谷氨酸-天冬氨酸转运体在豚鼠Corti器的分布和生理意义的探讨

２．１ １ 正常耳蜗内毛细胞、外毛细胞、支持细胞、螺旋神经节细胞、血 管纹边缘细胞和螺旋缘上皮细胞，均有谷氨酸一天冬氨酸转运体样免疫反
应（ｇｌｕｔａｍａｔｅ－ａｓｐａｒｔａｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ·ｌｉｋｅｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ，ＧＬＡＳＴ—ＩＲ）呈棕
黄色阳性表达。其中内毛细胞、外毛细胞、内毛细胞周围的支持细胞（包 括内柱细胞）、外毛细胞周围的Ｄｅｉｔｅｒ细胞和螺旋神经节细胞表达呈强阳 性；而外毛细胞周围的其他支持细胞，包括Ｈｅｎｓｅｎ细胞、Ｃｌａｕｄｉｕｓ细胞， 血管纹边缘细胞和螺旋缘上皮细胞表达稍弱。
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缩略语表
缩略语
ＡＢＲ ＣＮＳ ＤＡＢ
英文全称
ａｕｄｉｔｏｒｙ ｂｒａｉｎｓｔｅｍ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｉｌｃｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ３，３’一ｄｉａｍｉｏｎｂｅｎｚｉｄｉｎｅ
ＥＡＡＳ
ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ
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第川军医人学顺ｌ‘学位论史
以底转最轻，靠近顶转最为明显，可见内毛细胞缺失，三排外毛细胞均 有严重损伤表现，纤毛失去正常形态，排列紊乱，外毛细胞缺失数量较 多，尤以第ｌ、２排外毛细胞为著。透射电镜观察示对照组耳蜗毛细胞形 态基本正常：实验组可见毛细胞胞浆空化明显：线粒体肿胀，嵴断裂、 融合变短或消失。 ３小结 ３．１ 耳蜗内ＧＬＡＳＴ分布广泛，存在于内毛细胞、外毛细胞、支持细胞、 螺旋神经节细胞、血管纹和螺旋缘的边缘细胞。其中内毛细胞、外毛细 胞、内毛细胞周围的支持细胞（包括内柱细胞）、外毛细胞周围的Ｄｅｉｔｅｒ 细胞和螺旋神经节细胞表达呈强阳性；而外毛细胞周围的其他支持细胞， 包括Ｈｅｎｓｅｎ细胞、ＣｔａｕｄｉＵＳ细胞，血管纹边缘细胞和螺旋缘上皮细胞表 达稍弱。 ３．２ 图像分析结果提示：在不同耳蜗转，ＧＬＡＳＴ在内毛细胞和外毛细胞 分布具有差异性。在内毛细胞以第２转分布最为密集（Ｐ＜Ｏ．０５）；在外毛 细胞ＧＬＡＳＴ分布从第ｌ转到第４转逐渐依次递减（Ｐ＜Ｏ．０５）。有文献表明， 耳蜗传入神经分布情况与此类似，因此，ＧＬＡＳＴ的分布情况可能是与耳蜗 传入神经的分布的密度有关，其功能可能与听觉神经传入功能密切相关。 ３．３耳蜗鼓阶灌注ＧＬＡＳＴ抗体后，未引出ＡＢＲ，出现耳蜗毛细胞损伤等 表现，与对照组有明显差异性（Ｐ＜Ｏ．０５），这些结果表明，ＧＬＡＳＴ抗体能 够造成耳蜗毛细胞和传入神经的损伤，ＧＬＡＳＴ功能可能与中枢神经系统中 的ＧＬＡＳＴ一样，体现在对突触间隙Ｇｌｕ的重新摄取上，保持细胞外环境 较低的Ｇｌｕ浓度，防止Ｇｌｕ的神经毒性影响。 ３．４耳蜗灌注给药可能面临术中外淋巴液流失、血液流入外淋巴、毛细 胞外环境改变、耳蜗灌注的压力引起基底膜的震荡等的损伤和问题，所 以临床上及实验研究中耳蜗灌注给药时应该进一步完善操作技术。
ＧＬＡＳＴ
ｇｌｕｔａｍａｔｅ—ａｓｐａｒｔａｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ
ＧＬＡＳＴ··ＩＲ ｇｌｕｔａｍａｔｅ－－ａｓｐａｒｔａｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ
Ｇｍ
ＧⅡ
Ｇｍ
－ｌｉｋｅｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ ｇｌｕｔａｍｉｎｅ ｇｌｕｔａｍａｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ １ ｇｌｕｔａｍａｔｅ
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ｇｌｕｔａｍｉｎｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｈａｉｒ ｃｅｌｌ ｉｎｎｅｒ ｈａｉｒ ｃｅｌｌ ｏｕｔｅｒ ｈａｉｒ ｃｅｌｌ ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ａｔ！－·ｔｉｖａｔｅｄｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ
中文全称
听性脑干反应 中枢神经系统 ３，３。二氨基联苯胺 兴奋性氨基酸 谷氨酸一天冬氨酸转运体 谷氨酸一天冬氨酸转运体 样免疫反应 谷氨酰胺 谷氨酸转运体ｌ 谷氨酸 谷氨酰胺合成酶 毛细胞 内毛细胞 外毛细胞 磷酸激活谷氨酰胺酶
氨酸转运体之一一谷氨酸一天冬氨酸转运体（ｇｌｕｔａｍａｔｅ—ａｓｐａｒｔａｔｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ，ＧＬＡＳＴ）在豚鼠耳蜗内的表达及分布，采用ＧＬＡＳＴ抗体拮抗 耳蜗内ＧＬＡＳＴ，通过听性脑干反应（ａｕｄｉ ｔｏｒｙ ｂｒａｉｎｓｔｅｍ ｒｅｓｐｏｎｓｅ，ＡＢＲ）
测试和耳蜗形态学改变作为判断指标，探讨ＧＬＡＳＴ在防止耳蜗Ｇｌｕ神经 毒性中的作用和机理。 １ 实验方法
２．１．２采用图像分析方法对耳蜗内ＧＬＡＳＴ—ＩＲ阳性表达部位进行分析提 示：内毛细胞第２转与其他各转比较ＧＬＡＳＴ—ＩＲ阳性反应明显增强
（尺Ｏ．０５），其他各转之间的差异性不明显（协Ｏ．０５）：外毛细胞各转 ＧＬＡＳＴ—ＩＲ阳性反应强度之间均有明显差异性（Ｐ＜Ｏ．０５），而且ＧＬＡＳＴ—ＩＲ 反应从第１转到第４转依次递减。 ２．２ ＧＬＡＳＴ抗体对豚鼠耳蜗听反应阈及形态学的影响 ２．２．１ 耳蜗内灌注ＧＬＡＳＴ抗体后ＡＢＲ测定实验组和对照组豚鼠在手术 前ＡＢＲ反应阈之间无明显差异。手术后实验组始终未引出ＡＢＲ。手术后３ 天，对照组只有２只豚鼠引出ＡＢＲ，但是反应闽较高；手术后６天，对照 组均引出ＡＢＲ，反应闽平均６２．５±５．２５ ｄＢ ＳＰＬ，与手术前相比反应阈值 升高（Ｐ（Ｏ．０５）：手术后９天，对照组均引出ＡＢＲ，反应阈平均４７．５±６．１８ｄＢ ＳＰＬ，与手术前相比反应闽值升高（ＲＯ．０５），与手术后６天相比反应阈 值降低（尺Ｏ．０５）。 ２．２．２形态学观察耳蜗铺片示对照组耳蜗顶转至底转，内、外毛细胞 听毛形态基本正常，靠近蜗顶处外毛细胞有少量缺失。实验组可见内毛 细胞、外毛细胞病变广泛，遍于耳蜗各转，且从蜗底到蜗顶逐渐加重，
笫叫军医人学坝Ｉ：学位论文
谷氨酸一天冬氨酸转运体在豚鼠Ｃｏｒｔｉ器 的分布及生理意义的探讨
硕士研究生：纪育斌
导
师：王锦玲教授（主任医师）
邱建华教授（主任医师）
第四军医大学西京医院全军耳鼻咽喉专科中心，西安７１００３２
中文Fra Baidu bibliotek要
谷氨酸（ｇｌｕｔａｍａｔｅ，Ｇｌｕ）是耳蜗传入神经系统兴奋性突触传递的主 要神经递质，在介导突触兴奋性活动和突触可塑性方面起着重要作用。 同时，许多研究表明，耳蜗缺血、缺氧或过度声刺激均可使耳蜗内毛细 胞、支持细胞释放大量Ｇｉｕ，对耳蜗内毛细胞、外毛细胞、传入神经纤维 和螺旋神经节产生毒害作用。既往对中枢神经系统（ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ，ＣＮＳ）的研究中已经证实，谷氨酸转运体在清除突触间隙Ｇｌｕ，防 止Ｇｌｕ神经毒性中发挥重要作用。本实验采用免疫组织化学方法研究谷
秉承学较严谨的学风与优良的科学道像，本人声嘲所呈交的论文是藐 个人在导舜指导下进行的研究工作及取得的研究喊果。尽我所知，际了文 中特别加以标注和致谢舶地方外，论文巾不包含其他Ａ已经发表或撰写过 的研究成果，不包含本人或他＾已申请学位或其他用途使橱过的成果．与 莪一同工作的厨志对本研究所鳅的任何贡献均已在论文率作了明确的谢嚼 并表示了致谢。
采用免疫组织化学和图像分析方法探讨ＧＬＡＳＴ在豚鼠耳蜗内的表达 及分布，对照组采用ＰＢＳ代替一抗：采用耳蜗内灌注ＧＬＡＳＴ抗体，拮抗耳 蜗内ＧＬＡＳＴ，以ＡＢＲ、耳蜗基底膜铺片和透射电镜结果作为判断指标，对
箱旧军１ｘ人学坝Ｉ？学位论文
照组采用人工外淋巴液代替ＧＬＡＳＴ抗体。
２结果 ２．１ 谷氨酸一天冬氨酸转运体在豚鼠耳蜗的分布