实验二 孚尔根核染色

HE XI UNIVERSITY
伸长区
分生区
根冠
注意事项
Schiff试剂小心取放，及时清洗吸取
Schiff试剂的吸管。
黑暗条件下wenku.baidu.com色。
实验作业
绘制你所观察到的图象，并说明是有丝
分裂的哪一个时期，并注明放大倍数。
前期、中期、后期、末期
为什么要严格掌握DNA的水解条件？
温度过低，时间过短：则DNA的水解
快完全除掉，脱氧核糖中潜在的的醛基获得自由状态，
水解条件下形成半缩醛羟基，与Schiff试剂反应，形成
紫红色化合物。
孚尔根核染色法是Feulgen和Rossonbek 于1924年提出的鉴定细胞中DNA的组织 化学方法。其优点是制片清洁、染色体 清晰、组织软化好，易于压片。但对小
型染色体（如玉米、水稻）效果较差。
剂分解。
为什么RNA在此过程中不会着色？
由于在酸解条件下，RNA较DNA分子
更加稳定，它的醛基难以游离，所以 在用Schiff试剂染色时RNA分子不会 着色。
件下染色30min或过夜。
小心倒出Schiff试剂,然后用漂洗液洗3次。
漂洗液配置方法：取10ml10 %亚硫酸氢钠母液， 加200ml蒸馏水，再加10ml1NHCL，即成漂 洗液，使用前配置。
蒸馏水漂洗后取根尖置于载玻片上，只保留
分生区，再加一滴45%的醋酸，压片镜检。
根尖形态与结构
成熟区
医学遗传学实验
实验2 洋葱根尖孚尔根染色法
实验目的 实验原理
实验方法
注意事项
实验作业
思考问题
实验目的
掌握孚尔根核染色的方法。
了解孚尔根染色的原理。
实验原理
Na2S2O3+ HCl→→亚硫酸根
亚硫酸根+碱性品红→无色的亚硫酸品红—Schiff试剂
DNA在60℃，1mol/L HCl作用下，核酸中的嘌呤碱很
实验方法
水洗：把已经固定好的洋葱根尖用50％乙醇和清
水分别冲洗, 再把它放入室温的1mol/L HCl中处
理2-3min。
将根尖换入60℃预热的HCl，置于恒温水浴中，
在600.5℃的条件下水解10min。
吸出热HCl，换入室温1mol/L HCl再处理2min，
然后水洗2-3次。
吸净水分，加入Schiff试剂，盖上盖子，黑暗条
不够彻底，醛基暴露不充分，染色会 过浅。 温度过高，时间过长：则DNA过度水 解，游离的核苷酸会漂移到细胞质中， 造成染色浅或不均一 。
为什么要在实验材料从60℃盐酸中倒 出后，再放入室温的盐酸中呢？
材料从60℃的盐酸倒出后温度还相当高，如 果直接转入Schiff试剂中，则会使Schiff试剂发 生分解影响效果。所以我们首先要把材料转入 室温的盐酸溶液中，做一个缓冲以避免Schiff 试