霍乱弧菌的实验室
霍乱弧菌实验室检测ppt课件
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• 6.增菌培养6-8小时后，需要取胨水生长物再次观察动力 ，进行6-8小时动力报告。并转种到庆大霉素平板并放入 35℃孵箱中培养。在进行6-8小时动力报告时，需要先取 消之前的审核，在原报告单上进行审核（1505970005） 。
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0139霍乱弧菌，并认定为真正的霍乱弧菌。
三、不典型01群霍乱弧菌：可被多价01群血清所凝集，但该群 菌不产生肠毒素，因此无致病性
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霍乱病原学特点
• 形态与染色
– 弧状或逗点状 – 革兰染色阴性 – 有一根单鞭毛，细菌运动非常活泼，呈鱼群穿梭样或流星状
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霍乱实验室检测
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检验科
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霍乱病原菌发现
• 1883年德国科学家Koch发现霍乱弧菌 • 1 9 0 5 年埃及埃儿托检疫站首次分离到ElTor弧菌，与霍乱
弧菌甚为相似，但经过多年的观察并不致病或仅引起轻度 腹泻，直到1937-1958年发生4次爆发后才逐渐认识到 ElTor弧菌致病性 • 1992年10月印度马德拉斯发现了新菌型O139霍乱弧菌
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疑似菌落初步鉴定：
7.庆大平板培养18-24h后挑取可疑菌落进行动力观察， 如动力阴性，可进行最终阴性报告，如下图。
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• 注意：
• 1.动力试验阴性，无需进行血清制动试验。 • 2.任何一次动力阳性，都需进行血清制动试验并
霍乱弧菌实验室检测
霍乱弧菌的实验室检测
目的:提高检出率,减少漏检以及误判的发生 手段:
检测人员是否有足够的责任心? 检测试剂准备是否齐全且符合要求? 是否严格按照检测流程进行操作?
霍乱概述
▪ 什么是霍乱?
霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌（V．cholerae）
引起的急性肠道传染病，发病急、传播速度快、波 及范围广、危害严重的甲类传染病。
霍乱弧菌
O1群 非O1群
古典生物型 埃尔托生物型
小川型 Ogawa (AB) 稻叶型 Inaba (AC) 彦岛型 Hikojim (ABC)
霍乱病原菌
O139群（Bengal）
O2-O200群
腹泻病原菌
▪ 病原体
O1群，O139群霍乱弧菌
▪ 发病特征：
剧烈腹泻、呕吐、严重脱水时致酸中毒、循环衰竭而致死亡 不治疗或医疗很差的条件下病死率可达到20－50％（重症病人达70－ 100％）
菌落鉴定
▪ 染色镜检
革兰染色阴性的短杆菌
▪ 血清凝集试验：
➢分别使用O1群，O139群霍乱血清进行凝集试验，同时使用生理盐水进行 对照凝集，以排除与生理盐水发生凝集的自凝菌。 ➢生理盐水不凝集，O1群血清明显凝集的菌落，进一步使用稻叶型和小川型 血清进行凝集试验，判定型别：稻叶型血清凝集而小川型血清不凝集的菌落 为稻叶型，小川型血清凝集而稻叶型血清不凝集的菌落为小川型，如稻叶型 血清和小川型血清均出现凝集的时候，要注意鉴别是否为彦岛型，需进行试 管凝集试验且两者的凝集效价均超过一半以上才能判定为彦岛型，因为某些 小川型菌落自身会带有少量的C抗原而出现与稻叶型血清发生弱凝集，因此 如小川型血清凝集较稻叶型血清凝集有明显优势时应维持小川型的判定。 ➢生理盐水不凝集，O139群血清明显凝集的菌落，一般为O139群，但其与 O22群及O155群甚至一些非霍乱弧菌会出现交叉凝集，由上级实验室进行 进一步确认。
霍乱
第章霍乱霍乱（cholera）是由霍乱弧菌（vibrio cholerae）引起的急性肠道传染病，属国际检疫传染病，在我国被列为甲类传染病。
第一节教学大纲要求1．掌握霍乱的流行概况、发病机制和病理、,临床表现、实验室检查、诊断、治疗和预防。
2．熟悉霍乱弧菌的生物型特点、三种血清型。
3．了解流行病学的三个环节、鉴别诊断要点及预后。
第二节内容精要与重点一、霍乱弧菌霍乱弧菌为革兰氏阴性，菌体弯曲呈弧状或逗点状，镜检可见其呈鱼群状排列，有鞭毛，运动活泼，在碱性蛋白胨水中生长良好。
霍乱弧菌分为3群，其中仅O1 群与非O1 群的O139血清型可引起霍乱流行。
O1 群霍乱弧菌有两个生物型、三个血清型，是霍乱的主要致病菌。
产生霍乱肠毒素可引起剧烈腹泻。
二、流行病学患者和带菌者是霍乱的主要传染源，其中轻型患者和无症状感染者作为传染源的意义更大。
主要通过被污染的水源、食物、生活密切接触和苍蝇媒介而传播，易引起局部暴发流行。
人群普遍易感，在热带、沿江沿海地带夏秋季节流行。
三、发病机制与病理霍乱弧菌不直接侵犯肠壁，而是通过肠毒素刺激细胞分泌亢进，使大量体液和电解质进入肠腔而发生剧烈吐泻，由于大量脱水和失盐，可引起代谢性酸中毒，循环衰竭或休克。
失水使胆汁分泌减少，故吐泻物呈“米泔水”样。
病理特点主要是严重脱水引起的一系列改变。
四、临床表现急性起病，典型病程可分三期。
①泻吐期：突然发生的剧烈腹泻、呕吐，多数无里急后重、无发热。
腹泻量多、次频，水样或“米泔水”样，少数重症患者可呈洗肉水样便。
呕吐呈喷射状，亦可为“米泔水”样；②脱水期：病人迅速呈现脱水和周围循环衰竭。
根据脱水程度分为轻、中、重三型。
严重失水导致电解质紊乱、酸碱失衡、尿毒症、急性肺水肿以及休克等严重后果；③反应恢复期：患者脱水纠正，症状消失，逐渐恢复正常。
约1/3患者可出现发热。
五、实验室检查红细胞、白细胞、血红蛋白增高。
以患者新鲜粪便或呕吐物悬滴镜检，可见细菌呈穿梭状运动，以特异血清可制动，涂片染色镜检见革兰氏阴性呈鱼群状排列的弧菌。
霍乱弧菌国标标准方法
霍乱弧菌国标标准方法
霍乱弧菌是一种引起霍乱的弧菌属细菌。
为了有效防控霍乱疫情，国家制定了
相关的标准方法来监测和检测霍乱弧菌的存在和潜在威胁。
以下是关于霍乱弧菌国标标准方法的介绍。
霍乱弧菌国标标准方法主要包括样品采集、实验室分析和结果解读三个方面。
1. 样品采集：根据国家标准方法，样品的采集需要遵循严格的卫生规范。
一般
来说，水样、食物样品和环境表面样品是常见的采集对象。
采集时需要使用无菌容器，避免样品污染。
同时，应根据实际情况选择合适的采集方法和采样点，确保能够准确反映被测对象的情况。
2. 实验室分析：实验室分析是判定霍乱弧菌是否存在的重要环节。
通常采用培
养法进行分析，包括选择适当的培养基、温度和时间等。
在培养过程中，需要注意避免其他细菌的污染，保证结果的准确性。
此外，也可以使用分子生物学技术如PCR检测方法进行快速和准确的分析。
3. 结果解读：根据国家标准方法，对于从采集到的样品中检出霍乱弧菌的，应
根据相应的标准或参考值来进行解读。
结果解读需要根据实验室分析的结果，结合相关的卫生标准来判断是否存在风险，以及是否需要采取相应的控制和预防措施。
综上所述，霍乱弧菌国标标准方法是一种用于监测和检测霍乱疫情的重要手段。
准确采集样品、实验室分析和结果解读是该方法的关键步骤。
通过执行国家标准方法，我们能够及时发现和控制霍乱弧菌的传播，从而保障公众的健康和安全。
霍乱检测操作规程
霍乱检测操作规程霍乱是一种由霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，其症状包括剧烈腹泻、呕吐和腹痛。
霍乱具有高度传染性，因此在进行霍乱检测时需要遵循一定的操作规程，以确保实验室工作人员和社会公众的安全。
下面是一份霍乱检测的操作规程，以供参考。
1. 实验室准备：- 确保实验室设备和试剂的完好和有效性。
- 准备好所需的培养基、试剂和仪器。
- 提前准备好相关实验记录和报告模板。
2. 实验室设备清洁和消毒：- 定期对实验室设备进行清洁和消毒，特别是接触到样本的仪器和工具。
- 使用合适的消毒剂对实验台面、试剂架和实验室周边进行消毒。
3. 样本采集和处理：- 使用适当的个人防护装备，包括手套、口罩和护目镜。
- 选择合适的采样方法，如直肠拭子、粪便样本或病人的呕吐物。
- 将采样好的样本放入严密密封的容器中，避免样本泄漏和污染其他样本。
- 将样本尽快送往实验室进行处理，以确保有效的检测结果。
4. 霍乱检测方法：- 使用合适的实验方法和试剂进行霍乱的检测，如PCR、免疫学检测或培养方法。
- 按照试剂和仪器的说明书进行实验操作，确保准确和可靠的结果。
- 对实验过程中的废液和废物进行正确处理，以防止污染和传播。
5. 结果判读和报告：- 对检测结果进行仔细的观察和判断，根据标准判定结果的阴阳性。
- 将结果记录在实验记录中，并及时生成报告。
- 如有需要，将结果报告给相应的卫生部门和相关人员。
6. 实验室安全和废物处理：- 在实验室操作过程中，严格遵守实验室安全规定，确保操作人员的安全。
- 对实验室产生的废液和废物进行正确的处置和处理，以降低污染和传播的风险。
- 使用合适的方法和设备对操作台面和工具进行清洁和消毒。
7. 实验室记录和质量控制：- 对实验室操作进行详细的记录，包括样本信息、实验步骤和结果等。
- 定期进行质量控制实验，以确保实验的准确性和可靠性。
- 定期进行实验室内部和外部的质量评估，及时发现和纠正实验中的问题。
总结：霍乱检测的操作规程至关重要，它能确保实验室工作人员和社会公众的安全。
生物安全实验室划分标准
生物安全实验室划分标准生物安全防护实验室是指生物实验室的安全操作规程、结构和设施、安全设备能够确保工作人员在处理含有致病微生物及其毒素时，不受实验对象侵染，周围环境不受污染。
生物安全防护一级实验室一般适用于对健康成年人无致病作用的微生物；二级适用于对人和环境有中等潜在危害的微生物；三级适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物或其毒素；四级适用于对人体具有高度的危险性，通过汽溶胶途径传播或传播途径不明、目前尚无有效疫苗或ZL方法的致病微生物或其毒素。
分为四级，一级Z低，四级Z高。
是根据微生物及其毒素的危害程度不同分类的。
一级生物安全实验室：若在此级实验室内同时进行非基因重组的实验时,需明确划分实验区域,小心进行操作.一级生物安全实验室具备跟一般微生物学实验室相同等级的设备.实验所产生之所有生物材料废弃物,需尽快灭菌后再依院方「感染性废弃物管理」相关办法丢弃.被污染的器具需先经灭菌后,再清洗使用或丢弃. 不得用口做吸量操作.每日实验结束时需灭菌实验台,如实验中发生污染,需立即加以灭菌.操作重组体之后,或离开实验室之前要洗手.在所有操作中,应尽量避免产生气雾.进行实验时,宜关闭实验室的门窗.实验室内禁止饮食,吸烟及保存食物.要从实验室搬离被污染物品时,必需将其放入坚固且不漏的容器,在实验室内密封后才可运出.防除实验室的非实验用生物,如昆虫及鼠类等.需遵守计划主持人所订之其他事项.若有其他方法可用,应避免使用针头.实验用衣物的使用,需遵从计画主持人的指示.二级生物安全防护实验室1、在实验室内配备生物安全柜。
2、设洗眼设施，必要时应有应急喷淋装置。
3、符合BSL-2实验室建设要求。
4、有可靠的电力供应和应急照明。
必要时，重要设备如培养箱、生物安全柜、冰箱等应设备用电源。
5、实验室门口带锁并可自动关闭。
实验室的门应有可视窗。
6、在实验室的工作区域处应有存放个人衣物的条件。
7、在实验室所有的建筑内配备高压蒸汽灭菌器，并按期检查和验证，以保证符合要求。
霍乱弧菌实验室检测完整版
中、重型病例 。 临床诊断病例：符合下列任一类病例均为临床诊断病例。 临床表现为轻、中、重型或中毒型病例，并在腹泻病患者日常生活用品或家居环境中
检出O1群或/和O139群霍乱弧菌；
在一起确认的霍乱暴发疫情中，暴露人群中临床表现为轻、中、重型或中毒型病例。 实验室确诊病例： 临床病人并粪便、呕吐物或肛拭子细菌培养分离到O1群或/和O139群霍乱弧菌 ； 在疫源检索中，粪便培养检出O1群或O139群霍乱弧菌前后各5天内有腹泻症状者。
挑可疑菌落、多价血清凝集
胶体金层析 卡检测
胶体金层析 卡检测
核酸提取 荧光PCR检测
血清分型、生化鉴定
问题：实验时间；灵敏度；初筛；等待时间
标本的采集和运输
采集：
病例：粪便、肛拭子、呕吐物 未使用抗生素之前 “健康”人：粪便、肛拭子 其他传播环节的标本：食物、水、操作台、砧板、下水道口……
要求：位置、数量
运输：
C-B运输培养基（pH8.4） 碱性蛋白胨水：不是最佳的，尤其6小时内还不能进行培养时，不要用 运输培养基用前预冷1-2小时，采样后不能立即运至实验室时，需冷藏
特定地区？
感染因素多样化
初级感染因素、衍生的感染因素
确诊 病例 采样检测
就诊
患者
- 临床及时发现病例 - 细致的流行病学调查 - 实验室检测与分析 - 信息整合 - 控制行动
标本-粪便、呕吐物、水体、食品、、、
前处理：运输、调pH
增菌：碱性蛋白胨水（水体：加十倍浓缩液），6h – 过 夜
涂平板，16h ： 4号琼脂、TCBS、庆大霉素
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实验室霍乱弧菌检测应急预案及流程
实验室霍乱弧菌检测应急预案及流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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霍乱
(D) Entry of A subunit.
(E) Reduction of disulfide bond of A subunit by intracellular glutathione, freeing A1 and A2.
(F) Cleavage of NAD by A1 yielding ADP-ribose and nicotinamide.
人群易感性
• 普遍易感 • 隐性感染者多，显性感染者少 • 病后获得免疫力，但持续时间短，可再 次感染（再感染率0.22%）
问题一
霍乱易感性受下列哪些因素影响？
A 胃酸 B 卫生习惯 C 年龄 D 人口流动 E 上述均是
流行特征
• 热带地区：全年发病 • 我国：夏秋季流行，高峰期7～9月
• 地理特点:分布在沿江沿海
治
疗
治疗原则
• 严格隔离 • 及时、足够补液 • 辅以抗菌和对症治疗
严格隔离
• 按甲类肠道传染病隔离
• 迅速上报疫情 • 症状消失后，隔日粪便培养，连续 三次培养阴性，可解除隔离
• 呼吸深长，可有意识障碍。
4、肌肉痛性痉挛（钠盐丢失）
• 腹直肌及腓肠肌多见 • 痉挛部位的疼痛和肌肉强直状态。
5、低血钾
• 肌张力减低，腱反射消失 • 鼓肠，肠鸣减弱 • 心律失常、心动过速
三、恢复及反应期
——少数病人有反应性低热（持续1-3天， 体温38-39℃） 循环改善致残余毒素吸收
O139型霍乱的临床特征
• 非O1群霍乱弧菌：不凝集弧菌 • 不典型O1群霍乱弧菌：不产肠毒素，不致病
O1群霍乱弧菌
• 根据表现型的不同，分为两个生物型：
• 古典生物型（classical biotype） • 埃尔托生物型（El Tor biotype）
霍乱弧菌实验室检验技术
抗原构造
O139群霍乱弧菌不被已知的O1-O138群霍乱弧 菌诊断血清所汇集。表明本菌的抗原性与O1群 和其它非O1群霍乱弧菌有明显区别。 革兰氏阴性菌的抗原性都是由细胞壁的脂多 糖（LPS）所决定。通过对O139群霍乱弧菌的 LPS进行化学分析和血清学分析后发现O139群 霍乱弧菌缺少O1群霍乱弧菌LPS中的特异性成 分。 通过两者进行提取其LPS然后进行被动溶血试 验与被动溶血抑制试验检测，结果显示两者抗 原性有显著不同。O139群霍乱弧菌有荚膜而 O1群霍乱弧菌无荚膜。
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两者不同点：
群所致病中有44 O139群所致病中有 44.3% 可发生腹部痉 139 群所致病中有 44. 也有引起严重粘液性腹泻的， 挛 ， 也有引起严重粘液性腹泻的 ， 进入 外周血液可引起发热， 外周血液可引起发热 ， 出现菌血症或败 血症。 印度出现20 例病人中有17 例发热、 20例病人中有 17例发热 血症 。 印度出现 20 例病人中有 17 例发热 、 白细胞增多。 白细胞增多 。 而 O1 群引起的病人未曾见 过。 鉴别两者， 必须通过血清学诊断 来区分。 血清学诊断来区分 鉴别两者 ， 必须通过 血清学诊断 来区分 。 22群与 139群血清有交叉汇集反应 群与O 群血清有交叉汇集反应， O22群与O139群血清有交叉汇集反应，必 须用O22群弧菌吸收 群弧菌吸收， 须用O22群弧菌吸收，去除交叉汇集现象。
病，发病急、传播速度快、波及范 围广、危害严重的甲类传染病。 ♦ 是国内交通检疫传染病之一。 ♦ 也是当今三种国际检疫传染病中最 严重的一种。
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霍乱病原菌发现
♦ 1883年德国科学家Koch发现霍乱弧菌 ♦ 1905年埃及埃儿托检疫站首次分离到
霍乱弧菌课程设计
霍乱弧菌课程设计一、课程目标知识目标：1. 学生能够理解霍乱弧菌的基本特征，掌握其分类、形态结构和生理特点；2. 学生能够了解霍乱弧菌的传播途径、感染过程及引起的霍乱疾病的症状；3. 学生掌握霍乱弧菌的检测方法，了解实验室诊断和防控措施。
技能目标：1. 学生能够运用所学知识，分析霍乱弧菌的生物学特性，提高观察、思考和分析问题的能力；2. 学生能够运用实验室技术，进行霍乱弧菌的检测，提高实验操作技能；3. 学生能够运用所学知识，设计并实施预防霍乱弧菌传播的措施，提高解决实际问题的能力。
情感态度价值观目标：1. 学生通过学习霍乱弧菌的相关知识，认识到微生物在自然界和人类生活中的重要作用，增强对生物科学的热爱；2. 学生了解霍乱弧菌引起的霍乱疾病对社会和人类健康的影响，提高社会责任感和健康意识；3. 学生在小组合作学习过程中，培养团队协作精神，提高沟通、交流和分享成果的能力。
课程性质：本课程为生物学科领域的选修课程，结合学生年级特点，以提高学生的生物科学素养和实验操作技能为主。
学生特点：学生具备一定的生物基础知识，对微生物感兴趣，但实验操作能力有待提高。
教学要求：教师应注重理论与实践相结合，运用生动案例和互动教学，激发学生的学习兴趣，提高学生的观察、分析和解决问题能力。
同时，注重培养学生的实验操作技能和团队协作精神。
通过本课程的学习，使学生能够达到预设的知识、技能和情感态度价值观目标。
二、教学内容根据课程目标，本章节教学内容主要包括以下三个方面：1. 霍乱弧菌基本知识：- 弧菌的分类、形态结构及生理特点；- 霍乱弧菌的生物学特性及其与其他弧菌的区别；- 霍乱弧菌的传播途径、感染过程和引起的霍乱疾病症状。
2. 霍乱弧菌检测与防控：- 实验室检测霍乱弧菌的方法和技术；- 霍乱弧菌的防控措施及实验室生物安全；- 结合案例分析，了解霍乱弧菌感染的预防和控制策略。
3. 实践操作与拓展：- 设计并实施霍乱弧菌检测实验，提高实验操作技能；- 探讨霍乱弧菌在环境、食品和水源中的分布情况；- 了解霍乱弧菌的疫苗研发及免疫预防。
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霍乱的流行病学
霍乱的病原菌：霍乱弧菌 是我国《传染病防治法》：甲类传染病（又称2号病）， 是国际检疫的烈性传染病 霍乱：七次世界大流行： 1817-1923年 六次大流行 （均从印度恒河三角洲发源地）~古典生物型； 1961年 第七次大流行 ElTor生物型（我国以ElTor生物 型为主） 1992年 在印度， 孟加拉， 泰国发生的霍乱，分离到菌 株不与O1群霍乱血清凝集，定为O139群，被认为下一次 大流行的主角。浙江省94年发现，
疑似病人或急诊病人如何处理
如是高度怀疑的疑似病人或急诊病人可在接种碱性胨水培 养基的同时直接再接种于4号琼脂培养基一个。 标本直接涂片，镜检观察有没有呈鱼群穿梭样或流星状运 动活跃的细菌，如有加一滴霍乱诊断血清后再观察细菌运 动情况（3分钟运动被抑制为制动试验+） 标本直接涂片作革兰氏染色，镜检观察弧状或逗点状，革 兰染色阴性的细菌。 如形态典型，运动活泼，制动试验+，可作出疑似初步报 告，报涂片见到xx形态，xx染色性细菌等。--常见于紧急 情况
℃
- 抗原性
-生化反应：发酵葡萄糖，甘露醇，蔗糖，产酸不产气
霍乱红试验（+） o/129敏感试验（+） 赖氨酸，鸟氨酸脱羧酶（+） 精氨酸双水解酶（-） 氧化酶（+）粘丝试验（+）
-致病性：侵袭力 （鞭毛来自菌毛）霍乱肠毒素 -抵抗力：水中存活20天，怕酸耐碱，庆大霉素耐药 -消毒： 漂白粉
霍乱弧菌常规检验
霍乱弧菌的病原学特点
-形态与染色： 弧状或逗点状 -革兰染色阴性 有一根单鞭毛，细菌运动非常活跃，呈鱼 群穿梭样或流星状 -培养特性：营养要求不高，生长较快，兼性厌氧。 最适生长温度为37 ℃ ， 怕酸嗜碱，最适pH7.2-7.4, PH7.4-9.6快速生长 O抗原：耐热，耐受100℃2h,特异性高，分群 和分型的基础。 H抗原：不耐热，特异性低
谢谢
霍乱病原分离培养及鉴定
鉴定： - 以血清学（玻片凝集）为主，结合形态学，生化反应作出 判断。 玻片凝聚试验： - 试剂：o1群霍乱弧菌多价和单价诊断血清 o139群诊断血清 - 方法：从分离培养基上挑起可疑菌落分别用o1群霍乱弧菌 多价诊断血清和o139群诊断血清作玻片凝集试验，立即出 现凝集者为阳性，同时设生理盐水对照。
霍乱菌株的管理，保存与上送
对首发病例分离的霍乱菌株需送上一级实验室作进一步鉴 定或复合。 送前应按要求完成相应霍乱弧菌的常规鉴定：o1/o139群 霍乱诊断血清玻片凝集试验，革兰氏染色与形态，氧化酶 试验，动力观察等。 按《感染人类高致病微生物菌毒种或标本运输管理规定》 要求，存放菌种，常温下运输。 送交上一级CDC复核鉴定前，应填写好菌种转送记录单。
霍乱弧菌抗原结构及分类
抗原结构：霍乱弧菌有耐热的菌体（O)抗原和不耐热的鞭毛（H)抗原， H抗原为霍乱弧菌属所共有，O抗原有群特异性3型特异性两种抗原， 是霍乱弧菌分群和分型个基础。 WHO腹泻控制中心将霍乱弧菌分为三群： -O1群霍乱弧菌：古典生物型和埃尔托生物型。 O1群 的特异抗原有ABC三种，其中A抗原为O1群共有， A与其他B和C结合则可分为三型：原型-AC（稻叶），异型-AB（小 川），中间型-ABC（彦岛） -非O1群霍乱弧菌：H抗原与O1相同，O抗原则不同，可分137个血清 型，一般引起的胃肠型腹泻不作霍乱处理。但O139除外，它在92年 被认定为真正的霍乱弧菌。 -不典型O1群霍乱弧菌：该菌不产生肠毒素，无致病性。
标本采集，送检和保存 霍乱的病原学检查 病原分离技术要点
标本采集，送检和保存
粪便：标本的采集以病人粪便为主，水样便采取1-3ml.成 形便采取指甲大小的粪便，亦可用直肠拭子（要求棉拭子 插入直肠3-5cm处采取）。接种于碱性胨水培养基，37增 菌6-8h后，划线接种于4号琼脂培养基。 如是高度怀疑的疑似病人或急诊病人可在接种碱性胨水培 养基的同时直接再接种于4号琼脂培养基一个。 不能立即检查的，要把采集标本放入碱性胨水培养基或文 腊二氏保存液或采集标本插入Cary-Blair半固体保存培养 基中。
霍乱病原分离培养及鉴定
选择性的增菌培养基：碱性胨水ph8.5 37增菌培养6-8h后 移种 常用的强选择性培养基： ph8.4-ph8.6 庆大霉素琼脂（GTA） 四号琼脂 硫代硫酸钠盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂（TCBS） 弱选择性培养基：（现基本不用） 碱性琼脂，碱性胆盐琼脂 菌落特征：扁平湿润半透明，菌落中心呈灰黑色 生化反应：
病原分离技术要点
霍乱是烈性传染病，对首发病人的病原学诊断要做到快速， 准确并及时作出检测报告（阳性报告不超过24h) 因是用玻片凝聚试验作出鉴定，所以要求平板分离要有单 个菌落，要求用9cm的平板分离，不允许9cm的平板分离 二份以上样品。 因o139和o1群抗原性不一样，所以血清凝集必须要分别 用用o1群霍乱弧菌多价诊断血清和o139群诊断血清作玻 片凝集试验，不能只用一个，同时要作生理盐水对照。