激光显微切割
显微切割技术的原理和应用
显微切割技术的原理和应用1. 前言显微切割技术是一种精密的材料加工方法，通过显微镜和尖锐工具的组合使用，可以对微小物体进行切割、雕刻和加工。
本文将介绍显微切割技术的原理和应用。
2. 基本原理显微切割技术的基本原理是通过显微镜观察待切割物体，并使用尖锐工具进行精确的切割。
其具体步骤如下：1.选材：选择一种适合显微切割的物体，如纤维、生物样品、微电子元件等。
2.制备样品：将需要切割的物体进行固定和制备工作，如研磨、抛光等。
3.显微观察：使用显微镜观察待切割物体，调整显微镜的焦距和光源亮度，以获得清晰的视野。
4.定位：确认需要切割的位置，并进行标记。
5.切割：使用尖锐的工具，如显微刀、显微剪等，按照标记的位置进行精确的切割。
6.清洁：清洁切割后的样品，以便进行后续的使用或观察。
3. 应用领域显微切割技术在许多领域具有广泛的应用，主要包括以下几个方面：3.1 生物学显微切割技术在生物学研究中起着重要的作用。
例如，在组织学研究中，显微切割技术可以用来制作组织切片，以便观察和分析细胞结构和功能。
另外，在遗传学和分子生物学研究中，显微切割技术也可以用来切割和处理微小的生物样品，以进行基因测序和分析等工作。
3.2 材料科学显微切割技术在材料科学领域有广泛的应用。
例如，在纤维材料研究中，显微切割技术可以用来切割和处理纤维样品，以进行纤维结构和性能的分析。
另外，在微电子元件研制中，显微切割技术可以用来切割和加工微小的电子元件，以提高其性能和稳定性。
3.3 纳米技术显微切割技术在纳米技术领域也有重要的应用。
由于显微切割技术具有高精度和高灵活性的特点，可以用来对纳米材料进行精确的加工和切割。
这对于纳米器件的制备和研究具有重要意义。
3.4 医学显微切割技术在医学领域主要应用于病理学和微创手术等方面。
例如，在病理学中，显微切割技术可以用来制作病理切片，以进行疾病诊断和治疗。
另外，在微创手术中，显微切割技术可以用来进行精确的外科手术和组织修复。
激光捕捉显微切割技术操作流程
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Leica AS LMD激光显微切割系统
；
各种 固定剂 固定
H & E
染色 或不 染色
免疫细胞 化 学染色
荧 光切 片等组 织 切 片
均可 )
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以 上 为本科 室激 光 显 微 切 割 系 统 完成 样 品
：
切 割 下 的样 品 可 用 于 基 因组 分析
,
、
(如基 因突变
P C R
，
充分 显 示 出该技 术准确性 高
。
与形 态 学紧密结合
，
、
能
保 证 分 子 结 构 完整 等优越 性
了L M D 激 光 显 微 切 割 技 术
。
目前 国 际 上 很 多 重 要 的 研 究
其材料 的获取都利用
检测对象
：
组 织 切 片 (包 括
、
：
新鲜冷冻组 织
、
、
存档石 蜡包埋 组 织
、
、
细胞爬 片等
为 实验 提 供 科 学依 据
，
，
不 会 产 生 高热 和 高能量 影 响样 品
，
。
．
无 接触
u
无 污染
，
。
3 4
．
独 家高倍 镜 头 S
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15 0 x O IL
形 态 观 察更 清 晰
，
。
应 用 软件 控 制 可 采 集微 切 割 前 后 组 织 图像
，
在 显 微镜 下 可 观 察 回 收 的细胞
。
，
整
个切 割过 程 可 在 计 算机 屏 幕 上 实 时观 察
激光捕获显微切割技术用于分离混合斑中精子细胞
技 术与 激光 细胞 切 割技术 相 结合 ． 能够 在 显微 镜 的直
差 异 裂 解 法 是 传 统 的 分 离 和 提 取 混 合 斑 中 精 子
离 单 一 细 胞 亚 群 或 单 个 细 胞 的 新 技 术 ． 将 光 学 显 微 它
细胞 的 方法 … 。但 在 实 际 案件 中 ， 由于 受 检 材 条件 的 影响 （ 如精 子 量 过 少 或 者存 在 大 量 女 性上 皮 细胞 ） ，
１３ １ 不 同 比例 的 精 液 一阴道 上 皮 细 胞 混 合 液 配 制 及 ．．
Ｅ ａ ｎ ｔ ｎ Ｃ ｎｅ，Ｂｅ ｉｇ Ｐ ｂｉ Ｓ ｃ ｒ ｙ Ｂｕｅ ｕ ｅ ｉｇ １ ０ ９ ，Ｃ ｉａ ｘ ｍｉａｉ ｅ ｔｒ ｉ ｎ ｕ ｌ ｅ ｕ ｉ ｒａ ，Ｂ ｉｎ ０ １ ２ ｈｎ ） ｏ ｊ ｃ ｔ ｊ
Ａｂ ｔａ ｔ ｓｒ ｃ ：Ｏｂ ｅ ｔ ｅ Ｔ ｓｅｓ ｔｅ ａ ｐｉａｉｎ ｖ ｌｅ ｏ ａｅ ａ ｔｒ ｃｏ ｉ ｅ ｔ ｎ （ Ｃ ｊ ｃｉ ｏ ａｓ ｓ ｈ ｐ ｌ ｔ ａｕ ｆｌｓｒ ｃ ｐｕｅ ｍｉｒｄｓ ｃｉ ｖ ｃ ｏ ｓ ｏ Ｌ Ｍ）ｔｃ ｎｑ ｅ ｆｒ ｅ ｈ ｉｕ ｏ
ｉｏａ ｉｇ ｓ ａｌ ｕ ｅ ｏ ｓ ｅ ｍ ｃ ｌ ｆｏ ｓ ｌｔ ａ ｍ ｌ ｎ ｎ ｍｂ ｒ ｆ ｐ ｒ ｅｌ ｒ ｍ ｍ ｉｔ ｒ ｓ ｍｐ ｅ Ｍ ｅｈｏ Ｍｉｔ ｒ ｓ ｍｐ ｅ ｗｅ ｅ ｒｐ ｒ ｄ ｓ ｘｕｅ ａ ｌ． ｔ ｄｓ ｘｕ ｅ ａ ｌｓ ｒ ｐ ｅ ａ ｅ ｗｉ ｓ ｅ ｍ ｅｌ ａ ｄ ａ ｉ ａ ｅ ｉ ｅ ｉ ａ ｆｅ ｅ ｔ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔ ｎ ．Ｂｏｈ ＣＭ ｔ ｃ ｎ ｑ ｅ ｎ ｔ ｅ ｉ ｅｅ ｔ ｌ ｔ ｐ ｒ ｃ ｌｓ ｎ ｖ ｇｎ ｌ ｐｔ ｌ ｈ ｈ ａ ｔ ｄｉ ｒ ｎ ｃ ｎ ｅ ｔａｉ ｓ ｆ ｏ ｔ Ｌ ｅ ｈ ｉｕ ａ ｄ ｈ ｄｆ ｒ ｎ ｉ ｆ ａ
激光显微切割分离细胞的微量RNA质量鉴定体系的建立
获取 细胞提 取微量 Ｒ Ａ采用 Ｒ －Ｃ Ｎ ＴＰ Ｒ进 行质 量鉴定 是 一种操作 简 单 的稳 定 方法，可 以作 为 肿瘤基 因组研 究的有
效和 常规方 法 。
关 键词 ：激光 显微 切 割； ＴＰ Ｒ ＲＮ 完整 性；质 量鉴 定 Ｒ －Ｃ ； Ａ
Ｅｓａ ｌｓ ｍ ｅ ｆｔ ｅ ｐ ｐ ｌ ｏ ｔ ｂ ｉｈ ｎｔｏ ｈ ｉ ｅｉ ｆ ｒ ＲＮＡ ａ ｉｙ ａ ｓ ｓ ｍ ｅ ｒ ｍ ｈｅ ｎｅ ｑｕ ｌ ｓ ｅ ｓ ｎｔｆｏ ｔ ｔ
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摘要 ：探 索一套激 光显微 切 割（ａｅ ａ ｔｒ ｍｉｒｄｓｅ ｔ ｎ Ｌ Ｍ） 离细胞 后获 得 的微 量 Ｒ Ｌ ｓｒ ｐｕｅ ｃｏ ｉｓｃｉ ， Ｃ 分 ｃ ｏ ＮＡ质 量鉴 定标准 操
作流 程。选 取 ３个低 温保存 的 胃癌旁 组织 样本，冰 冻切 片进 行 甲酚 紫染色 和病 理学检 查， 用 激光 显微 切 割技 利
MMI CellCutPlus 激光显微切割系统 用户培训手册说明书
基因有限公司技术支持部 二零一九年 八 月MMI CellCut®Plus 激光显微切割系统培训手册目录一、CellCut®激光显微切割系统技术特点二、系统安装条件三、培训所需试剂设备及样品四、安装及调试安排五、培训程序及时间安排六、仪器及试剂系统介绍七、仪器使用培训八、维护保养九、常见问题处理十、常用快捷方式十一、注意事项附录一、CellCut®激光显微切割系统技术特点CellCut®激光显微切割（荧光）系统，是通过紫外激光切割需要分离的组织，然后通过有黏性的Eppendorf管盖进行收集，这样就可以将特定类型的细胞从组织切片上分离下来。
它主要应用于石蜡、冰冻切片，细胞培养片，以及细胞涂片等各种样本的特定类型细胞的分离。
它的应用涉及：通过细胞形态及基因分析对肿瘤的深入研究基因表达与疾病类型之间关系的研究肿瘤发生的特异的基因表达，基因组研究微卫星序列不稳定性基因定量，单细胞PCR蛋白质研究HGP，生物化学与分子生物学核酸研究，蛋白质研究生物芯片（DNA芯片，基因芯片，蛋白芯片）定量PCR，细胞生物学研究肿瘤学研究，病理学研究比较基因组杂交等众多研究领域二、系统安装条件1.稳定水平的操作平台放置设备，远离热源，避免阳光直射2.空间及载重要求：操作平台尺寸（长×宽×高）：150m×90m×71m以上3.温度要求：5℃-40℃4.湿度要求：50%（40℃）-80%（31℃）电源：220V AC，推荐配置不间断电源（UPS）。
5.其它：通用插头接线板（至少5个插孔）三、培训所需试剂及样品1.组织切片：进行显微切割需使用mmi膜片，这种膜片的一侧铺有一层PET膜，该膜为惰性材料，且几乎无自发荧光。
制片时，将样品平铺在膜片平整的一面，并且处于金属框内。
为了增加PET膜的黏性，同时清洁膜，可以使用紫外光照射PET膜15-30min，照射的时间不要超过30min，否则会破坏膜。
激光捕获显微切割技术及其在肿瘤基础研究中的应用进展
激光捕获显微切割技术（ Ｃ 是 ２ Ｌ Ｍ） Ｏ世纪 ９ ｏ年代末期 由
美 国 国立 卫 生 研 究 院 开 发 ， 由 Ａ ｃ ｒｓ 司 商 品 化 发 展 起 并 ｒｔ ｕ 公 ｕ
基 本 上 由软 件 控 制 ， 作 者 无 需 手 动切 割 。 整个 过 程 在 显 微 操
镜下进行 ， 可以直观地选取 目的细胞 ， 具有 “ 所见 即所得 ” 的
显微镜与 电脑相连接 以便对 激光进 行控制及 获得相 应 的图 像资料。 将 专用组织切片放置在倒置显微镜 的载物 台上 ， 在一个
与 标 准 Ｅ ｐｎ ｏｆ 配 套 的 扁 平 盖 子 上 贴 附 一 层 直 径 约 ６ ｐ ｅｄｒ 管
于 Ｌ Ｍ 仪器集普通光学 显微 镜和 荧光 显微镜 于一体 ， Ｃ 故除 了常规染料外也可把荧光染料 （ Ａ ＩＦＴ ｈｄｍｉ ） 如 Ｐ 、ＩＣ、ｏ ａ ｎ等 用 于样品的分离 ， 样不仅可以依据组织细胞的形态而且 可以 这
３ Ｌ Ｍ 技 术 在 肿 瘤 基 础 研 究 中 的 应 用 Ｃ
细胞上 。Ｅ Ａ膜受 照射后 瞬间温 度升 高使薄膜溶 解并 与其 Ｖ
下方的细胞 紧密粘连 ， 其黏附力远大于组织与载玻 片的黏附 力， 与薄膜相连 的细胞 可以被完整地从组织切片 中取 出而不
会损伤。这一过 程 可以在 盖 子表 面重 复进行 ， ～ 张 Ｅ Ａ 用 Ｖ 膜可以在切片的不 同部位快 速选取 大量被 选细胞 。然后将 黏 附有 细胞 的 盖 子 盖 在 装 有 微 量 缓 冲 液 的 Ｅ ｐ ｎｏｆ 上 ， ｐ ｅｄｒ 管 通 过洗 脱 使 细胞 与 薄 膜 分 离 而 获 得 完 整 的 细 胞 。 利 用 此 管
特 点 。而 且 速 度 快 ， 割 过 程 可 以 在 几 秒 内完 成 ， 练 的 操 切 熟
激光显微切割-单细胞PCR技术在霍奇金淋巴瘤IgH基因检测中应用
增 产物作模 板 ， 引物 Ｈ Ｂ Ｐ５Ｐ２２ Ｂ ． 。② Ｐ Ｒ反应 条件 ： ／ ． Ｃ 热
１２ 方 法 ．
１２ １ 待切割组 织切 片的制备 ．．
紫外线消毒后经多 聚赖氨基 酸处 理。使用 一次性切片刀 ， 切
片厚度 ｌ ５ ０～１ ｍ， 本同常规冷冻 、 基 石蜡切片制备过程 。 １２ ２ 免疫组 织化 学 ．． 选 用胰酶 消化抗 原修 复法 ， 以避免 高温抗原 修复 损伤 载片上 Ｅ Ａ膜 。按 Ｅ Ｖｓ ｎ法 操作 ， Ｖ ｎ ｉｏ ｉ 一 抗工作液 ３ ７℃孵育 ２ｈ或 ４℃ 过夜 ， 二抗工作液 ３ ７℃孵育
℃ 、４℃ 、ｌ℃ 、８℃ 依 次退火循 环 ， ６ ６ ５ 首轮扩 增循环 ４ ２次 ， 第二轮循环 ３ ６次 。 １２ ６ Ｉ 基 因重排检 测… ． ． ＃Ｉ Ｐ Ｒ反应 体系 中各 成分 的浓 Ｃ 度同上 ， 半巢式 Ｐ Ｒ首 轮扩增 引物 Ｆ ３ ／ＬＨ， 二轮 以 ３ Ｃ ＲＡ Ｊ 第 首 轮扩增产物 作为 模板 ， 引物 Ｆ ３ ／Ｖ Ｊ Ｒ Ａ ＬＨ。热启 动 ，５ ９ ℃预变性 ５ｍｎ 首 轮扩 增 ９ ｉ； ５℃ ２ｍｎ ６ ｉ、５℃ ４ｒ ｎ７ ｉ、２℃ ８ ａ ０ Ｓ 循环一次 ， 后接 ３ ５个循环 ， ９ 即 ５℃ ９ ，５℃ ６ ，２℃ ０ｓ６ ０Ｓ７ Ｌ Ｍ 专用 带 Ｅ Ａ膜 载片 Ｃ Ｖ ８ ； ０ｓ第二轮扩 增 ９ ￣ ０ ｓ６ ６ ，２℃ ６ ，２次循 ５Ｃ ６ ，５ ０ ｓ７ ０ Ｓ３ 环 ；２℃后延伸 ７ｒ ｎ ７ ａ 。 ｉ
激光捕获显微切割技术在食管鳞癌蛋白质组学研究中的应用
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ｌ ｉｅ ｇｌｅ ｃ ｈ ｒ ｉ （ － Ｅ ｔｃｎｑ ｅａ ｄ ｃｍｐｔｒａｓ ｔ ｍ ｇ ａ ｓ ｅｅ ｕｅ ｏ ａａ ｚ ｅ ａ ｄ ｅ ｌ ｔ ｏｅ ｓ ２ Ｄ ） ｈｉｕ ， ｏ ｕｅ－ｓｉｅ ｉａ ｅ ａｌ ｉ ｗ ｒ ｓｄ ｔ ｎｌ ｅ ｔ ｍ ｅ ｍｐ ｓ ｅ ｎ ｓｄ ｎ ｙｓ ｙ ｈ
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重 庆 医科 大 学 学 报 ２０／ 第 ３ ０ ＂年 ２卷 第 ２期 （ｏ ｍａ ｆ ｏ ｇ ｉｇＭｅ ｉ ｌ ｎｖ ｒｉ ０ ＂ Ｖ １ ２Ｎｏ２ Ｊ ｕ ｌ ｎ ｑｎ ｄｃ ｉ ｓｔ ２ ０ ． ｏ． ．ｌ ｏ Ｃｈ ａＵ ｅ ｙ ／ ３
激光捕获显微切割技术在胃肠道肿瘤研究中的应用
激光捕获显微切割技术在胃肠道肿瘤研究中的应用邢敬【期刊名称】《胃肠病学》【年(卷),期】2011(16)4【摘要】激光捕获显微切割(IJCM)技术是一种在显微镜直视下,通过激光捕获和切割从异质性组织中获得纯净目的细胞群或单个细胞的技术.该技术既解决了组织异质性问题,又不脱离体内环境,是连接病理学与分子生物学研究不可或缺的桥梁.我国是胃癌高发地区,近年来结直肠癌的发病率亦逐渐升高.为此,本文对LCM的操作步骤及其与多种技术结合,在胃肠道肿瘤研究中的应用作一综述.%Laser capture microdissection (LCM) is a technique that allows the procurement of pure cell populations or single cells from heterogeneous tissue under direct microscopic visualization. By this technique, the limitation of tissue heterogeneity can be solved and cells can be obtained while keeping their natural environment. Therefore, LCM can serve as an indispensable bridge connecting the pathological and molecular biological investigations. As the incidence of gastric cancer is high in China, and colorectal cancer becomes more prevalent in recent years, the procedure of LCM and its application in association with other techniques in studies of gastrointestinal tumors were reviewed in this article.【总页数】4页(P242-245)【作者】邢敬【作者单位】上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科上海市消化疾病研究所,200001【正文语种】中文【相关文献】1.激光捕获显微切割技术在肿瘤研究中的进展 [J], 孙昱皓;彭志海2.激光捕获显微切割技术及其在肿瘤研究中的应用 [J], 姚连生;韩惠霞;李湘平3.激光捕获显微切割技术在肿瘤研究中的应用 [J], 王行富4.激光捕获显微切割技术在肿瘤研究中的作用 [J], 滕小梅;吴伟华;赵饮虹;沈振亚5.组织芯片在胃肠道肿瘤研究中的应用进展 [J], 刘秀峰;施瑞华;郜恒骏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
激光显微切割在肿瘤研究中的应用
３２ 蛋 白质组学研究 ＿ ＬＤ Ｍ 技术与与二维凝胶电泳和生 物质谱等技术结合 ， 组成 了蛋 白质 组学技术 。该技术对人类基 因组在不同病理条件下所表达的蛋 白质组进 行研究 ，建立蛋白 “ 指纹 ”库 ，对疾病的早期诊断 、早期治疗具有深远 意义 。Ｌ ｗ ｉ ａ ｒ 等采用Ｌ Ｄ ｅ Ｍ 对结肠癌标本进行切割 ，分离 出结肠癌细胞和 正常 的结肠上皮细胞 ， 通过二维凝胶电泳 和质谱技术确定了细胞角蛋 白 ８（ｙ ｋｒ ｉ ８ 等３ ｃｔ ｅ ｔ ） 种在结肠癌 中特异改变的蛋 白质 ，可以进一步来确 ｏ ａｎ 定新的分子标志物或蛋 白质靶 ，对癌症进行早期诊断。
ｏ ｎ ｌ ｅｌ ｆｏ ｃ ｍｐ ｅ ｉ ｕ ｓ Ｂ ｏ ｅ ｈ ｉ ｕ ｓ １ ９ ｆ ｉ ｇｅｃ ｌ ｒ ｍ ｏ ｌｘｔ ｓ ｅ ． ｉｔ ｃ ｎｑ ｅ ， ９ ９； ２ ： ３ ８ ３ ５ ｓ ｓ ｓ ６ ２ —３ ．
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ｍｏ ｅ ｕ ａ ａ ｙ ｉ ｏ ｔ ｓ ｅ Ｓ ｉ ｎ ｅ １ ９ ，７ ：４ １ ４８ ． ｌ ｃ ｌｒａ ｌｓｓ ｆ ｉ ｕ ． ｃｅ ｃ ， ９ ７２ ８ １ ８ —１ ３ ｎ ｓ
［］ ａｅ— ｕａ Ａ Ｃ ｌｓ ｉ Ｒ Ｐ ｈｄ ， ｔ ． ａｅ ｐｕｅ ｃ ｄ ｓｃ—ｉ ４Ｓ ｒｚ Ｑ ｉ Ｃ ， ｏ ｔ ｎＳ ， ｏ ｉ Ｔ ｅ ａ Ｌ ｓｒ ａ ｔｒ ｍｉ ｏ ｉ ｅ ｔ ｎ ｕ ｎ ｄｅ ａ １ ｃ ｒ ｓ ｏ
激光捕获显微切割细胞的全基因组DNA扩增
ＴＧＧＡＡＣＣＡ
的偏差 。但从 Ｌ Ｍ获得 的有 限细胞中提 取的微量 Ｄ Ａ难 以 Ｃ Ｎ
满 足 多 基 因 、 位 点 、 次 检 测 的 需 求 ， 别 是 以 Ｄ Ａ芯 片 多 多 特 Ｎ
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病 理 学杂 志 ２Ｏ Ｏ２年 ２月 第 ３ 卷 第 １ ｌ
２０ ０ ２．Ⅷ
３１ ．№ ． １
低倍 电子显傲镜下 的观 察结果 相媲美 。树脂 包埋薄 切片 的
天 青 一 蓝 染 色 还 可 对 周 围 神 经 进 行 形 态 测 量 学 研 究 ， 观 美 在
中华 病 理 学杂 志 ， ９８２ ：２５ １９ ７ ３ ． （ 收藕 日期 ：０１ １１ ） ２０ ＂ ．７ ０
诊断方面可以比石蜡切片提高分辨率 ， 为明确诊 断提供更详 细的信息 在光 学显 傲镜下 显示 很多微细的结构甚 至可 以与
（ 本文编辑 ： 常秀青 ）
激光捕 获 显微 切 细胞 的全 基 因组 Ｄ Ａ扩 增 Ｎ
胞 、 纤 维 细胞 等 多种 成 分 。在 肿 瘤 分 子 病 理 学 和 基 因组 学 成 研究 中 ， 除 非 肿 瘤 细 胞 污 染 对 实 验 结 果 的 影 响 尤 为 重 排 要 … 。 激 光捕 获 显 微 切 割 （ ｓｒｃｐ ｒ ｎｃｏＪ ｎ Ｌ Ｍ） １ ｅ ａｔ ｅ ｆｒ ｓ ａ ｕ ｉ ｄ 唧 。Ｃ 是 在 显 散 镜 下 从 组 织 切 片 中 分 离 、 化 单 一类 型细 胞 群 或 单 纯 个 细 胞 的技 术 。 它 能 有 效 地 解 除 组 织 中 细 胞 异 质 性造 成 ２ Ｊ
SLuCUT—A全自动激光显微切割系统植物染色体切割的研究
进行染色体切割 、 分离和收集研究 ， 但这三种仪器设 备操作 复杂 、 技术难度大 、 污染较重 、 分离 的 目标染 被
显微切割技术
显微切割技术中国医科大学科学实验中心显微切割技术( 显微切割技术(Microdissection) Microdissection)：是在显微 状态或显微镜直视下通过显微操作系统对欲 选取的材料（组织,细胞群，细胞，细胞内组 分或染色体区带等）进行切割分离并收集用 于后续研究的技术。
显微切割技术实际上属 于在微观领域对研究材料的分离收集技术， 因此应用此技术往往是许多要深入的研究工 作中起始的重要一步。
是一种有效的细胞纯化技术， 是一种有效的细胞纯化技术 ， 可在基本不损伤细 胞内DNA 胞内DNA、 DNA 、RNA和蛋白质并保持组织细胞结构完整的条件 RNA 和蛋白质并保持组织细胞结构完整的条件 下，从组织中分离出同质细胞群 从组织中分离出同质细胞群、 同质细胞群、单个细胞甚至亚细胞 结构。
结构。
技术的必要性： 技术的必要性： 研究对象的异质性 研究对象的异质性 研究材料日趋微小 研究材料日趋微小基于流式细胞术 流式细胞术的荧光激活细胞分选： 流式细胞术 显微切割是目前从组织或细胞单层分离亚群细 显微切割 胞的有效方法，同时实现将组织中每种细胞群显微切割技术能够使作为研究对象，其分子表达谱会非常接近体内 状态 离心技术我们分离得到特异的 目的细胞，而没有周 围细胞的污染。
显微切割的特点2“原位”，利用显微切割技术是在组织细胞或染色体的原位取材，1 “细微”，由于是在显微状态并采用特殊的分 离收集手段，显微切割的对象可以达到微米 级，显微切割的精度可以达到毫微米级，因此 利用显微切割技术可以分离收集到象核仁和包 涵体及染色体特异区带这样细微的对象 。
因此所取材料的定位清楚，所研究对象的历史背景明确。
例如何杰 金氏淋巴瘤中瘤组织成分多样,特征性的瘤细胞(R-S细胞及其变异 型)占细胞成分的2%左右,且呈散在性分布,如果常规地用组织匀浆 的方式从组织中提取蛋白质或核酸，则既包含了来自瘤细胞的成 分，又包含了来自淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细 胞、组织细胞等多种非瘤细胞的成分,这样所提的蛋白质或核酸来 自何种细胞并不清楚，而如果用显微切割技术则可以选择我们需要 的细胞，以使研究对象的历史背景明确 。
激光捕获显微切割技术及其在肿瘤研究中的应用
激光捕获显微切割技术及其在肿瘤研究中的应用激光捕获显微切割技术（Laser Capture Microdissection，LCM）是一种通过激光束精确切割组织样本的技术，可以在细胞水平上收集纯净的细胞或组织。
它主要应用于肿瘤研究中，可以帮助研究人员获取纯净的肿瘤细胞，分析和研究这些细胞的特征和功能。
激光捕获显微切割技术的原理是利用激光微束直接切割目标细胞，然后将切割下的细胞收集到特殊材料上，通过滤纸迅速吸附，最后可以用于进行进一步的分析，如基因组测序、蛋白质组学分析等。
这种技术可以避免传统切片技术中细胞混合的问题，保证提取到纯净的细胞或组织。
在肿瘤研究中，激光捕获显微切割技术具有以下几个重要的应用：1.分离肿瘤细胞：利用激光捕获显微切割技术可以选择性地分离肿瘤细胞，从而研究和分析这些细胞的生物学特征。
相比传统方法，LCM可以更准确地分离肿瘤细胞，避免混杂其他细胞的污染。
2.基因组学研究：通过激光捕获显微切割技术可以获取纯净的肿瘤细胞，进一步进行基因组测序分析。
这有助于了解肿瘤的发生机制和基因表达变化，寻找潜在的致癌基因或抑癌基因。
3.蛋白质组学研究：激光捕获显微切割技术可以用于收集肿瘤细胞，然后进行蛋白质分析，如蛋白质组学研究、质谱分析等。
这有助于寻找和鉴定肿瘤细胞中的蛋白质标志物，为肿瘤诊断和治疗提供新的靶点。
4.生物标记物研究：通过激光捕获显微切割技术可以选择性地获取肿瘤组织中的特定细胞或区域，研究和鉴定细胞内的生物标记物。
这有助于开发针对特定细胞亚群的个体化治疗策略。
尽管激光捕获显微切割技术在肿瘤研究中有许多优势，但它也存在一些限制。
首先，该技术需要专业的仪器设备和经验丰富的操作人员，成本较高。
其次，激光捕获显微切割技术在样本处理过程中可能导致细胞或组织的染色质、RNA和蛋白质的损失。
因此，在应用该技术时需要在实验设计和操作中严格控制条件。
总之，激光捕获显微切割技术是一种非常有潜力的技术，在肿瘤研究中具有重要应用价值。
显微切割技术
能够确保后续试验成果旳可靠性！
例如
霍奇金淋巴瘤中瘤组织成份多样， 特征性旳瘤细胞（R—S细胞及其变异型） 占细胞成份旳2％左右，且呈散在性分布， 假如常规地用组织匀浆旳方式从组织中 提取蛋白质或核酸，则既包括了来自瘤 细胞旳成份，又包括了来自淋巴细胞、 浆细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、 组织细胞等多种非瘤细胞旳成份，这么 所提旳蛋白质或核酸来自何种细胞并不 清楚，而假如用显微切割技术则能够选 择我们需要旳细胞，以使研究对象旳背 景明确；
1. 2. 怎样对已切割旳细胞进行分析
2.
显微切割后取得旳材料能够用于提取
蛋白质、DNA和RNA等用于Western Blot，
Southern Blot，Northern Blot，PCR等蛋白
质和核酸旳有关分析。
4.
3. 活细胞显微切割后还能够继续培养
（五）显微切割旳影响原因 1. 一切与显微切割结合旳技术中旳影响原因均为显微切
Building 10, 9000 Rockville Pike, Bethesda, MD 20892, USA. Comment on: Abstract
肝期约氏疟原虫的激光俘获显微切割和分子分析
参数中个体间变异影响因素的有效工具。这 些 资料 随后 可 用 于 设 计 理 想 的给 药 方 案 ， 从 而使 药 物治 疗 更安 全有 效 。
（ 杨 彬摘 官亚宜校 ）
Байду номын сангаас
析可估计个体药代动力学参数。其缺 点为： １研究 前 必 须 了解初 步 的 药 代 动 力学 资料 ， ）
２ 比传 统方 法 更 复 杂 ， ） 要 数 学 和 统 计 学 ） ３需 专业人 才 ，） 作 大量 的计算 机统 计工 作 ，） ４需 ５ 收集 资料过 少 ， 足 以可 靠 地 描 述 药 代 动 力 不
学模型。 本 文 作者 对 ２ ７例 单 纯性 恶 性疟 患者 进 ５
１ ２ 肝 期 约 氏 疟原 虫 的激 光 俘获 显 微 切 割 ４
托 喹 酮 的研 究 结果 。
群 体药 代 动 力学研 究 的设 计 是一相 对较 新 的研 究 领 域 ， 精 确 的方 法 学 尚 待 确 立 。 其 计 算机 模拟 和 理想 设计 方 法可 用 于确定 采样 时间和 样本 大 小 。将 给予 研 究 者 一 个 “ 样 采 窗”在 此段 时 间 内必 须收 集血 样 。在整 个研 ， 究 期对 患者 采 样 以便 确定 药代 动 力学参 数 的
从 每个 个体 多 次重 复取 血 ， 童 、 儿 老人 和重 病 者 难 以做 到 ； 分 析 方 法 过 高 估 计 了个 体 问 其
利用度与原虫更 迅速的廓清相关联。由此 ， 分 次 给药 的治 疗优 势 用较 多 的患者 中采 集 的
相 对少 的样 品 的资料 得到 了证 明 。本文 作者 还 列举 了对 Ｌ ｍｅａｔｉｅ青 蒿 素 、 胍 和 阿 ｕ ｆｎｒ 、 ｎ 氯
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Annotation: How to prepare frozen section
1. 取 材：取新鲜的组织。 2. 固 定：组织固定于10%中性福尔马林,冰冻切片。 3. 切 片：
利用切片机的厚度调节旋钮调节切片厚度，调整切片角度， 安装切片刀。 将样品放到样品托上，利用包埋剂固定，放到冷台上冷冻， 在即将完成冷透前用热交换装置压平。 将样品放到样品头上，用样品快进按钮将样品移近刀口， 利用慢进按钮开始修片，修好后即可放下防卷板切片，使 切出的样品进入防卷板与刀片的狭缝，取出后染色观察
激光捕获显微切割技术 Laser Micro-Dissection (LMD)
Definition of LMD
显微镜下用手工或仪器采样的方法从组织切 片或细胞涂片上将所要研究的形态或表型相 同的细胞从组织三维构造中分离出来，获得 纯的细胞群（pure cell population），以备 进一步作分子水平的研究。显微切割技术的 贡献就是克服了组织的细胞成分非常繁杂这 一重大的缺点。 Laser captuHale Waihona Puke e microdissection
RNA
Protein
Introduction of Leica LMD6000
紫外激光 UV Laser 热塑膜：保证生物 大分子不受损害 自动辨别样品
Work fashion of Leica LMD6000
重力掉落方式, 掉落到指定的 PCR ( RTPCR ) 盖子上 组织：石蜡切片/冰冻切片/活细胞 LMD 专用 SmartCut UVI-镜头: 6.3x, 10x, 20x, 40x, 63x, 100x. 150x
Weakness of LMD
用仪器和耗材昂贵；QIAGEN 染色时对后续反应可能有影响； 对涂片的要求比较苛刻等。
Use Of LMD
Cancer
肿瘤基因突变检测 肿瘤特异基因表达分 析 杂和性丢失检测 微卫星序列不稳定性 分析 新基因发现 核酸及蛋白质的定量 研究 染色体畸变分析 细胞局部病变病因学
含热塑膜 特制玻片，成本约40元/片
Cutting of paraffin section
石蜡包埋 HE染色
Multiple cutting of brain section
连续切割 容易出现切割不下来，需要手动辅助
Living cell cutting of LMD6000
荧光显微镜下切 割活细胞
The History of LMD
1965 ，Baxter TJ，肾小管 1990‘s ，紫外激光切割超薄膜上的组织 1996，NIH，红外激光光源，转运膜技术 美国Arcturus 公司：热塑膜 德国PALM 公司：激光脉冲所产生的压力
Advance of LMD
⑴无破坏性，用于粘附目的细胞的热塑膜厚度约为 100～200 μm, 能够吸收激光产生的绝大部分能量， ⑵高精确性，激光定位的准确程度可以达到1 μm， 切割直径可以小到2 μm，捕获点范围达到3～5 μm， ⑶高效率，每次激发耗时不超过1秒, ,单张转运膜 可以一次捕获上万个细胞； ⑷自动化程度高，全电脑操作 ⑸无污染，使用全封闭操作，能避免外来物质的污 染。
Specimen placement of LMD6000
载片台上有三个平行 载片夹 切割时视野只在单一 玻片内
Collection tube
A/B/C/D四个收 集孔，管盖固定 在收集孔上
Focus Mode
电动控制焦距调节 步幅小 稳定
Special Glass slide
Pathology and Forensic
组织切片 冰冻切片检验。 法医学中的各种细胞涂 片,目前常见的法医物 证检材如液体类(精液、 血液、唾液、精阴混和 液)、斑迹类(精斑,血斑, 唾液斑,混和斑等)等
Note the use of LCM
DNA
分析基因组DNA 时, 细胞越大, 则需要切割更多的细胞, 才能保证 包含细胞的全部基因组 保持基因组的相对完整性, 避免在样品处理过程中造成DNA 的降 解和断裂 建议样本使用冰冻组织块, 同时用Trizol 法抽提原始组织样本RNA, 鉴定样本降解情况,确保样本质量。 常规HE 染色,伊红和苏木精配好后用DEPC 可以根据需要制备总蛋白, 或膜蛋白, 或核蛋白等, 也可以富集糖 蛋白 通过去除白蛋白来减少蛋白质类型的复杂程度。