实验大肠杆菌基因组DNA的提取

大肠杆菌基因组DNA的提取

1．吸1ml大肠杆菌DH5α至1.5 ml离心管中，10000rpm离心30秒；

2．吸干上清液，菌体充分悬浮于0.5 ml裂解液（10 mM Tris, 100 mM NaCl, 10 mM EDTA, 0.5% SDS, pH8.0）;

3．加12.5 μl 10 mg/ml proteinase K, 混匀，37℃水浴1小时；4．加250 μl 6 M NaCl, 剧烈振荡30秒；

5．冰浴10 min后9500rpm离心10min;

6．转移500 μl上清至1.5 ml离心管中，加1 ml无水乙醇，颠倒混匀直至看清沉淀；

7．10000rpm离心5min, 吸干上清，沉淀溶于300μl水中；8．加15μl 2 mg/ml RNaseA, 混匀，37℃水浴1小时；9．加150μl饱和酚及150μl氯仿，振荡10秒后10000rpm 离心1 min；

10．上清转移到1.5 ml离心管中，加2.5倍体积无水乙醇,混匀；11．10000rpm离心2min, 吸干上清，沉淀用0.5 ml 70%乙醇洗涤一次，吸干乙醇，室温晾干(~10 min)；

12．沉淀溶于300μl水中，取10μl电泳观察，其余置-20℃冻存备用。