M胆碱受体和H1组胺受体激动剂对离体豚鼠回肠的作用
豚鼠离体回肠实验报告
一、实验目的1. 了解离体豚鼠回肠实验的基本原理和方法。
2. 观察不同药物对豚鼠离体回肠平滑肌张力的影响。
3. 掌握绘制量效曲线、分析量效关系、认识竞争性拮抗剂和非竞争性拮抗剂等概念。
二、实验原理豚鼠离体回肠实验是一种常用的生物学实验方法，通过在体外模拟豚鼠回肠平滑肌生理状态，观察不同药物对回肠平滑肌张力的影响，从而研究药物的药理作用。
实验过程中，豚鼠回肠平滑肌的收缩与舒张反应受到多种因素的影响，如神经递质、激素、药物等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：豚鼠离体回肠、生理盐水、乙酰胆碱、阿托品、组胺、扑尔敏等。
2. 实验仪器：恒温浴槽、肌力换能器、显微镜、培养皿、微量注射器、缝衣针、缝线、洗瓶、RM6240多媒体化生物信号记录分析系统等。
四、实验方法1. 豚鼠离体回肠标本的制备：取豚鼠离体回肠约2cm，对角结扎，一端固定在浴槽的通气钩上，另一端垂直连接于肌力换能器的感应片上，调节基础张力约为0.5g。
2. 实验分组：将实验分为以下几组：（1）对照组：加入生理盐水；（2）乙酰胆碱组：加入不同浓度的乙酰胆碱；（3）阿托品组：加入不同浓度的阿托品；（4）组胺组：加入不同浓度的组胺；（5）扑尔敏组：加入不同浓度的扑尔敏。
3. 观察指标：观察并记录不同药物对豚鼠离体回肠平滑肌张力的变化，绘制量效曲线。
4. 数据处理：采用统计学方法对实验数据进行处理，分析量效关系。
五、实验结果1. 生理盐水组：豚鼠离体回肠平滑肌张力基本稳定，无显著变化。
2. 乙酰胆碱组：随着乙酰胆碱浓度的增加，豚鼠离体回肠平滑肌张力逐渐增强，呈剂量依赖性。
3. 阿托品组：随着阿托品浓度的增加，豚鼠离体回肠平滑肌张力逐渐减弱，呈剂量依赖性。
4. 组胺组：随着组胺浓度的增加，豚鼠离体回肠平滑肌张力逐渐增强，呈剂量依赖性。
5. 扑尔敏组：随着扑尔敏浓度的增加，豚鼠离体回肠平滑肌张力逐渐减弱，呈剂量依赖性。
六、实验结论1. 乙酰胆碱对豚鼠离体回肠平滑肌具有兴奋作用，呈剂量依赖性。
离体豚鼠回肠mine
离体豚⿏回肠mine药物对离体豚⿏回肠的作⽤摘要⽬的观察胆碱能神经递质⼄酰胆碱(acetylcholine，Ach）和局部炎症介质组胺(histamine，His）对肠道平滑肌M胆碱受体的激动作⽤，以及它们的受体拮抗剂阿托品（atropine）和扑尔敏（chlorpheniramine）的阻断作⽤。
⽅法在离体肠平滑肌灌流装置中，测量⼄酰胆碱、组胺、阿托品和扑尔敏对豚⿏回肠平滑肌张⼒的影响。
结果以阿托品，扑尔敏分别作⽤于回肠平滑肌，其受⼄酰胆碱、组胺的激动作⽤较回肠直接受Ach、His激动时作⽤弱，收缩幅度明显减⼩，BaCl2的强激动作⽤不能被阿托品阻断。
结论Ach、His 能兴奋肠道平滑肌，其激动作⽤能分别被拮抗剂阿托品和扑尔敏阻断；阿托品不能阻断BaCl2对肠道平滑肌的强烈激动作⽤。
关键词⼄酰胆碱阿托品组胺扑尔敏1. 材料和⽅法1.1 材料豚⿏1.2仪器离体装置：浴槽（20ml），恒温⽔浴箱。
张⼒换能器与多道⽣理信号采集处理系统的连接。
RM6240⽣物信号采集处理系统部分1.3 药品 10-2 g/L氯⼄酰胆碱、1 g/L硫酸阿托品、 10-2 g/L组胺磷酸盐， 10-3 g/L扑尔敏、10 g/L BaCl2 溶液。
1.4 ⽅法1.4.1 实验装置准备和仪器参数设置麦⽒浴槽加固定量的台⽒液(10ml左右)→恒温37℃→95% O2+5%CO2⽓体→通⽓速度,⽓泡⼀个个逸出为宜→固定张⼒换能器→参数设置1.4.2 标本准备清醒豚⿏→击头部处死→打开腹腔→找到回盲部→在离回盲部1cm处剪断，取出回肠约10cm左右⼀段→置于盛有台⽒液的培养⽫中，将回肠剪成1-1.5cm 的⼏⼩段，冲洗⼲净→取⼀段肠管置于盛有台⽒液的培养⽫中，在其两端对⾓处分别⽤缝针穿线，并打结。
⼀端系于浴槽固定钩上，另⼀端系在张⼒换能器的悬臂梁上。
1.4.3 通氧→连接PCLab⽣物信号采集处理系统→⽂件---打开配置---药物对离体豚⿏平滑肌的作⽤→配置---零点设置→调节换能器张⼒（2-3 g）→稳定20-30分钟2. 观察项⽬2.1标本在浴槽内稳定10~30min后，记录⼀段正常收缩曲线，依次向麦⽒浴槽内加下列药物。
小鼠腹腔注射
实验动物基Байду номын сангаас操作
大鼠的捉持: 捉持和固定方法基本同小鼠，无经验者可戴 上防护手套，并应动作轻柔。 •用右手捉住鼠尾，放在鼠笼盖上，向后轻拉鼠尾；
•左手掌面向鼠背，食指和中 指压住鼠的头顶，拇指和无 名指分别从鼠的两腋下插入， 将鼠的两前肢卡住；或拽紧 鼠后颈及后背皮肤即可。
实验动物基本操作
3、实验动物的给药方法（大、小鼠） （1）小鼠灌胃（i.g.） •将小鼠固定后，使颈部拉直，右手持装有灌胃针头的注射 器，自口角插入口腔，压其头部，使口腔与食道成一直线， 沿上腭壁向鼠口腔的后下方轻轻插入食道。如遇阻力，可 将针头抽出再插，以免刺破食管或误入气管。一般给药量 为0.1～0.3ml/10g（体重）。
实验动物基本操作
大鼠腹腔注射 (0.1 - 0.2 ml/100 g)
实验方法
实验动物基本操作
（3）小鼠尾静脉注射(i.v.) •小鼠置于套桶，用左手抓住小鼠尾巴中部。拔去沿尾部静 脉走向的毛，置尾巴于45～50℃温水中浸泡几分钟或用 75%酒精棉球反复擦拭尾部，以达到消毒和使尾部血管扩张 及软化表皮角质的目的。 •持4号针头注射器，使针头与静脉平行(小于30°角)，从尾巴 的下1/4处进针注射量为0.05～0.1ml/10g体重。拔出针头 后，用拇指按住注射部位轻压1～2min，防止出血。
实验动物基本操作
大鼠灌胃
实验动物基本操作
（2）小鼠腹腔注射(i.p.) •右手持注射器，45度角刺入腹白线偏左的下腹部，进针 3mm左右有落空感时表示已进入腹腔，回抽无肠液、尿液 （有空气）即可注射。给药容积一般为5～10ml/kg。
注意：切误使针头向上 注射，以防针头刺伤内 脏；取药时略多，针头 向上赶去气泡后多余药 品放回原瓶。
实验五 利用离体肠实验方法鉴别未知药物
实验五利用离体肠实验方法鉴别未知药物【实验目的】1．学习豚鼠离体回肠实验方法，2．利用已知的激动药作工具鉴别未知药物，观察和分析拟胆碱药与抗胆碱药、组胺与抗组胺药的作用及其相互作用，从而提高分析和解决问题的能力。
【实验原理】豚鼠回肠平滑肌分布有M胆碱受体及组胺H1受体。
前者可被Ach激动，后者可为组胺激动，二者均可引起肠平滑肌收缩。
此收缩作用可分别被M受体阻断剂、组胺受体阻断剂竞争性拮抗。
根据药物对肠平滑肌受体的竞争性作用特点，用已知的激动药作工具，可鉴别相应的受体阻断药。
【材料与方法】一、实验对象：豚鼠，雌雄不拘，体重250~350g二、器材药品：小动物手术器械一套、恒温浴槽、铁支架、双凹夹、试管夹、细丝线、张力换能器、BL－410生物信号记录系统、注射器(1、5、10 m1)、烧杯(250m1)。
已知药：乙酰胆碱溶液5×10-6mol ·L-1未知药：生理盐水、硫酸阿托品溶液3×10-6mol ·L-1、磷酸组胺溶液3×10-6mol ·L-1、盐酸苯海拉明溶液3×10-5mol ·L-1，分别用A、B、C、D表示三、方法与步骤(一)标本制备取禁食24h的豚鼠1只，击头致死，立即剖腹，在其左下腹找到盲肠，在离回盲瓣2~3cm 处剪断肠管，取长约7~8cm的回肠一段，迅速放入盛有冷台氏液的培养皿中，将肠系膜及脂肪组织分离掉，用镊子夹住肠缘，以5ml注射器(或吸管)吸取台氏液冲洗肠腔内食糜及残渣。
然后将肠管剪成1.5~2cm长数段，放入盛有新鲜台氏液的培养皿中备用。
取肠管一段，将一端固定于标本板的小钩上，另一端连接在肌力传感器的应变梁上，置于含10m1的乐氏液的玻璃浴槽内，通入95％O2和5％CO2混合气体，浴槽内温度恒定在37±1℃，pH为7.3~7.5。
使标本负荷lg，平衡30min，其间更换台氏液1~2次。
离体回肠
四.实验方法
（1）预热，打开恒温槽电源，设定37℃（已设定，勿动 （2）清洗麦氏槽，加入约20ml台式液。 （3）调节空气泵：1-2气泡/秒。 （5）开启电脑及ASB240U生物信号处理系统，设定参 数。 (6)离体回肠标本制备与连结. （7）给药观察药物作用. （8）实验结果保存、编辑打印。
停止实验 保存在E盘：我的实验文件夹中，请老师打印。
药物对豚鼠离体回肠的作用
一、实验目的：
1、掌握离体平滑肌实验方法。 2、观察药物对豚鼠离体回肠平滑肌的作用效 应，并分析其作用机制。
二、实验原理：
ACh
阿托品
回肠M受体 组胺
苯海拉明
H1受体
平滑肌收缩↑ 平滑肌收缩↑
氯化钡 Ba2+经钙通道进入胞浆 触发肌浆网释放Ca2+
肌浆[Ca2+] ↑ 平滑肌收缩↑
管，置于台式液中，冲洗剪成2cm段备用。
离体回肠标本连结 离体回肠两端各系一线，一段于换能器尖
端，另一端过浴槽横杆固定于支架上，给予 1g外力，观察电脑显示器波形波动。
动作应轻柔，尽量避免牵拉肠管
给药方法
第一组
阿托品0.1ml
苯海拉明0.1ml
乙酰胆碱0.2m
四.实验方法
（1）预热，打开恒温槽电源，设定37℃（已设定，勿动 （2）清洗麦氏槽，加入约20ml台式液。 （3）调节空气泵：1-2气泡/秒。 （5）开启电脑及ASB240U生物信号处理系统，设定参 数。 (6)离体回肠标本制备与连结. （7）给药观察药物作用. （8）实验结果保存、编辑打印。
ASB240U生物信号系统使用方法
磷酸组织胺0.2m
第三组
氯化钡0.2m 苯海拉明0.1ml 阿托品0.2m
药物的量效关系曲线 ——组胺和抗组胺药对离体豚鼠回肠的作用
昆明医科大学机能学实验报告实验日期：2014年10月14日带教教师：云宇小组成员：专业班级：2012级麻醉班药物的量效关系曲线——组胺和抗组胺药对离体豚鼠回肠的作用一、实验目的学习绘制量效曲线，掌握量效关系，竞争性拮抗剂，非竞争性拮抗剂药等概念，熟悉实验装置二、实验原理消化道平滑肌与骨骼肌、心肌一样，具有肌肉组织共有的特性，如兴奋性．传导性和收缩性等。
但消化道平滑肌兴奋性较低，收缩缓慢，富有伸展性，具有紧张性、自动节律性，对化学、温度和机械牵张刺激较敏感等特点。
给予离体肠肌以接近于在体情况的适宜环境，消化道平滑肌仍可保持良好的生理特性。
量效关系曲线是指在一定范围内药理效应与剂量之间的正相关关系。
组胺能使豚鼠的平滑肌收缩，随着用药量增加，肠肌的收缩幅度也增加，而苯海拉明作为竞争性拮抗药使得豚鼠肠肌收缩所需的药的浓度增加。
罂粟碱作为非竞争性拮抗药使得豚鼠的肠肌的收缩幅度降低。
三、实验仪器设备Medlab生物信号采集处理系统，肌张力换能器，恒温平滑肌槽实验装置，注射器（1ml）,培养皿，烧杯等。
磷酸组胺（3×10—9——3×10—3g／ml系列浓度），盐酸苯海拉明，盐酸罂粟碱（3×10—3g／ml）台氏液1000ml四、实验方法与步骤1，肠肌的制备；2，观察各种药物对豚鼠肠肌收缩的影响：取已制备的肠肌，两端分别用细线穿过，一端固定于通气钩上，置入盛有30ml台氏液的浴管内，持续通入氧气；另一端线与拉力传感器相连，调节负荷至1g，待平衡后，进入Medlab生物信号采集处理系统，选择实验项目中的“药理肠肌实验”窗口，调节适当的实验参数，开始实验。
（实际做实验时，该过程由实验老师准备完成）。
按下列顺序加药：⑴分别用1ml注射器准确吸取磷酸组胺系列浓度的药液，从低到高累积加入麦氏浴管内，记录标本收缩情况，等达到最大值后，加入下一剂量，直至加入组胺液时标本不再继续收缩为止，记录整理加入不同药物浓度时肠肌标本收缩高度，以最大值计算收缩高度百分比，记录在表内。
实验15药物对离体豚鼠回肠的作用 (2)
2 2.810.1032.230.564
3 3.430.1253.070.111
4 3.260.1873.460.394
5 1.340.2712.160.776
62.150.1202.980.230
7 3.34-0.083.010.418
8 3.460.1542.590.103
3.讨论
3.1M受体激动药及拮抗药对平滑肌的药理作用
M胆碱受体激动药可分为两类，即胆碱酯类和天然形成的拟胆碱生物碱。乙酰胆碱属于胆碱酯类药物[2]，小剂量时为M胆碱受体激动作用。Ach与M胆碱能受体结合，使平滑肌Ca2+通道开放，Ca2+内流增加，肌浆Ca2+浓度增大，平滑肌收缩幅度增高。大剂量时也有N胆碱受体激动作用，使胃肠道平滑肌兴奋。Atropine为M胆碱受体阻断药，其与平滑肌细胞膜M-受体结合，本身不产生或较少产生拟胆碱作用，却能阻断乙酰胆碱与M-受体结合，阻断乙酰胆碱与M-受体的激动作用[3]。
【关键词】乙酰胆碱组胺阿托品扑尔敏M胆碱受体 H1受体
胃肠道平滑肌以胆碱能神经占优势，小剂量或低浓度的ACh即能激动M胆碱受体，产生与兴奋胆碱能神经节后纤维相似的作用，兴奋胃肠道平滑肌。Atropine与胆碱受体结合而本身不产生或较少产生拟胆碱作用，却能阻断胆碱能递质或拟胆碱药物与受体的结合，从而产生抗胆碱作用。Histamine对多种动物的胃肠道和气道平滑肌H1受体有兴奋作用，豚鼠尤其敏感。Chlorpheniramine为H1受体拮抗剂，能阻断histamine与H1受体的结合，从而产生抗histamine作用。BaCl2为肌肉兴奋剂，能够使平滑肌强烈收缩[1]。
如上histamine同样具有使回肠平滑肌收缩的能力，作用前后其张力变化幅度为2.76±0.618，经扑尔敏作用后，再加入histamine平滑肌的收缩幅度变为0.37±0.213，用t检验得P<0.01，两者差异显著。说明扑尔敏具有对抗histamine的作用，主要是阻断了肠道上的H1受体。
药物对离体豚鼠回肠的作用
药物对离体豚鼠回肠的作用摘要目的观察胆碱能神经递质乙酰胆碱，炎症介质组胺对离体豚鼠回肠平滑肌的作用。
观察M胆碱受体拮抗剂阿托品和H1受体阻断剂扑尔敏对乙酰胆碱、组胺的阻断作用。
方法以离体豚鼠回肠为材料，研究乙酰胆碱、组胺对肌张力的影响及阿托品、扑尔敏对其的阻断作用。
结果在加入阿托品后豚鼠回肠肌张力明显小于仅加入乙酰胆碱时（P<0.01）；加入扑尔敏后豚鼠回肠肌张力明显小于仅加入组胺时（P<0.01）；BaCl2 处理后加入阿托品时回肠肌张力小幅下降结论阿托品具有强抗胆碱作用；扑尔敏具有部分拮抗组胺作用；阿托品可通过拮抗胆碱能受体部分减弱BaCl2的作用。
关键词豚鼠回肠肌张力乙酰胆碱阿托品组胺扑尔敏BaCl21.材料和方法1.1实验动物Dunkin-Hartley 豚鼠1.2 药品0.01g/L氯化乙酰胆碱溶液1g/L硫酸阿托品溶液0.01g/L磷酸组织胺溶液0.001g/L氯苯那敏溶液10g/L BaCl2溶液台氏液1.3 器材双层玻璃浴槽（20ml）张力换能器恒温水浴箱多通道生理信号采集处理系统RM6240生物信号采集处理系统1.4 制备豚鼠离体回肠标本取豚鼠一只，以木槌击打头部致昏死，立刻剖开腹腔，在离回盲部1cm处剪断，取长约10cm左右的回肠一段，置于氧饱和的台氏液中，沿肠壁去除肠系膜，将回肠剪成1-1.5cm左右的小段，用注射器吸取台氏液将肠内容物冲洗干净。
1.5 仪器连接和参数清洗浴槽后,将台氏液装至刻度，调节水浴箱温度为37℃±0.5 ℃，通气管接95% O2+5%CO2混合气体，调节至浴槽中气泡一个个溢出为止。
将回肠标本一端固定在通气钩上置于浴槽中，另一端固定在换能器上与多通道生理信号采集处理系统连接。
连接RM6240生物信号采集处理系统，仪器参数：通道时间常数直流，滤波频率10Hz，灵敏度3g，采样频率200Hz，扫描速度1s/div。
1.6 测定药物影响快速归零后调节前负荷为1g。
小鼠腹腔注射
W 食尾指一抓左手住翻小转鼠使两鼠耳腹后部项朝背上部，皮头毛略一朝以下无。名指及小指夹住鼠
大鼠的捉持:捉持和固定方法基本同小鼠，无经验者可戴
上防护手套，并应动作轻柔。
•用右手捉住鼠尾，放在鼠笼盖上，向后轻拉鼠尾;
•左手掌面向鼠背,食指和中 指压住鼠的头顶，拇指和无 名指分别从鼠的两腋下插入, 将鼠的两前肢卡住;或拽紧 鼠后颈及后背皮肤即可。
=
大鼠灌胃
(2 )小鼠腹腔注射(i.p.)
•右手持注射器，45度角刺入腹白线偏左的下腹部,进针
3mm左右有落空感时表示已进入腹腔,回抽无肠液、尿液
(有空气)即可注射。给药容积一般为5 ~ 10ml/kg。
注意:切误使针头向上 注射，以防针头刺伤内 脏；取药时略多,针头 向上赶去气泡后多余药 品放回原瓶。
实验课注意事项
L独立完成实验,不串岗，认真如实记录数据；
V
2. 遵守实验室规制制度，离开实验室须经教师许可；
3. 数据资料用邮件发回，请不要使用移动存储器；
4. 器具须用水擦洗、擦干，按原样整齐放置；
5. 实验台须用湿的干净抹布擦拭干净。用品摆放整齐、关机；
6. 每次实验后安排2个小组值日:督查各组善后工作；扫地、拖地,凳子
小鼠性别鉴别
外生殖器与肛门之间 雄 性 距离长，有毛生长，无纵行沟 雌 性 距离短，无毛生长，能见到一条纵行沟
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预习报告-实验15- 药物对离体豚鼠回肠的作用
实验15 药物对离体豚鼠回肠的作用实验日期：3月8日时间：温度：组员：受试对象：豚鼠性别：离体器官：回肠【目的】了解胆碱能神经递质乙酰胆碱（acetylcholine，ACh）和局部炎症介质组胺（histamine）对肠道平滑肌M胆碱受体和H1受体的激动作用，以及它们的受体拮抗剂阿托品（atropine）和扑尔敏（chlorpheniramine）的阻断作用。
【原理】消化道平滑肌与骨骼肌、心肌一样，具有肌肉组织共有的特性，如兴奋性．传导性和收缩性等。
但消化道平滑肌兴奋性较低，收缩缓慢，富有伸展性，具有紧张性、自动节律性，对化学、温度和机械牵张刺激较敏感等特点。
给予离体肠肌以接近于在体情况的适宜环境，消化道平滑肌仍可保持良好的生理特性。
胃肠道、膀胱等平滑肌以胆碱能神经占优势，小剂量或低浓度的ACh即能激动M胆碱受体，产生与兴奋胆碱能神经节后纤维相似的作用，兴奋胃肠道平滑肌。
Atropine与胆碱受体结合而本身不产生或较少产生拟胆碱作用，却能阻断胆碱能递质或拟胆碱药物与受体的结合，从而产生抗胆碱作用。
Histamine对多种动物的胃肠道和气道平滑肌H1受体有兴奋作用，豚鼠尤其敏感。
Chlorpheniramine为H1受体拮抗剂，能阻断histamine与H1受体的结合，从而产生抗histamine作用。
【材料】豚鼠；麦氏浴槽，超级恒温器，张力换能器，生物信号采集处理系统；台氏溶液，10-2g/L acetylcholine chloride溶液，1g/L atropine sulfate溶液，10-2 g/L histamine phosphate 溶液、10-3 g/L chlorpheniramine溶液、10g/L BaCl2 溶液。
【方法】1．实验装置准备和仪器参数设置（1）离体肠管描记装置的准备见图7-15-1，麦氏浴槽中加固定量的台氏液，调节超级恒温器的温度，使麦氏浴槽内温度稳定在37±0.5℃。
药物对肠管平滑肌的作用
药物对肠管平滑肌的作用教案药学院药理教研室李生莹2006.11. 21药物对离体肠管平滑肌的作用一、实验目的1. 学习离体平滑肌器官的实验方法。
2. 观察乙酰胆碱、阿托品、组织胺、扑尔敏和氯化钡等药物对离体回肠平滑肌的作用，并分析其作用原理。
二、实验原理1. 乙酰胆碱：为胆碱能神经末稍释放的递质，对M、N受体均有激动作用，因此它的作用非常广泛，其中对胃肠道平滑肌的作用主要表现为激动M受体后，其收缩的幅度、张力增加，蠕动加快，曲线呈现上升。
2. 阿托品：为非选择性的M受体阻断药，它对M1、M2、M3受体均有阻断作用，从而对抗乙酰胆碱的作用，对胃肠平滑肌的作用则表现为松弛，降低蠕动的幅度和频率，曲线呈现下降。
3. 组织胺：广泛存在于体内的自体活性物质之一，组织中的组胺主要存在于肥大细胞及嗜碱性粒细胞中，当组织受到物理的或化学的刺激时可使肥大细胞脱颗粒，导致组胺的释放，释放的组胺可与靶细胞上的组胺受体结合产生生物效应。
组胺受体有H1、H2、H3三种亚型，今天我们所使用的豚鼠回肠平滑肌上分布的受体主要是H1受体，当组胺与H1受体结合后，产生激动作用，引起肠管平滑肌的收缩，曲线呈现上升。
4. 扑尔敏：为常用的H1受体阻断药，可竞争性阻断H1受体，对抗组胺引起的肠管平滑肌收缩作用，曲线呈现下降。
5. 氯化钡：Ba2+与Ca2+化学结构相似，可模拟Ca2+的作用引起肠管平滑肌的收缩，曲线呈现上升。
他不作用于受体，而是直接作用于肠管，此时再加阿托品或扑尔敏，不能拮抗，曲线无变化。
三、实验材料1. 动物：豚鼠2. 器材：恒温平滑肌槽1台、通气泵、铁支架、止水夹各1个，生物信号采集处理系统，张力换能器，1ml注射器4个，培养皿1个，50ml烧杯1个，普通剪刀、组织剪、眼科剪各1把，丝线若干。
3. 药品：台氏液、0.1%氯化乙酰胆碱溶液、0.1%硫酸阿托品溶液、0.1%磷酸组织胺溶液、0.1%扑尔敏溶液、8.33%氯化钡溶液四、实验方法1. 标本制备：取豚鼠一只，置于手中倒悬，以木槌击头至死，立即打开腹腔，找到回盲部，在离其2—3cm的回肠处剪断，取出回肠，置于盛有台氏液的培养皿中，沿肠壁分离并剪去肠系膜，将肠管剪成数段，轻轻冲出肠内容物，最后将肠管剪成2～3 cm的小段备用。
药物对离体豚鼠回肠的作用
药物对离体豚鼠回肠的作用消化道平滑肌除具有肌肉的共性,如兴奋性、传导性和收缩性以外，尚具有自动节律性收缩（其特点是收缩缓慢而不规则）、伸展性较大、具有紧张性收缩以及对化学刺激、温度改变和牵张刺激敏感等特性。
本实验采用离体小肠平滑肌灌流的方法，观察acetylcholine (乙酰胆碱），histamine (组胺）对离体豚鼠回肠平滑肌的作用，以atropine (阿托品)、chlorpheniramine (氯苯那敏、扑尔敏）为工具药，初步分析以上二药的作用原理。
1 材料和方法1．1 材料豚鼠，改良式离体组织灌流装置、生物信号采集处理系统、张力传感器（量程为10克）、铁支架、微调固定器、温度计、1ml注射器、腰穿长针头、烧杯、台氏溶液、10-2 g/L乙酰胆碱、1 g/L硫酸阿托品、10-2 g/L组胺磷酸盐， 10-3 g/L扑尔敏溶液等。
1．2 方法1．2．1 改良式离体组织灌流装置的准备在改良式离体组织灌流装置（图9.3-1）中事先向中心管内加台氏液10ml。
开启恒温槽，使其温度保持于37℃。
灌流槽内通以5%CO2和95%O2，使逸出的气泡细小而均匀。
图9.3-1 改良式离体组织灌流装置1．2．2 制备标本将豚鼠执于手中倒悬，用木槌猛击后脑部，使其昏迷，立即剖开腹腔，找出胃幽门与十二指肠交界处，以此处为起点取长20～30cm的肠管。
用台氏液冲洗肠段内容物，置于低温（4～6℃）的台氏液内。
实验时剪取一段长约2cm的肠段，用细丝线于其两端各扎一结，一端系于固定钩上，另一端与张力传感器相连。
适当调节传感器高度，使其与标本之间松紧度合适。
并且注意连线垂直，不得与浴槽的管壁接触，以避免磨擦。
1．2．3 连接实验装置将张力传感器的输入插头与生物信号采集处理系统的信号放大器输入通道相连，并设置好放大器、采样和刺激器参数。
1．2．4 实验观察（1）待离体回肠稳定20~30 min后，记录一段正常收缩曲线，依次向麦氏浴槽内加下列药物。
药物对豚鼠离体回肠的作用
药物对豚鼠离体回肠的作用讨论：1，从受体学说角度，讨论分析实验结果。
（1）1）消化道平滑肌的一般特性有，兴奋性较骨骼肌低，不规则的节律性、紧张性、伸展性，对刺激的特异敏感性即对牵张、温度和化学刺激敏感而对切割、电刺激等不敏感。
当施加1g的力时牵张刺激使平滑肌反射性收缩。
2）豚鼠消化道平滑肌上有H1受体，是组织胺受体的一种。
组织胺是组织胺受体H1的激动剂，与细胞上的组织胺受体结合可以引起平滑肌收缩。
因此加入0.2ml磷酸组织胺后豚鼠消化道平滑肌强烈收缩，描计曲线上升。
拮抗剂能与受体结合，具有较强亲和力而无内在活性。
H1受体阻断药苯海拉明对组织胺具有竞争性拮抗作用，可以竞争性地拮抗组织胺对豚鼠消化道平滑肌的收缩作用，使消化道平滑肌松弛，曲线下降到正常状况。
（2）肠肌稳定后，再加入0.2ml的磷酸组织胺，则消化道平滑肌收缩作用小于“（1）”中加入组织胺的结果。
这可能是因为在“（1）”中细胞内的储备受体已经被苯海拉明占领，再次加入组织胺后组织胺结合的受体数量很少，故收缩作用远不如第一次强。
也可能是再次加入激动剂后消化道平滑肌的反应性降低所致。
（3）胆碱能受体广泛分布与中枢和周围神经系统，分为M受体和N受体。
豚鼠消化道平滑肌上存在M受体，M受体激活后可产生一系列自主神经反应，包括平滑肌收缩。
加入0.2ml乙酰胆碱，乙酰胆碱是一种完全拟胆碱药，作用于M受体产生M样作用，兴奋平滑肌，使回肠肌收缩，描笔曲线呈现上升。
给阿托品后，阿托品的作用机制为竞争性拮抗乙酰胆碱或胆碱受体激动药对M 胆碱受体的激动作用。
阿托品与M胆碱受体结合，因内在活性很小，一般不产生激动作用，却能阻断乙酰胆碱或胆碱受体激动药与受体结合，结果拮抗了它们的作用。
对内脏平滑肌有松弛作用，因此给阿托品后曲线下降到正常状况。
（4）肠肌稳定后，再加入0.2ml的乙酰胆碱，消化道平滑肌收缩作用小于“（3）”中加入乙酰胆碱的结果。
这可能是因为在“（3）”中细胞内储备的M受体已经被阿托品占领，再次加入乙酰胆碱可以结合的M受体数量减少，故收缩作用远不如第一次强。
M胆碱受体和H1组胺受体激动剂对离体豚鼠回肠的作用
M胆碱受体和H1组胺受体激动剂对离体豚鼠回肠的作用实验报告课程名称： 生理科学实验指导老师：唐法娣成绩：实验名称M 胆碱受体和H 1组胺受体激动剂对离体豚鼠回肠的作用 同组学生： 一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填） 三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤 五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填）本人Email ：M 胆碱受体和H 1组胺受体激动剂对离体豚鼠回肠的作用（浙江大学医学院 级临床医学七年制生理科学实验 班 组，浙江 杭州 310058） [摘 要] 目的：观察胆碱能神经递质acetylcholine (Ach 、乙酰胆碱），炎症介质histamine (His 、组胺）对离体豚鼠回肠平滑肌的作用。
观察M 胆碱受体拮抗剂atropine(阿托品)和组胺H 1受体拮抗剂chlorpheniramine(氯苯那敏、扑尔敏）对乙酰胆碱、组胺的拮抗作用。
方法：应用液压传递系统直接测定动脉血压，通过压力换能器将压力变化转化为电信号变化，用微机生物信号采集处理系统记录动脉血压变化曲线。
结果：在加入阿托品后豚鼠回肠肌张力明显小于仅加入乙酰胆碱时（P<0.01）；加入扑尔专业： 临床医学 姓名：敏后豚鼠回肠肌张力明显小于仅加入组胺时（P<0.01）；BaCl2处理后加入阿托品时回肠肌张力小幅下降。
结论：阿托品具有强抗胆碱作用；扑尔敏具有部分拮抗组胺作用；阿托品可通过拮抗胆碱能受体部分减弱BaCl2的作用。
[关键词] 动脉血压血红蛋白急性失血1.材料1.1 实验动物豚鼠1.2 药品未标记的激动剂：A，B，C。
10-2g/L 氯化乙酰胆碱（acetylcholine chloride）溶液；10-2g/L磷酸组织胺（histamine phosphate）溶液；10g/L BaCl2溶液。
拮抗剂：1g/L硫酸阿托品（atropine sulfate）溶液；10-3g/L氯苯那敏（chlorpheniramine）溶液。
小鼠腹腔注射
吸收、分布、代谢、排泄
药物代谢动力学 （Pharmacokinetics）
Pharmacokinetics Pharmacodynamics
Absorption
Drug Administration
Drug in Tissues of Distribution
Drug Concentration in
实验动物基本操作
大鼠灌胃
实验动物基本操作
（2）小鼠腹腔注射(i.p.) •右手持注射器，45度角刺入腹白线偏左的下腹部，进针 3mm左右有落空感时表示已进入腹腔，回抽无肠液、尿液 （有空气）即可注射。给药容积一般为5～10ml/kg。
注意：切误使针头向上 注射，以防针头刺伤内 脏；取药时略多，针头 向上赶去气泡后多余药 品放回原瓶。
观察指标
1. 记录进入翻正反射消失的时间； 2. 记录翻正反射的消失到恢复的时间； 3. 处死小鼠，解剖肝脏，肉眼观察正常小鼠和肝损小鼠肝
脏的病理变化（表面色泽和颗粒）。
实验结果
表1 异丙酚诱导正常小鼠与肝损小鼠睡眠时间的 比较（x±s ）
分组 样本 进入翻正反射消失 翻正反射消失至恢复的
(只) 的时间（min）
实注验意课事注项意事项
1.独立完成实验，不串岗，认真如实记录数据； 2.遵守实验室规制制度，离开实验室须经教师许可； 3. 数据资料用邮件发回，请不要使用移动存储器； 4.器具须用水擦洗、擦干，按原样整齐放置； 5.实验台须用湿的干净抹布擦拭干净。用品摆放整齐、关机； 6.每次实验后安排2个小组值日：督查各组善后工作；扫地、拖地，凳子
小鼠性别鉴别性别外生殖器与肛门之间雄性距离长有毛生长无纵行沟雌性距离短无毛生长能见到一条纵行沟实验动物随机分组no1234567891011121314151617181920randomnumber0437608802032417978156519234866082555133groupabaaababbbabaaaaabbb用excel产生随机数字将20只小鼠分为ab二组动物实验每组所需的样本数动物计量资料计数资料小小鼠大鼠蛙1030中兔豚鼠620大犬猫5102实验动物的捉持大小鼠小鼠的捉持
小鼠腹腔注射
课堂讨论
问题和讨论
问题：实验中哪一个数据与异丙酚的吸收有关？ 问题：异丙酚吸收过程中有哪些重要的影响因素？ 问题：如何评价异丙酚腹腔注射的吸收程度？ 问题：异丙酚在体内如何分布？ 问题：哪些因素会影响异丙酚的体内分布过程？ 问题：采用何种药动学参数评价异丙酚的分布？ 问题：实验中何种现象与异丙酚清除有关？ 问题：生物转化过程有哪些重要的影响因素？ 问题：为什么异丙酚很难经由肾脏排泄？ 问题：哪些药代动力学参数可用于评价异丙酚的清除过程？
•高亲脂性。 •血浆蛋白的结合率为96%-98%。 •代谢迅速，主要在肝脏进行。
小鼠肝损伤模型
Carbon tetrachloride(CCl4)
小鼠肝损模型制备方法 •实验前24h用10%四氯化碳 0.2ml/10g体重皮下注射。
实验步骤
1. 建立肝脏损伤模型（已制备）； 2. 小鼠称重、做标记； 3. 腹腔注射1%propofol溶液，注射体积0.1ml/10g体重。
作用、作用机制
吸收、分布、代谢、排泄
药物代谢动力学 （Pharmacokinetics）
Pharmacokinetics Pharmacodynamics
Absorption
Drug Administration
Drug in Tissues of Distribution
Drug Concentration in
4、实验动物给药量的计算
例：小鼠体重22g，腹腔注射A药10mg/kg,药物浓度为0.1%, 应注射多少毫升? 药物浓度：0.1%=0.1g/100ml=100mg/100ml=1mg/ml 给药剂量：10mg/kg=10ml/kg 小鼠体重：22g=0.022kg
10ml/kg×0.022kg=0.22ml 或换算成ml/10g：10ml/kg=0.1ml/10g。
组胺对离体豚鼠回肠的作用及EC50、pD2测定
组胺对离体豚鼠回肠的作用及EC 50、pD 2测定[目的] 学习组胺对离体豚鼠回肠平滑肌H 1受体量－效曲线的测定，掌握pD 2的计算方法。
(EC 50：半效能浓度或半最大效应浓度，是指引起一半最大效应的浓度)[原理] 药理学的一个经典实验，实验条件要求不高（动物种类、个体差异甚至操作不够准确，对pD 2值的影响都不大）而且操作简单。
pD 2称为“亲和力指数”，为完全激动药引起50%最大效应所需的克分子（摩尔）浓度的负对数值，表示作用于受体的药物与受体亲和力的大小。
pD 2中的2指激动药浓度乘2倍才能达到最大效应，pD 2不必用摩尔单位，数值大小与亲和力成正比，pD 2越大，表示亲和力越大。
受体与配体结合后，通过第二信使作用，触发特定的药理效应。
药物就是一种外源性配体，根据效应不同，可分为激动药、拮抗药。
今天我们应用的组胺是一种完全激动药。
DK DE E D +=αm a x ，α＝1、maxE DK D E D ⨯+=。
(α表示内在活性，通常0≤α≤1,完全激动药α＝1；)我们将不同浓度的药物与H 1－R 结合后产生的效应一一对应，即可得到双曲线。
由定义知：21m ax =E E ，K D ＝D ，找到Emax （100％），反过来找到50％时的药物浓度（C ）即可。
根据药物浓度可知：D 值相差很大，绘制曲线时有一定难度，数值误差大，因此需引入logD ，这样就可以容纳大范围剂量数，而且还可以鉴别竞争性拮抗作用，可得到S 型曲线，再由50％求对应的logK D 及pD 2=-logK D 。
pD 2∝1/K D ，注意K D 与pD 2不同，EC 50＝K D 而pD 2=-logK D 。
由于S 曲线实际上只有一个最高点得以利用，这样的数据显然缺乏可信度，为了使数据更精确，引入直线回归方程:即:][111][][][][max max max maxD E K E E D K D E E D K D E E D D D ⨯+=⇒+=⇒+= 令max1E a =， m axE K b D =，E y 1=，][1D x =，可得：y=bx+a ，K D ＝b/a 。
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实验报告
课程名称：
生理科学实验
指导老师：唐法娣
成绩：实验名称M 胆碱受体和H 1组胺受体激动剂对离体豚鼠回肠的作用同组学生：
一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（必填）四、操作方法和实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填）
本人Email ：
M 胆碱受体和H 1组胺受体激动剂对离体豚鼠回肠的作用
（浙江大学医学院级临床医学七年制生理科学实验班组，浙江杭州310058）
[摘
要]目的：观察胆碱能神经递质acetylcholine (Ach 、乙酰胆碱），炎症介质
histamine (His 、组胺）对离体豚鼠回肠平滑肌的作用。
观察M 胆碱受体拮抗剂
atropine(
阿
托品)和组胺H 1受体拮抗剂
chlorpheniramine(
氯苯那敏、扑尔敏）对乙酰胆碱、组胺的拮
抗作用。
方法：应用液压传递系统直接测定动脉血压，
通过压力换能器将压力变化转化为电
信号变化，用微机生物信号采集处理系统记录动脉血压变化曲线。
结果：在加入阿托品后豚
鼠回肠肌张力明显小于仅加入乙酰胆碱时（
P<0.01）；加入扑尔敏后豚鼠回肠肌张力明显小
于仅加入组胺时（P<0.01）；BaCl 2 处理后加入阿托品时回肠肌张力小幅下降。
结论：阿托品
具有强抗胆碱作用；扑尔敏具有部分拮抗组胺作用；阿托品可通过拮抗胆碱能受体部分减弱
BaCl 2的作用。
[关键词]动脉血压血红蛋白急性失血
1.材料1.1实验动物豚鼠
1.2药品
未标记的激动剂：A ，B ，C 。
10-2
g/L 氯化乙酰胆碱（acetylcholine chloride ）
溶液；10-2
g/L 磷酸组织胺（histamine phosphate ）溶液；10g/L BaCl 2溶液。
拮抗剂：1g/L 硫酸阿托品（atropine sulfate
）溶液；10-3
g/L 氯苯那敏（chlorpheniramine
）溶液。
台
氏液（Tyrode) g/L: NaCl 8.0, KCl 0.2, MgCl
2
0.1, CaCl
2
0.2, NaH
2PO 40.05, NaHCO 3
1.0,
葡萄糖 1.0。
1.3器材
双层玻璃浴槽（20ml ）、张力换能器、微距调节夹，恒温水浴箱、多道生理
专业：临床医学
姓名：学号：
日期：2013.3.21 地点：
教C
信号采集处理系统，RM6240生物信号采集处理系统。
2.方法
2.1准备
清洗浴槽：清洗后,将台氏液装至刻度；检查温度：37℃±0.5 ℃；检查通氧: 单个小泡溢出; 打开电脑：选中桌面RM6240图标，选择“实验”---生理科学实验---肠肌。
2.2实验步骤
清醒豚鼠，轻击头部后股动脉放血，打开腹腔，取出回肠，制作回肠标本，一端固定在
通气钩上，置含有37℃台氏液的浴槽中，通氧另一端固定在换能器上与多道生理信号采集
处理系统的连接，连接RM6240生物信号采集处理系统，选择“实验”---生理科学实验---肠肌，归零，调节换能器张力（1g），稳定20分钟。
2.3制作回肠标本
找到回盲部，在离回盲部1cm处剪断回肠，取出回肠约15cm左右一段，置于盛有台氏液
的培养皿中，将回肠剪成1-1.5cm的小段。
2.4 回肠标本张力调节
将回肠标本的下端连线系于标本固定钩上，放入麦氏浴槽中，选中桌面RM6240图标。
选择“实验”--生理科学实验--肠肌，工具--快速归零（按右上快速归零Z）---调“0”，将RM6240系统处在记录状态；将回肠标本的上端连线打一活结，勾在张力换能器的悬臂梁
钩上，旋转调节螺母，调张力至1g。
（见左上显示平均1g左右）。
2.5 RM6240系统的使用
1.实验---生理科学实验--- 肠肌
2.记录、实验中用暂停, 实验结束用停止，停止后一定要另存为d或e盘。
3.标记：在标记窗内打上药名，加药时做好标记。
4.测量方法：选测量方法选择键---峰峰值测量
5.剪辑：按剪辑图标---选中---剪切
6.导出：文件---当前屏图像输出---到word
2.6 实验观察记录
①待离体回肠稳定10min，记录一段正常收缩曲线。
②加A药0.3ml，观察并记录其收缩曲线，加入拮抗剂阿托品 0.3ml,曲线稳定后加A药，记录一段曲线后，用台氏液连续冲洗浴槽3次换液，稳定5min。
③加B药0.3ml，观察并记录其收缩曲线，待曲线稳定后，加入拮抗剂氯苯那敏0.3ml,
观察5min，加B药，换液，稳定5min。
④加C药0.3ml，观察并记录其收缩曲线，待曲线稳定后，加入拮抗剂阿托品0.3ml,观察3min，加C药，记录曲线。
请根据实验结果考虑进一步设计实验，并继续实验。
2.7 数据处理
1.数据测量：从加药前的基线到最高点的收缩幅度，测得峰峰值。
2.收集数据：离体豚鼠回肠实验10个小组的原始数据收集
3.导出实验图：文件---当前屏图像输出
2.8 统计
参考《生理科学实验教程》 p30应用Excel进行数据统计分析 t-检验，以x s 表示。
3. 结果
3.1药物对离体豚鼠回肠作用曲线图，见图 1.图2.
图1.A药物对离体豚鼠回肠作用曲线图
图2.BC药物对离体豚鼠回肠作用曲线图
3.2 离体豚鼠回肠实验10个小组的原始数据列表药物对离体豚鼠回肠平滑肌张力的影
响(数据统计表）见表 1.
表1.药物对离体豚鼠回肠平滑肌张力的影响
收缩幅度（g）收缩幅度（g）实验小组A药Atr+A药B药Chl+B药
1 0.46
2 0.059 0.147 0.059
2 1.444 0.205 2.4 0.242
3 1.136 0.169 0.242 0.088
4 1.246 0.059 1.38
5 0.227
5 1.781 0.044 1.51
6 0.337
6 0.528 0.044 0.806 0.044
7 1.319 0.799 1.24 0.676
8 1.297 0.165 1.37 0.242
9 1.29 0.872 1.26 0.967
10 0.725 0.051 1.106 0.139
x 1.1228 0.2467 1.1472 0.3021
s 0.421272358 0.316477505 0.647297596 0.297046367
3.3 结果，见表 2.
表2.药物对离体豚鼠回肠平滑肌张力的影响
组别标本数收缩幅度（g）T检验值乙酰胆碱10 1.12±0.42 6.78512E-05
阿托品+乙酰胆碱10 0.25±0.32
组胺10 1.15±0.65 0.002534156氯苯那敏+组胺10 0.30±0.30
4.讨论
4.1A、B、C药分别为什么药？
根据实验结果，A药是乙酰胆碱，B药是组胺，C药是氯化钡。
4.2阿托品的作用和作用机制
阿托品与胆碱受体结合而本身不产生或较少产生拟胆碱作用，却能阻断胆碱能递质或拟胆碱药物与胆碱受体结合，从而产生抗胆碱作用。
[1]
4.3氯苯那敏的作用和作用机制
氯苯那敏（扑尔敏）：为组胺H1受体拮抗剂。
扑尔敏与平滑肌细胞膜H1受体结合，从而阻断组胺对H1受体的激动作用。
[2]在肠肌痉挛收缩时加入阿托品可通过拮抗胆碱能受体
部分减弱BaCl2的作用，但无法阻断钙离子浓度上升导致的收缩，故肌张力依然维持在较高
水平。
5. 参考文献
[1]陆源，夏强等，生理科学实验教程（第二版）.浙江：浙江大学出版社.2012.231.
[2]唐法娣，药物对离体豚鼠回肠的作用（课件）.。