甲基睾酮对斑马鱼成鱼的影响
三种色素和甲基睾丸酮对锦鲫的生长形体、体色和抗氧化能力的影响
４ ３
Ｃ ＮＧＱ ＮＧ Ｆ Ｓ Ｅ Ｙ ＨＯ Ｉ ＩＨ Ｒ
注 ： （ ）Ａ． １ 虾青 素 ，Ｌ 叶黄素 ，Ａ 一 Ｅ Ｂ胡萝 卜 ，ＭＴ 甲基 睾 丸酮 ，下 同。 （ ）ＭＹ肩 注不 含相 同 素 一 ２ ｄ 小写字 母者 ，差 异显 著 （ ＜ ．５ 尸 Ｄ０ ）；肩注 含 相 同小写字 母者 差异 不显 著 （ ＞ ．５ Ｐ Ｄ０ ）；下 同 。
ｇ ；Ｗｔ为试验结束时鱼体尾均重 ，ｇ ；Ｗｎ 色杯 中，在 ４ ０ ｍ 波长处测定吸光值 ，每 ２ｎ 为 内脏重 ，ｇ ；ｄ 为试验周期 ，ｄ ；Ｌ 为鱼 体长 ，ｃ ｍ；Ｔ 为鱼体高 ，ｃ ｍ；Ｗ 为鱼体
重 ，ｇ 。
隔 ３ｓ ０ 读数一次 ， 测定 ４ ｎ内每分钟吸光 ｍｉ
值 的变化 。要求 自氧化速率控制在每分钟
下：
×１ ０ ０ ０×ｇ
；
每 ｍ 反应液 中，每 ｍ ｎ抑制邻苯三 ｌ ｉ
式 中 ｘ 为总色素含量 ，ｍ ／ ０ｇ 酚 自氧化速率达 ５ ％的酶量为 １ ｇｌ ；Ａ Ｏ ０ 个酶活单
为在 ４ ８ｎ 处测定的吸光度值 ；Ｙ 为所 ４ ｍ 用提取液 的量 ，ｍＬ；Ａ％ｌ ｍ 为胡萝 卜 ｃ 素 位（ ｍ１ Ｕ／ ） 。
化 的量用脱脂米糠 调平 ）。
的影 响， 旨在确 定对锦 鲫体色增色效果最 好 的增色剂及其适宜添加量 ，为锦鲫增色 剂 的开发利用提供理论依据 。
将 分组后 的锦鲫分别对应放入 已编 号
的室 内水族箱 中 （ ０５ ０５ １ ｍ￣ ．ｍ￣ ．ｍ），养 殖 正 式 试 验 为期 ６ 。每 天 投 喂 ３ 次 ０ｄ （ ８： ０ ３： ０和 １ ０ ），投饲率 ０ ｏ ，１ ｏ ８： ０
酶 活 性 ＝ （Ｏ０ ． Ａ４ ０ ｍ／ ｎ） ． ７ ２ ｎ ｍｉ
17α-甲基睾酮对赤点石斑鱼性逆转的影响.
17α-甲基睾酮对赤点石斑鱼性逆转的影响2010-07-08采用腹部埋植方式,用17α-甲基睾酮(17α-MT)以10 mg・kg-1剂量处理2龄雌性赤点石斑鱼(每4周埋植1次,共埋植2次),检查埋植前后性腺结构、血清中性类固醇激素水平以及脑和性腺芳香化酶活性的变化.结果显示:一次埋植17α-MT即可诱导赤点石斑鱼发生不同程度的性逆转,性腺成熟系数(GSI)明显下降,性腺中卵细胞退化,精原细胞增殖,出现大量精母细胞和精子细胞,性逆转雄鱼精巢的组织结构与正常雄鱼精巢相似,部分鱼转变为功能性雄鱼,经轻微的腹部挤压可排精,精子活力与正常雄鱼相似.赤点石斑鱼埋植17α-MT后前脑、中脑的芳香化酶活性明显提高而后脑的.芳香化酶活性降低,但性腺芳香化酶活性无显著变化.埋植17α-MT后第4周血清中11-酮基睾酮(11-ketotestosterone,11-KT)浓度显著升高,而睾酮(testosterone,T)和雌二醇(estradiol-17β,E2)浓度变化不显著.这些结果表明,脑部芳香化酶活性的显著升高与性逆转密切相关,17α-MT主要通过提高血清中11-KT水平诱导赤点石斑鱼发生性逆转.作者：李广丽刘晓春林浩然 LI Guang-li LIU Xiao-chun LIN Hao-ran 作者单位：李广丽,LI Guang-li(中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室,广东,广州,510275;广东海洋大学水产学院,广东,湛江,524025)刘晓春,林浩然,LIU Xiao-chun,LIN Hao-ran(中山大学水生经济动物研究所暨广东省水生经济动物良种繁育重点实验室,广东,广州,510275)刊名：水产学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF FISHERIES OFCHINA 年，卷(期)：2006 30(2) 分类号：Q45 S917 关键词：赤点石斑鱼17α-甲基睾酮性逆转芳香化酶活性性类固醇激素。
甲基睾酮对斑马鱼成鱼的影响
甲基睾酮对斑马鱼成鱼的影响刘晓红2010444033 摘要：用含雄性激素甲基睾酮(MT)的饲料饲喂斑马鱼(Danio rerio)来探讨外源激素对其性腺发育的影响。
本文一斑马鱼为研究对象，探讨了甲基睾酮对斑马鱼性腺发育的影响。
试验中将斑马鱼随机分为4组：空白对照组，95%乙醇溶剂对照组，两个30μg/l甲基睾酮实验组。
每组30尾斑马鱼，放置在室内饲喂7天，每天记录斑马鱼的生长情况，7天后取其性腺等器官，采用石蜡切片技术，在显微镜下观察其性腺发育及生物学变化。
结果表明甲基睾酮对斑马鱼性腺的发育受到抑制,卵巢结构变化明显。
但是对其成活率等无明显影响。
关键词：斑马鱼甲基睾酮卵巢生长发育斑马鱼(Brachydanio rerio)属鲤科，短担尼鱼属，俗称蓝条鱼、花条鱼、斑马担尼鱼，是一种典型的亚热带观赏鱼类。
具有产卵量大、繁殖周期快、突变表现型明显、胚体透明、胚胎发育同步且发育速度快等特点，被喻为理想的分子生物学和免疫学研究的脊椎动物模型，具有很高的科研价值和广泛的应用前景，是四大模式生物之一。
目前国内外对斑马鱼的研究涉及到胚胎学、内分泌学、生物学、毒理学、遗传学、分子生物学等多个方面 J，但对于斑马鱼卵巢发育的研究在国内还未有报道。
本文对斑马鱼卵巢发育进行了研究，以期能丰富斑马鱼发育生物学、繁殖生物学内容，也为其它小型热带观赏鱼的养殖与繁殖提供一些理论参考[1]。
本次实验采用用含有30μg/g甲基睾酮饲料饲喂斑马鱼来探究甲基睾酮对雌性斑马鱼性腺的影响，旨在对其性别控制的生物学基础及性逆转机制进行理论上的探讨，为斑马鱼养殖生产提供科学依据[2]。
1材料与方法：1.1实验试剂仪器和30μg/g甲基睾酮的饲料，生物显微镜，切片机，电热恒温干燥箱，电子天平，甲基睾酮，布温氏固定液，石蜡，代氏苏木精染液，0.5%伊红染液，二甲苯，不同浓度梯度的乙醇，0.1%盐酸，0.1%NaOH。
1.2实验材料实验动物：同步受精的斑马鱼1.3试验方法1.3.1斑马鱼的饲喂实验设置3个处理组（阴性对照组，空白对照组，实验组），其中设置两个实验组。
甲基睾酮对雌性斑马鱼性腺发育的抑制作用
ｍａｕｉ ｔ ｒｐ ｅ ｏ ａａｉｅｙ ｏｔｅ ｏ ｔ １ ｅ ｅ ｒａｅ ｏ ａ ｅｒ ｅ ０ ・ｇ ， ｅｍａｕｉ ｔｒｙｒ ｉｄ ｏ ｐ ｄｃ ｍｐ ｒｔ ｌｔ ｎｒ ． ｔ ａｏ ｖ ｈ ｃ ｏ Ｗｈ ｎｔ ｅ ｔｄｄ ｓ ｇ ｓ ｄｔ ４ ０ｍｇ ｋ ～ ｔ ｔｒ ｈｔ ｉ ｏ ｈ ｙ ｔ
．
ｏ ｎ ｌ ｃ ｎ ｅ ｄ ｅ ｈ ｏ ｇ ， ｏｔｅ ｓ ｇｉｕ ｕａＵ ｉ ｒｉ， ａｂｎ ０ ０Ｃ ｉ ） ｆ ｉ ｉ ｃ ｓ ｎ ｃ ｎ ｌ ｙＮ ｒ ａ ｔ ｒ ｌ ｒｌ ｎ ｅｓｙ Ｈ ｒｉ１ ０ ３ ， ｈｎ Ａ ｍａ Ｓ ｅ ａ Ｔ ｏ ｈ Ａ ｃｔ ｖ ｔ ５ ａ Ａｂ ｔａ ｔ Ｕ ｉ ｅ ｅ ｄ ｎｏ ｅ ｔ ｌ ｓ ｓ ｒｎ Ｍｒｔ ｆ ｄｍｕｉ ｒ ｍ ｌＺ ｂａｓ （ ａ ｋ ｓｒ ｃ： ｓ ｇ ｈ ｅ ｖ ｌ ｄＭｅ ｙ ｅｔ ｔ ｏ ｅ（ － ｏ ｅ ｌ ａｉ ｆ ａ ｅ ｒ ｈ Ｄ ｎ ） ｎｔ ｆ ｉ ｖ ｈｔ ｏｅ ） ｅ ｔ ｔｅ ｅ ｐ ｙ ｉ ｆ
ｄ ｖ ｌｐ ｅ ｔｏ ｖ ｒ ． ｓ ｌ ｈ ｗｅ ｈ ｔｗ ｉ Ｔ ｄ ｓ ｇ ｎ ｒ ａ ｅ ， ｈ ｏｎ ｄ ｒ ｗｔ ｆｔ ｅ ｆ ｍａｌｓ ｅ ｅｏ ｍ ｎ ｆｏ ａ ｙ Ｒｅ ｕｔ ｓ ｏ ｄ ｔ ａ ， ｔ Ｍ ｏ ａ ｅ ｉｃ ｅ ｓ ｄ ｔ ｅ ｇ ａ ａｌ ｏ ｈｏ ｈ ｅ ｓ ｈ ｇ ｅ ｗｅ ｅ ｏ ｖｏ ｓｙ ｉｈｂｔ ｄ ｎ ｈ ｖ ｒ ｔｕ ｔ ｒ ｈ ｇｅ ｂ ｉ ｓｙ Ａｔｔ ｅ ｄ ｓ ｇ ０ ｍ ｇ ・ｇ ， ｈ ｒ ｂ ｉｕ ｌ ｎ ｉｉ ，ａ ｄ ｔｅ ｏ ａ ｉ ｓ ｒ ｃｕ ｅ ｃ ａｎ ｄ ｏ ｖｏｕ ｌ． ｈ ｏ ａ ｅ ｏｆ３ ｅ ａｎ ｋ ｔｅ
ｒｎ）ｏ ｔ ｄ ｔ ｔｈ ｆｃｏ ｒｉ ｏｍ ｎ ｎ ｈ ｏ ａ ｖ ｌ ｍ ｎ． ｆ ｒ ０ ｅ ｉ ｙｈ ｉ ｅ ｏｆｒ ０ ｅ ｃ ｔ ｅ ｅｔ ｆｏｅ ｎｈ ｒ ｏ ｅ ｅｇ ｎ ｄ ｅ ｅ ｐ ｅ ｔ ｔ ｆ ｄｎ ｂ ｅ ｅ ３ ｄｏ ｅ ｅ ｆ ｆ ｇ ｏｔ ｄ ｏ Ａ ｅ ３ ｄｅ ｇ ｔ ｄ ｔ
甲炔诺酮对斑马鱼胚胎下丘脑-垂体-生长轴基因表达的影响
甲炔诺酮对斑马鱼胚胎下丘脑-垂体-生长轴基因表达的影响甲炔诺酮（TCA）是一种合成的类固醇化合物，已被证实在脊椎动物中具有雄激素活性。
斑马鱼（Danio rerio）由于其短期生育周期、透明胚胎和易于实验操作的特点，已成为研究生物学和药物筛选的重要模式生物。
下丘脑-垂体-生长轴是脊椎动物中调节生长和代谢的重要系统，而TCA对这一系统的影响尚未被深入研究。
本研究旨在探究TCA对斑马鱼胚胎下丘脑-垂体-生长轴基因表达的影响，以期为TCA在临床应用中可能引起的潜在影响提供实验依据。
实验采用斑马鱼胚胎为研究对象，通过实时荧光定量PCR技术分析TCA处理后下丘脑-垂体-生长轴相关基因的表达水平。
在实验组中，斑马鱼胚胎在培养基中添加不同浓度的TCA处理，包括低浓度组（10 ng/mL）、中浓度组（100 ng/mL）和高浓度组（1000 ng/mL），同时设立对照组。
经过一定时间的处理后，收集斑马鱼胚胎样本，提取总RNA并合成cDNA，利用实时荧光定量PCR技术检测下丘脑-垂体-生长轴相关基因（如ghrh、gh、prl和tsh）的表达水平。
实验结果显示，TCA处理后斑马鱼胚胎下丘脑-垂体-生长轴相关基因的表达呈现出浓度依赖性的变化。
在低浓度组和中浓度组，部分基因的表达呈现显著上调的趋势，而在高浓度组，这些基因的表达呈现出明显下调的现象。
具体来看，ghrh基因在低浓度组和中浓度组的表达水平显著上调，而在高浓度组则下调；gh基因在低浓度组显著上调，而在中浓度组和高浓度组下调；prl基因在低浓度组显著上调，而在中浓度组和高浓度组下调；tsh 基因在低浓度组和中浓度组显著上调，而在高浓度组下调。
本研究揭示了TCA对斑马鱼胚胎下丘脑-垂体-生长轴基因表达的影响，并为TCA在临床应用中可能产生的影响提供了初步的实验依据。
未来的研究将进一步探究TCA的作用机制，以及跨物种验证其影响的差异性，从而为临床用药安全提供更加可靠的科学依据。
实验鱼类在药学研究中的应用
实验鱼类在药学研究中的应用廖小立;姚峰;吴端生【摘要】实验鱼类作为模式生物已经被广泛地应用于药学研究，其中犹以斑马鱼为经典。
斑马鱼因其独特的优点，被建立人类重大疾病模型和药物筛选平台，取得了许多有价值的研究成果。
另外，青鳉、虹鳟、剑尾鱼、稀有鮈鲫、红鲫、金鱼、鲤鱼等实验鱼类也具有在药物开发与应用研究的优势。
本文综述了近年来国内外实验鱼类在药物毒理学与安全性评价、环境化合物安全性评价、药物筛选与新药发现、药物药理学研究、药物代谢研究、药物制剂学研究、中药研究、再生药物研究等药学研究的一些事例，为药学研究中实验动物的选择积累有价值的资料，并为实验鱼类应用研究提供新的启示。
%The Laboratory fish has been widely used in pharmaceutical research as model organisms. The zebrafish is a classic animal model in basic research, which is always used for establishing human disease models and discovering lead drug due to its unique characteristics. Many valuable research achievement has been made on the study of zebrafish. In addition,Oryziaslatipes,Oncorhynchusmykis,Xiphophorushelleri,Gobiocyprisrarus,Ca rassius auratusredvariety,Carassiusauratus,Cyprinuscarpio and other fish also show its advantage in the development and application of drugs. The article summarized the application of Laboratory fish in pharmaceutical research at home and abroad in recent years, including some examples of drug toxicology and safety evaluation of environmental compounds, drug screening and drug discovery, drug pharmacology, drug metabolism, pharmaceutical preparations, and traditional Chinese medicine andregenerative medicine research. The object of this paper is to accumulate valuable information for the selection of Laboratory animal in pharmaceutical research and to provide new enlightenment for the research and application of Laboratory fish.【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2013(000)022【总页数】5页(P18-21,26)【关键词】实验鱼类;药学;应用【作者】廖小立;姚峰;吴端生【作者单位】南华大学药学与生物科学学院实验动物学部，湖南衡阳421001;南华大学药学与生物科学学院实验动物学部，湖南衡阳421001;南华大学药学与生物科学学院实验动物学部，湖南衡阳421001【正文语种】中文【中图分类】R-332随着生物医药科技的进步和动物福利的改善，实验鱼类在生物医学中的应用越来越显得突出。
固相萃取——高效液相色谱法测定水产品中甲基睾酮药物残留
固相萃取——高效液相色谱法测定水产品中甲基睾酮药物残留作者：万译文伍远安洪波邓克国来源：《湖南饲料》 2013年第5期万译文1伍远安洪波2 邓克国2（1，农业部渔业产品质量监督检验测试中心（长沙），长沙，410153；2．湖南省水产科学研究所，长沙，410153）甲基睾酮(17a-Mehthyltestosterone，C20H3002)是一种人工合成的固醇类药物，又叫做甲基睾丸酮、甲基睾丸素和甲睾酮。
它是一种白色结晶状粉末，无臭无味，易溶于乙醇、丙酮或氯仿等有机溶剂，不溶于水，结构式见下图1。
在水产养殖中，它作为一种性激素既能促进器官成熟与第二特征的发育，又有促进蛋白质合成的同化作用，使肌肉增长，体重增加，被作为水产品养殖过程中的一种性激素和强壮剂添加到饲料中。
由于甲基睾酮代谢时间长，通过食物链被人体摄人，扰乱人体激素平衡，导致孕妇有女胎男性化和新生儿畸形，影响儿童的正常生长发育，且具有致癌、致畸、致突变的作用。
欧盟95/22/EC中规定在养殖中禁止使用甲基睾酮等性激素类兽药，我国也在2003年发布的公告《动物性食品中兽药最高残留限量》中规定甲基睾酮为禁止使用兽药，在动物源性组织中不得检出。
目前对甲基睾酮残留检测的相关研究较少，水产品中激素类药物残留的相关检测标准尚不完善，我国农业部于2006年制定了甲基睾酮残留量的高效液相色谱法检测标准，但是该方法前处理复杂，有机溶剂使用较多，水产品基质复杂采用液液萃取的净化效果不好。
因此本文通过简化前处理过程，采用固相萃取方式进行净化，利用紫外检测器对甲基睾酮进行了检测，缩短了前处理时间，灵敏度高，能实现了对甲基睾酮的快速检测，满足水产品质检以及相关基础研究的要求。
1实验部分1.1仪器与试剂Waters2695高效液相色谱仪，配备紫外检测器：旋转蒸发仪（瑞士布奇公司）：氮吹仪（美国Organomation公司）；固相萃取装置（美国Agilent公司）；超声波清洗器（昆山超声波仪器厂）；精密电子天平（梅特勒一托利多称重设备系统有限公司）；微型漩涡混合仪（上海沪西分析仪器厂）。
甲基睾酮对斑马鱼成鱼的影响
3.4实验结论
通过此次实验，可以得出结论：甲基睾酮对斑马鱼的生长发育会产生一定的影响，而且导致斑马鱼的性发育受到影响，在一定程度上会影响成活率。对于斑马鱼性腺的影响具体为：甲基睾酮外源激素的使用，使卵巢发育受到一定程度的抑制，以至于使卵巢的结构变化明显，促进精巢的发育。
1.2实验方法：
1.2.1甲基睾酮饲料的配制
乙醇喷雾法：按照30μg/g剂量称取甲基睾酮溶于95%乙醇中，充分溶解后喷洒在饵料中，放入40℃烘箱中烤干。
1.2.2组别设计与处理方法
本实验设置四个组：实验一组，实验二组，空白对照组、阴性对照组。每组有30尾斑马鱼。
实验组用配置好的30μg/g甲基睾酮饲料饲喂，空白对照组用普通饲料饲喂，阴性对照组用95%乙醇饲喂，并且要定时适量的饲喂，看情况及时换水，处理一周，各组员按上午、下午各一次，观察鱼的活性，记录存活率，随机捞取10条斑马鱼称重，测量4条鱼的体长，均求取平均值记录一条鱼的体重和体长变化。
1材料与方法
1.1仪器和试剂：
1.1.1实验用鱼——斑马鱼
斑马鱼是一种小型热带观赏鱼。由于其具有个体小、产卵量大、繁殖周期快、体外受精、胚胎透明、突变表现性明显、易于观察、胚胎发育同步且发育速度快、饲养简便等优点，除了具有经济、观赏价值外，还以其自身独有的优势被广泛的应用与发育生物学、遗传学等领域的研究，有很高的科研价值和广泛的应用前景，也因此成为研究最广泛的脊椎动物模式生物之一。
3.2实验组结果
实验组一组和二组都用30μg/g甲基睾酮进行饲喂，结果见表三、表四，附图五、附图六。
17_甲基睾酮对斑马鱼肝脏vtg基因mRNA表达的影响_刘少贞
雄鱼 MT 暴露 7 d 后， 其肝脏中 vtg 基因 mRNA 的 表达变化情况。 结果表明， 与对照组相比，25、50、 100 ng/L 的 MT 暴露 7 d 后，雌鱼肝脏中 vtg 基因的 mRNA 表达均被显著抑制（P<0.05 或 P<0.01），尤其 是 50 ng/L 的 MT， 其对雌鱼肝脏中 vtg 基因 mRNA 的表达抑制作用最为显著（P<0.01，见图 1A）；对于 斑马鱼雄鱼，50 ng/L 的 MT 暴露 7 d 后， 雄鱼肝脏 vtg 基 因 的 mRNA 表 达 量 显 著 升 高 （P<0.05），100 ng/L 的 MT 暴露 7 d 后， 雄鱼肝脏 vtg 基因 mRNA 的表达量极显著升高（P<0.01），而 25 ng/L 的 MT 暴 露 7 d 后， 雄鱼肝脏 vtg 基因的 mRNA 表达未受到 显著影响（P>0.05，见图 1B）。 3 讨论
关 键 词 ：17α-甲 基 睾 酮 ；斑 马 鱼 ；肝 脏 ；vtg
中 图 分 类 号 ：X171.5
文 献 标 识 码 ：A
文 章 顺 序 编 号 ：1672-5190（2016）05-0009-03
DOI:10.16003/ki.issn1672-5190.2016.05.004
Effect of 17α-methyltestosterone (MT) on mRNA Expression of vtg Gene in Liver of
微量移液器（Eppendorf），VORTEX-6 漩涡混合
10
1.4
A
畜牧与饲料科学
30
B
第 37 卷 **
17α-甲基睾酮与类胡萝卜素对观赏鱼体色影响的研究的开题报告
17α-甲基睾酮与类胡萝卜素对观赏鱼体色影响的研究的开题报告题目：17α-甲基睾酮与类胡萝卜素对观赏鱼体色影响的研究研究背景：观赏鱼是指人们养殖或观赏用的一类鱼类，具有丰富多彩的体色和形态特征，是水族馆和家庭水族箱中的重要鱼类。
观赏鱼的颜色和形态受到多种因素的影响，其中荷尔蒙和营养素是重要的影响因素之一。
17α-甲基睾酮是雄性动物体内的睾酮代谢产物，具有提高颜色鲜艳度的作用。
而类胡萝卜素则是一类色素化合物，可以影响动物体内色素的合成和代谢，从而影响动物体色。
因此，研究17α-甲基睾酮和类胡萝卜素对观赏鱼体色的影响，对于探究观赏鱼体色的形成机制、提高观赏鱼养殖品质具有重要意义。
研究内容与方法：本研究将分别探究17α-甲基睾酮和类胡萝卜素对观赏鱼体色的影响。
研究方法包括以下几个步骤：1. 实验鱼种选择：选取器官明显、色彩丰富的观赏鱼种类，如锦鲤、孔雀鱼等。
2. 实验设计：将实验鱼种随机分成对照组、17α-甲基睾酮处理组和类胡萝卜素处理组。
对照组饲养在普通饲料条件下，处理组饲养在添加不同浓度的17α-甲基睾酮或类胡萝卜素的饲料条件下。
3. 实验数据采集：观察实验鱼在不同处理条件下的体色变化情况，采集有关数据，包括颜色数值、比色板比色、取样体重等。
4. 数据分析：利用统计学方法对实验数据进行分析，探究17α-甲基睾酮和类胡萝卜素对观赏鱼体色的影响情况，并对影响因素进行探讨。
预期成果：本研究旨在探究17α-甲基睾酮和类胡萝卜素对观赏鱼体色的影响机制，预期成果包括以下几个方面：1. 17α-甲基睾酮和类胡萝卜素对观赏鱼体色的影响情况。
2. 影响17α-甲基睾酮和类胡萝卜素影响观赏鱼体色的主要因素和作用机制。
3. 对于观赏鱼养殖品质的提高提供理论依据和实践支持。
研究意义：观赏鱼是一种重要的养殖和观赏动物，其体色是影响其市场价值和观赏价值的关键因素。
本研究旨在探究17α-甲基睾酮和类胡萝卜素对观赏鱼体色的影响机制，为提高观赏鱼品质、促进鱼类养殖业的发展提供理论依据和实践支持。
甲基睾酮对雌斑马鱼内分泌干扰效应的研究
甲基睾酮对雌斑马鱼内分泌干扰效应的研究侯丽萍;何骏驹;冯子懿;郑果;梁艺聪;方少彬【摘要】甲基睾酮(MT)广泛存在于造纸废水中,为了研究其对水生动物内分泌的干扰效应,选用斑马鱼为模式生物,开展甲基睾酮对斑马鱼的慢性毒性暴露实验.将雌性斑马鱼分别暴露在含10、50、100和150μg/L的甲基睾酮水环境中48 d,另设空白对照和0.01%甲醇对照,观察斑马鱼的个体生长指标及组织结构的变化.结果表明:当MT浓度为150μg/L时,斑马鱼全部死亡;而在0~100μg/L的MT暴露处理中,随着MT浓度的增加,斑马鱼的体重逐渐减轻,体长逐渐缩短,臀鳍逐渐变大,体色转向偏黄,出现了雄性化的特征;而且肝脏和性腺重量均明显减轻,卵巢出现明显的退化特征,肝细胞逐渐肿大,细胞核偏移中央,且伴随细胞中空等现象;其中,50和100μg/L MT处理的斑马鱼鳃丝变得高低不一,有的开始断裂甚至结构无法辨认.%Methyltestosterone is widely present in papermaking wastewater drainage. In order to study endocrine disrupting effects it produces, this paper used zebra fish as model organism to conduct methyltestosterone zebra fish exposed to chronic toxicity experiments. The female Zebra fish were exposed to the water environment with 0, 10, 50, 100 and 150 μg/L methyl testosterone in 48 days and no MT group and 0.01% methanol group used as control group, to record their growth indicators changes and tissue damaged. The results showe d that exposure to 150 μg/L MT Zebra fish all died. In other groups, with the growth of concentration, various indicators have been changed. MT has tiggered some symptoms to treated group zebra fish, such as oval cells degenerated; hepatocyte tumefaction, vacuolation and nuclear offseted. Besides that, in 50 and100μg/L MT groups, fish fin filgaments showed uneven, some of them even broken or unrecognized.【期刊名称】《湖南农业科学》【年(卷),期】2017(000)003【总页数】4页(P70-73)【关键词】斑马鱼;环境激素;甲基睾酮;毒理作用【作者】侯丽萍;何骏驹;冯子懿;郑果;梁艺聪;方少彬【作者单位】广州大学生命科学学院,广东广州 510006;广州大学生命科学学院,广东广州 510006;广州大学生命科学学院,广东广州 510006;广州大学生命科学学院,广东广州 510006;广州大学生命科学学院,广东广州 510006;广州大学生命科学学院,广东广州 510006【正文语种】中文【中图分类】S917.4近年来，随市场需求的不断增长，激素因见效快、辐射广、周期短及获取途径多等优点在养殖业被广泛使用。
三种孕激素物质甲炔诺酮、去氢孕酮和醋酸甲羟孕酮对斑马鱼的毒理效应
三种孕激素物质甲炔诺酮、去氢孕酮和醋酸甲羟孕酮对斑马鱼的毒理效应作为一类荷尔蒙激素,孕激素广泛应用于口服避孕药和激素替代疗法中,用来避孕和治疗激素引起的各类疾病。
此外,孕激素还广泛用于养殖业中,促进动物的生长和增肥作用,提高产量。
由于污水处理厂不能完全地去除孕激素,以及人畜直接排泄和废水直接排放,导致受纳环境中广泛检出多种孕激素,浓度在几ng L<sup>-1</sup>到几万ngL<sup>-1</sup>。
孕激素拥有强生物活性,其对环境生物的影响引起了研究人员关注。
已有研究表明孕激素有多种毒性效应,如:影响鱼产卵量、引起生物组织损伤和改变基因转录水平。
目前研究主要集中在孕激素对生物生理生化和目标基因转录表达的影响,而孕激素毒理效应机制研究较少。
由于孕激素种类繁多,化学结构差异大,导致不同种类孕激素毒理效应有较大差异,因此,有必要进一步开展不同孕激素物质的毒理效应研究。
本论文以斑马鱼为模式生物,利用基因芯片技术、荧光定量PCR技术以及组织切片等生物学手段,研究目前关注较少而环境中检测浓度较高的三种孕激素物质（甲炔诺酮、去氢孕酮和醋酸甲羟孕酮）的毒理效应,探讨了这三种孕激素物质对斑马鱼的分子毒理效应机制。
论文主要成果如下:1.首先研究了甲炔诺酮（Norgestrel,NGT）对成年斑马鱼性腺发育毒性机制。
主要分析NGT对成年斑马鱼转录组和性腺发育的影响。
871 ng L<sup>-1</sup>NGT暴露成年斑马鱼14天后,利用基因芯片技术富集生物过程和通路。
基因芯片结果显示,NGT暴露显著富集大量差异表达基因。
基因本体（Gene ontology,GO）分析发现,发育相关的生物过程被显著富集,包括器官发育、系统发育、多细胞有机体发育、单细胞有机体发育和发育过程等生物过程。
进一步研究发现在这些发育相关生物过程中均包含有434个差异表达基因。
17α甲基睾酮对草鱼性腺发育及性类固醇激素水平的影响
始，各处理组卵巢中开始出现精原细胞。30~150 d，50 mg/kg MT处理组草鱼卵母细胞的生 成及成熟受到抑制，发育迟缓；100 mg/kg MT处理组的生殖细胞受抑制程度要高于50 mg/kg MT处理组，实验结束时性腺已被大量精原细胞占据，有向精巢发育的趋势；200 mg/kg MT处理组精卵兼性状态较50 mg/kg MT处理组明显，但精原细胞的数量少于100 mg/kg
姚汶励1,2， 姜 鹏1， 白俊杰1*
(1. 中国水产科学研究院珠江水产研究所， 农业农村部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室，广东 广州 510380；
2. 上海海洋大学，水产科学国家级实验教学示范中心，上海 201306)
摘要：利用养殖草鱼雌性个体所表现出的生长优势，探讨通鱼按投喂饲料MT浓度梯度设置分为
4组，每组150尾，分别置于约10 m2户外水泥池 中饲养。投喂实验从2016年11月开始至2017年 4月结束，连续饲养周期150 d。实验期间，气泵 不间断充气，每周换水清污1次，换水量约为1/3。 每天9∶00 am和4∶30 pm各投喂1次，日投喂量 约为鱼体质量的3%，以每次投喂后无残饵为宜。 药饵停止投喂后，所有处理组改用普通颗粒饲料 继续投喂。
收稿日期：2018-02-02 修回日期：2018-06-15 资助项目：现代农业产业技术体系建设专项(CARS-45-04，CARS-46-03)；广东省自然科学基金(2015A030313702) 通信作者：白俊杰，E-mail：jjbai@
802
水产学报
43 卷
克罗非鱼(O. mossambicus)在30 mg/kg MT时就可 以完全性逆转[10]，但投喂时间过短会降低雄性率[11]。 虹鳉(Poecilia reticulata)、茉莉花鳉(P. latipinna)等 花鳉科(Poeciliidae)鱼类最适MT浓度为90 mg/kg[12]， 鲤科(Cyprinidae)激素处理的强度要高于花鳉科 。 [13] 因此，选择合适的激素浓度是成功诱导性逆转 的必要条件。
环境内分泌干扰物对金鱼性腺组织学影响
环境内分泌干扰物对金鱼性腺组织学影响王菊;高广斌;曹信瑜;潘方艳;宋元照;王晓强;刘少贞【摘要】[目的]“环境内分泌干扰物”又称“环境激素”,近年来由于其对环境造成的污染逐渐增加,受到国内外广泛关注.本文选取市场上常见的金鱼作为试验材料,研究3种环境激素对金鱼性腺组织学的影响.[方法]甲基睾酮(17α-methyltestosterone,MT)是一类人工合成的雄激素,乙炔雌二醇(Ethinylestradiol,EE2)是雌激素干扰物中的一个典型代表,来曲唑(Letorzole,LE)是新一代芳香化酶抑制剂,本文分别设置暴露3、7d的0、50、100、200 ng·L-1的MT浓度梯度;暴露3、7d的0、50、100、200 ng·L-1的EE2浓度梯度;暴露7、14d的0、100、200、400 ng·L-1的LE浓度梯度.[结果]发现MT对金鱼卵巢具有抑制作用;不同EE2浓度处理的雄性金鱼体重和性腺重均受到了抑制,50 ng·L-1的EE2处理金鱼7d后,变化最为明显,不同EE2浓度处理的雌性金鱼体重和性腺重均受到了促进,100 ng·L-1的EE2处理雌性金鱼7d后,变化最为明显;LE对于雌鱼的卵巢分化具有抑制作用,并且在100 ng·L-1处理7d后,抑制作用最为明显,一定浓度的来曲唑可以促进精巢发育,在中等浓度200 ng·L-1处理金鱼7d时促进作用最为明显.[结论]用3种浓度的EDCs处理金鱼后,MT可抑制金鱼卵巢的发育;EE2可抑制雄性金鱼睾丸的发育,促进雌性金鱼卵巢的发育;LE可抑制雌鱼卵巢的分化,促进睾丸的发育.以上结果显示,3种EDCs可对雄性或雌性金鱼性腺的发育产生不同的干扰作用,且与所用的剂量和暴露时间有关.【期刊名称】《山西农业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(038)011【总页数】10页(P67-76)【关键词】17α-甲基睾酮;乙炔雌二醇;来曲唑;金鱼;性腺;组织学【作者】王菊;高广斌;曹信瑜;潘方艳;宋元照;王晓强;刘少贞【作者单位】山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801;山西农业大学动物科技学院,山西太谷030801【正文语种】中文【中图分类】X592“环境激素”一词最早是由美国《波士顿环境》报记者安·达玛诺斯基所著《被偷去的未来》一书中提出，英语称为“Endocrine Disrupting Chemicals”(简称“EDCs”)，被译为“环境内分泌干扰物”[1]。
甲基睾酮对鱼类内分泌的作用机理及其在水产养殖上的应用.
甲基睾酮对鱼类内分泌的作用机理及其在水产养殖上的应用摘要：介绍了甲基睾酮诱导鱼类性逆转的机制，阐述了其对于雌雄鱼类不同的作用机理及相关研究，概括了其在水产养殖上的应用。
关键词：甲基睾酮；内分泌；性逆转；水产养殖性类固醇激素在鱼类性腺发育成熟过程中起着重要作用。
1969 年，日本学者Yamamoto 和Kajishima 首次对鱼类的性别决定机制进行了系统的阐述，总结了鱼类的性腺类型、雌雄同体现象、性别决定的遗传学基础以及性类固醇激素对性分化的影响，提出类固醇激素是自然的“性诱导剂”，雌激素是“雌性诱导剂”，而雄激素是“雄性诱导剂”。
甲基睾酮（MT），又名甲基睾丸素或甲基睾丸酮，是人工合成的白色或乳白色结晶性粉末状雄性激素，具有雄性和蛋白同化双重作用。
它能促进雄性性器官发育成熟和第二性征的形成，并能对抗雌激素、抑制子宫内膜生长及卵巢垂体、促进蛋白质合成代谢、兴奋骨髓造血功能、刺激血细胞的生成。
在水产养殖业中，MT一直作为苗种培育和性别控制等方面的特效药物。
迄今为止，至少在15个科47种鱼类中进行了激素诱导实验并取得了良好的诱导效果，在所使用的31种激素中，以17α-MT 诱导转雄效果最好，且埋植激素比口服激素有效，在自然性逆转发生之前任何年龄阶段处理都可诱导转雄。
1MT诱导鱼类性逆转的机制17α-MT 诱导鱼类性逆转的机制有两种观点，Lee 等认为，17α-MT 诱导性逆转是通过直接作用于性腺或是对下丘脑－垂体轴产生正反馈，使GtH 升高，从而促进原始生殖细胞分化和增殖诱导性腺发生变化，周立斌等人用含有E2和MT孵育液对长臀鱼危（Cranoglanis bouderius）脑垂体碎片作用的研究证实了后一种可能性。
但Kitano等认为17α-MT 诱导褐牙鲆（Paralichthys olivaceus）转雄的机制同芳香化酶抑制剂一样，是通过降低性腺中芳香化酶mRNA表达导致雌二醇（E2）总量降低而引起的。
甲状腺激素在鱼类繁殖中的作用
收稿日期 : 2009-05-08; 修回日期 : 2009-08-09
基金项目 : 海洋公益性行业科研专项经费项目 (200805069) 作者简介 : 于道德 (1978-), 男 , 山东青岛人 , 博士 , 主要从事海洋生物 学研究 , 电话 : 0532-82655167, E-mail:wensentte@; 刘洪军 , 通 信作者 , 研究员 , 理学博士 , E-mail: Hongjunl@
[19] [18]
; 最终 , 随
。
4
甲状腺激素与鱼类的繁殖系统
鱼类甲状腺激素的分泌活动部分受到脑 - 垂体 -
在所研究的脊椎动物中 , TH 的作用方式非常保 守。研究发现 , TH 缺失所引起的症状在低等脊椎动 物中更加明显 ; 因此 , 相对于哺乳动物来说 , TH 在 低等脊椎动物 , 尤其是鱼类中的作用显得更加重要。 由于 TH 在鱼类调控生长、发育、变态、生殖等方面 发挥的作用 , 使其成为鱼类生活史中最为重要的激 素之一 [20]。
[16]
。与其他脊椎动物类似 , 鱼类
TH 的失活也主要是通过脱碘酶的脱碘作用 , 失活的 靶器官组织包括肝、肾、脑和肌肉组织 [17] 。但是由 于鱼类脱碘酶在分布以及对 TH 的敏感性上与哺乳 类不同 , 因此还存在其他多种失活形式 , 例如氧化 脱氨、 脱羧以及硫酸化或葡萄糖苷化等 胆汁或尿液排出体外
甲状腺轴的调节。鱼脑主要通过神经内分泌调节促 使垂体分泌促甲状腺激素 (TSH), TSH 进而作用于甲 状腺促使其合成和分泌 TH, 同时鱼类血清 T4 水平 对 TSH 的释放具有反馈调节作用。研究发现 , 鱼类 的性腺发育亦受到脑 - 垂体 - 性腺轴的调节 , 垂体分 泌的促性腺激素 (GtH)与 TSH 在结构上具有较高的 相似性。早在 1973 年 , Sage[29]就预测了 TSH 和 TH 在鱼类繁殖过程必然存在着特定的调节作用。 鱼类的 GtH 包括 GtH Ⅰ 和 GtH Ⅱ 两种 , 分别是 哺乳类 FSH(follicle stimulating hormone)和 LH(luteinizing hormone)的类似物。 其中 , GtH Ⅰ 主要参与配 子发生和性类固醇激素发生等过程 , 起到了性腺起 始激素的作用 ; GtH Ⅱ 则可通过改变性激素的水平 , 刺激配子的最后成熟以及繁殖行为的正常发生。 事实上 , TH 在鱼类繁殖过程的各个水平上均发 挥着重要作用 , 但由于鱼类很少受到碘元素的限制 ,
水体中甲基炔诺酮对斑马鱼早期胚胎发育的毒性作用
49--土壤肥料•资源环境 引用格式：邓希楷，何雨桐，冯婷茵，等. 水体中甲基炔诺酮对斑马鱼早期胚胎发育的毒性作用[J]. 湖南农业科学，2022（1）：49-51，68. DOI:10.16498/ki.hnnykx.2022.001.014甲基炔诺酮（Norgestrel ，NGT ）是一种合成的类固醇孕酮，与乙炔雌二醇联合用于口服避孕。
诺孕酮是由右旋诺孕酮和左旋诺孕酮这2种立体异构体组成的外消旋混合物。
然而，只有左旋对映体（左炔诺孕酮）具有生物活性。
作为避孕药中的活性成分，左炔诺孕酮对三棘刺鱼（Gasterosteus aeuleatus ）有强烈的雄激素效应，同时也发现其对雌性黑头呆鱼（Pimephales promelas ）有雄性化作用[1-2]。
此外，在畜牧业中，甲基炔诺酮也经常用于控制牲畜的繁殖。
由于甲基炔诺酮的广泛应用，加上污水处理厂过滤不彻底，导致不同水体中存在一定浓度的甲基炔诺酮。
例如，曾在地表水体和污水处理厂废水中检测到22和11 ng/L 的甲基炔诺酮。
在畜牧产业排放的废水中，广西某猪场和某奶牛厂就曾检测到浓度高达6 460~10 800 ng/L 的甲基炔诺酮[3-6]。
这些大量存在于水体环境中的甲基炔诺酮会严重影响斑马鱼的生长发育。
斑马鱼是一种生活在热带的小型淡水鱼，具有适应性强、对水质要求低、在实验室环境下易于饲养、繁殖周期短、产卵量大、胚胎易收集等特点，是环境毒理学试验的理想模型[7]。
此外，斑马鱼的遗传背景明确，与人类的基因组具有高度同源性[8-9]。
因此，笔者以斑马鱼作为研究模型，通过比较不同浓度NGT 暴露下斑马鱼胚胎的转录组表达水平，寻找NGT 影响下表达发生明显差异的基因，从而揭示水体环境中不同浓度NGT 对斑马鱼早期胚胎发育的毒性作用。
1 材料与方法1.1 试验材料将斑马鱼在实验室条件下稳定饲养3个月（控制饲养水体环境的硬度、pH 值、溶解氧含量、温度、光周期等参数）。
PFOS对斑马鱼胚胎及仔鱼的生态毒理效应
PFOS对斑马鱼胚胎及仔鱼的生态毒理效应夏继刚;牛翠娟;孙麓垠【摘要】全氟辛烷磺酸(Peffluorooctane sulfonate,PFOS)是一种广泛存在于水生生态系统的新型持久性有机污染物(Persistent Organic Pollutants,POPs),其对鱼类健康的影响以及水生生态系统安全的潜在威胁是当前人们高度关注的水环境问题.为探究PFOS对斑马鱼(Danio rerio)胚胎及仔鱼的生态毒理效应,研究了不同浓度(0,0.1,1,10 mg/L) PFOS暴露对斑马鱼胚胎孵化率、仔鱼畸形率与死亡率、仔鱼心率、仔鱼运动行为以及生长的影响.结果表明:PFOS暴露对斑马鱼胚胎孵化率、孵出仔鱼死亡率与畸形率的影响显著(P＜0.05),10 mg/L PFOS暴露导致胚胎孵化率下降,孵化延迟,仔鱼死亡率与畸形率升高;PFOS暴露4 dpf(day post-fertilization,dpf)或8 dpf对斑马鱼仔鱼心率影响显著(P＜0.05),心率随PFOS暴露浓度升高而增加;PFOS暴露6 dpf或9 dpf对斑马鱼仔鱼的运动行为影响显著(P ＜0.05),10 mg/L PFOS暴露6 dpf导致运动斑马鱼仔鱼比例和仔鱼最大持续运动距离增加(P＜0.05),PFOS暴露9 dpf,单位时间内仔鱼的运动距离、停顿频率、平均每次运动距离随PFOS暴露浓度升高而减少(P＜0.05),最大持续运动距离随PFOS暴露浓度升高而增加(P＜0.05),呈剂量依赖的毒理学效应;PFOS暴露导致斑马鱼仔鱼体长和吻宽下降(P＜0.05)或有下降的趋势,并对吻宽/体长、吻宽/头长影响显著(P＜0.05).以上研究结果提示:PFOS对斑马鱼胚胎及仔鱼具有显著的发育与行为毒性,仔鱼心率、运动行为、吻宽/体长以及吻宽/头长等是评估水体PFOS污染敏感而有效的生物标志物.【期刊名称】《生态学报》【年(卷),期】2013(033)023【总页数】9页(P7408-7416)【关键词】PFOS;斑马鱼;仔鱼;运动表现;生长【作者】夏继刚;牛翠娟;孙麓垠【作者单位】生物多样性与生态工程教育部重点实验室,北京师范大学生命科学学院,北京100875;重庆师范大学进化生理与行为学实验室,重庆市动物生物学重点实验室,重庆401331;生物多样性与生态工程教育部重点实验室,北京师范大学生命科学学院,北京100875;生物多样性与生态工程教育部重点实验室,北京师范大学生命科学学院,北京100875【正文语种】中文全氟辛烷磺酸(Perfluorooctane sulfonate，PFOS)是全氟类有机化合物(Perfluorinated compounds，PFCs)的代表物质之一。
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（10）HE染色封片
1脱蜡：二甲苯（2）中3’～5’→二甲苯（1）中15’
2复水：1/2乙醇+1/2二甲苯中2’→100%乙醇（2）中2’→100%乙醇（1）中2’→95%乙醇中2’→85%乙醇2’→70%乙醇2’→50%乙醇2’→30%乙醇2’→蒸馏水2’
表一一周内斑马鱼的生长情况（空白对照组）
时间
体重/g
体长/cn
死亡数/尾
成活率
初
0.312
2.2
0
100%
末
0.382
2.7
1
96.7%
差值
+0.07
+0.5
-1
-3.3%
注：“+”表示增长，“-”表示减少或者降低，以下表格省略该说明。
2.2甲基睾酮对斑马鱼性腺发育的影响的实验结果
本组以雌性的卵巢和雄性的精巢的HE染色的石蜡切片为观察对象，并用生物显微镜对其进行显微摄影，并经过处理。
附图一空白组对照组斑马鱼的卵巢结构
Ⅱ.第Ⅱ时相卵母细胞；Ⅲ.第Ⅲ时相卵母细胞；Ⅳ.第Ⅳ时相卵母细胞；Ⅴ.第Ⅴ时相卵母细胞；YG.卵黄颗粒；RB.辐射带
附图二空白组对照组斑马鱼的精巢结构
Sg.精原细胞；ScⅠ.初级精母细胞；ScⅡ.次级精母细胞；St.精子细胞；SC.间质细胞
3讨论
3.1阴性对照组结果
体重/g
体长/cm
死亡数/尾
成活率
初
0.312
2.36
0
100%
末
0.382
2.48
0
100%
差值
+0.07
+0.12
0
0
附图五实验组斑马鱼的卵巢结构
大多数为Ⅱ～Ⅳ时相的卵母细胞，第Ⅴ时相卵母细胞明显减少。Ab.凋亡小体
3.3三组实验结果对比讨论
3.3.1甲基睾酮对斑马鱼生长及存活率影响
本试验是通过对甲基睾酮激素的使用和对比，来确定其对斑马鱼生长和存活率的影响。理论上，实验组的体重和体长跟对照组相比应该有一定程度的增长，而空白对照组与阴性对照组没有显著的差异，由此实验组中斑马鱼的生长情况受到的抑制作用可以排除乙醇的影响，出现这种情况的原因应该在于雄激素对动物体有着刺激食欲，促进蛋白质合成的作用[4]。
阴性对照组用95%乙醇对斑马鱼进行饲喂，结果见表二，附图三、附图四。
表二一周内斑马鱼的生长情况（阴性对照组）
时间
体重/g
体长/cm
死亡数/尾
成活率
初
0.280
2.28
0
100%
末
0.382
3.32
0
100%
差值
+0.102
+1Байду номын сангаас04
0
0
附图三阴性对照组斑马鱼的卵巢结构
附图四阴性对照组斑马鱼的精巢结构
但是从表一、二、三、四中对比可以看出，MT处理后斑马鱼的生长情况，在本次实验中有很大的误差，两个实验组的实验结果相差很大，空白对照组与阴性对照组的实验结果也有很大的差距。不过，能反映出，甲基睾酮在一定程度上促进了斑马鱼的生长。
激素对成活率的影响跟多种因素有关，其中处理时间和处理强度是最重要的两个因素[4]。而存活率各组的实验结果几乎没有明显变化。
通过附图二，可以粗略的看到部分不同形态的生殖细胞（未标出）：精原细胞，呈圆形，直径为9.0～15.0μm，细胞质为弱嗜碱性；初级精母细胞，呈圆形或椭圆形，直径比精原细胞小，4.0～5.5μm，核染色质丰富，染色比精原细胞深；次级精母细胞，呈圆形，较小，直径为3.5～4.0μm，细胞质很少，核的嗜碱性增加，存在的时间短暂；精子细胞小，直径为2.5μm，无明显的细胞质，只含有强嗜碱性的细胞核；精子，精巢中最小的一种细胞，有特殊的形态，多数有头颈尾三部分组成。
因为本实验持续喂养斑马鱼的时间较短，而且实验组较为单一，只有30μg/g的甲基睾酮处理的情况，所以对实验结果的精确程度造成一定的的局限性。所以，甲基睾酮对成鱼成活率的影响还不能定论，本实验表明30μg/g的甲基睾酮对斑马鱼成活率有一定的影响，但影响不大。
3.3.2甲基睾酮对斑马鱼性腺发育的影响
卓孝磊报道过MT可以促进雌性黄鳝卵母细胞退化，并可以促进雌雄间体早起的黄鳝的雄性生殖细胞的发育[5]。在鱼类的性转换实验中，国内外的学者都曾指出[6,7],甲基睾酮的投喂量有一适宜的剂量范围，如果雄激素的剂量过大，其结果是生殖腺萎缩，甚至是雌鱼出现反常的雄性化，也曾提到过30μg/g的甲基睾酮诱导的效果最佳，而本次实验的甲基睾酮浓度正好为最明显的实验结果。
通过对三组石蜡切片的对比观察，实验组的斑马鱼的卵巢有一定的萎缩，第Ⅴ时相卵母细胞明显减少，卵原细胞出现退化，卵巢大小受到明显的抑制，出现凋亡小体，有向精巢发育的趋势，而精巢本身受到了促进发育的作用。
3.4实验结论
通过此次实验，可以得出结论：甲基睾酮对斑马鱼的生长发育会产生一定的影响，而且导致斑马鱼的性发育受到影响，在一定程度上会影响成活率。对于斑马鱼性腺的影响具体为：甲基睾酮外源激素的使用，使卵巢发育受到一定程度的抑制，以至于使卵巢的结构变化明显，促进精巢的发育。
参考文献
[1]赵春刚,范鹏,刘奕,等.甲基睾酮对雌性斑马鱼性腺发育的抑制作用.东北农业大学学报,2010,41(12):70～74
3初染：代氏苏木精中15’
4分化：0.1%HCl脱色至变红1～5’’→0.1%NaOH至变蓝5～20’’
5脱水：蒸馏水3～5’’→30%乙醇2’→整理装片→50%乙醇2’→70%乙醇2’→85%乙醇2’
6复染：0.5%伊红（含95%乙醇）10～15’
7脱水透明：95%乙醇中2～3’’→100%乙醇（1）中2’→100%乙醇（2）中3’→1/2乙醇+1/2二甲苯中3’→二甲苯（1）中3’→二甲苯（2）中≥3’
1.2实验方法：
1.2.1甲基睾酮饲料的配制
乙醇喷雾法：按照30μg/g剂量称取甲基睾酮溶于95%乙醇中，充分溶解后喷洒在饵料中，放入40℃烘箱中烤干。
1.2.2组别设计与处理方法
本实验设置四个组：实验一组，实验二组，空白对照组、阴性对照组。每组有30尾斑马鱼。
实验组用配置好的30μg/g甲基睾酮饲料饲喂，空白对照组用普通饲料饲喂，阴性对照组用95%乙醇饲喂，并且要定时适量的饲喂，看情况及时换水，处理一周，各组员按上午、下午各一次，观察鱼的活性，记录存活率，随机捞取10条斑马鱼称重，测量4条鱼的体长，均求取平均值记录一条鱼的体重和体长变化。
甲基睾酮对斑马鱼成鱼的影响
姓名
xx大学xx学院xx级xx专业学号xxxxxxxx
摘要：通过对斑马鱼的实验，研究甲基睾酮对其成鱼生长、成活率和性腺发育的影响，设置3个处理组：空白对照组、阴性对照组、实验组，各组用配制好的三种饵料（普通饲料、95%乙醇、30μg/g甲基睾酮）分别饲喂，按时投喂换水，观察鱼的活性。连续处理一周后，记录存活率，随机取10条斑马鱼称重，5条鱼测量其体长，均求取平均值并记录每条鱼的体重变化和条长变化。对数据进行分析后，对三组的斑马鱼进行解剖，制作斑马鱼性腺的石蜡切片来对比甲基睾酮对斑马鱼性腺的影响。通过对激素处理过程中斑马鱼的性腺发育、体长增长和成活率的观察，分析发现，实验组在甲基睾酮的作用下，斑马鱼的雌性卵巢发育受到抑制，卵巢结构变化明显，还会促进斑马鱼精巢的发育[1]。
1.2.3制作斑马鱼性腺石蜡切片（HE染色）
（1）随机取本组的斑马鱼若干，置于冰袋上，降低其活性，过一段时间后，对斑马鱼进行解剖，并选取起性腺，包括雌鱼的卵巢和雄鱼的精巢，然后用布温氏固定液24h，用70%的乙醇换洗三次，每次20min，然后用70%的乙醇在0～4℃中保存。
（2）脱水：在不同浓度的乙醇中逐渐脱水，80%的乙醇中20～30min，然后到95%乙醇中20～30min，之后到100%乙醇中20～30min中脱水两次。
1.1.2仪器设备
解剖镜、生物显微镜、电子天平、切片机、渗蜡器、中性树胶、水盘、单面切片、玻璃板、载玻片、解剖刀、石蜡、盖片
1.1.3实验试剂
饲料：30μg/g甲基睾酮饲料、95%乙醇、普通饲料
染料：布温氏固定液、不同浓度的乙醇（30%、50%、70%、85%、95%、100%）、100%乙醇（2）、100%乙醇（1）、1/2乙醇+1/2二甲苯、二甲苯、1/2甲苯+1/2石蜡、涂贴片剂（蛋清溶液）、二甲苯（2）、二甲苯（1）、蒸馏水、代氏苏木精、0.1%HCl、0.1%NaOH、0.5%伊红（含95%乙醇）
（6）修块：用单面切片，在玻璃板上修块，要求一蜡块一材料，蜡块或正方形或长方形，材料位于中央，各面平直，材料边缘与蜡块边缘约3mm。
（7）固着：将修好的蜡块用烧热的解剖刀固着在样品台上。
（8）切片：将样品固定在切片机样品壁上，调整位置，切面垂直，调节刀角、刀距，紧锁，刀角15～20°；厚度跳到最大进行粗切，顺时针摇动切片机切片至切到样品；厚度调至6～10μm进行细切，直到切到完整切片，并连续成带
8整理封片：将材料周围擦干净（用干纱布擦，勿引入水，过程中二甲苯不能干，可以随时补加），加1～2滴胶，加干净干燥的标签，盖片，贴标签，注明HE染色及部位。
（11）用生物显微镜观察，并拍照，处理照片。
2结果
本组为空白对照组，用普通饲料对斑马鱼进行饲喂。
2,1甲基睾酮对斑马鱼生长及存活率影响的实验结果
对斑马鱼进行饲喂的过程中斑马鱼的生长情况见表一。
关键词：斑马鱼；甲基睾酮；成活率；性腺发育
鱼类是较低等的脊椎动物，多数情况下幼鱼的性腺尚未分化，激素可以影响性腺的分化和发育。在鱼类中，对于已分化的性腺，外源激素可以改变个体的副性征、行为性别以及导致败育或者不孕不育，但一般不能改变性腺的分化方向。目前，目前大多数学者对于外源激素，如甲基睾酮，对斑马鱼性腺发育的研究[2,4]已经很多，一般都集中于斑马鱼的雌性性腺以及性别未分化的斑马鱼的影响，实验中多采用不同浓度的甲基睾酮处理斑马鱼，观察性腺发育情况。除此之外，作为一种重要的模式生物，应用甲基睾酮对斑马鱼性逆转的研究也不少，如邹记兴等采用外源混合激素硅胶药条肌肉埋植法诱导巨石斑鱼提早性逆转。本试验采用不同的饵料饲喂性腺已分化的斑马鱼成鱼，观察斑马鱼的生长情况你的和存活率，并通过组织学方法观察性腺变化，探讨甲基睾酮对斑马鱼卵巢和精巢的影响[3]。