--医学课件弥散性血管内凝血(DIC)_1

材料
家兔、兔台、常规手术器械、25%乌拉坦溶液、双孔电热恒 温水浴箱、台式离心机、721分光光度计、秒表、显微镜、 号码计数器、刻度离心管（10ml）、试管、刻度吸管 （2ml、5ml）、微量定量移液器、血色素吸管、毛细滴 管、血球计数板配盖片、橡皮吸球、乳胶滴管、棉球和纱布， 3.8％枸橼酸钠溶液、 4％兔脑粉生理盐水浸出液（临用时 配制）、饱和氯化钠液、肝素、 1％硫酸鱼精蛋白液、血小 板稀释液、 0.025mol／L氯化钙溶液、P试液、K试液、5ml 玻璃试管、动脉夹、动脉插管
思考题
1．本实验是否复制了急性DIC？有何根据？ 2．本实验所致的DIC其主要发病机制是什么？ 3．急性DIC时本实验的观察指标为什么会改变？ 4．如果先给家兔注入肝素后再注射兔脑粉浸液，能否起到
⑸血清纤维蛋白(原)含量测定(饱和盐水法)
①取血浆0.5m1置于12X100mm的试管中，加入饱和氯化钠溶液 4.5m1，充分混匀，置于37℃水浴中孵育3min，取血后再次混 匀，用721型分光光度计比色，测定光密度.
②以生理盐水代替饱和氯化钠溶液，进行同样操作作为对照。
③对照管调零点，测出光密度(波长520mm)后，按下式计算纤 维蛋白原含量：
DIC的系列病理过程
各种病因 激活凝血系统
1 凝血酶增多
大量微血栓形成
凝血因子、血小板消耗
2
纤溶系统激活
产生纤溶酶 FDP形成
纤溶、抗凝作用增强 出血、休克、器官功能障碍和
溶血性贫血等
3
发病机理
1. 内皮细胞损伤, 凝血、抗凝调控失调 2. 组织因子入血，激活外源性凝血系统 3.血细胞大量破坏, 血小板被激活 4.促凝物质入血 5.纤溶活性的改变(继发于凝血系统激活或致病因子直接引起）
➢检查急性DIC的几种血液学常规方法： (1)白陶土部分凝血活酶时间(KPTT)测定 ．
① 取被检血浆0.2m1，加入小试管内，置37℃水浴中，然后加 入0.2ml K试液,混匀后孵育3min；
②加入0.025mΒιβλιοθήκη Baidul/L氯化钙0.2mI，开动秒表，10s后从水浴中 取出轻轻侧动，至液体流动停止或出现粗颗粒时为凝固终点。
实验结束后整理与分析实验结果，并用列表或文字描述进行 表述。
注意事项
1．兔脑粉浸液极易招致兔猝死, 注射过程中，密切观察动 物呼吸，控制推注速度.注射前做好二次采血的准备,以免 措手不及而耽误取血。 2．纤维蛋白原含量检测时，一旦血浆与饱和盐水接触，应 即混匀，否则易致局部沉淀，影响测定。 3．作3P试验，应先加血浆，再加鱼精蛋白液，否则易致假 阳性。
③重复2～3次，取平均值,家兔正常值约为30sec。 ⑵凝血酶原时间(PT)测定
①取被检血浆0.1ml，置于小试管内放于37℃水浴中。
②加入P试液0.2ml，开动秒表，轻轻地侧动，直至液体停止 流动或出现粗颗粒，即为凝血酶原时间.
③重复3次，取平均值,家兔正常值为6～8sec。
⑶凝血酶时间(TT)测定
➢在注入兔脑粉浸液前15min、注入开始后15mln及45min，分 别由颈总动脉取血样10ml一次,抗凝剂(3.8％枸橼酸钠溶液) 与血液之比为1：9(V／V)，离心(3000转／min)15min，获得 含微量血小板血浆作为大部分实验测定用。每次取血样时， 采血1～2滴供血小板计数用。另用1.5—2.0m1置于不含抗凝 剂的干净试管内，作为测定FDP用
测定管光密度
×1000=mg%
0.5
⑹血小板计数 吸血小板稀释液0．38ml于一小试管内，用血红蛋白吸管取血 20ml立即加入血小板稀释液内,充分摇匀后，用滴管将上述混 悬液一小滴滴入计算室内，静置15min后，用高倍镜计数。数 5个方格内之血小板数，乘以1000，即得每立方毫米血小板数。 家兔正常值为3×105～6×105／mm3
①取被检血浆0.2m1，置于小试管内放于37℃水浴中。
②加入适当浓度的凝血酶悬液0.2ml，开动秒表，观察方法同 上,测定其凝固时间。
③重复3次，取平均值. ⑷鱼精蛋白副凝实验(3P实验)
①取血浆0.9ml置于小试管内。
②加入1％硫酸鱼精蛋白液0.1ml，混匀，室温下放置30min， 于观察终点前，将试管轻轻摇动,有白色纤维或凝块为阳性， 均匀混浊、无白色纤维为阴性。
K试液配制：实验前将2％白陶白生理盐水悬液1份与兔脑磷 脂悬液等量混合。
实验步骤与观察指标
➢用25％乌拉坦溶液麻醉动物后，暴露一侧颈总动脉，结扎其 远心端，用动脉夹夹闭近心端，剪口后插入动脉插管,结扎， 固定之，备用取血。
➢复制DIC模型：取4％兔脑粉生理盐水溶液，按2.0ml／kg体 重计算，将总量用生理盐水稀释至30m1，由耳缘静脉缓慢注 入。
兔脑粉浸液的制备：称取兔脑粉[实验前检测其活力，以凝 血酶原时间(PT)不超过12s为宜]400mg，加人生理盐水10m1， 充分搅匀后放入37℃（摄氏度）恒温水浴箱内孵育60min， 每隔15min搅拌一次,然后离心(1000转／min)5min，取上清 液过滤后供静脉注射用。
P试液配制：实验前称取兔脑粉200mg，加入5m1生理盐水， 充分混匀后放人37°C恒温水浴箱内孵育1h，在此过程中， 用玻璃棒搅拌3～4次，并颠倒混匀，然后离心(1000转／ min)5min,吸取上清液，再加入等量的0．025mol／L氯化钙 溶液，用前摇匀，作PT实验用
弥散性血管内凝血(DIC) 家兔模型及机制
体内凝血与抗凝血系统的动态平衡
凝血
1.内源性凝血系统 （Ⅻ因子激活开始） 2.外源性凝血系统 （Ⅲ因子激活开始）
抗凝血
1.完整的血管内皮； 2.血流速度相对较快； 3.单核吞噬系统作用； 4.生理性抗凝物质； 5.纤溶系统。
DIC概念
DIC不是一种独立的疾病。它是一种发生在 多种疾病基础上，凝血系统被异常激活而发 生的以凝血功能失常为主要特征的系列性病 理过程.
造模原理
兔脑粉含有组织因子(或称凝血致活酶）,能启动外源性凝 血过程. 正常体内血液中没有组织因子，静脉注射兔脑粉后 通过外源性凝血途径引起DIC.
实验目的
学习用兔脑粉浸液复制急性实验性DIC动物模型,通过本 实验所测的几项血液学实验结果,讨论急性DIC的发病机 制，初步了解急性DIC的几项血液学常规检查方法