临床检验仪器第十四章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪习题

第十三章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪

一、名词解释

1.荧光标记引物法：将荧光染料预先标记在测序反应所用引物的5′端，称为荧光

标记引物法。

2.荧光标记终止底物法：将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上，

称为荧光标记终止底物法。

3.多色荧光标记引物法：是DNA测序反应常用的一种荧光标记方法。将荧光染料

预先标记在测序反应所用引物的5′端，当相同碱基排列的寡核苷酸链作为骨架分

别被4种荧光染料标记后，便形成了一组（4 种）标记引物。特定颜色荧光标记的

引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关系。

4.多色荧光标记终止底物法：是D NA 测序反应常用的一种荧光标记方法。将荧光染

料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。反应中将4种d dNTP 分别用4种不同

的荧光染料标记，带有荧光基团的ddNTP 在掺入DNA 片段导致链延伸终止的同时，也使该片段3′端标上了一种特定的荧光染料。根据荧光颜色的不同来判断所代表

的不同碱基信息。

5.Edman降解法：是检测蛋白质一级结构的方法。在弱碱条件下，多肽链N末端N H2

与P ITC 反应，生成PTC－多肽。在无水强酸如三氟醋酸的作用下，可使PTC－多

肽形成ATZ 衍生物和一个失去末端氨基酸的剩余多肽。剩余多肽链可以进行下

一次以及后续的降解循环。如此不断循环，可依次使多肽链的氨基酸逐一降解，

形成A TZ 衍生物。ATZ 衍生物经水溶酸处理转化为稳定的P TH 氨基酸。

6.Sanger 双脱氧链末端终止法：是检测D NA 序列的一种方法。其原理是利用P CR，但反应体系中除了dNTP 外，还有ddNTP。ddNTP 可掺入到正在延伸的DNA 链中，

但不能同后续的dNTP 形成磷酸二酯键，从而使正在延伸的DNA 链在此终止。由于

存在ddNTP 与dNTP 的竞争，生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。

7.平板电泳型DNA测序仪：为D NA 测序仪的一种类型。平板型电泳的凝胶灌制在两块玻璃板中间，聚合后厚度一般小于 0.4mm 或更少，因此又称为超薄片层凝胶电泳。它具有样品判读序列长（600bp～900bp）、一块凝胶板上可同时进行多个样品测序的优点。

8.毛细管电泳型DNA测序仪：为D NA 测序仪的一种类型。将凝胶高分子聚合物灌

制于毛细管中（内径50m～100m），在高压及较低浓度胶的条件下实现D NA 片

段的快速分离。

9.缩微生物处理器：是一种新型D NA 自动测序装置。其基本结构为3层玻璃薄片和

一层聚二甲基硅氧烷薄片，各层间紧密粘合形成圆盘状，直径仅 10 厘米。在

这些薄片之间有各种反应小室、毛细管电泳通道和微瓣膜，可完成纳升级标本

的S anger DNA 测序。

二、选择题

【A型题】

1.DNA的一级结构是指（B）

A.DNA空间构象

B.核苷酸序列

C.碱基序列

D.氨基酸序列

E.DNA双螺旋结构

2.下列有关测序反应体系反应原理的叙述中，错误的是（C）

A.加入的核苷酸单体为2’-脱氧核苷三磷酸

B.低温退火时，引物与模板形成双链区

C.沿着3’-5’的方向形成新链

D.DNA聚合酶结合到DNA双链区启动DNA的合成

E.形成的新生连与模板完全互补配对

3.双脱氧链末端终止法测序反应与普通体外合成DNA反应的主要区别是（E）

A.DNA聚合酶不同

B.dNTP的种类不同

C.dNTP的浓度不同

D.引物不同

E.双脱氧链末端终止法测序反应体系中还需加入ddNTP

4.下述荧光标记方法中，可以将A、C、G、T四个测序反应放在同一管中完成而不影响测序结果的是（D）

A.单色荧光标记引物法

B.单色荧光标记终止底物法

C.多色荧光标记引物法

D.多色荧光标记终止底物法

E.多色荧光标记法

5.下述那一荧光标记法，必须将A、T、C、G四个测序管分管进行，但可以合并在一个泳道内电泳（C）

A.单色荧光标记引物法

B.单色荧光标记终止底物法

C.多色荧光标记引物法

D.多色荧光标记终止底物法

E.多色荧光标记法

6.毛细管电泳型测序仪电泳时仪器显示无电流，最常见的原因是由于（B）

A.电极弯曲

B.电泳缓冲液蒸发使液面降低

C.毛细管未浸入缓冲液中

D.毛细管内有气泡

E.测序样本为注入毛细管中

7.毛细管电泳型测序仪电泳时产生电弧，主要原因是（C）

A.电泳缓冲液漏出

B.电泳缓冲液配置有误

C.电极、加热板或自动进样器上有灰尘沉积

D.测序样本纯化不完全，含有盐性成分

E.加热温度过高

8.全自动DNA测序仪的主要应用范围，不包括（E）

A.人类遗传病、传染病和癌症的基因诊断

B.法医的亲子鉴定和个体识别

C.生物工程药物的筛选

D.动植物杂交育种

E.新蛋白质的鉴定

9.蛋白质测序仪的基本工作原理，主要是利用（A）

A.Edman降解法

B.双脱氧链末端终止法

C.化学降解法

D.氧化-还原法

E.水解法

10.蛋白质测序仪主要检测（D）

A.核苷酸序列

B.核糖核酸序列

C.碱基序列

D.氨基酸序列

E.脱氧核糖核酸序列

11.下列有关双脱氧链末端终止法测序原理的叙述中，不正确的是（D）

A.其基本原理是利用DNA的体外合成过程

B.反应体系中需加入dNTP和ddNTP

C.ddNTP可以形成磷酸二酯键而掺入到DNA链中

D.dNTP掺入后导致新合成链在不同的位置终止

E.生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段

12.下列有关多色荧光标记终止底物法的叙述中，不正确的是（E）

A.需将4种ddNTP分别用4种不同的荧光染料标记

B.标记和终止过程在同一时间完成

C.A/T/C/G四种反应可以在同一管中完成

D.可在一个泳道内完成电泳测序

E.荧光染料标记过程和延伸反应终止分别发生在同一DNA片段的两段

13.下列有关荧光标记DNA的检测原理的叙述中，不正确的是（A）

A.用于测序的产物绝大多数应为单链

B.DNA片段上的荧光基团可吸收光束提供的能量而发射出特征波长的荧光

C.两极间的电势差推动DNA片段从正极向负极泳动并达到相互分离

D.不同颜色的荧光与不同的碱基信息相对应

E.测序结果中，纵轴表示荧光波长种类和强度

14.下列有关Edman降解法基本原理的叙述中，错误的是（C）

A.PTC-多肽的生成是在弱碱性条件下

B.PTC-多肽的生成反应需用过量的试剂使有机反应完全

C.在无水强碱的作用下，可使靠近PTC基的氨基酸环化，形成ATZ衍生物和一个失去末端氨基酸的剩余多肽

D.剩余多肽链可以进行下一次以及后续的降解循环

E.ATZ衍生物经水溶酸处理转化为PTH氨基酸

15.毛细管电泳型DNA测序仪电泳时仪器显示无电流，最常见的原因为（C）

A.缓冲液配置错误

B.毛细管内有气泡