无菌检查法
无菌检查法
附录ⅩⅢB 无菌检查法无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度10 000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在 2 ℃～25 ℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基酪胨(胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5gL-胱氨酸0.5g 新配制的0.1% 刃天青溶液 1.0 ml硫乙醇酸钠0.5g 琼脂0.75g(或硫乙醇酸) （0.3 ml) 水1000 ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1 ± 0.2 。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2 。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5 ，否则，须经100 ℃水浴加热至粉红色消失（不超过20 分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
无菌检查法-2022版中国药典-电子版
无菌检查法-2022版中国药典-电子版无菌检查应在环境洁净度B级背景下的局部A级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2〜25°C、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1.硫乙醇酸盐流体培养基酪胨（胰酶水解）15.0g酵母浸出粉5.0g葡萄糖5.0g氯化钠2.5gL-胱氨酸0.5g新配制的0.1%刃天青溶液1.0ml硫乙醇酸钠0.5g琼脂0.75g（或硫乙醇酸）（0.3ml）纯化水1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。
灭菌在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100°C水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30〜35C培养。
2.胰酪大豆胨液体培养基胰酪胨17.0g氯化钠5.0g大豆木瓜蛋白酶消化物3.0g磷酸氢二钾2.5g葡萄糖（一水合/无水）2.5g（2.3g）纯化水1000mL除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节pH值使灭菌后在25C的pH值为7.3土0.2，加入葡萄糖，分装，灭菌。
无菌检查法课件
微生物的检测方法
01
02
03
04
培养法
通过培养基培养微生物，观察 其生长情况，进行检测。
显微镜检查
通过显微镜观察微生物的形态 、大小、染色等情况，进行检
测。
生物发光检测法
利用生物发光原理，检测微生 物的存在。
免疫学方法
利用抗原抗体反应，检测微生 物的存在。
03
无菌检查法的操作流程
样品采集
采样前准备
霉菌
常见的无菌检查对象，包 括酵母菌、霉菌等。
病毒
体积较小的微生物，需要 特殊的方法进行检测。
微生物的生长条件
营养物质
微生物生长需要各种营养 物质，如碳源、氮源、水 、无机盐等。
温度
不同微生物需要在不同的 温度下生长，一般温度范 围在20℃-45℃之间。
pH值
微生物生长的酸碱度条件 ，不同微生物适应的pH值 范围不同。
操作规范
严格遵守无菌操作规程，避免交叉污染。
样本处理
对样本进行适当的处理，以去除杂菌并保留所需检测的微生物。
培养条件
确保培养基处于适宜的温度和湿度条件下，以促进微生物的生长。
观察记录
对实验过程进行详细记录，包括操作步骤、观察结果等。
实验后的处理
器具清洗
实验结束后，对使用过的器具进行彻底清洗 和消毒。
防止污染
在接种和培养过程中，应采取措施防 止培养基和培养物受到污染。
结果观察与判定
观察微生物生长情况
定期观察培养物的生长情况，记录生 长特征和菌落形态等信息。
菌落计数
结果判定
根据检验目的和标准要求，对观察到 的微生物生长情况进行判定，如是否 符合无菌要求或特定微生物的存在与 否。
无菌检查法
无菌检查法-2015版中国药典无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基酪胨 (胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5gL-胱氨酸 0.5g 新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.75g(或硫乙醇酸) （ 0.3 ml) 纯化水 1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1±0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20 分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
无菌检查法
无菌检查法Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】无菌检查法：系指检查药品、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其它品种是否无菌的一种方法。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室温控18℃~26℃，相对湿度45%～65%，操作室或工作台应保持空气正压。
无菌室的清洁与消毒应符合《质保部洁净室清洁消毒规程》（10-G-07404）的规定。
无菌室无菌程度的检查应符合规定：见《洁净区沉降菌监测规程》（10-G-09113）、《洁净区尘埃粒子监测规程》（10-G-09114）。
实验设备及用具：电热干燥箱、电热手提式压力蒸汽灭菌器、电热恒温培养箱、试管、注射器、针头、试管架、刻度吸管、手术剪、手术镊、砂轮、注射器盒、搪瓷托盘、双碟、75%酒精棉球、碘酒棉、无菌工作服（衣、裤、帽、口罩等）。
微孔滤膜：直径50mm、孔径μm～μm，应符合规定。
除菌滤器所有进入无菌室的物品必须经过消毒或灭菌，应严格按照《物品进入质保部洁净室清洁消毒规程》（10-G-07403）进行操作。
稀释剂：灭菌注射用水。
培养基：需气菌、厌气菌培养基（流体硫乙醇酸盐培养基）；真菌培养基。
培养基的使用，配制、管理及灵敏度检查应按照《培养基管理规程》（10-G-07406）、《培养基灵敏度检查规程》（10-G-07408）、《培养基配制规程》（10-G-07407）进行操作。
在使用前，细菌培养基须经30~35℃培养不少于14天，真菌培养基经20~25℃培养不少于14天，证明无菌后方可使用。
本检查可与供试品的无菌检查同时进行。
对照用菌液：金黄色葡萄球菌（Staphyoccus sureus）菌液：取金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]的营养琼脂斜面新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，在30~35℃培养16~18小时后，用%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含10~100个菌。
无菌检查法-2010版中国药典
附录Ⅻ A 无菌检查法无菌检查法系用于检查药典要求无菌的生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度10 000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基培养基的制备培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2℃～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在三周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基酪胨(胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5gL-胱氨酸0.5g 新配制的0.1% 刃天青溶液 1.0 ml硫乙醇酸钠0.5g 琼脂0.75g(或硫乙醇酸) （0.3 ml) 水1000 ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1 ±0.2 。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2 ，灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5 ，否则，须经100 ℃水浴加热至粉红色消失（不超过20 分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
2.改良马丁培养基胨 5.0g 磷酸氢二钾 1.0g酵母浸出粉 2.0g 硫酸镁0.5g葡萄糖20.0g 水1000 ml除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 值约为6.8 ，煮沸，加入葡萄糖溶解后，摇匀，滤清，调节pH 值使灭菌后为6.4 ±0.2 ，分装，灭菌。
医疗器械无菌检查方法
医疗器械无菌检查方法医疗器械无菌检查是指检测医疗器械是否达到无菌状态的一项重要工作。
无菌状态是医疗器械使用过程中的基本要求，保障了患者的安全和手术的成功。
下面将介绍常用的医疗器械无菌检查方法。
1. 外观检查法外观检查法是最常用的无菌检查方法之一。
通过肉眼观察医疗器械外观是否完整、无污染、无破损等情况来判断其无菌状态。
外观检查应在充足的光线下进行，仔细观察器械的各个部位，特别是接触患者体内的部分，如针头、导管等，以确保其没有明显的缺陷。
2. 包装完整性检查法包装完整性检查法是通过检查医疗器械的包装是否完好无损来判断其无菌状态。
包装是保护医疗器械不受外界污染的重要屏障，因此包装完整性对于无菌状态的保证至关重要。
检查时应注意包装是否有破损、破裂、渗透等现象，若发现问题应立即停止使用。
3. 生物检测法生物检测法是一种直接判断医疗器械无菌状态的方法。
它通过将医疗器械暴露于一定时间的培养基中，观察培养基是否出现细菌或真菌的生长来判断器械是否无菌。
这种方法具有高度的准确性和可靠性，但需要一定的时间和专业的实验室设备。
4. 物理化学检测法物理化学检测法是通过检测医疗器械上的物理性能和化学指标来判断其无菌状态。
常用的物理性能检测方法包括：渗透测试、密封性测试、抗拉强度测试等；化学指标检测方法包括：气体浓度检测、重金属含量检测等。
这些方法不仅可以判断器械是否无菌，还可以评估其质量和可靠性。
5. 辐射灭菌检测法辐射灭菌是常用的无菌处理方法之一，通过辐射杀灭医疗器械上的微生物。
辐射灭菌后，可以使用辐射灭菌检测法来判断器械是否达到无菌状态。
常用的辐射灭菌检测方法有：D值测定、剂量监测、生物指标检测等。
这些方法可以评估辐射灭菌的有效性和安全性。
无菌检查是医疗器械质量控制的重要环节，也是保障患者安全的关键步骤。
不同的检测方法可以相互补充，提高无菌检查的准确性和可靠性。
医疗机构应建立完善的无菌检查制度，培训医务人员掌握无菌检查的方法和技巧，确保医疗器械的无菌状态，保障患者的安全。
1101 无菌检查法
1101 无菌检查法无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌的培养；胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基胰酪胨15.0g 氯化钠 2.5g酵母浸出粉 5.0g 新配制的0.1%刃天无水葡萄糖 5.0g 青溶液 1.0mlL-胱氨酸0.5g 琼脂0.75g硫乙醇酸钠0.5g 水1000ml（或硫乙醇酸）（0.3ml）除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH，使灭菌后在25℃的pH值为7.1±0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
无菌检查法(逐字对比20版药典变化)
无菌检查法，逐字对比20版药典变化无菌检查的定义及无菌检查的适用条件无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器械、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供拭品中微生物的检出。
单向流空气区域、工作台面及受控环境应定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确认。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或成品培养基商品化的预制培养基。
胰酪胨 1.50g氯化钠 2.5g酵母浸出粉 5.0g葡萄糖/无水葡萄糖 5.5g/5.0g新配制的0.1% 刃天青溶液 1.0mlL-胱氨酸0.5g琼脂 0.75g硫乙醇酸钠 0.5g水 1000ml(或硫乙醇酸）（0.3ml）除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节PH为弱碱性，煮沸，滤清，加人葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节PH, 使灭菌后在25℃的PH值为7.1土0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
2、胰酪大豆胨液体培养基▲该项目下2020版药典四部通则与2015版药典四部通则内容无变化3、中和或灭活用培养基按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基的处方及制法，在培养基灭菌前或使用前加人适宜的中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验。
4、0.5 %葡萄糖肉汤培养基（用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查）▲该项目下2020版药典四部通则与2015版药典四部通则内容无变化5、胰酪大豆胨琼脂培养基▲该项目下2020版药典四部通则与2015版药典四部通则内容无变化6、沙氏葡萄糖液体培养基▲该项目下2020版药典四部通则与2015版药典四部通则内容无变化7、沙氏葡萄糖琼脂培养基▲该项目下2020版药典四部通则与2015版药典四部通则内容无变化培养基的适用性检查无菌性检查每批培养基一般随机取不少5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。
卫生学检查技术—无菌检查法
无菌检查法
一、基本知识
（一）基本概念 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器
具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
（二）检查对象 各类注射剂、吸入粉雾剂、眼用制剂、可吸收的止
血剂、用于手术、烧伤及严重创伤的局部给药制剂等
二、无菌ห้องสมุดไป่ตู้查的人员与环境
无菌检查的人员：具备微生物专业知识，并经无菌技术培训。 无菌检查环境：环境洁净度为10000级下的局部洁净度100级的单向 流空气区域内或隔离系统 无菌检查要求：全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防 止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。日常检验还需对试 验环境进行监控。
三、供试品的无菌检查
阳性对照 应根据供试品特性选择阳性对照菌，选择方法可以见下表。阳性对照试验的菌
液制备同方法验证试验，加菌量小于100cfu，供试品用量同无菌检查每份培养基 接种的样品量。阳性对照管培养48～72小时应生长良好。
不同特性的供试品
无抑菌作用 及抗革兰氏阳性菌为主
阳性对照菌 金黄色葡萄球菌
试验若经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品， 依法检查，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长， 判供试品不符合规定。
抗革兰氏阴性菌为主
大肠埃希菌
抗厌氧菌的供试品
生孢梭菌
抗真菌的供试品
白色念珠菌
三、供试品的无菌检查
阴性对照 供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释剂，冲洗液同法操作，作为
阴性对照。阴性对照不得有菌生长。 无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应
证明其有效性，且对微生物无毒性。 中国药典的“无菌检查法”有直接接种法和薄膜滤过法两种。只要供试
药品无菌检查法——检查法
2.操作 取上述备妥的供试品,以无菌操作将该供试品分别接种 于需气菌、厌气菌培养基6管，其中1管接种金黄色葡萄球菌对照用菌 液1ml，作阳性对照,另接种于真菌培养基5管。轻轻摇动,使供试品与培 养基混合。需气菌、厌气菌培养基管置30～35℃、真菌培养基管置20～ 25℃培养7日。在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。阳性对照 管在24小时内应有菌生长，如在加入供试品后，培养基出现浑浊，培 养7天后,不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种 至同种新鲜培养基中或斜面培养基上继续培养，细菌培养2日，真菌培 养3日，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长，或用接种环取培养液 涂片，染色，用显微镜观察是否有菌。
结果判断 当阳性对照管显浑浊并确有细菌生长，阴性对照管呈阴性时，可 根据观察所得的结果判定：如需气菌、厌气菌及真菌培养基管均为澄 清或虽显浑浊但经证明并非有菌生长,均应判为供试品合格；如需气 菌、厌气菌及真菌培养基管中任何1管显浑浊并确证为有菌生长，应重 新取2倍量供试品，分别依法复试，除阳性对照管外，其他各管均不得 有菌生长，否则应判为供试品不合格。
药品无菌检查法—— 检查法
无菌检查法包括：直接接种法和薄膜过滤法。前者适用于非抗菌作 用的供试品，后者适用于有抗菌作用的或大容量的供试品。
操作时，应用适当的消毒液对供试品容器表面或外包装浸没或擦 拭消毒后，以无菌的方法取内容物。
凡无菌检查中，均应取相应溶剂和稀释剂同法操作，作阴性对照。 1. 直接接种法 (1) 供试品准备 供试品如为注射液、供角膜穿通伤及手术用 的滴眼剂或灭菌溶液，按表1或表2规定量取供试品，混合。 供试品如为注射用无菌粉末或无菌冻干品或供直接分装成注射用 的无菌粉末原料，按表1或表2规定量取供试品，加入无菌水或0.9％无 菌氯化钠溶液,或该药品项下规定的溶剂用量制成一定浓度的供试品 溶液。 供试品如为外科敷料，取供试品4个包装,以无菌操作拆开包装， 于不同部位分别剪取约100mg 或1cm×3cm 的供试品11份；肠线、缝合 线取最小包装5个，拆开包装，共取11股，接种于足以浸没供试品的适 量培养基中。 供试品如为灭菌医用器具，依样品大小、形状的不同，取供试品 11个，接种于足以浸没供试品的适量培养基中。或用0.9％无菌氯化钠
无菌检查法-中国药典2010第三部-附录XIIA
附录XII A 无菌检查法无菌检查法系用于检查药典要求无菌的生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在洁净度万级下的局部洁净度百级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基培养基的制备：培养基按以下处方制备，亦可用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2~25℃避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般可在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在1年内使用。
1、硫乙醇酸盐流体培养基酪胨（胰酶水解）15.0g 酵母浸出粉 5.0g葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5gL-胱氨酸0.5g 新配制的0.1%刃天青溶液 1.0mL硫乙醇酸钠0.5g （或硫乙醇酸0.3mL）琼脂0.75g 水1000mL 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调pH值为弱碱性，煮沸，滤清，加入水葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调pH值使灭菌后为7.1±0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2，灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经1000℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟）后，迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
2、改良马丁培养基胨 5.0g 磷酸氢二钾 1.0g酵母浸出粉 2.0g 硫酸镁0.5g葡萄糖20.0g 水1000mL除葡萄糖外，取上述成分混合，微温溶解，调pH值约为6.8，煮沸；加入putaotang 溶解后，摇匀，滤清，调pH值使灭菌后为6.4±0.2，分装，灭菌。
无菌检查法
无菌检査法：系指检查药品、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其它品种是否无菌的一种方法。
5.2无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室温控18°C~26C,相对湿度45%〜65%,操作室或工作台应保持空气正压。
5.2.1无菌室的淸洁与消毒应符合《质保部洁净室淸洁消毒规程》(10-G-07404)的规定。
5.2.2无菌室无菌程度的检査应符合规定：见《洁净区沉降菌监测规程》(10-G-09113)、《洁净区尘埃粒子监测规程》(10-G-09114)o5.3实验设备及用具：5.3.1电热干燥箱、电热手提式压力蒸汽火菌器、电热恒温培养箱、试管、注射器、针头、试管架、刻度吸管、手术剪、手术谡、砂轮、注射器盒、搪瓷托盘、双碟、75%酒精棉球、碘洒棉、无菌工作服(衣、裤、帽、口罩等)。
5.3.2微孔滤膜：直径50mm、孔径0.22pm〜0.45pm,应符合规定。
5.3.3除菌滤器5.3.4所有进入无菌室的物品必须经过消毒或火菌，应严格按照《物品进入质保部洁净室淸洁消毒规程》(10-G-07403)进行操作。
5.4稀释剂：火菌注射用水。
5.5培养基：5.5.1需气菌、厌气菌培养基(流体硫乙醇酸盐培养基)；真菌培养基。
5.5.2培养基的使用，配制、管理及灵敏度检查应按照《培养基管理规程》(10-G-07406)、《培养基灵敏度检查规程》(10-G-07408〉、《培养基配制规程》(10-G-07407)进行操作。
5.5.3在使用前，细菌培养基须经30~35°C培养不少于14天，真菌培养基经20~25°C培养不少于14天，证明无菌后方可使用。
本检査可与供试品的无菌检查同时进行。
5.6对照用菌液：5.6.1金黄色痢萄球菌(Staphyoccus sureus)菌液：取金黄色痢萄球菌［CMCC (B) 26 003］的营养琼脂斜而新鲜培养物1白金耳，接种至营养肉汤培养基内，在30~35°C培养16-18小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每lml中含10-100个菌。
无菌检查法包括
无菌检查法包括：直接接种法和薄膜过滤法。
前者适用于非抗菌作用的供试品，后 者适用于有抗菌作用的或大容量的供试品。
操作时，应用适当的消毒液对供试品容器表面或外包装浸没或擦拭消毒后，以无菌 的方法取内容物。
凡无菌检查中，均应取相应溶剂和稀释剂同法操作，作阴性对照。
1. 直接接种法 (1) 供试品准备供试品如为注射液、供角膜穿通伤及手术用的滴眼剂或灭菌溶 液，按表1或表2规定量取供试品，混合。
供试品如为注射用无菌粉末或无菌冻干品或供直接分装成注射用的无菌粉末原料， 按表1或表2规定量取供试品，加入无菌水或0.9％无菌氯化钠溶液,或该药品项下规定的 溶剂用量制成一定浓度的供试品溶液。
供试品如为外科敷料，取供试品4个包装,以无菌操作拆开包装，于不同部位分别剪 取约100mg或1cm×3cm的供试品11份；肠线、缝合线取最小包装5个，拆开包装，共取11 股，接种于足以浸没供试品的适量培养基中。
供试品如为灭菌医用器具，依样品大小、形状的不同，取供试品11个，接种于足以 浸没供试品的适量培养基中。
或用0.9％无菌氯化钠溶液各40ml，分别冲洗内壁（输血、 输液袋）收集各冲洗液，混合，按薄膜过滤法检查。
供试品如为青霉素类药品，按表1或表3规定量取供试品，分别加入足够使青霉素灭 活的无菌青霉素酶溶液适量，摇匀，混合。
亦可按薄膜过滤法检查。
供试品如为放射性药品，取供试品1瓶（支），接种于装量为7.5ml的培养基中。
每 管接种量为0.2ml。
2.操作取上述备妥的供试品,以无菌操作将该供试品分别接种于需气菌、厌气菌 培养基6管，其中1管接种金黄色葡萄球菌对照用菌液1ml，作阳性对照,另接种于真菌培 养基5管。
轻轻摇动,使供试品与培养基混合。
需气菌、厌气菌培养基管置30～35℃、真 菌培养基管置20～25℃培养7日。
在培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长。
阳性对照 管在24小时内应有菌生长，如在加入供试品后，培养基出现浑浊，培养7天后,不能从外 观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中或斜面培养基上 继续培养，细菌培养2日，真菌培养3日，观察是否再出现浑浊或斜面有无菌生长，或用 接种环取培养液涂片，染色，用显微镜观察是否有菌。
无菌感染的检查方法
无菌感染的检查方法
无菌感染的检查方法主要有以下几种：
1. 细菌培养：通过从患处采集样本，如血液、尿液、伤口分泌物等，将样本放入适当的培养基中，培养出细菌，并进行鉴定和药敏试验，确定感染的菌种和对抗生素的敏感性。
2. 细菌DNA检测：利用PCR等分子生物学技术，直接检测样本中的细菌DNA，可以快速、准确地确定感染的菌种。
3. 血液标志物检测：通过检测血液中的炎症标志物、白细胞计数和C反应蛋白等指标，判断是否存在感染。
4. 组织活检：对于深部组织感染，可以通过手术或穿刺等方法获取组织样本，进行组织学检查和细菌培养，确定感染的菌种和病变情况。
5. 影像学检查：如X线、CT、核磁共振等检查，可以观察感染部位的病变情况，帮助确定感染的范围和严重程度。
以上是常见的无菌感染的检查方法，具体选择何种方法取决于感染的部位和症状，医生会根据具体情况进行判断和决定。
无菌检查法-版中国药典-电子版
无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基酪胨 (胰酶水解) 酵母浸出粉葡萄糖氯化钠L-胱氨酸新配制的 % 刃天青溶液硫乙醇酸钠琼脂(或硫乙醇酸) （ ml) 纯化水 1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为±。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20 分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃培养。
无菌检查法
目的：建立无菌检查法的标准操作程序，规范无菌检查法的操作。
范围：适用于无菌检查法。
职责：检验室主任、检验员。
规程：1 概述无菌检查是检查药品、敷料、缝全线、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其它的品种是否染有活菌的一种方法，无菌检查的操作环境和全部过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，同时也应避免在有抑菌条件下操作。
该检查法根据供试品有无抑菌作用而采用薄膜过滤法或直接接种法两种方式。
2 仪器、设备和用具2.1 无菌室分无菌操作室和缓冲间，在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等物，无菌操作室外应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，局部洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温控(25±2)℃及除湿装置，缓冲间及操作室内均设置能达到空气消毒的紫外灯和照明灯，操作室或工作台应保持正压。
2.1.1 无菌室应每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭溶液或2%甲酚液或其他适宜消毒液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1小时，在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌半小时。
2.1.2 无菌室的无菌程度检查，无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数；取直径约90mm双碟，在接种室外内点燃乙醇灯，在乙醇灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml制成平板，在30～35℃预培养48小时，证明无菌后将平板3个，以无菌方式带入无菌操作室内的洁净区左、中、右各放1个；打开碟盖放置，平板在空气中暴露30分钟后将碟盖盖好，置30～35℃培养48小时，取出检查，100级清洁度要求：3个平板上生长的菌落数平均不得超过1个。
无菌操作台面或超净工作台定期请有关部门检测其洁净度，应达到1000级(一般尘埃粒子计数仪)检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个/升；空气流量应控制在0.75～1.0m3/S；细菌菌数平均＜1个，可根据无菌状况必要时置换过滤器。
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实用文档
培养基PH区别
2010版
2015版
改良马丁培养基 调节 pH 值使灭 菌后 为 6.4 ± 0.2
胰酪大豆胨液体 培养基
Байду номын сангаас
营养肉汤培养基 调节 pH 值使灭 菌后 为 7.2 ± 0.2
胰酪大豆胨琼脂 培养基
营养琼脂培养基 调节pH 值使灭菌 沙氏葡萄糖液体 后为 7.2±0.2 培养基
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培养基接种直观区别
2010版
2015版
硫乙醇酸 9支 金黄色葡萄球 硫乙醇酸 7支
盐流体培
菌、铜绿假单 盐流体培
养基
胞菌、枯草芽 养基
孢杆菌、生孢
梭菌
改良马丁 5支 白色念珠菌、 胰酪大豆 7支
培养基
黑曲霉
胨液体培
养基
金黄色葡萄球 菌、 铜绿假单胞菌、 生孢梭菌
枯草芽孢杆菌、 白色念珠菌、 黑曲霉
2015版 无菌检查法
姜珊 2014.10.07
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无菌检查法
无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药 品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及 其他品种是否无菌的一种方法。若供试品 符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在 该检验条件下未发现微生物污染
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环境洁净度
2010版
无菌检查应在环境洁净度 10 000级下的局部洁净 度 100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行
检验数量 检验数量是指一次试验所用供 试品最小包装容器的数量
检验量 是指供试品每个最小包装接种至 每份培养基的最小量（g 或ml）。
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阳性对照供试应品根的据供无试菌品检特性查选择阳性
对照菌：无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主 的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌； 抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌 为对照菌；抗厌氧菌的供试品，以生孢梭 菌为对照菌；抗真菌的供试品，以白色念 珠菌为对照菌。阳性对照试验的菌液制备 同方法适用性试验，加菌量小于 100cfu， 供试品用量同供试品无菌检查时每份培养 基接种的样品量。阳性对照管培养 48～72 小时应生长良好。
阴性对照 供试品无菌检查时，应取相 应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作，作为 实用文档
薄膜过滤法
2015版
无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达 到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌 操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影 响供试品中微生物的检出。
实用文档
培养基
硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的 培养，也可用于需氧菌培养；
胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌 的培养。
制备好的培养基应保存在 2～25℃、避光 的环境，若保存于非密闭容器中，一般在 3周内使用；
量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作
用可以忽略不计，照此检查方法和检查条
件进行供试品的无菌检查。 如含供试品的
任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不
生长，则说明供试品的该检验量在该检验
条件下有抑菌作用，应采用增加冲洗量、
增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、
更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌
作用，并重新进行方法适用性试验。
膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗 液中加入小于 100cfu的试验菌，过滤。加 硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体 培养基至滤筒内。另取一装有同体积培养 基的容器，加入等量试验菌，作为对照。 置规定温度培养 3～5 天，各试验菌同法 操作。
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方法适用性试验
结果判断
与对照管比较，如含供试品各容器中的试 验菌均生长良好，则说明供试品的该检验
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培养基适用性检查直观区别
2010版 2015版
相应菌种接种所用 培养基
金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、 枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
黑曲霉
营养肉汤培养基中 或营养琼脂培养基
改良马丁培养基中 或改良马丁琼脂培
养基 改良马丁琼脂斜面
培养基
胰酪大豆胨液体培 养基中或胰酪大豆
胨琼脂培养基
沙氏葡萄糖液体培 养基中或沙氏葡萄
糖琼脂培养基
沙氏葡萄糖琼脂斜 面培养基
霉菌、酵母菌培养温度
23～28℃
20～25℃
稀释液
0.9%无菌氯化钠溶 液
pH7.0 无菌氯化钠蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶
液
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培养基的适用性检查
培养基接种
取每管装量为 12ml 的硫乙醇酸盐流体培 养基 7 支，分别接种小于 100cfu 的金黄 色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各 2支，另 1支不接种作为空白对照，培养 3 天；取每管装量为 9ml 的胰酪大豆胨液体 培养基 7支,分别接种小于 100cfu的枯草 芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各 2支， 另 1支不接种作为空白对照，培养 5天。 逐日观察结果。
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方法适用性试验
菌种及菌液制备 除大肠埃希菌（Escherichia coli）
[CMCC(B) 44102〕外，金黄色葡萄球菌、 枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、 黑曲霉同培
养基灵敏度检查。大肠埃希菌的菌液制 备同金黄色葡萄球菌。
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方法适用性试验
薄膜过滤法 取每种培养基规定接种的供试品总量按薄
培养基的适用性检查
无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰 酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无 菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可 在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌 检查同时进行。
无菌性检查 每批培养基随机取不少于 5 支（瓶），置各培养基规定的温度培养 14 天，应无菌生长。
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胨缓培养冲基液的适或用性检0.查9% 无菌氯化钠溶液制 成每 1ml 含菌数 小于 100cfu（菌 落形成单位）的菌
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供试品的无菌检查
无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。 只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。 供试品无菌检查所采用的检查方法和检验 条件应与方法适用性试验确认的方法相同。
无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、 灭活剂、中和剂等试剂，应证明有效性， 且对微生物无毒性。
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供试品的无菌检查
改良马丁琼脂培 调节 pH值使灭菌 沙氏葡萄糖琼脂
养基
后为 6.4±0.2 培养基
调节 pH 使灭菌 后pH值为 7.3±0.2
调节 pH使灭菌 后在 25℃的pH 值为 7.3±0.2
调节 pH使灭菌 后在 25℃的pH 值为 5.6±0.2
调节 pH使灭菌
后在25℃的pH值
为5.6±0.2
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