微生物-金黄色葡萄球菌 PPT
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实验十二金黄色葡萄球菌(共40张PPT)
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公式二
A1B1/C1=155×3÷5=93 A2B2/C2=17×4÷5=14
T=(93+14)/1.1d=127÷1.1÷0.1=970
结果报告
单位:cfu/g或cfu/mL 如T值为0，报告 ＜1× d cfu/mL
（g）。
检样
检样25g(mL)+ 225ml灭菌生理盐水，均质。
取新鲜配置兔血浆 0.
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比 3 mL，振荡摇匀，置 36 ±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积
大于原体积的一半，被判定为阳性结果。
典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙 并干燥。
典型菌落计数和确认
品匀液接种到10%NaCl 胰蛋白胨大豆肉汤管，每个稀释度接种3管，将上述接种物36℃±1℃培养，45h～48h。
平板和血平板， 血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h A2B2/C2=17×4÷5=14
Baird-Parker平板
～24 h。Baird-Parker平板 36 ℃±1 ℃培养 18 Baird-Parker平板，血平板
B-P平板18h~24h或45h~48h 也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 用于做血浆凝固酶的菌落数
将上述培养物， 分别划线接种到 Baird-Parker 取新鲜配置兔血浆 0.
根据对样品污染状况的估计，选择3个适宜稀释度 的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样
3.9 革兰氏染色液：见附录 A中 。 3.10 无菌生理盐水：见附录 A中 。
四、实验内容及操作
金黄色葡萄球菌定性检验程序见图
公式二
A1B1/C1=155×3÷5=93 A2B2/C2=17×4÷5=14
T=(93+14)/1.1d=127÷1.1÷0.1=970
结果报告
单位:cfu/g或cfu/mL 如T值为0，报告 ＜1× d cfu/mL
（g）。
检样
检样25g(mL)+ 225ml灭菌生理盐水，均质。
取新鲜配置兔血浆 0.
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比 3 mL，振荡摇匀，置 36 ±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积
大于原体积的一半，被判定为阳性结果。
典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙 并干燥。
典型菌落计数和确认
品匀液接种到10%NaCl 胰蛋白胨大豆肉汤管，每个稀释度接种3管，将上述接种物36℃±1℃培养，45h～48h。
平板和血平板， 血平板 36 ℃±1 ℃培养 18 h A2B2/C2=17×4÷5=14
Baird-Parker平板
～24 h。Baird-Parker平板 36 ℃±1 ℃培养 18 Baird-Parker平板，血平板
B-P平板18h~24h或45h~48h 也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 用于做血浆凝固酶的菌落数
将上述培养物， 分别划线接种到 Baird-Parker 取新鲜配置兔血浆 0.
根据对样品污染状况的估计，选择3个适宜稀释度 的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1mL样
3.9 革兰氏染色液：见附录 A中 。 3.10 无菌生理盐水：见附录 A中 。
四、实验内容及操作
金黄色葡萄球菌定性检验程序见图
微生物学检验葡萄球菌属PPT课件
球菌（MRSA）已成为医院感染最常见 的致病菌
2020/7/22
致病物质
• 凝固酶 • 葡萄球菌溶素 • 杀白细胞素 • 肠毒素 • 剥脱毒素 • 毒性休克综合征毒素－1
2020/7/22
凝固酶
• 游离凝固酶：采用试管法检测
协同因子
游离凝固酶
凝血酶
纤维蛋白原
纤维蛋白
血浆凝固
• 结合凝固酶：采用玻片法检测
报告
检验方法—直接镜检
• 方法:取标本直接涂片,革兰染色后镜检 • 初步报告:
“查见革兰阳性葡萄串状排列球菌，疑 似葡萄球菌” “查见革兰阳性球菌”
2020/7/22
检验方法—分离培养
• 脓、痰、脑脊液标本－→接种血平板 • 菌落特征：光滑型、中等大小、脂溶性
色素、透明溶血环（β-溶血环）
2020/7/22
2020/7/22
葡萄球菌传统分类
产生溶血毒素
金黄色 葡萄球菌
+
表皮 葡萄球菌
－
腐生 葡萄球菌
－
产生凝固酶
+
－
－
产生耐热DNA酶
+
－
－
产生SPA
+
－
－
新生霉素敏感性
S
S
R
致病性
强
弱
无
2020/7/22
金葡菌噬菌体分型
• 分型：分五个群，共22型 • 意义：追踪传染源
2020/7/22
抵抗力
• 是抵抗力最强的无芽孢细菌 • 耐干燥 • 对龙胆紫敏感 • 易形成耐药性：耐甲氧西林金黄色葡萄
2020/7/22
抗原构造
★葡萄球菌A蛋白（SPA） • 存在于金黄色葡萄球菌细胞壁 • 可与人和其它哺乳动物IgGFc段非特异性
2020/7/22
致病物质
• 凝固酶 • 葡萄球菌溶素 • 杀白细胞素 • 肠毒素 • 剥脱毒素 • 毒性休克综合征毒素－1
2020/7/22
凝固酶
• 游离凝固酶：采用试管法检测
协同因子
游离凝固酶
凝血酶
纤维蛋白原
纤维蛋白
血浆凝固
• 结合凝固酶：采用玻片法检测
报告
检验方法—直接镜检
• 方法:取标本直接涂片,革兰染色后镜检 • 初步报告:
“查见革兰阳性葡萄串状排列球菌，疑 似葡萄球菌” “查见革兰阳性球菌”
2020/7/22
检验方法—分离培养
• 脓、痰、脑脊液标本－→接种血平板 • 菌落特征：光滑型、中等大小、脂溶性
色素、透明溶血环（β-溶血环）
2020/7/22
2020/7/22
葡萄球菌传统分类
产生溶血毒素
金黄色 葡萄球菌
+
表皮 葡萄球菌
－
腐生 葡萄球菌
－
产生凝固酶
+
－
－
产生耐热DNA酶
+
－
－
产生SPA
+
－
－
新生霉素敏感性
S
S
R
致病性
强
弱
无
2020/7/22
金葡菌噬菌体分型
• 分型：分五个群，共22型 • 意义：追踪传染源
2020/7/22
抵抗力
• 是抵抗力最强的无芽孢细菌 • 耐干燥 • 对龙胆紫敏感 • 易形成耐药性：耐甲氧西林金黄色葡萄
2020/7/22
抗原构造
★葡萄球菌A蛋白（SPA） • 存在于金黄色葡萄球菌细胞壁 • 可与人和其它哺乳动物IgGFc段非特异性
食品中微生物的检测-金黄色葡萄球菌检验
免疫学方法
抗原制备
从金黄色葡萄球菌中提取特异性抗原，制备 成免疫原。
抗体制备
利用抗原抗体特异性结合的原理，通过凝集 反应、沉淀反应等方法检测样品中的金黄色
葡萄球菌。
抗原抗体反应
将免疫原注射到动物体内，刺激机体产生特 异性抗体。
结果判定
根据反应结果判断样品中是否含有金黄色葡 萄球菌。
分子生物学方法
食品中微生物的检测-金黄 色葡萄球菌检验
目录
• 引言 • 金黄色葡萄球菌概述 • 样品采集与处理 • 微生物学检测方法 • 理化检测方法 • 结果分析与报告 • 质量控制与实验室安全
01
引言
目的和背景
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是一种常见的食品污染源，可引起食物中毒，对公众健康构成威胁。因此，检测食品中的金黄 色葡萄球菌对于保障食品安全具有重要意义。
适量性
根据检测方法和目的，采 集适量样品，以满足检测 需求。
样品保存与运
低温保存
样品应尽快放入低温环境 （如4℃冰箱）中保存，以 减缓微生物的生长速度。
避免反复冻融
尽量避免样品在保存过程 中反复冻融，以免影响微 生物的存活和检测结果的 准确性。
快速运输
样品在运输过程中应保持 低温，并尽快送达实验室 进行检测。
04
微生物学检测方法
传统培养法
增菌培养
将液体样品接种到选择性增菌液 中，于适宜温度下培养一定时间 ，使金黄色葡萄球菌得以增殖。
鉴定
通过观察菌落形态、革兰氏染色 、血浆凝固酶试验等生化特征进 行鉴定。
01
02
样品处理
取适量食品样品，进行均质化处 理，得到均匀一致的液体样品。
03
04
微生物葡萄球菌ppt课件
葡萄球菌溶血素
各种器官的化脓性感染；
杀白细胞素
全身的感染和败血症、脓毒血症等；
肠毒素
食物中毒；假膜性肠炎；
表皮剥脱毒素
烫伤样皮肤综合征；
中毒性休克综合征毒素Ⅰ
中毒性休克综合征；
44
第1节 葡萄球菌属
三、免疫性
• 成人对金黄色葡萄球菌感染有相当的抵抗 力。这种自然抵抗力的本质尚不清楚。
• 化脓性感染由于白细胞浸润和血浆凝固酶 的作用，易使早期病灶局限化，故白细胞 功能障碍的人，感染过程严重。
27
MRSA的特性 • 不均一耐药性 • 广谱耐药性 • 生长特殊性
意义
MRSA感染日趋严重，是院内感染的主要病 因，还是社区获得性感染的主要病因， MRSA这一术语提示这种细菌对所有β内酰 胺抗生素耐药
28
第1节 葡萄球菌属
二、致病性
（一）致病物质：酶、毒素、表面结构
1、凝固酶（coagulase） 2、葡萄球菌溶素（staphylolysin） 3、杀白细胞素（leukocidin） 4、肠毒素（enterotoxin） 5、表皮剥脱毒素（exfoliative toxin, exfoliatin） 6、毒性休克综合征毒素-1（toxic shock syndrome
11
第1节 葡萄球菌属
（二）培养特性
1、液体培养基（肉汤）：呈均匀混浊生长 2、普通固体培养基：S型菌落（金黄色、白色、柠檬色） 3、血平板：致病性葡萄球菌菌落周围有完全溶血圈（β溶血）
β溶血 金葡菌菌落
β溶血
β溶血
12
第1节 葡萄球菌属
表皮/腐生性葡萄球菌菌落 1000×
金葡菌菌落、周围有溶血圈 1000×
金黄色葡萄球菌
批准文号：国药准字H44023815 说明书修订日期：2012年02年29日 储藏：遮光，密封，在干燥处保存 不良反应：尚不明确
禁忌：尚不明确
请检单
品名 开塞露 批号 141003
规格/包装规 格 批准文号
检查单位 请检目的 备注
10ml/瓶
国药准字 H44023815
数量
请检日期
资料来源：2010年版《中国药典》第二部附录 XI J 微生物限度检查法P107
局部给药制剂的途径和剂型
★不经胃肠道给药的剂型
（1）注射给药 如静脉注射、肌内注射、皮下注射和皮内注 射等。
（2）呼吸道给药 如吸入剂、喷雾剂、气雾剂等。
（3）皮肤给药 如外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、糊剂、 贴剂等。 （4）粘膜给药 如滴眼剂、滴鼻剂、含漱剂、舌下片剂、栓 剂、膜剂等。一般把直肠给药也归于粘膜给药一类，如灌肠 剂、栓剂、直肠用胶囊栓等。
甘露醇高盐琼脂平板
纯培养
营养琼脂斜面
培养温度： 36±1℃ 培养时间：24~72h
革兰氏染色镜检
血浆凝固酶试验
报告
供 试 液 的 制 备
用量筒量取无菌水 90ml于空瓶中
取样品10ml加入
供 试 液Байду номын сангаас
用玻璃棒搅拌，使 混合均匀
增菌
供试液 缓冲液 培养温度：36±1℃ 培养时间：18~24h 必要时可延至48h 阴性对照应无菌生长 营养 肉汤 营养 肉汤 营养 肉汤
英文名称：Glyceine
汉语拼音：Kaisailu
Enema
成份：本品每支含主要成份甘油52.8-58.3%。
辅料为：纯化水 性状：本品为无色、澄清的粘稠液体 作用类别：本品为缓解泻药类非处方药药品 适应症：用于便秘
禁忌：尚不明确
请检单
品名 开塞露 批号 141003
规格/包装规 格 批准文号
检查单位 请检目的 备注
10ml/瓶
国药准字 H44023815
数量
请检日期
资料来源：2010年版《中国药典》第二部附录 XI J 微生物限度检查法P107
局部给药制剂的途径和剂型
★不经胃肠道给药的剂型
（1）注射给药 如静脉注射、肌内注射、皮下注射和皮内注 射等。
（2）呼吸道给药 如吸入剂、喷雾剂、气雾剂等。
（3）皮肤给药 如外用溶液剂、洗剂、搽剂、软膏剂、糊剂、 贴剂等。 （4）粘膜给药 如滴眼剂、滴鼻剂、含漱剂、舌下片剂、栓 剂、膜剂等。一般把直肠给药也归于粘膜给药一类，如灌肠 剂、栓剂、直肠用胶囊栓等。
甘露醇高盐琼脂平板
纯培养
营养琼脂斜面
培养温度： 36±1℃ 培养时间：24~72h
革兰氏染色镜检
血浆凝固酶试验
报告
供 试 液 的 制 备
用量筒量取无菌水 90ml于空瓶中
取样品10ml加入
供 试 液Байду номын сангаас
用玻璃棒搅拌，使 混合均匀
增菌
供试液 缓冲液 培养温度：36±1℃ 培养时间：18~24h 必要时可延至48h 阴性对照应无菌生长 营养 肉汤 营养 肉汤 营养 肉汤
英文名称：Glyceine
汉语拼音：Kaisailu
Enema
成份：本品每支含主要成份甘油52.8-58.3%。
辅料为：纯化水 性状：本品为无色、澄清的粘稠液体 作用类别：本品为缓解泻药类非处方药药品 适应症：用于便秘
微生物检测技术--金黄色葡萄球菌检测
1 范围 本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的检验方法。
本标准第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌 的定性检验；
第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色葡萄 球菌的计数； 第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食 品中金黄色葡萄球菌的计数。
（重点）
1、生物学特性
1.1形态与染色
金黄色葡萄球菌无芽孢，无鞭毛， 大多数无荚膜
革兰氏染色阳性； 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直 径0.8μm左右，显微镜下排列成葡 萄串状。
1.2 培养特征
易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良好。 需氧或兼性厌氧，在好氧条件下生长最好；
30min而不被破坏。人摄食该污染产品后2-3h便可出现中 毒症状。其引起的食物中毒典型症状为呕吐和腹泻。
3、流行病学
在自然界中广泛存在，空气、水、灰尘及人和动 物的排泄物中都可找到。 作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和 动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的 皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受 其污染的机会很多。
血平板：可形成完全透明溶血环（溶血）
溶血：红细胞破裂，血红蛋白逸出称红细胞溶解， 简称溶血。 溶血素是细菌分泌的一种毒性因子
细菌的溶血现象
根据细菌对红细胞的溶解能力可分为以下三种溶血类型及现 象： α溶血:产生溶血素，不完全性溶血，在血琼脂平皿上菌落 周围有1～2mm，较窄半透明的草绿色溶血环。 β溶血: 呈完全性溶血，在血平皿上菌落周围有2～4mm宽、 界限分明、无色透明的溶血环。 γ溶血:不产生溶血素，在血琼脂平皿上的菌落周围无溶血 环。
化妆品微生物标准检验方法金黄色葡萄球菌
一、金黄色葡萄球菌
2、形态 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm
左右，显微镜下排金黄色葡萄球菌无芽胞、 鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金 黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基 上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温 度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存 活数周。
一、金黄色葡萄球菌
三、检验结果报告
凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染 色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵 甘露醇产酸。血浆凝固酶试验阳性者，可报告被 检样品检出金黄色葡萄球菌。
谢谢观看
2.1、菌落形态
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径
0.5~1.0μm。血平板菌落周围形成透明的溶 血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可 在10~15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、 麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。
一、金黄色葡萄球菌
3、传播途径
一般来说，金黄色葡萄球菌可通过以下 途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销 售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前 本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产 生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装 不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳 腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的 污染。
二、金葡菌的检测
1、培养基和试剂
1.1.7.5％的氯化钠肉汤 成分：蛋白胨 10g 牛肉膏 3g
氯化钠 75g 蒸馏水 1000ml 制法：将上述成分加热溶解，调pH为7.4，分装，121℃(15 1b)15min高 压灭菌。 1.2.血琼脂培养基 成分：营养琼脂 100ml 脱纤维羊血(或兔血) 10ml 制法：将营养琼脂加热溶化，待冷至50℃左右以无菌手续加入脱纤维羊 血，摇匀，制成平板，置冰箱内备用。
微生物检测技术-金黄色葡萄球菌检测
国内检测标准
GB 4789.10-2010
食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
GB/T 20944.32008
食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素的测定 第3部分：黄曲霉毒素 M1的测定
GB/T 23511.42008
食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定 第4部分：脱氢乙酸含量的 测定
样品中的快速检测。
纳米技术
纳米材料如纳米金、纳米孔等在 金黄色葡萄球菌检测中展现出巨 大潜力，具有高灵敏度、低检测
限和快速响应等优点。
未来研究方向
开发更高效、特异性的检测方法
01
针对金黄色葡萄球菌的不同表型和基因型，开发更高效、特异
性的检测方法，提高检测的准确性和可靠性。
集成化与自动化
02
将多种检测方法集成于一体，实现金黄色葡萄球菌的自动化检
治疗方案的选择。同时，对于流行病学调查和疾病监测也具有重要意义。
05
CATALOGUE
金黄色葡萄球菌检测技术展望
新技术发展与应用
基因组学技术
利用全基因组测序技术，能够快 速准确地检测金黄色葡萄球菌，
并识别其耐药性和毒力基因。
生物传感器技术
生物传感器能够实时、快速地检 测金黄色葡萄球菌，具有高灵敏 度和特异性，适用于食品和环境
测，提高检测效率，降低人工误差。
多重耐药性研究
03
深入研究金黄色葡萄球菌的多重耐药性机制，为遏制耐药性的
传播提供科学依据和技术支持。
对公共卫生的影响与意义
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，通过改进检测技 术，能够及时发现和控制食品中的污染，保障公众的食品 安全。
预防疾病传播
食品中各类微生物检验-PPT课件
新华网东京４月６日专电日本最近再度发生病原性大肠 杆菌Ｏ１５７集体感染事件，到５日为止，东京、千叶、埼 玉、神奈川、茨木、群马等地已有１２５人受到感染。
这次集体感染于３月１２日首先在千叶县柏市被发现。 诊断和调查结果表明，患者是由于食用了一些工厂生产的不 洁净的食品而被感染的。
日本曾于５、６年前首次发生病原性大肠杆菌Ｏ１５７ 集体感染事件。患者有发烧、恶心、呕吐等症状。
操作步骤
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内， 接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐 发酵管；1mL及1mL以下者，用单料乳 糖胆盐发酵管，每一稀释度接种3管，置 36+1℃温箱内，培养24+2小时，如所有 乳糖胆盐发酵管均不产气，则可报告为 大肠菌群阴性。如有产气者，按下列程 序进行。
操作步骤
(二)分离培养
食品中细菌数量越少，食品存放的时间 越长。如：
0℃时菌落数为105cfu/cm2的牛肉，可存 放7d；菌落数为102cfu/cm2时， 可存放 18d。
0℃时菌落数为105cfu/cm2的鱼可存放6d， 菌落数为103cfu/cm2时， 可存放12d。
菌落(colony)：生长在固体 培养基上，来源于一个细胞， 肉眼可见的细胞群体。
待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培 养48±2h，取出计算平板内菌落数目，乘以稀 释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。
计数和报告 选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落
总数测定标准。
我国饮用水卫生标准： ≤ 100个细菌总数/1mL饮水
第二节 食品中大肠菌群的测定
一、大肠菌群与食品卫生质量 大肠菌群系指一群在37℃能发酵乳糖、产酸、
引起中毒的主要是 动物源性食品。
本菌对热、消毒药及 外界环境的的抵抗力 不强。60℃，20-30min
这次集体感染于３月１２日首先在千叶县柏市被发现。 诊断和调查结果表明，患者是由于食用了一些工厂生产的不 洁净的食品而被感染的。
日本曾于５、６年前首次发生病原性大肠杆菌Ｏ１５７ 集体感染事件。患者有发烧、恶心、呕吐等症状。
操作步骤
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内， 接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐 发酵管；1mL及1mL以下者，用单料乳 糖胆盐发酵管，每一稀释度接种3管，置 36+1℃温箱内，培养24+2小时，如所有 乳糖胆盐发酵管均不产气，则可报告为 大肠菌群阴性。如有产气者，按下列程 序进行。
操作步骤
(二)分离培养
食品中细菌数量越少，食品存放的时间 越长。如：
0℃时菌落数为105cfu/cm2的牛肉，可存 放7d；菌落数为102cfu/cm2时， 可存放 18d。
0℃时菌落数为105cfu/cm2的鱼可存放6d， 菌落数为103cfu/cm2时， 可存放12d。
菌落(colony)：生长在固体 培养基上，来源于一个细胞， 肉眼可见的细胞群体。
待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培 养48±2h，取出计算平板内菌落数目，乘以稀 释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。
计数和报告 选取菌落数在30~300之间的平板作为菌落
总数测定标准。
我国饮用水卫生标准： ≤ 100个细菌总数/1mL饮水
第二节 食品中大肠菌群的测定
一、大肠菌群与食品卫生质量 大肠菌群系指一群在37℃能发酵乳糖、产酸、
引起中毒的主要是 动物源性食品。
本菌对热、消毒药及 外界环境的的抵抗力 不强。60℃，20-30min
实习3 食品中微生物的检测-金黄色葡萄球菌检验
金黄色葡萄球菌的抗原构造和分型
对分型进行简单的了解. 对分型进行简单的了解. 血清学分型: 1,血清学分型: 金黄色葡萄球菌水解,获得两种抗原成分: 金黄色葡萄球菌水解,获得两种抗原成分:蛋白抗原和 多糖抗原. 多糖抗原. 蛋白抗原主要为葡萄球菌A蛋白 蛋白( 蛋白抗原主要为葡萄球菌 蛋白(SPA),是一种表面抗 , 以上金黄色葡萄球菌有此抗原, 原,90%以上金黄色葡萄球菌有此抗原,无特异性. 以上金黄色葡萄球菌有此抗原 无特异性. 多糖抗原为半抗原,有型特异性. 多糖抗原为半抗原,有型特异性. 噬菌体分型. 2,噬菌体分型. 根据肠毒素分型. 3,根据肠毒素分型. 根据血浆凝固酶分型. 4,根据血浆凝固酶分型.
*金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生 金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生 问题, 问题,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起 的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%, 的食物中毒占整个细菌性食物中毒的 , 加拿大则更多, 加拿大则更多,占45%,我国每年发生的此 , 类中毒事件也非常多.肠毒素形成条件: 类中毒事件也非常多.肠毒素形成条件: 存放温度, 温度越高, 存放温度,在37℃内,温度越高,产毒 ℃ 时间越短; 时间越短; 存放地点, 存放地点,通风不良氧分压低易形成肠 毒素; 毒素; 食物种类,含蛋白质丰富,水分多, 食物种类,含蛋白质丰富,水分多,同 时含一定量淀粉的食物,肠毒素易生成. 时含一定量淀粉的食物,肠毒素易生成.
***当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较 ***当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较 多的食品, 如牛奶和乳制品, 蛋等, 多的食品 , 如牛奶和乳制品 , 肉 , 蛋等 , 在温度条 件适宜时,经过8～ 小时即可产生相当数量的肠毒 件适宜时,经过 ～10小时即可产生相当数量的肠毒 肠毒素可耐受100℃煮沸 分钟而不被破坏.人 分钟而不被破坏. 素,肠毒素可耐受 ℃煮沸30分钟而不被破坏 摄食该菌污染的食物2～ 小时后可引起中毒症状 小时后可引起中毒症状, 摄食该菌污染的食物 ～ 3小时后可引起中毒症状 , 它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻. 它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻. 此外, 金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素, 此外 , 金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素 , 明胶 蛋白酶,脂肪酶,肽酶等. 酶,蛋白酶,脂肪酶,肽酶等.
金葡菌
4. 肠毒素（enterotoxin）：引起急性胃肠炎（食物中毒）
5. 表皮剥脱毒素（exfoliative toxin）：裂解表皮组织棘状 颗粒层，导致表皮与真皮脱离 6. 毒性休克综合征毒素-1（TSST-1）：引起中毒性休克
金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus)
（二）所致疾病： 1. 侵袭性疾病：化脓性感染
2. 毒素性疾病
（1）食物中毒 （2）烫伤样皮肤综合征 （3）毒性休克综合征 3. 葡萄球菌性肠炎（假膜性肠炎）
Staphylococcal Scalded Skin Syndrome
(三) 免疫性：无牢固免疫力
金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus)
三. 微生物学检查 标本分离培养鉴定 凝固酶试验 甘露醇分解试验 食物中毒检测：动物（6~8周幼猫）试验 四. 防治原则
防止医源性感染。
根据药物敏感试验结果，选用敏感抗生素
（四）抗原结构： 1. 葡萄球菌表面蛋白A（staphylococcal protein A，SPA） SPA是葡萄球菌细胞壁中的一种表面蛋白，可与人类IgG抗 体的 Fc段非特异性结合，增强细菌抗吞噬细胞的吞噬作用 2. 多糖抗原
金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus)
（五）分类依据 1. 色素（pigment）：分为金黄色、表皮及 腐生葡萄球菌 2. 凝固酶（coagulase）：凝固酶阳性与阴性葡萄球菌 （六）抵抗力：强于其它无芽孢菌，易产生耐药性变异
金黄色葡萄球菌
表皮葡萄球菌
金黄色葡萄球菌
(Staphylococcus)
二. 致病性与免疫性
（一）致病物质： 1. 凝固酶（coagulase）：促血浆凝固
金黄色葡萄球菌 (牛肉膏蛋白胨培养基)
金黄色葡萄球菌（牛肉膏蛋白胨培养基）耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，36±1°C培养24小时，在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。
本试验金黄色葡萄球菌为阳性。
2．金黄色葡萄球菌肠毒素检测金黄色葡萄球菌肠毒素的检测主要有动物试验、血清学试验、免疫荧光试验及酶联免疫吸附等方法，在此就不一一赘述。
3．金黄色葡萄球菌的控制主要包括：1）防止金黄色葡萄球菌污染食品防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗位。
防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染：如牛奶厂要定期检查奶牛的乳房，不能挤用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出后，要迅速冷至-10℃以下，以防毒素生成、细菌繁殖。
奶制品要以消毒牛奶为原料，注意低温保存。
对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。
2）防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻底加热。
牛肉膏蛋白胨培养基配方：牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。
其中牛肉膏为微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要提供氮源，而NaCl提供无机盐。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。
琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。
固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此，要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
食品中微生物的检测金黄色葡萄球菌检验
目前，随着研究的深入，一些快速和采用 现代技术的检测方法不断出现，这些新的快速 方法，一般都缩短了传统检测方法的时间，能 够较快地得到检测结果，并且操作相对简单。 比如：法国梅里埃公司生产的RPF培养基 、API检测系统等。梅里埃公司生产的mini VIDAS利用荧光免疫的方法检测葡萄球菌 肠毒素，在仪器上45 min可以得到结果。
法国梅里埃公司生产的RPF培养基
将兔血浆包括在培养基中作为直接确认菌落的手段
-
+
凝固酶阳性葡萄球菌 : 菌落周围形成沉淀圈 (例) 金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌污染的控制 防止食品污染
防止带菌人群对各种食物的污染： 定期对生产加工人员进行健康检查，患 局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等 ）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性 肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止 其工作或调换岗位。
金黄色葡萄球菌 在甘露醇盐平板上的菌落
Staphylococcus aureus on mannitol salts agar
3、血浆凝固酶试验：
吸取1:4新鲜兔血浆0.5 mL，放入小试 管中，再加入培养24 h的金黄色葡萄球菌 肉浸液肉汤培养物0.5 mL，振荡摇匀， 置 36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察 一次，观察6 h，如呈现凝固,即将试管倒 置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结 果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及 肉汤作为对照。
＊＊＊当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较 多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在温度条 件适宜时，经过8～10小时即可产生相当数量的肠毒 素，肠毒素可耐受100℃煮沸30分钟而不被破坏。人 摄食该菌污染的食物 2 ～ 3 小时后可引起中毒症状， 它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。 此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶 酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
法国梅里埃公司生产的RPF培养基
将兔血浆包括在培养基中作为直接确认菌落的手段
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凝固酶阳性葡萄球菌 : 菌落周围形成沉淀圈 (例) 金黄色葡萄球菌
金黄色葡萄球菌污染的控制 防止食品污染
防止带菌人群对各种食物的污染： 定期对生产加工人员进行健康检查，患 局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等 ）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性 肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止 其工作或调换岗位。
金黄色葡萄球菌 在甘露醇盐平板上的菌落
Staphylococcus aureus on mannitol salts agar
3、血浆凝固酶试验：
吸取1:4新鲜兔血浆0.5 mL，放入小试 管中，再加入培养24 h的金黄色葡萄球菌 肉浸液肉汤培养物0.5 mL，振荡摇匀， 置 36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察 一次，观察6 h，如呈现凝固,即将试管倒 置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结 果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及 肉汤作为对照。
＊＊＊当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较 多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在温度条 件适宜时，经过8～10小时即可产生相当数量的肠毒 素，肠毒素可耐受100℃煮沸30分钟而不被破坏。人 摄食该菌污染的食物 2 ～ 3 小时后可引起中毒症状， 它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。 此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶 酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
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生理盐水
方法二：玻片法 在一张洁净玻片中央加1滴生理盐水，用接种环取
待检培养物与其混合（设阳性和阴性对照）制成菌悬液， 若经10~20s内无自凝现象发生，则加入人或兔新鲜血浆 1环（不用稀释），与菌悬液混合，观察结果 。
兔血浆制备 成分：柠檬酸钠0.106 mol/L （31.3g Na3C6H5O7·2H2O溶于1L蒸馏水中） 制法：一份加兔血9份混合后离心2000rpm，
当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品， 如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经810小时即可相当数量的肠毒素。
二、检验程序与操作方法
根据中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准： 《食 品 卫 生 微 生 物 学 检 验》 GB 4789.10-94
金黄色葡萄球菌检验
国标：金黄色葡 萄球菌检验程序
所有的毒株产生血浆凝固酶，人和动物来源的菌 株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。
金黄色葡萄球菌产生磷脂酶、蛋白酶、脂肪酶和 溶菌酶等，大多数菌株可水解天然的动物蛋白并释放 脂肪酸。在BP平板产生磷脂环。
生物学特性 ——致 病 性
金黄色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强弱主 要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血素：外毒素，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌 体局部缺血和坏死；在血平板培养出现溶血环。 b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血 液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬 细胞的吞噬作用。 d.脱氧核糖核酸酶（DNA酶） e.肠毒素：引起急性胃肠炎。
25g样品+ 225ml 生理盐水
5mL样品匀液（1:10）+ 50mL胰酪胨大豆肉汤
36± 1℃ 24hr
定性 检测
血平板
BP平板
36± 1℃ 24hr 镜检与 肉浸液肉汤培养
36± 1℃ 24hr
血浆凝固酶 试验
36± 1℃ 6hr
报告结果
定量
25g样品+ 225ml 生理盐水
梯度稀释
检测
（平板法）
养24h的金黄色葡萄球肉浸液肉汤培养物0.5mL，振荡摇 匀，放36±1℃恒温箱或水浴内，每半小时观察一次，观 察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者， 被认为阳性结果。
试管法
阴性反应
阳性反应
不凝固
少量、 零散凝
固
明显的块 状凝固
巨大块 凝固
完全凝固， 倒置不流动
有凝块
均匀混浊
血浆
检样 25g(ml)+225ml灭菌生理盐水
直接计数方法
增菌培养方法
Baird-parker（贝尔德- 帕克） 0.3ml、0.3ml、0.4ml
36± 1℃ 24hr
血平板
36± 1℃ 24hr
7．5％氯化钠肉汤或 胰酪胨大豆肉汤
36± 1℃ 24hr
血平板 ，Baird-parker
涂片染色
观察溶血
微生物-金黄色葡萄球菌
大多数菌株产生类胡罗卜素，使细胞团呈现出深橙色 到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件，故称金黄 色葡萄球菌。
大多数菌株最适生长温度30-37℃，最适pH为7.0-7.5； 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； 可在15%氯化钠和40%胆汁中生长。
一般用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增菌或7.5% 氯化钠肉汤增菌。
10min吸取上清液即为兔血浆。
葡萄糖肉浸液肉汤的制备
成分：绞碎牛肉500g，氯化钠5g，蛋白胨10g，磷酸氢二 钾2g，葡萄糖10g，蒸馏水1000mL，pH7.4～7.6。
制法：将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g，与蒸馏水混合后 放冰箱24h，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣 完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水 补足原量。加入蛋白胨、葡萄糖，氯化钠和磷酸盐，溶解 后校正pH，煮沸并过滤、分装，121℃30min高压灭菌。
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌， 临床表现多种多样，可引起局部化脓感染，也可引起肺 炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
葡萄球菌皮肤感染
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交流
葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的疾 病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心、呕吐最 为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。
✓ 丙酮酸钠是一种生长促进剂 ✓ 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有
毒性，并使菌落产生黑色 ✓ 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 ✓ 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制
作用。
在BP平板上典型菌落为：灰色到黑玉色，圆形，光 滑突起，湿润，直径2-3mm，边缘常为淡色（米黄色或 灰色），周围为一混浊带，在其外缘常有一透明圈。用 接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。
选三个连续梯度，每个梯度分别取1mL接种之至表面 干燥的BP平板（如0.4mL，0.3mL，0.3mL）
36± 1℃ 48hr
适用于检测金黄色葡萄球菌 数不小于10/g（mL）的食品
长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落，其黑 色常较典型菌落淡些，且外观可能粗燥，质地较干燥。
B-P平板
பைடு நூலகம்
检验程序 ——鉴定之革兰氏染色镜检
革兰氏阳性，球形，组成葡萄状
检验程序 ——鉴定之凝固酶试验
金黄色葡萄球菌可以产生血浆凝固酶，因此对其鉴别 的主要试验是测定其凝固酶。
方法一：试管法 吸取1:4新鲜兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入培
大而突起，圆形，不透明， 表面光滑，有溶血环
血平板制作
成分：豆粉琼脂（或营养琼脂）100mL，脱纤维 羊血（或兔血）5-10mL。
制法：加热融化琼脂，冷至50℃，以无菌操作加 入脱纤维羊血或兔血，摇匀，倾注平板。或分装 灭菌试管，摆成斜面。
检验程序——分离培养
BP（贝尔德- 帕克）平板：
✓ 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素 和矿物元素
血浆凝固酶试验
报告
检验程序 ——增菌培养
利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性（可耐受15%的 氯化钠），用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤或7.5% 氯化钠肉汤增菌。
置37摄氏度培养箱培养24小时。
检验程序 ——分离培养
血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血 平板上产生明显的溶血环。
典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆 形，不透明，表面光滑，有溶血环。