嗜血杆菌分离与鉴定过程讲解

细菌的抑制（营养竞争及菌素作用），菌落细小不易与其他细
菌相区别，这是造成嗜血杆菌分离率低的直接原因。在培养基
中加入30~50mg/L的万古霉素或300mg/L杆菌肽（或其他
革兰阳性细菌抑制剂），可提高嗜血杆菌分离率。原因是，当
在培养基中加入万古霉素后，抑制了革兰阳性细菌的生长，增
加了对嗜血杆菌的选择性，嗜血杆菌在加万古霉素的培养基上，
菌落生长较大，极易识别，从而提高了嗜血杆菌的分离率。
1)不同血源对嗜血杆菌的影响
______________________________ ____
血源
GI
P
______________________________ ____
羊血
4.3+-1.3
兔血
7.03+-1.45
<0.001
马血
6.88+-1.53
(2)如何提高嗜血杆菌的分离率？
嗜血杆菌分离培养基以巧克力琼脂最好，其中在兔血巧
克力琼脂上的生长状况好于羊血巧克力琼脂，如兔血来源困难
也可用羊血代替，但需补充一定量的V因子（1.5mg/L NAD
或2%鲜酵母浸液）。在培养基中加入2％鲜酵母浸液和50％
鲜牛肉浸液可使菌落明显增大。
呼吸道标本中的嗜血杆菌在初代培养时，受到革兰阳性
A
4.185±1.161
B
6.286±1.572
10.15（<0.001）
AS
2.259±0.734
BS
5.352±1.538
10.56（<0.001）
AR
4.166±1.345
BR
7.006±1.581
13.58（<0.001）
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paraphrophaemolyticus) 惰性嗜血杆菌(H.segnis) 杜克雷嗜血杆菌(H.ducreyi)
一 生物学性状
1. 形态与染色：
嗜血杆菌包括一群无动力、无芽胞的革
兰阴性小杆菌，从病灶中新分离的菌株多呈球
杆状、双球状或短链状，在陈旧培养物中呈多
形性（长杆状或呈长丝状），直径通常不超过
嗜血杆菌的分离和鉴定过程讲解
概述
嗜血杆菌属（Haemophilus）属于巴斯德
菌科，是专性寄生的苛养性细菌。该属细菌主要
寄生在人的咽喉及口腔粘膜，少见于消化道和生
殖道。其中流感嗜血杆菌主要引起人类急性化脓
感染（急性咽炎、喉炎、气管炎、肺炎、中耳炎、
鼻窦炎、心内膜炎、败血症、脑膜炎等）及严重
的继发感染，杜克雷嗜血杆菌是引起软性下疳的
1μm。
2. 培养特征：
嗜血杆菌对营养要求较高，需氧或兼性厌氧，
在温补度充为535~℃10~%37C℃O2，的大pH气7中.6生~7长.8良，好在，p最H7适.6生条长件
下生长最好。 生长需要X因子、V因子或二者之一。
X因子是一种对热稳定的血红素及其衍生物，是一
种含铁的卟啉，为细菌合成过氧化氢酶、过氧化物
<0.001
______________________________ _____
表1 不同营养培养基上的GI值比较（n =10）
___________________________________
培养基
GI（x±s）
t（P值）
_______________________________________ ___________
3. 嗜血杆菌的分离培养
取标本在巧克力琼脂平板上三区划线接
种 ， 以 保 证 长 出 单 个 菌 落 ， 置 35℃ ， 在
5~10%CO2的大气中培养24h。
(1)及时处理标本
及时将标本接种到适当的培养基上是提 高嗜血杆菌分离率的前提。因为，嗜血杆菌对 干燥、对寒冷的抵抗力均较弱，标本在外界环 境中暴露时间过长，其存活率降低，不及时接 种适当培养基是导致嗜血杆菌分离率低的主要 原因。
A：脑心琼脂加入X、V因子； B：A加入50%鲜牛肉浸液，加入2%的滤菌鲜酵母浸液； AS：脑心琼脂加入5%脱纤维蛋白羊血；BS：AS加入50%鲜牛肉浸液，加入2%的滤菌鲜酵母浸液； AR：脑心琼脂加入5%脱纤维蛋白兔血；BR：AR加入50%鲜牛肉浸液，加入2%的滤菌鲜酵母浸液.
发酵葡萄糖及其他碳水化合物，产酸、
少数菌株产气，氧化酶、触酶反应不定，能
还原硝酸盐为亚硝酸盐。
二 毒力因子
有荚膜的流感嗜血杆菌根据荚膜多糖抗原
பைடு நூலகம்
可分为a、b、c、d、e、f 6个血清型，其中b
型的致病力最强，大部分感染由b血清型引起。
b型荚膜物质为线性聚合物，含有核糖、
核糖醇和磷酸，或叫作多聚核糖-核糖醇-磷酸
病原菌。本属细菌对营养要求严格，生长时需血
液中存在的生长因子，人工培养时必须供给新鲜
血液才能生长，故名“嗜血杆菌”。
寄居在人体的嗜血杆菌
流感嗜血杆菌(H.influenzae) 副流感嗜血杆菌(H.parainfluenzae) 溶血嗜血杆菌(H,haemolyticus) 副溶血嗜血杆菌(H.parahaemolyticus) 嗜沫嗜血杆菌(H.aphrophilus) 副嗜沫嗜血杆菌(H. paraphrophilus） 副溶血嗜沫嗜血杆菌(H.
（PRP）。PRP荚膜具有抵抗细胞吞噬及中性
粒细胞胞内杀伤的作用，可能是构成b型毒力的
重要因素。
三 微生物学检查法
1. 标本采集
根据不同感染，分别采取血液、脑脊液、鼻咽分泌物、
痰液、脓汁等标本，采取标本时应注意下列事项。
1）尽量在疾病的早期(用抗生素治疗前)采取标本，采 集后应立即送检。
2）鼻咽拭子应在取标本前以肉汤湿润拭子，取样后要 防止干燥，并立即送检。
酶、细胞色素氧化酶的辅基；V因子是一种对热不
稳定的维生素B类物质，是脱氢酶的辅酶，在细胞
的呼吸中起递氢的作用。红细胞中富含X 及V因子，
但羊血红细胞中含有水解V因子的酶类， V因子依
赖性的嗜血杆菌通常不能在含有完整红细胞的羊血
琼脂上生长，因而实验室中常用巧克力琼脂培养基
上分离培养嗜血杆菌。
3. 生化反应：
3）对心内膜炎、菌血症、败血症患者采取血液标本， 最好在发热期间多部位、多次采样。。
4）痰液标本，则首先用灭菌生理盐水将痰液洗3次， 然后将痰块打碎，制成悬液。若痰块太硬，可加入等量 10g/L的胰蛋白酶,于37℃水浴0.5~1h，将痰块消化后 再接种。
2. 直接涂片检查
痰、脓汁、鼻分泌物或溃疡性性病（软 性下疳）分泌物可直接涂片，脑脊液须离心后 取沉淀物涂片，革兰染色后镜检。查到革兰阴 性短小杆菌或多形态杆菌，结合临床症状，可 做初步诊断。流感嗜血杆菌还可作荚膜肿胀试 验测定其血清型。