免疫组化与原位杂交共57页文档

原位杂交与免疫组化(2)

实验步骤
2.探针的制备 1.FISH 样本的制备 3.探针标记
4.样本的预处理
6.染色体显带 5.杂交 7.荧光显微镜检测8.结果分析Fra bibliotek实验步骤
1.FISH 样本的制备 2.探针的制备 3.探针标记
4.样本的预处理
5.杂交 6.染色体显带
7.荧光显微镜检测
具体实例.
THANKS
原位杂交与免疫组化
MEDICAL REPORT
PART 01 免疫组化的概念
主要内容
一、免疫组化二、原位杂交
PART 02 免疫组化的步骤 PART 03 免疫组化的应用 PART 04 原位杂交
一、免疫组化
原理
抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性，免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，
的二抗
免疫组化应用
在科研中的应用
在科研中的应用
在科研研究某个基因与疾病的发生（肿瘤）临床分期，预后，患者生存率等的相关性。最终的目的是考察这个基因的临床意义。
二、原位杂交
基本原理
分类荧光原位杂交类型
原位杂交
探针
实验步骤实验流程
具体实例
基本原理
1.核酸分子杂交的基本原理是利用核酸分
免疫组化的概念
通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去
探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来，以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性，定位或定量的研究。
1.染色方法
免疫组化的步骤
2.石蜡组织切片的制备 3.免疫组化染色（石蜡切片）

免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察

免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察1. 引言1.1 背景鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，其病因尚不完全清楚。

已有研究表明埃波斯坦-巴尔病毒（EB病毒）可能与鼻咽癌的发展密切相关。

EB病毒是一种常见的人类病毒，感染后可引起多种疾病，包括淋巴瘤和鼻咽癌等。

检测EB病毒在鼻咽癌中的存在对于该疾病的诊断和治疗具有重要意义。

当前，免疫组化技术和原位杂交技术被广泛应用于肿瘤诊断和研究中。

免疫组化技术可以通过检测特定抗原的表达水平来判断肿瘤的类型和分级，而原位杂交技术则可以检测病毒的核酸序列，从而确定病毒的存在。

双标记技术结合了免疫组化和原位杂交技术的优势，可以同时检测抗原和核酸，提高了诊断的准确性和可靠性。

本研究旨在通过免疫组化和原位杂交双标记技术检测EB病毒在鼻咽癌中的存在，探讨其在鼻咽癌诊断中的应用以及对该疾病的诊断和治疗的意义。

通过对免疫组化与原位杂交双标记技术的应用效果进行观察和分析，为鼻咽癌的早期诊断和治疗提供更准确的依据。

1.2 研究目的本研究的目的是探讨免疫组化与原位杂交双标记技术在诊断鼻咽癌中的应用效果。

鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，而EB病毒被认为是导致鼻咽癌发生的一个重要因素。

通过检测EB病毒在鼻咽组织中的存在情况，可以帮助早期诊断和治疗鼻咽癌。

免疫组化技术是一种通过特定抗体与靶分子结合的技术，可以帮助我们检测出EB病毒在组织中的表达情况。

而原位杂交技术则可以帮助我们检测出EB病毒的基因组在组织中的存在情况。

将两种技术结合起来进行双标记，不仅可以提高对EB病毒的检测灵敏度和准确性，同时也可以更加直观地观察病毒在组织中的分布情况。

通过本研究，我们旨在验证免疫组化与原位杂交双标记技术在鼻咽癌诊断中的准确性和可靠性，为临床提供更好的诊断方法，帮助医生更早地发现和治疗鼻咽癌，提高患者的生存率和生活质量。

1.3 意义鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，其发病率逐年增加，给患者的生活质量和健康造成了严重威胁。

免疫组化与原位杂交

以上，否则组织中心固定不良影响效果。组织固定后应充分水洗，去除固定液，以减少固定液
造成的人为假象。
3、固定方法：
浸入法(Immersion method)：将组织浸泡在固定液内，必要时可在低温
(4℃)环境下进行，固定时间可根据抗原的稳定性以及固定液性质而定，一般在2~12h之间。
灌注法(Irrigation method)：此法适用于动物实验研究。灌注法固定可
培养细胞标本的取材:
可根据培养的细胞特性分别采取不同的方法。某些细胞有贴壁生长的特性，只需将载玻片或盖玻片插入培养液内即可收集到理想的细胞标本。某些细胞只能在培养液中生长，可用上述体液沉淀离心涂片法处理。
2、组织标本的取材：
组织标本主要取之于活组织检查标本、手术切除标本、动物模型标本以及尸体解剖标本等。前三者均为新鲜组织，后者是机体死亡 2h以上的组织，可能有不同程度的自溶，其抗原可能有变性消失，严重弥散现象，因此，尸检组织应尽快固定处理，以免影响免疫组化标记效果。
2、单克隆抗体：
单克隆抗体是应用细胞融合杂交瘤技术通过免疫动物（大多数为小鼠）而制备的。它是针对一种抗原决定簇的一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体。
㈢抗原与抗体的关系：
没有抗原的刺激，机体不能产生抗体；没有抗原物质，也无法检测抗体的存在，利用抗体可以检测抗原物质。
二、细胞和组织标本的取材和固定
1、石蜡切片脱蜡到水： 2、预处理：需要时可选用3%过氧化氢溶液阻
断过氧化物酶。
3、抗原修复处理：根据需要选用
4、染色：

PBS液洗涤：5分钟×2次；

正常山羊血清封闭：室温或37℃20分钟；

滴加一抗：37 ℃1-2小时或4 ℃过夜；

原位杂交免疫组化学

原位杂交免疫组化学
原位杂交和免疫组化是两种在组织学和病理学中常用的分子生物学技术，它们都能够在细胞或组织的自然环境中定位特定生物大分子。

原位杂交：
-该技术主要用于检测组织切片中DNA或RNA分子的存在与分布。

通过设计并标记一段与目标核酸序列互补的寡核苷酸探针，在组织切片上进行杂交反应。

当探针与靶标分子结合后，可以通过显色或者荧光信号来观察目标核酸的位置。

免疫组化：
-免疫组化则主要用来定位蛋白质等抗原物质。

它利用抗体与抗原特异性结合的原理，将能识别特定蛋白质的抗体标记上可见的示踪物（如酶、荧光素、金属离子或放射性同位素），然后让这些标记抗体与组织切片上的抗原发生特异性结合，通过显色反应显示出目标蛋白在组织中的位置和分布。

联合应用：
-在病毒学和其他领域研究中，有时会将原位杂交与免疫组化结合起来，即同时在同一组织切片上进行ISH和IHC实验。

这样可以
同时检测病毒基因及其编码的蛋白质产物在细胞内的表达及分布情况，从而获得更为全面深入的生物学信息。

这种技术称为“双标记”或“多标记”技术，有助于揭示病毒感染过程、宿主响应机制以及病原体与细胞相互作用的复杂关系。

细胞生物学中的免疫组化和原位杂交技术

细胞生物学中的免疫组化和原位杂交技术细胞生物学是研究细胞结构、功能和特性的学科，其中免疫组化和原位杂交技术是重要的实验手段和研究工具。

本文将介绍免疫组化和原位杂交技术的原理、应用以及未来的发展方向。

一、免疫组化技术免疫组化技术是通过特异性抗体与目标分子结合来检测细胞内或组织内的特定蛋白质的方法。

免疫组化技术的原理是利用抗体与抗原之间的亲和性，通过特异性结合实现对蛋白质的检测和定位。

1. 原理免疫组化技术主要包括以下步骤：取材、固定、切片、抗原恢复、阻断、抗体标记、显色和观察。

首先，将需要检测的组织固定并制作切片。

然后，对切片进行抗原恢复处理，以破坏固定过程中引起的抗原和抗体的交联反应。

接下来，进行阻断步骤，防止非特异性抗体的结合。

随后，使用特异性抗体标记目标蛋白质。

最后，通过显色反应观察标记的抗体的位置和数量。

2. 应用免疫组化技术在细胞生物学领域有多种应用。

它可以用于检测特定蛋白质的存在和定位，从而研究细胞内各种生物分子的分布。

此外，免疫组化技术还可以用于诊断疾病，例如通过检测肿瘤标志物的表达来判断肿瘤的类型和分级。

此外，免疫组化技术还能够评估细胞的增殖、分化和凋亡等生理过程。

二、原位杂交技术原位杂交技术是通过标记的探针与靶RNA或DNA结合，从而在组织或细胞水平上检测靶分子的方法。

原位杂交技术可以提供靶RNA和DNA的空间分布和细胞定位信息。

1. 原理原位杂交技术主要包括以下步骤：制备探针、固定组织、加氢解固、杂交反应、洗涤和检测。

首先，制备标记的探针，通常使用放射性同位素或荧光标记。

然后，将组织固定，以防止RNA或DNA降解。

接着，进行加氢解固步骤，以使靶分子的结构恢复。

随后，进行杂交反应，将探针与靶RNA或DNA结合。

最后，通过洗涤和检测步骤，确定探针的结合位置和数量。

2. 应用原位杂交技术在细胞生物学和遗传学领域有广泛的应用。

它可以用于研究基因表达和功能的调控机制，例如通过检测特定RNA的存在来研究基因的转录水平。

免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察

免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察【摘要】本文旨在探讨免疫组化与原位杂交双标记技术在诊断鼻咽癌中的应用效果。

通过对EB病毒与鼻咽癌关系的分析，介绍了免疫组化技术和原位杂交技术在鼻咽癌诊断中的应用及双标记技术的优势。

实验方法包括了细胞标本的处理和检测流程。

研究结果显示，免疫组化与原位杂交双标记技术在鼻咽癌诊断中具有较高的有效性，为临床诊断提供了新的方法。

未来研究可探索更多的双标记技术以提高诊断的准确性和全面性。

本研究对于提升鼻咽癌的早期诊断和治疗具有积极的意义。

【关键词】关键词：免疫组化、原位杂交、双标记技术、EB病毒、鼻咽癌、诊断、效果观察、研究意义、实验方法、有效性、未来研究方向1. 引言1.1 背景介绍鼻咽癌是头颈部最常见的恶性肿瘤之一，常见于亚洲地区。

其发病机制尚不完全清楚，但已有研究表明，埃普斯坦-巴尔病毒（EB病毒）感染与鼻咽癌的发生密切相关。

EB病毒是一种常见的病毒，能够在人类鼻咽黏膜中潜伏多年，患鼻咽癌的患者体内EB病毒DNA的检测阳性率较高。

免疫组化技术是一种重要的组织学检测方法，可以通过检测组织中特定抗原的表达水平来判断疾病的发展程度。

在鼻咽癌的诊断中，免疫组化技术可以帮助医生准确地识别肿瘤细胞，并辅助判断患者的病情。

原位杂交技术是一种检测核酸序列的方法，可以用于检测EB病毒DNA在肿瘤组织中的存在。

通过将该技术与免疫组化技术结合起来，可以更准确地诊断EB病毒与鼻咽癌的关系。

本研究旨在探讨免疫组化与原位杂交双标记技术在诊断鼻咽癌中的作用，为临床诊断提供更加准确、可靠的依据。

通过对其有效性进行观察和分析，希望为未来的鼻咽癌诊断和治疗提供参考。

1.2 研究目的本研究的目的是通过应用免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB 病毒在鼻咽癌组织中的存在情况，探讨该技术在鼻咽癌诊断中的有效性和可行性。

具体目的包括：1. 确定EB病毒与鼻咽癌的关系，验证其在鼻咽癌中的潜在作用。

免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察

免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察【摘要】本研究旨在探讨免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒对鼻咽癌诊断的效果。

通过文献分析，免疫组化技术在鼻咽癌中的应用已被广泛研究，原位杂交技术也被证实具有较高的敏感性和特异性。

本研究对双标记技术在鼻咽癌中的应用进行了探讨，并分析了EB病毒与鼻咽癌的关联性。

结果显示免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒在诊断鼻咽癌中具有较高的准确性和可靠性。

结论认为该技术在鼻咽癌诊断中的有效性较高，未来的研究方向可以进一步探索该技术的临床应用和优化方法。

该研究有望为鼻咽癌的早期诊断和治疗提供更多有效的手段。

【关键词】免疫组化、原位杂交、双标记技术、EB病毒、鼻咽癌、诊断、效果观察、关联性分析、有效性、未来研究方向1. 引言1.1 背景介绍鼻咽癌是一种发生在鼻咽黏膜上皮组织的恶性肿瘤，常见于东南亚地区。

根据统计数据显示，我国每年鼻咽癌的发病率呈逐年增加的趋势。

该疾病早期症状不典型，易被忽视，导致诊断困难和治疗延误。

寻找更准确、可靠的诊断方法对于提高鼻咽癌的早期检测率和治疗效果具有重要意义。

免疫组化技术是一种通过检测组织或细胞内特定蛋白质的表达情况来诊断疾病的方法。

在鼻咽癌中，免疫组化技术可以帮助医生确定肿瘤的类型、分级和预后，指导治疗方案的选择。

原位杂交技术是一种检测病毒DNA或RNA存在的方法，可以帮助确定EB病毒在鼻咽癌中的感染情况。

结合免疫组化与原位杂交双标记技术，可以更全面、准确地评估EB病毒在鼻咽癌中的作用，为临床诊断和治疗提供更准确的依据。

本研究旨在探讨免疫组化与原位杂交双标记技术在鼻咽癌诊断中的应用效果，并为未来的研究提供新的思路和方向。

1.2 研究目的本研究旨在探讨免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒在诊断鼻咽癌中的效果。

具体目的包括：1. 评估免疫组化技术在鼻咽癌中的应用情况，探讨其在检测EB病毒感染中的准确性和可靠性。

免疫组化技术、原位杂交技术用于结核病诊断中的价值评价

免疫组化技术、原位杂交技术用于结核病诊断中的价值评价喻永洋【摘要】　目的　探究免疫组化技术、原位杂交技术用于结核病诊断中的应用价值, 评价其效果。

方法　结核病患者142例作为结核病组, 另选取100例进行健康体检的志愿者作为健康组。

结核病组患者随机分为A、B 组, 各71例, A 组进行免疫组化技术诊断, B 组进行原位杂交技术诊断, 观察两种方法在显微镜下的病变形态, 比较两种诊断方法的检测阳性率。

结果　A 组和健康组的阳性率分别为87.32%、6.00%, B 组和健康组的阳性率分别为97.18%、2.00%。

B 组诊断结核病的阳性率高于A 组, 差异具有统计学意义 (χ2=4.829, P<0.05)。

结论　免疫组化技术、原位杂交技术都是结核病诊断较好的手段, 但原位杂交技术诊断结核病的阳性率高于免疫组化技术, 具有临床推广价值。

【关键词】　免疫组化技术；原位杂交技术；结核病；诊断DOI ：10.14164/11-5581/r.2017.03.023作者单位：110000　沈阳市苏家屯区中心医院结核病主要是由于结核杆菌侵袭患者机体脏器引起的慢性传染病, 其中以肺部感染最为常见。

结核杆菌感染患者后, 使患者机体抵抗力降低, 出现发热、乏力、消瘦、呼吸困难等各种疾病, 严重者会引发患者发生肺癌等疾病, 影响患者的生命安全和身体健康。

有研究表明, 早期对患者进行治疗, 能有效降低患者的感染率, 缩短传染期, 降低复发率, 因此寻找一种准确可靠的诊断方法具有至关重要的意义。

本次研究对比了免疫组化技术和原位杂交技术在诊断结核病中的效果, 现将结果报告如下。

1　资料与方法1. 1　一般资料　选取2014年12月~2016年3月本院收治的明确诊断为结核病的患者142例作为结核病组, 另选取100例在本院进行健康体检的志愿者作为健康组。

本次研究经过患者及志愿者本人同意并经过本院伦理委员会批准进行。

免疫组化技术、原位杂交技术检测尖锐湿疣结果对比分析

免疫组化技术、原位杂交技术检测尖锐湿疣结果对比分析摘要】目的：总结性探讨分析免疫组化技术、原位杂交技术在尖锐湿疣中的检测价值。

方法：将110例门诊诊断为尖锐湿疣的蜡块进行连续切片，采用免疫组化技术和原位杂交技术对比染色，并在光镜下观察。

结果：原位杂交92例表达HPV DNA阳性；免疫组化技术染色68例HPV多克隆抗体染色阳性，两者联合应用检测到104例呈阳性反应。

结论：原位杂交技术的检测结果优于免疫组化技术，两者联合使用更加有利于尖锐湿疣的检测，使检测阳性率提高。

【关键词】免疫组化技术；原位杂交技术；尖锐湿疣【中图分类号】R综合医学【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）22-0135-02尖锐湿疣为一种性传播疾病，在临床工作中较为易见，其发病率近几年逐渐上升。

此病的发生原因主要是由于人乳头瘤病毒感染[1]。

人乳头瘤病毒感染后是否出现尖锐湿疣、病情的转归、发展与宿主的载量、病毒的型别、免疫功能的关系十分密切[2]。

尖锐湿疣发病和复发或许和HPV的免疫逃逸以及宿主或者局部的细胞免疫功能低下相关。

其病理诊断工作主要依靠免疫组化技术或者HE染色，然而尖锐湿疣的诊断工作有许多问题，免疫组化的阳性检测率低，HE切片典型（含血管丛、角化不全和挖空细胞），使尖锐湿疣和假性尖锐湿疣的区别难度更大[3]。

本次临床研究将免疫组化技术和原位杂交技术同时运用于尖锐湿疣的检测中，取得了良好的成果，现报道如下.1.资料与方法1.1 一般资料本次临床研究的对象为110例尖锐湿疣患者，均为女性，年龄为21到53岁，病程10天到3个月，皮损都位于外阴部，大小为0.5厘米×0.3厘×0.2厘米～0.8厘×0.5厘米×0.5厘米，表面乳头样或者菜花样，固定组织时采用10%中性福尔马林，之后脱水、石蜡包埋、切片，切片的厚度为4微米，之后进行HE染色。

捞于涂有多聚赖氨酸的玻片上，进行原位杂交技术和兔疫组化技术对比染色。

免疫组化及原位杂交结果

免疫组化及原位杂交结果免疫组化和原位杂交，这听起来像是科学家们的魔法咒语，但其实它们是研究细胞和组织中蛋白质和基因的重要工具。

想象一下，科学家们就像侦探，利用这些技术寻找身体里的秘密。

嘿，别想歪了，这不是侦探片里的悬疑剧，而是真正的生物医学探索。

免疫组化就像是给细胞打上“我是谁”的标签，让我们一眼就能识别出那些重要的蛋白质。

而原位杂交则是另一种酷炫的技术，能让我们看到基因在细胞中的位置，简直像是在细胞的舞台上放大镜头，聚焦那些闪闪发光的基因。

在实验室里，科学家们准备好样本，像是准备一场盛大的派对。

他们把样本处理得漂漂亮亮，接着加入各种化学试剂，这些试剂就像是派对上的小道具，帮助识别和标记目标蛋白。

想象一下，一群蛋白质在细胞里聚会，免疫组化的试剂就是DJ，把每个蛋白质都点亮，闪闪发光。

哇，那个样子可真让人兴奋。

然后，科学家们会用显微镜观察结果，真是个视觉盛宴。

通过这些神奇的染色反应，他们能够一眼看出细胞的状态，是否健康，是否有病变，像是在读一张细胞的“身份证”。

再说说原位杂交，这玩意儿就更有趣了。

科学家们用一小段DNA探针，就像是一封信，专门去找目标基因。

就好比你在寻找一个老朋友，发了条信息给他，结果他就在那儿等你。

探针找到了目标基因，立刻就会发出亮丽的信号，哇，这时整个细胞就像是参加了灯光秀一样，五光十色。

通过这些技术，研究人员可以看到基因的表达情况，简直让人目不暇接，仿佛打开了一个新世界。

免疫组化和原位杂交并不总是一帆风顺。

科学家们也会遇到挑战，比如试剂的选择、样本的处理等，像是一场没有硝烟的战斗。

他们得耐心琢磨，反复实验，直到找到最优方案。

就像厨师在调配菜肴的调味料一样，每一次实验都是一次新的尝试。

可是，没关系，失败也是成功之母嘛，科学家们总是乐于从每一次失败中吸取经验教训。

实验结果就像天气预报一样，有点出乎意料。

明明以为会有个大惊喜，结果却发现原来只是小水花；根本没想到的地方却给了你一个意外的收获。

免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察

免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果观察作者：古建雄刘彬来源：《中国实用医药》2019年第11期【摘要】目的探讨免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果。

方法 47例鼻咽癌患者作为研究对象，进行免疫组化和原位杂交双标记技术检测鼻咽癌细胞中 EB 病毒的表达情况，观察检测效果。

结果免疫组化检测结果显示，广谱细胞角蛋白（CK）定位于细胞浆内。

原位杂交双标记技术检测结果显示， EB病毒编码的小 RNA （EBER）阳性反应定位于鼻咽癌细胞的细胞核上。

免疫组化检测后的阳性细胞的胞膜表现为红色，原位杂交双标记技术检测后的阳性细胞核表现为蓝黑色，而双阳性细胞的核与膜呈现蓝红色，不仅对比鲜明同时背景十分清楚，双染成功后细胞及组织结构表现完整。

结论免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌均有一定作用，但原位杂交双标记技术检测比免疫组化方法更灵敏，值得临床推广应用。

【关键词】鼻咽癌;病理诊断;原位杂交双标记技术;免疫组化DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2019.11.012鼻咽癌是一种在我国南方地区发病率非常高的恶性肿瘤，由于缺乏特异性的诊断方法，患者往往预后较差[1]。

鼻咽癌又分为角化性鳞状细胞癌、非角化性癌以及基底样鳞状细胞癌，其中未分化型的非角化性癌是最常见的。

目前手术切除以及术后放化疗治疗对于提高患者的生存率有很好的作用，都属于不可缺少的治疗手段[2]。

鼻咽癌活检病理诊断应用较多的指标是CK免疫组化染色，可能对鼻咽癌的诊断具有重要意义。

免疫组化检测与原位杂交双标记技术检测，可同时分析CK与EBER两种指标在鼻咽癌细胞中的表达情况，免疫组化这种传统的检测方法有助于鼻咽癌的病理诊断[3]。

本文主要探讨免疫组化与原位杂交双标记技术检测EB病毒用于诊断鼻咽癌的效果，为促进鼻咽癌的诊断提供合理的参考，现报告如下。

1 资料与方法1. 1 一般资料选择2004年1月～2018年1月来本院进行治疗的47例鼻咽癌患者作为此次研究对象，其中男27例、女20例。

不同类型霍奇金淋巴瘤EBV检测的原位杂交和免疫组化方法比较分析

不同类型霍奇金淋巴瘤EBV检测的原位杂交和免疫组化方法比较分析摘要】目的通过采用原位杂交以及免疫组化方法探究不同类型霍奇金淋巴瘤中EBV的表达，对比两种方式在表达中的意义。

方法对比分析法是应用EBER原位杂交对EBV编码的mRNA在不同类型霍奇金淋巴瘤中的表达与应用免疫组化两步法对EBV中潜伏蛋白在不同类型霍奇金淋巴瘤中的表达进行对比的一种方法，本文采用这种方法对我院自2011年4月～2013年4月收集的200例不同类型霍奇金淋巴瘤标本进行检测，观察两种检测方法的不同表达结果。

结果采用免疫组化方法进行检测的结果阳性率低于原位杂交检测结果的总阳性率。

结论应用原位杂交的方法检测不同类型霍奇金淋巴瘤的检出率明显要高于免疫组化检测法，且具有明确的定位，具有敏感性以及特异性，值得临床推广与应用。

【关键词】霍奇金淋巴瘤 EBV检测原位杂交免疫组化比较分析【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）32-0256-02引言随着社会的发展与进步，不同霍奇金淋巴瘤的检测方法也在不断进步，目前我院应用原位杂交与免疫组化方法对EBV进行检测，现将检测结果报道如下。

1 一般资料与方法1.1 一般资料我院自2011年4月～2013年4月收集的200例不同类型霍奇金淋巴瘤标本进行检测，分别应用EBER原位杂交对EBV编码的mRNA在不同类型霍奇金淋巴瘤中的表达与免疫组化两步法对EBV中潜伏蛋白在不同类型霍奇金淋巴瘤中的表达观察两种检测方法的不同表达结果，从而找到最佳检测方案。

我院采集的标本均应用石蜡进行包埋，且按照世界卫生组织淋巴瘤分类标准进行分类，对标本进行切片，每片3μm厚，每例标本取8片进行检测，并通过HE染色——免疫组化/原位杂交——对照染色等进行处理，经过两种方法处理的切片均捞赋于浓度为2％的3-氨基丙基三乙氧基甲硅烷进行处理的玻璃片上[1]。

1.2 方法1.2.1 应用免疫组化方法进行检测试剂选择：我院应用上海生产的免疫组化试剂盒。

石蜡切片原位杂交免疫组化

病理检验技术江汉大学医学与生命科学学院病理学与病理生理学教研室2004年4月内容提要本书介绍组织病理学常用的多种技术。

包括常见的技术，即福尔马林固定、石蜡包埋、HE染色技术，同时也介绍了常用的特殊染色技术，免疫组织化学技术，并简明地介绍了分子生物学技术的基本理论以及在组织病理学中的应用。

全书理论与实践并重，经典与改良结合，内容丰富，通俗易懂，实用性强，为实验室工作的必备参考书。

适合从事病理学、组织学、生物学、法医学等的科研教学和临床工作的技术人员、教师、医师和研究生使用。

同时也适合临床医学检验专业中专、专科生使用以及临床医学专业专升本学生和临床医学专业本科生选用。

第一篇石蜡切片技术第一章组织标本的处理第一节取材 (5)第二节组织的固定 (6)第三节大体标本的处理和固定 (14)第四节陈列标本的固定 (15)第五节脱钙 (16)第六节组织的冲洗 (18)第二章石蜡包埋技术第一节脱水 (19)第二节透明 (21)第三节浸蜡 (22)第四节包埋 (22)第三章切片技术第一节切片刀 (25)第二节切片机 (27)第三节石蜡切片的制作 (27)第四节特殊组织石蜡切片的制作 (29)第五节石蜡切片的异常及处理 (29)第四章染色与染色剂第一节染色的基本原理 (31)第二节染色剂染色的化学基础 (33)第三节染色剂的分类 (34)第四节常用染色剂及配制 (35)第五节苏木素—伊红染色法 (39)第六节封固剂 (41)第五章特殊染色技术第一节结缔组织染色法 (43)第二节脂类染色法 (47)第三节糖原及粘液染色法 (48)第四节色素染色法 (50)第五节神经组织染色法 (52)第六节核酸及核蛋白染色法 (52)第七节肌肉组织染色法 (53)第八节病原微生物染色法 (54)第九节特殊染色技术的应用 (57)第二篇免疫组织化学和亲和免疫组织化学技术第一章免疫组织化学技术第一节基本原理 (62)第二节染色步骤 (67)第三节常用试剂的配制 (72)第二章亲和免疫组织化学技术第一节基本原理 (77)第二节染色步骤 (80)第三篇分子生物学技术第一章核酸原位杂交技术第一节核酸原位杂交的基本原理 (83)第二节核酸原位杂交的主要过程 (84)第三节核酸原位杂交的基本操作步骤 (86)第四节常用试剂的配制 (87)第五节核酸原位杂交的应用 (89)第二章原位PCR技术第一节基本原理 (91)第二节基本类型 (91)第三节基本步骤 (92)第四节原位PCR技术的应用 (93)第一篇石蜡切片技术切片技术的应用到现在已有一百年多的历史了。

全自动免疫组化和原位杂交染色系统技术参数

全自动免疫组化和原位杂交染色系统技术参数一、数量：1台（原装进口）用途：用于石蜡组织、冰冻组织及细胞等样本检测二、技术参数1.*烤片、脱蜡、抗原修复、阻断、标记一抗、标记二抗、显色直到复染所有步骤全自动处理，无需人工干预；烤片温度及时间可自由设置，烤片时间可满足从2分钟到至少2小时的要求；2.*同一平台实现以下多功能染色：单张切片免疫组化，单张切片双标记免疫组化，单张切片免疫组化与原位杂交同时标记，显色原位杂交，荧光原位杂交染色；3.*三个独立的玻片架，可以连续上载玻片，增加实验室效率和灵活性；4.抗原修复温度：室温到100度；5.*玻片容量：玻片容量≥30张玻片，每个玻片具有不同的抗原修复条件；机载小容量试剂瓶数量≥36个；6.可即时添加辅助试剂和一抗，二抗；7.所有缓冲液及废液试剂容量都从外部可见，可以仪器监测试剂，也可人工可视化管理；具备试剂和切片自检系统，避免错误产生；8.*试剂滴加方式：侧面滴加，最大限度减少对组织切片的伤害，减少对玻片的要求，最大程度保护不脱片，适用不同实验室来源的样本和穿刺组织等小样本；Covertiles技术保护组织不脱水不干片，保证试剂均匀覆盖组织切片；9.染色质量稳定可靠，根据不同指标方案染色时间从2.5-3.5小时可完成30张切片免疫组化从烤片到复染的全流程染色；10.*标签打印及识别系统：含红外线和摄像头的OCR识别系统；可打印并识别条形码标签、二维码和文字标签；开放标签可被LIS连接的外部扫描系统识别；可通过LIS编辑打印标签；11.*废液收集：真空负压抽吸，专门管道收集，减少试剂对机器的腐蚀；分开收集有害废液和无害废液；12.模块组合：一台电脑可控制最多至30台染色机，同一厂家不同型号的免疫组化和原位杂交染色仪器可以兼容在一台电脑操作；13.*中文操作系统，简单易懂，人性化设计；可实时查看试剂和切片运行状态；14.显色原位杂交与IHC能使用同一个二抗和显色试剂盒同时染色，方便管理，节约成本；15.免疫组化双染可实现两个抗体前后反应的顺次双染和两个抗体同时反应的并行双染两种方式；16.自动加样，可灵活设置100或150uL试剂模式，以及适用原厂一抗/探针试剂和第三方一抗试剂；17.原厂提供机载即用型一抗及浓缩型一抗试剂，满足不同切片检测需求。

10 原位杂交组化和免疫组化

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B. 核酸的标记: 1. 放射性标记: 将3H, 35S或32P等同位素标记的核苷酸或脱氧核苷酸掺入探针的碱基序列中或联结于探针的3’或5’端. 2. 非放射性标记: 用生物素(B), 地高辛(Digoxin, Dig), AKP或荧光等标记. a. Dig: 类固醇类半抗原. 利用末端转移酶在单链5’-羧基端直接添加Dig标记的U至RNA末端, 或通过随机引物法或 PCR法将其掺入到DNA探针中. 杂交后用AKP标记的抗Dig 抗体来显示靶核酸. b. AKP: 用交联剂辛二酸二琥珀酰亚胺酯(DDS)将AKP与核酸联接. c. B: 可标记UTP, dUTP, A和C等, 杂交后用酶标的抗生物素抗体或亲和素-生物素-酶来显示靶核酸. d. 荧光: 将荧光素直接与探针核苷酸的磷酸戊糖骨架共价结合, 或用缺口平移法将荧光素标记的NTP掺入.
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B. 探针对照: 1. 已知阳性和阴性组织对照: 应分别得到阳性和阴性结果. 2. 标记的载体做探针: 当应用的标记探针含有载体序列时, 可用标记的载体做探针进行原位杂交的阴性结果说明载体序列与组织标本之间无非特异性结合. 若探针所含的载体序列所引起的较高的背景时, 则可在做杂交反应前先用未标记的载体做封闭. 3. 正义RNA探针: 是证明探针特异性的阴性对照.
Cpm: 每分钟射线计数次数
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c. 预杂交和杂交液贮备液配方: *. A: 0.352g Na2HPO4, 1.736g NaCl, 0.5M EDTA, 10ml DDH2O. *. B: 二硫苏糖醇(Dithiothreitol, DTT)61.7mg, DDH2O 1ml. (仅用于 35S标记的探针, 阻止核酸二聚体形成. 其他探针用DDH O代替) 2 *. C: Denhardt’s液: 2%的BSA, 聚蔗糖(Saccharosan)和聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpyrrolidone, PVP). *. D: 2%焦磷酸钠 (Na4P2O7). *. E: 剪切鲑鱼精子DNA10mg, E.Coli tRNA10mg, DDH2O 1ml. *. F: 甲酰胺100ml, 离子交换树脂处理, 分装, -20℃贮存.

不同类型霍奇金淋巴瘤EBV检测的原位杂交和免疫组化方法比较

不同类型霍奇金淋巴瘤EBV检测的原位杂交和免疫组化方法比较许文兵;倪仰鹏;刘祖宏;黄绮国;陈宋钦【摘要】目的探讨EBER原位杂交和免疫组化EnVision两步法在检测不同类型霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma,HL)中EBV的表达和意义.方法收集68例不同类型HL标本(结节硬化型38例、混合细胞型18例、淋巴细胞丰富型7例、淋巴细胞消减型5例),石蜡切片后,分别采用EBER原位杂交法检测EBV编码的mRNA(epstein barr encoded RNAs1,EBER1)以及免疫组化EnVision两步法检测EBV潜伏膜蛋白1(laten mbmbrane proteins,LMP1)在不同类型HL中的表达.结果 68例标本中,免疫组化EnVision两步法检测结果总阳性率为36%(25/68),其中结节硬化型为23%(9/38),混合细胞型为66%(12/18),淋巴细胞丰富型和淋巴细胞消减型分别为28%(2/7)和40%(2/5);原位杂交检测结果总阳性率为55%(38/68),其中结节硬化型为42%(16/38),混合细胞型为88%(16/18),淋巴细胞丰富型和淋巴细胞消减型分别为42%(3/7)和60%(3/5).结论在对不同类型HL的EBV检测中,EBER原位杂交方法比免疫组化EnVision两步法检出率更高,定位更清晰,同时也更具特异性和敏感性.【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2013(029)004【总页数】3页(P440-442)【关键词】霍奇金淋巴瘤;原位杂交;免疫组织化学;EBV【作者】许文兵;倪仰鹏;刘祖宏;黄绮国;陈宋钦【作者单位】广东省揭阳市人民医院病理科,揭阳,522000【正文语种】中文【中图分类】R733.4霍奇金淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma，HL)与EBV 感染的关系密切［1］，在部分HL 中，EBV 甚至是被检出的唯一病毒。