药物制剂的微生物检验

三、影响抗菌试验的因素
1、试验菌种 在抗菌试验中所用到的菌种，必需是国家
卫生部生物制品检定所菌种保藏中心专门提供 的标准菌株。在特殊情况下，也可以采用临床 新分离的并经过鉴定、纯化及合理保藏的菌株。 而且我们要用到的试验菌种应该选择是对数期 生长的菌。因为那时菌种生命力最旺盛，这对 于我试验测定的结果也会准确些。
浓度范围内抑制细菌生长的原理进行的。一般 用于细菌和酵母菌的药敏试验。
1） 滤纸片法（纸碟法）
滤纸片法是最常用的方法，适用于新药的初筛 试验（初步药物是否有抗菌作用）及临床的药敏试 验。
滤纸片分湿、干两种，可以在试验时用无菌纸 片沾取药物溶液放在含菌的平板表面，也以预先做 成一定浓度的干燥纸片。一般来说预先做成的干燥 纸片实用一些而且准确一些。
2、 培养基
试验所有到的培养基应按各试验菌的营养 要求进行配制，严格控制各种原料、成分的质 量及培养基的配制过程。要注意当有些药物具 有抗代谢作用时，培养基应不能存在代谢物， 否则抑菌作用将会被消除。培养基内如果含有 血清等蛋白质时，有可能与某些抗菌药物结合， 使抗菌药物失去，所以就要避免培养基混进这 类营养物。
药物的抑菌作用或杀菌作用是在一定条 件下相对而言的。在我们检测时，药物的作 用受到用药时培养基的组成、温度、PH值及 所用的菌种、菌量等各个因素有关。
虽然说体外抗菌试验有很多优点，但是 由于体外抗菌试验没有复杂的体内因素影响， 因此药物体外抗菌试验和体内抗菌试验可能 会出现不一致的结果。所以，一般我们在体 外对药物进行测试后，有效的药再要进行体 内试验，如果体内试验再次证实此药有效的 话，才能推荐应用到临床。
3、 供试药物 药物的物理状态、浓度、稀释方法等都
会直接影响抗菌试验的结果，必需精确配制。 如果是固体药物，必需使药物溶解或使药物 呈均匀悬液。PH值应调至中性，以确保药物 的稳定性和不影响细菌的生长。中草药因为 有颜色和含有鞣质，结果的判断，应特别注 意。
四、对照试验
为确保试验结果的科学性和准确性， 试验时应同时进行各种对照试验。
世界卫生组织规定了抗菌药物的敏感性评定标准，在标准实验条 件下根据抑菌圈大小来判断，比如：
抗生素或化疗药物
耐药
抑菌圈直径（mm）
中敏
敏感
氯霉素 红霉素 四环素 卡那霉素
≤12 ≤13 ≤14 ≤13
13-17 14-17 15-18 14-17
≥18 ≥18 ≥19 ≥18
(2)挖沟法 (3)打孔法
第十七章 药物制剂的微生物检验
第一节 体外抗菌试验
药物的体外抗菌试验包括用于区别药物是抑 菌或杀菌药物的抑菌试验；测定药物杀菌活性 的杀菌试验；以及检查两种药物联合作用的联 合抗菌试验等。一般抑菌药物只能抑制微生物 生长，不能杀死微生物，抑菌药物被除去，微 生物又可以恢复继续生长。杀菌药物能杀死微 生物，杀菌药物除去后，微生物仍然不能生长。
3、酚系数测定（石炭酸系数测定） 酚系数是以酚为标准，将待测的化学消毒剂
与杀菌效力相比较，所得的就是杀菌效力的比值。 由于各种化学消毒剂杀菌原理各不相同，因
而这种方法仅仅适用于酚类消毒剂杀菌效力的测 定。
具体的测定方法是分别将酚及待测化学消毒 剂按不同比例稀释，各取5ml放到试管中，再加 入经24小时培养后的菌悬液各0.5ml，混匀后放 入 20℃水浴中，5、10、15分钟分别取一接种环 混合液移种到另一支5 ml的肉汤培养基中，37℃ 培养24小时记录生长情况。
FIC指数
0.5为协同作用； 0.5－1为相加作用； 1～2为无关作用； ＞2为拮抗作用。
[棋盘法的设计]
棋盘法的主要优点在于甲、乙两药的每个药物浓 度都有单独的和与另百度文库个药物不同浓度的联合，因此 能精确测定两种抗菌药物在适当浓度的比例下所产生 的相互作用。
在进行棋盘法之前应先测定两种抗菌药物单独对 受试菌的MIC，然后以两药MIC的8倍、4倍、2倍、1 倍以及MIC的1/2、1/4、1/8浓度（或4倍、2倍、1倍、 1/2、1/4浓度）分别进行联合。可见举例，如表—1的 青霉素G与链霉素联合药敏实验。
2、 活菌计数法 将定量的试验菌加入到一定浓度的定量药
物中，作用一定时间后，取样进行活菌数计数， 从存活的微生物数量计算出药物对试验菌的致 死率，从而判断药物的杀菌能力。
活菌计数一般是将定量的药物与试验菌作 用后混合液稀释后，混入琼脂培养基做成平板， 培养后数平板上形成的菌落数，由于一个菌落 是由一个细菌繁殖而来的，所以可以用菌数乘 以稀释倍数，计算出混合液中存活的细菌数。
试验菌对照：在无药情况下，应能在 培养基内正常生长。
溶剂及稀释液对照：配制抗菌药物时 所用的溶剂及稀释液均应无抗菌作用。
已知药物对照：应使已知抗菌药物对 标准菌株出现抗菌效应。
第二节 体内抗菌实验
1、试验动物 2、试验菌 3、感染过程 4、药物的体内药效评价
药物及浓度
链霉素 （µg／ml）
64 32 16 8 4
青霉素G(IU／m1) 4 2 1 0.5 0.25
-- -- -- -- -- -
---++ ++
青霉素G单药对照
--
-
++
链霉素单药对照
+ +
细菌对照
-：无细菌生长 +：有细菌生长 FIC指数=1／1+16／16=2——无关
2.纸条试验 在含菌平板上垂直放两条浸有不同药液的滤纸 条，培养后观察两药形成的抑菌区的图形来判 断两药联合应用时，是无关、协同还是拮抗作 用。
单独抗菌活性； ③累加作用，两种药物联合作用时的活性
等于两种单独抗菌活性之和； ④协同作用，两种药物联合作用显著大于
其单独作用的总和。
1、棋盘稀释法 常用的定量方法，首先分别测定拟联合
的抗菌药物对检测菌的MIC。药物最高浓度为 MIC的2倍，对倍稀释。两种药物的稀释分别 在方阵的纵列和横列进行，这样在每管（孔） 中可得到不同浓度组合的两种药物混合液。 接种菌量为5×105CUF／ml，35℃孵育18h后 观察结果。计算部分抑菌浓度（FIC）指数。
（二）体外杀菌试验 杀菌试验是用来评价药物对微生物的致
死活性的。 1、最低杀菌浓度（MBC）（最小致死浓
度MLC）的测定 按液体培养基稀释法的操作方法测定药
物的MIC。然后把未长出菌的各个试管培养液 分别移种到无菌平板上，培养后凡是平板上 无菌生长的药物最低浓度就是最小致死浓度 （MLC）。如果是细菌的话可以称为最小杀菌 浓度（MBC）。
（1）液体培养基连续稀释法
(2)固定培养基连续稀释法
1)平板法 将系列浓度的药物混入琼脂平板， 用微量加样器或多点接种仪接种试验菌， 可在一组平板上测定多种试验菌的MIC。
2)斜面法 将不同浓度的药物混入培养基中 制成斜面，然后在斜面接种一定量试验菌， 培养后观察其MIC值。
2.琼脂扩散法 利用药物在琼脂培养基中扩散，并在一定
二、药物的体内抗菌试验
药物的体内抗菌试验又称为动物实验治疗试验或保 护力试验。当抗菌药物进入机体后，其效力的发挥要 受体内各种因素的影响。如血液及组织内的蛋白质或 磷脂、脓汁内的核酸均与药物结合，降低药物的活性； 坏死组织内的酸性环境也能影响药物的活性。机体内 的微生物，代谢活动较低，对药物的敏感性降低，有 时还可形成细胞壁缺陷型细菌，对某些药物不敏感。 机体内各组织中药物的吸收，分布不同，使药物的浓 度难以恒定。因此在评定新药的药效时除做体外抗菌 试验外还需要做体内的抗菌试验。
一、药物的体外抑菌试验
（一）体外抑菌试验
药物的体外抑菌试验是常用抗菌试验方法，其 中最常用的方法用系列稀释法和琼脂扩散法。
1、连续稀释法 稀释法有液体培养基连续稀释法和固体
稀释法（斜面法）两种。这两种方法都可以 用来测定药物的最小抑菌浓度（MIC）：是 指该药物能抑制细菌生长的最低浓度，通常 用μg∕ml或U/ml表示。
（三）联合抗菌试验
联合抗菌试验主要用于测定两种抗菌药 物联合应用时的相互影响。两种抗菌药联合 应用时抗菌作用加强的称为协同作用；抗菌 作用减弱的称为拮抗作用；相互无影响的称 为无关。常用的联合抗菌试验的方法有以下 几种。
出现4种结果： ①无关作用小，两种药物联合作用的活性
等于其单独活性； ②拮抗作用，两种药物联合作用显著低于