于100mL 容量瓶中定容。
3.3材料火腿肠4.实验步骤4.1亚硝酸钠的提取4.2 测定试剂按照表1进行添加表1 各试剂添加顺序滤液20 0.4%对氨基苯磺酸1 1 1 1 1 1 混匀3~5min 0.2%盐酸奈乙二胺0.50.50.5 0.5 0.50.5补水至25mL数据处理公式与方法：1000250201000A X ⨯⨯⨯=mX ——样品中的亚硝酸盐的含量，mg/kg ；A ——测定用滤液中亚硝酸钠的含量，μg ； m ——样品的质量，g ；20/250——测定用样液体积mL/试样处理液总体积mL 。
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附件4
食品中亚硝酸盐的快速检测
盐酸萘乙二胺法（KJ201704）
1范围
本方法规定了食品中亚硝酸盐的快速检测方法。
本方法适用于肉及肉制品（餐饮食品）中亚硝酸盐的快速测定。
2原理
样品中的亚硝酸盐经提取后，在弱酸性条件下与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺反应生成紫红色偶氮化合物，其颜色的深浅在一定范围内与亚硝酸盐含量成正相关，通过色阶卡进行目视比色，对样品中亚硝酸盐进行定性判定。
3试剂和材料
除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。
3.1试剂
3.1.1对氨基苯磺酸。
3.1.2盐酸萘乙二胺。
3.1.3盐酸。
3.1.4盐酸（20%）：量取20mL盐酸，用水稀释至100mL。
3.1.5对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%盐酸中，混匀，置棕色瓶中，临用新制。
3.1.6盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶解于100mL水中，混匀，置棕色瓶中，临用新制。
3.2参考物质
亚硝酸钠参考物质中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1，纯度≥99%。
表1亚硝酸钠中文名称、英文名称、CAS登记号、分子式、相对分子质量
3.3标准溶液配制
亚硝酸钠标准工作液（200µg/mL，以亚硝酸钠计）：精密称取适量经110℃—120℃干燥恒重的亚硝酸钠参考物质（3.2），加水溶解，移入250mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
3.4材料
亚硝酸盐快速检测试剂盒：适用基质为肉及肉制品，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。
4仪器和设备
4.1移液器：200µL，1mL。
4.2涡旋混合器或超声仪。
4.3电子天平或手持式天平：感量为0.01g和0.0001g。
4.4离心机。
4.5微孔滤膜：0.45μm（水系）。
5分析步骤
5.1试样制备
取适量有代表性样品的可食部分，充分粉碎混匀。
5.2试样的提取
准确称取试样1g（精确至0.01g），置于离心管中，准确加水10mL，超声或涡旋振荡提取5min，静置10min。
准确吸取1mL上清液（如样品浑浊，≥3000r/min离心5min取上清液，或经微孔滤膜过滤后取续滤液）于检测管中，向检测管中滴加对氨基苯磺酸溶液200μL，混匀静置1min，再加入盐酸萘乙二胺溶液100μL，混匀静置5min，即得待测液。
5.3测定步骤
将待测液与标准色阶卡目视比色，10min内判读结果。
进行平行试验，两次测定结果应一致，即显色结果无肉眼可辨识差异。
5.4质控试验
每批样品应同时进行空白试验和质控样品试验（或加标质控试验）。
用色阶卡和质控试验同时对检测结果进行控制。
5.4.1空白试验
称取空白样品，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。
5.4.2质控样品试验（或加标质控试验）
亚硝酸盐质控样品：采用典型样品基质或相似样品基质按照实际生产工艺生产的，含有一定量亚硝酸盐，并可稳定保存的样品。
经参比方法确认的质控样品中亚硝酸盐含量（以亚硝酸钠计）应包括但不限于10mg/kg。
加标质控样品：准确称取空白试样1g（精确至0.01g），置于离心管中，加入适量亚硝酸钠标准工作液（200µg/mL）（3.3）使样品中亚硝酸钠含量为10mg/kg。
质控样品（或加标质控样品）按5.2和5.3步骤与样品同法操作。
6结果判定要求
观察检测管中样液颜色，与标准色阶卡比较判读样品中亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量。
颜色浅于检出限（1mg/kg）则为阴性样品；颜色深于10mg/kg则为阳性样品。
色阶卡见图1。
注：1.颜色接近或深于1mg/kg，但浅于或接近10mg/kg时，则考虑本底污染或带入所
2.10mg/kg仅作为本方法的本底控制限。
图1亚硝酸盐色阶卡
质控试验要求：空白试验测定结果应为阴性，质控样品试验测定结果应在其标示量值允差范围内，加标质控试验测定结果应与加标量相符。
7结论
由于色阶卡目视判读存在一定误差，为尽量避免出现假阴性结果，读数时遵循就高不就低的原则。
当测定结果大于10mg/kg时，应对结果进行确证。
8性能指标
8.1检测限：1mg/kg。
8.2灵敏度：灵敏度应≥99%
8.3特异性：特异性应≥85%。
8.4假阴性率：假阴性率应≤1%。
8.5假阳性率：假阳性率应≤15%。
注：性能指标计算方法见附录A。
9其他
本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不作限定。
方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。
本方法参比方法为待测样品中若存在高含量的亚硫酸氢钠、抗坏血酸或酱油时，会对本法的显色结果产生一定影响，检测时应予以注意。
色阶卡应确保在试剂盒保质期内不出现褪色或变色的情况。
附录A
快速检测方法性能指标计算表
表A.1性能指标计算表
本方法负责起草单位：陕西省食品药品监督检验研究院
验证单位：四川省食品药品检验检测院、山西省食品药品检验所
主要起草人：刘海静、李涛、林芳、王一欣、袁磊。