实验四 细胞显微操作技术
显微镜使用和细胞分裂实验
目镜
粗调节器 细调节器
镜臂 移片器 倾斜关节 镜柱
7. 移动载物台，将标本移动到视野内，调整粗微调到最佳位置。
4. 将聚光镜升到最高位置。
5.孔径光栏开到5点钟位置。
3~6cm
2. 将遮光板拉出。
8. 下课时的准备工作
a. 将光源亮度关到最低 b. 关闭开关电源 c. 取下切片并收藏好
实验一、显微镜使用、细胞有丝分裂
一、实验目的与要求： 1、初步掌握一般光学显微镜的主要构造、功 能及使用。 2、了解动植物细胞有丝分裂的基本过程和分 裂各期的形态特征。 二、自行观察组织标本： 1、洋葱根尖纵切片；2、马蛔虫子宫横切片 三、绘图： 绘有丝分裂各期图（高倍）
镜筒
物镜转换器 物镜 通光孔 载物台 聚光镜 反光镜 镜座
蛙血涂片
洋葱根尖纵切面
马
细胞生物学实验：倒置显微镜使用基本技术
倒置显微镜
目镜
物镜盘 光源旋钮 电源开关
载物台
粗调旋钮 微调旋钮
倒置显微镜组成和普
通显微镜一样，只不 过物镜与照明系统颠 倒，在载物台之下。 用于观察培养的活细 胞，具有相差物镜， 显示效果较好。
倒置显微镜使用前
1.插上电源线 2.入座，打开电源开关 3.旋开光源旋钮至合适亮度 4.调整目镜至合适瞳距
使用倒置显微镜的观察
1.将待观察细胞容器置于载物台正中 2.切换物镜至最低倍数，在目镜下观察
细胞 3.调节粗调旋钮，使焦距对准细胞 4.调节微调旋钮，达到最佳观测效果 .切换较高倍数的物镜以获得更好的放
大效果
倒置显微镜使用后
1.观察结束后，取下细胞容器 2.用酒精棉球擦拭载物台面 3.将物镜切换至最低倍数 4.将光源旋钮旋至最低 5.关闭显微镜开关 6.拔掉电源 7.写好仪器使用记录
分子生物学会——显微操作
生物科学与生物技术班第三小组
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一、显微操作： 显微操作： 1、定义：显微操作技术是指在高倍倒置显 、定义： 微镜下， 微镜下，利用显微操作器控制显微注射 针在显微镜视野内移动的机械装置， 针在显微镜视野内移动的机械装置，用 来进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。 来进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。 2、常见的显微操作技术：细胞核移植、显 、常见的显微操作技术：细胞核移植、 微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显 微注射、嵌合体技术、 微切割等
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优点： 优点： ＊任何DNA在原则上均可传入任何种类 任何 在原则上均可传入任何种类 的细胞内 外源基因没有长度上的限制， ＊外源基因没有长度上的限制，目前已 证明数百kb之 证明数百 之DNA片段均可以成功产制 片段均可以成功产制 出转基因动物 ＊效率较高
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缺点： 缺点： ＊操作者的要求较高 ＊设备精密而昂贵 ＊注射的细胞数较少
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二、显微注射的基本原理： 显微注射的基本原理： 是利用管尖极细（ 至 是利用管尖极细（0.1至0.5m）的玻璃 ） 微量注射针， 微量注射针，将外源基因片段直接注射 到原核期胚或培养的细胞中， 到原核期胚或培养的细胞中，然后藉由 宿主基因组序列可能发生的重组）、 ）、缺 宿主基因组序列可能发生的重组）、缺 失、复制或易位等现象而使外源基因嵌 入宿主的染色体内 。
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五、准备工作 1、DNA的制备 、 的制备 2、注射针的制作 、 3、把持针的制作 、 4、载玻片的准备 、 5、显微注射用细胞的准备 、
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六、显微注射操作过程 ▲ 1、针头装液 、 2、针头定位 、 3、显微注射的操作 、 ＊ 手动细胞核内注射 ＊自动细胞核内注射和细胞质内注射 4、对注射了荧光标记物的细胞的分析 、
实验四 细胞显微操作技术课件
一、目的要求
• 练习针刺细胞（未受精卵、去核卵、早期胚胎细胞或体外培养细胞）； • 学习微吸管制备； • 了解显微移植技术（细胞核、外源基因）
二、原理
• 采用显微操作系统（倒置显微镜/体视显微镜+显微操作器）将供体物 （基因、细胞核或细胞其他成分）直接注入宿主细胞（去核卵母细胞、 胚胎细胞或体外培养的细胞）中，研究供体物的功能或者获得转基因动 物的技术。
（2）旋转加样旋钮，将样本加入，并离开细胞。
注射
作业
• 简述细胞显微注射过程以及注意事项 • 显微拍照注射前后的胚胎 • 请于9月14日下午5点前提交报告
ห้องสมุดไป่ตู้ 三、实验材料
斑马鱼 Danio sp.胚胎
2-cell
4-cell
主要仪器和用具 倒置显微镜；显微操作仪；拉针仪
主要试剂 酚红/曙红
8-cell
四、显微注射操作过程
• 注射针制备 • 注射针内装液
使用无菌的微量加样器从微注射针的后部加入待注射样品；
• 注射针安装和定位
（1）将装液后的针头游离端安在连接器上，然后旋紧连接器以固定针头， 再将其固定到微操作仪的托针管上；
外源基因导入（基因沉默、过表达、转基因动物）
利用显微操作系统将外源目的基因（DNA或RNA）直接注入 到受体细胞或受精卵的核中，使外源基因整合到受体细胞 的基因组内，培养/筛选，获得转基因动物/性状分析；
显微注射是目前转基因效率较好的一种转基因方法，可直接 用不含有原核载体DNA片段的外源基因进行转移；外源基 因的长度不受限制, 可达100 kb；实验周期相对比较短。它 的不足之处是：需要昂贵精密的设备；显微注射操作复杂； 导入外源基因整合位点和拷贝数无法控制；常导致插入位 点附近宿主DNA 片段缺失、重组等突变，可造成动物严 重的生理缺陷。
用显微镜观察细胞实训报告
一、实验目的1. 掌握显微镜的基本操作技能，包括取镜、安放、对光、观察和整理等步骤。
2. 学习制作临时装片，了解临时装片的基本方法。
3. 通过观察细胞，认识细胞的基本结构，如细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核等。
4. 提高观察和实验分析能力，培养科学实验素养。
二、实验材料1. 实验用具：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、滴管、蒸馏水、碘液、纱布、吸水纸。
2. 实验材料：洋葱鳞片叶、松叶、动物血液、动物神经细胞永久装片。
三、实验步骤1. 取镜和安放- 右手握住镜臂，左手托住镜座。
- 将显微镜放在实验台上，略偏左，安装好目镜和物镜。
2. 对光- 转动转换器，使低倍物镜对准通光孔，注意物镜的前端与载物台保持2厘米的距离。
- 把一个较大的光圈对准通光孔。
- 左眼注视目镜内，右眼睁开，便于以后观察画图。
- 转动反光镜，看到明亮视野。
3. 制作临时装片- 在载玻片中央滴一滴蒸馏水。
- 取洋葱鳞片叶或松叶，用刀片切成薄片。
- 用镊子夹取薄片，轻轻放在载玻片上的水滴中。
- 盖上盖玻片，注意避免产生气泡。
4. 染色- 在盖玻片一侧滴加碘液。
- 用吸水纸在盖玻片另一侧轻轻吸引，使碘液浸润标本。
5. 观察- 转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近载玻片。
- 眼睛看着物镜以免物镜碰到玻片标本。
- 左眼向目镜内看，同时反向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到看清物像为止。
- 调整细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。
- 依次观察低倍镜和高倍镜下的细胞结构。
6. 整理- 实验结束后，将显微镜擦拭干净，放回原位。
四、实验结果与分析1. 洋葱鳞片叶细胞- 观察到细胞呈长方形，细胞壁明显，细胞膜清晰可见。
- 细胞质中存在大量淀粉粒，细胞核位于细胞中央，核仁明显。
2. 松叶细胞- 观察到细胞呈多边形，细胞壁较厚，细胞膜较薄。
- 细胞质中存在大量叶绿体，细胞核位于细胞中央，核仁不明显。
3. 动物血液细胞- 观察到红细胞呈圆形，无细胞核，细胞质中充满血红蛋白。
光学显微技术与细胞显微测量实验
2023级医学实验技术专业《细胞生物学实验技术》课程实验报告学号姓名成绩实验一：光学显微技术与细胞显微测量一．实验原理光镜的成像需要光束穿透被观察的样品，用于普通光镜的生物样品必须经过一系列的组织处理并制成1~10微米的切片。
普通显微镜的成像原理：被观察的物体先通过物镜进行第一次成像，物镜会将物体放大成一个倒立的实像。
这个实像再通过目镜进行第二次放大，最终形成一个倒立的虚像。
荧光显微镜利用短波波长，激发样品，使其产生荧光，通过放大系统放大后，看到的不是样品的本色，而是其荧光。
荧光显微镜的工作原理：荧光显微镜会使用特定的荧光染料或标记物，这些物质在受到特定波长的光激发时，会发出荧光。
当被观察的样本被这种荧光染料处理后，在显微镜下用特定波长的光进行照射，样本中的荧光染料就会吸收光的能量并发出荧光。
二．实验器材普通光镜44台（两间实验室）、荧光显微镜4台（每间实验室2台）、倒置显微镜4台（每间实验室2台）、小剪、小镊、小刀、牙签、吸管、手套、载玻片、盖玻片、移液器、黄白枪头、擦镜纸、面巾纸三．实验试剂教学标本片：人血标本44片、鸡血标本44片、镜台测微尺44片、目镜测微尺44片、AO 染液（0.1mg/ mL )1.5mLx4支、碘液10mLx4瓶四．实验步骤显微测量的步骤：1．抽出目镜，旋下接目透镜，将目微尺放到目镜光阑上（刻度一面朝下），再将透镜旋上。
2．将台尺置于载物台，用低倍镜将台微尺移至视野中央，然后换用测量细胞时所用物镜，调焦，使刻度清楚。
3.转动目镜，使目微尺与台微尺的刻度平行，再使目微尺上某段两端的刻线与台微尺刻线重合，读出两端重合线间，目微尺和台微尺各多少格。
4.计算选定物镜下，目微尺每格实际长度（μm ):目微尺每格长度＝台微尺格数／目微尺格数x10μm5．取下台尺，换上细胞标本，用目微尺测量细胞大小。
先用目尺测出佰放：数，再每格长度。
每种细胞测量5-10个（不同视野），计算均值。
细胞生物学实验指导（12生工）
细胞生物学实验指导（12生工）细胞生物学实验教案实验一：特殊显微镜的使用及显微摄影术一、实验目的：1、掌握暗视野显微镜、相差显微镜的原理、构造及其使用方法。
2、掌握显微摄影装置及其操作技术，独立完成显微摄影全过程。
二、实验原理：暗视野显微镜应用丁达尔现象，装配暗示场聚光器，是入射光从聚光器斜向照明被检样品。
暗视野显微镜利用样品的散射光和放射光进行观察，只能观察物体的存在与运动而不能辨清其细微结构。
暗视场照明是照明光线仅照亮被检样品而不能进入物镜，使视场背景暗黑，样品明亮的照明方法。
相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，通过衍射和干涉现象，将肉眼看不到的相差，变为明暗的振幅差而能看到。
相差显微镜应用于生物学的主要价值，在于对透明的活体进行直接观察，无需采用是细胞致死的固定和染色的方法。
0lympus BH系列的BHS和BHT型显微镜有摄影装置，通过摄影装置，拍摄显微视场中被检样品。
三、实验仪器与试剂1、材料：洋葱鳞茎、人口腔细胞；2、器材：暗视场显微镜、相差显微镜、Olympus显微镜、活体生物样品、擦镜纸、消毒牙签、镊子、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片3、试剂：生理盐水（0.9%）、2%碘液、香柏油、二甲苯。
四、实验步骤与方法（一）口腔上皮细胞的制备及染色1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水；3、用消毒牙签在自己漱净的口腔内壁轻轻地刮几下；4、把牙签上的碎屑放在生理盐水中轻涮几下；5、盖上盖玻片；6、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；7、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。
（二）洋葱鳞茎内表皮装片制作1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴蒸馏水；3、用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮置于蒸馏水中；4、盖上盖玻片；5、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；6、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。
（三）分别用暗视场显微镜和相差显微镜观察（四）显微摄影的使用将装片置于显微摄影镜下,选一清晰的视野进行拍摄并打印出来。
生物显微技术实验指导
一、实验目的掌握制作石蜡切片中固定、包埋的基本操作技术。
二、实验用品1、实验材料：鱼2、实验试剂：10%甲醛溶液（40%甲醛10ml，蒸馏水90ml）、50%酒精、70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精、100%酒精、二甲苯、石蜡。
3、实验器具：解剖器，双面刀片，小瓶，牛皮纸、电热恒温箱、脱水机、包埋机。
三、实验步骤1、取材：用任何杀生的方法把鱼杀死，将腹腔打开，切取0.5cm3左右大小的肝脏、肠等组织。
2、固定：将切好的组织直接投入10%甲醛固定液中，固定24h。
3、脱水：50%酒精→70%酒精→80%酒精→90%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。
每级1-2h。
70%酒精处可长期保存。
4、透明：1/2二甲苯+1/2100%酒精(1-2h) →纯二甲苯(1h) →纯二甲苯(1h)5、浸蜡：石蜡先置于60℃的温箱中，倒入含二甲苯及材料的小瓶中置于37℃温箱中，放置2-4小时。
6、包埋：先提升恒温箱的温度至60℃，换纯蜡3次，每次1-2h，用牛皮纸叠纸盒，置于45-60℃的烫板上，倒入材料，摆放好材料，把标签（正面向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干，也可在凉水盆中放置过夜。
四、作业分析总结石蜡切片技术中固定和包埋的操作注意事项有哪些？附：折纸盒按下列顺序折叠：(1) 折AA'及BB'；(2) 折CC'及DD'；(3) 折CE'与AE'、向外夹出EE'。
同样折出FF'，GG'及HH'；(4) 使CE'E与E'IE两三角形相叠，并沿E'C和EI重叠的折痕向后转折。
同样折其余三只角；(5)折RIJF向外，同样折出GKLH，即折成所需的纸盒。
一、实验目的掌握制作石蜡切片中切片、贴片的基本操作技术。
二、实验用品：1．实验试剂：95%酒精、100%酒精、二甲苯、明胶液、蒸馏水。
微生物显微镜直接计数法和死活细胞的鉴定[总结]
![微生物显微镜直接计数法和死活细胞的鉴定[总结]](https://img.taocdn.com/s3/m/6b47616e02d276a201292e66.png)
微生物显微镜直接计数法和死活细胞的鉴定[总结] 实验四微生物显微镜直接计数法和死活细胞的鉴定以及四大类微生物菌落形态的比较和识别微生物显微镜直接计数法一、实验目的1、学习使用血球记数板测定微生物数量的方法。
2、学习并掌握形态观察及死活细胞的鉴别方法。
二、实验原理酵母菌显微直接计数—血球计数板三、实验材料显微镜、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、无菌滴管、吸水纸、擦镜纸.四、实验步骤1、取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。
2、取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。
3、用10×(40x)镜观察并将计数室移至视野中央。
4、在10×(40x)镜下计数:计数5个中格的平均值，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。
注意事项:计上不计下，计左不计右。
出芽计一半。
五、实验结果将显微计数结果记录于下表中。
T表示五个中方格中的总菌数。
各中格中菌数二室平个/ml T均值 1 2 3 4 5第一室第二室六、问题与讨论在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点,有何改进方法,酵母菌死活细胞的鉴定一、实验原理美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。
用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。
因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色，借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。
二、实验材料酵母菌悬液、 0.1 ,吕氏碱性美蓝染色液显微镜、载玻片、盖玻片。
三、实验步骤美蓝镜片的观察1)在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色掖，然后按无菌操作用吸取计数时酵母菌样品液放在染液中，混合均匀。
2)用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。
3)将制片放置约1min后镜检，低倍镜到高倍镜观察，根据颜色来区别死活细胞。
显微鉴别法操作规程
内容：1 显微鉴别法：系指用显微镜对药材或饮片的切片、粉末、解离组织或表面制片及含饮片粉末的制剂中饮片的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。
2 仪器和用具2.1 仪器生物光学显微镜、显微描绘器、滑走切片机、小型粉碎机或徒手圆筒生物切片器、镜台测微尺、离心机。
2.2 用具2.2.1 放大镜、刀片、解剖刀、镊子（包括粗镊及眼科弯镊与直镊）、剪（眼科剪与手术剪）、解剖针。
2.2.2 载玻片、盖玻片2.2.3 吸湿器（即玻璃干燥器改装蒸馏水加微量苯酚，潮气润湿药材样品用）、培养皿或小烧杯（放切片用，切片后的处理均可在其中进行）、酒精灯、铁三角架、石棉网、滴瓶、试管、试管架、滴管、玻璃棒（粗与细）、乳钵、量筒等2.2.4毛笔（从刀上刷取切片用）、铅笔（HB、3H、6H绘图用）、带盖搪瓷盘（装切片标本用）、纱布、吸水纸（滤纸）、火柴等。
3 试药与试液3.1 水合氯醛试液取水合氯醛50g，加水15ml与甘油10ml使溶解，即得。
此液为透化剂，可使干缩的细胞壁膨胀而透明，并能溶解淀粉粒、树脂、蛋白质及挥发油等。
3.2 甘油醋酸试液（斯氏液）取甘油、冰醋酸与水各等份，混合即得。
此液专用于观察淀粉形态，可使淀粉不膨胀变形，便于测量其大小。
3.3 甘油-乙醇溶液取甘油1份，50%乙醇1份，混合即得。
此液为封藏液，用于保存植物材料及临时切片，有软化组织的作用。
3.4 苏丹Ⅲ试液取苏丹Ⅲ0.01g，加90%乙醇5ml溶解后，加甘油5ml，摇匀即得。
本液应置棕色玻璃瓶内保存，在2个月内应用。
此液可使木栓化、角质化细胞壁及脂肪油、挥发油、树脂等染成红色或淡红色。
3.5 钌红试液取10%醋酸钠溶液1～2ml，加钌红适量使呈酒红色即得。
本液应临用新制。
此液可使粘液染成红色。
3.6 间苯三酚试液取间苯三酚1g，加90%乙醇100ml使溶解，滤过即得。
应置棕色玻璃瓶内，在暗处保存。
此液与浓盐酸合用，可使木化细胞壁染成红色或紫红色。
植物生物学实验：显微技术及显微镜的使用方法
显微镜的分辨率
• 显微镜的分辨率是指显微镜的最小分辨 距离，即显微镜将物体放大成像后，能 将物体相近两点分辨清楚的极限距离， 通常用D表示。它与物镜的数值孔径成 反比，与光波长度成正比。公式为：
• D=0.16入/NxA 入为光波波长。 NxA 为物 镜数值孔径。D越小，显微镜的分辨率 就越高。
2020/11/27
显微镜的机械装置
• 显微镜的机械装置是有精密而牢固的零件组 成，主要包括镜座、镜臂、载物台、镜筒、 物镜转换器和调焦装置等。
• （1）镜座：又称镜脚是显微镜的基座，用以 支持整个镜体的稳定。有的显微镜在镜座内 有照明光源或反光镜。
• （2）镜臂：支持镜筒、载物台、聚光器和调 焦装置等。
• 物镜的数值孔径，又称镜口率，常用NxA或 A表示。数值孔径越大吸光量越多，分辨力 越高。NxA=nxsina/2（n是指物镜与标本之间 介质的折射率；a指镜口角。
2020/11/27
2020/11/27
马铃薯淀粉颗粒4倍镜下观察图片
2020/11/27
• 马铃薯淀粉颗粒10倍镜下观察图片
2020/11/27
• （5）物镜转换器：固着于镜筒的下端，可自 由旋转，更换物镜。当他们转到工作位置时 即与光轴合轴。安装物镜时要把镜筒提高， 以防止镜头碰到载物台。转换物镜要用手指 捏紧转换蝶，而不要推物镜，防止破坏合轴。
2020/11/27
• （6）调焦装置：为了得到清晰的物像，必须 调节物镜与标本之间的距离，使它与物镜的 工作距离相等，这种操作叫做调焦。
2020/11/27
• 2．低倍镜观察
•
镜检任何标本都要养成必须先用低倍镜
观察的习惯。因为低倍镜视野较，易于发现
显微镜观察动物细胞实验步骤
显微镜观察动物细胞实验步骤显微镜下看动物细胞呀，那可真是一场奇妙的微观之旅呢。
要开始这个实验，咱们得先把东西都准备好。
这就好比要出门旅行，得先把行李收拾齐整。
你得有一台显微镜，这可是咱的“探秘神器”。
就像探险家离不开指南针一样，咱们在微观世界闯荡，显微镜必不可少。
还得有载玻片和盖玻片，这俩就像是细胞的小床和小被子。
细胞住在载玻片上，盖玻片一盖，就舒舒服服的啦。
当然，用来观察的动物细胞样本也不能少，这就像咱们旅行的目的地，是整个旅程的核心呢。
有了这些东西，咱们就开始处理细胞样本。
如果是从组织里分离细胞，那就像是从一大群人中挑出特定的小伙伴一样。
得小心翼翼的，用合适的溶液把细胞从组织里解放出来。
这个过程可不能马虎，就像拆包裹的时候得小心别把里面的宝贝弄坏了。
然后把细胞放在载玻片上，要让它们均匀分布，不能挤成一团，这就好比住宿舍，每个人都得有自己的小空间，不然多难受呀。
接下来就是染色啦。
染色就像是给细胞穿上漂亮的衣服，这样咱们就能更清楚地看到它们的结构。
不同的染料就像不同风格的衣服，有的适合染细胞核，有的适合染细胞质。
把染料滴在细胞上，等一会儿，就像给细胞做个美容SPA一样。
现在就可以把载玻片放到显微镜的载物台上啦。
这就像把宝藏放在展示台上一样。
调整显微镜的焦距，这可是个技术活。
你得慢慢地转动旋钮，就像调整收音机的频率一样，直到看到清晰的细胞图像。
这个时候呀，你就像一个发现新大陆的探险家，那种兴奋劲儿就别提了。
当你看到细胞的时候，你会发现一个全新的世界。
细胞核就像细胞的大脑，指挥着细胞的一切活动。
细胞质就像细胞的身体，里面充满了各种各样的小结构，就像身体里的器官一样。
有的细胞圆圆的，像个小皮球；有的细胞长长的，像个小面条。
这多有趣呀，你难道不会被这个微观世界所震撼吗？在观察的过程中，你可能会遇到一些小问题。
比如说图像不太清楚，这时候可别慌，就像走路不小心摔了一跤，爬起来拍拍土再走就是了。
再仔细调整一下焦距，或者检查一下载玻片有没有放好。
细胞生物学实验一.显微镜的使用
（
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院
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细 胞 生 物 学 实 验
实验内容安排
油镜和测微尺的使用及细胞形态观察 叶绿体分离及荧光镜检（密度梯度离心法） 线粒体的分离及活性染色（差速离心法） 细胞化学（Feulgen反应） 细胞融合 小鼠染色体标本制作及观察 植物细胞骨架的制作及观察 自主实验
考试成绩
实验报告（70%） 平时表现（30%）
课程特点与期望
01
没想象中简单
02
努力思考、多动 脑
03
会分析、会设计、 会解决
实验一 油镜和测微尺的使用 及细胞形态观察
一．实验目的 掌握油镜和测微尺的使用方法，学会用 显微尺观察和测量细胞，并按比例绘制 细胞大小示意图。
二、实验用品
器材：普通光学显微镜，台尺，目尺；
三、实验原理（测微尺的使用）
1
测微尺由目尺和台尺组成。目尺是一块圆形玻璃片，上面刻 有等距离的刻度，分成50～100格。实际刻度因不同物镜的
放大倍数以及镜筒长度而不同，需要台尺校定。台尺则是一
块特制的载玻片，中央封着一把刻度标尺，其每个刻度为
0.01mm (10 m)。
2 link
镜台测微尺
总长0.1mm
10 m
目尺每格长度( m)＝
○ 台尺格数 ○ 目尺格数 ○ 取下台尺，换上标本观
测。
观察各种切片标本，注意细胞 1
的形态结构、核的形态及数量。
用目尺测量细胞及核的大小 （横距、宽距及厚度），每一 2 类被测物测3个数据，最后取平 均值。
3 按比例画出细胞大小的示意图。
实验四光学显微标本的切片制作技术
实验四光学显微标本的切片制作技术实验四光学显微标本的切片制作技术一、实验目的了解光学显微镜切片制作技术的基本方法步骤。
二、实验原理采用光学显微镜研究一般生物体的内部结构，在自然状态下是无法观察清楚的，多数动、植物材料都必须经过某种处理，将组织分离成单个细胞或薄片，光线才能通过细胞。
为了适应这个需要，就产生了光学显微镜制片技术。
光学显微镜的制片技术方法可分为两大类：一类是非切片法，另一类是切片法。
非切片法，是用物理或化学的方法，使细胞彼此分离，如有分离法、涂布法、压碎法等。
非切片法的操作比较简单，能保持细胞的完整，但是细胞之间的正常位置往往被更动，无法反映细胞之间的正常联系。
它可以与切片法配合使用，各取其长处。
切片法，是利用锐利的刀具将组织切成极薄的片层，材料须经过一系列特殊的处理，如固定、脱水、包埋、切片、染色等，过程十分繁复。
在制作过程中，还要经过一系列的物理和化学的处理，这些处理方法可根据各种不同材料的性质要求进行合理选择。
切片法虽然工序繁琐，技术复杂，但是，它最能保持细胞间的正常的相互关系，能较好和较长时间地保留细胞的原貌，所以仍然是光学显微镜的主要制片方法。
三、实验材料1．材料洋葱根或小鼠肝。
2．试剂乙醚、无水乙醇、甲醛、冰醋酸、苦味酸、重铬酸钾、锇酸、正丁醇、二甲苯、石蜡、甘油、鸡蛋、纱布、加拿大树胶、麝香草酚。
3．仪器石蜡切片机、恒温蜡箱、载玻片、盖玻片。
四、实验步骤光学显微镜切片制作技术最简单的切片法是徒手切片，但是由于组织块往往十分柔软，切削很困难，而且无法得到十分薄的切片，因此必须先用某些特殊物质渗入组织块的内部起支持作用，并将整个组织块包住，然后再用精密的切片机制作切片，才能获得良好的效果。
这种方法称为包埋法，包埋的物质称为包埋剂。
常用的包埋剂有石蜡、火棉胶、炭蜡、明胶等，水和塑料也可作为包埋剂。
根据包埋剂的不同，分别有石蜡切片、火棉胶切片、冰冻切片等，它们各有长处，可以根据需要选用，但是使用得最多的还是石蜡切片技术。
利用显微镜观察细胞
生物医学领域其他应用案例
细胞生物学研究
显微镜是研究细胞生物学的重要工具，可用于观 察细胞结构、功能、代谢等方面，揭示生命的奥 秘。
神经科学研究
利用显微镜观察神经细胞的形态、连接和信号传 递过程，有助于深入了解神经系统的结构和功能 。
遗传学研究
通过显微镜观察染色体、基因等遗传物质的形态 和结构，研究遗传信息的传递和表达调控机制。
02
细胞形态结构与功能
细胞形态多样性展示
动物细胞形态
多样且不规则，如圆形、椭圆 形、扁平形等，一般无细胞壁 。
植物细胞形态
较规则，多为长方形或正方形 ，有细胞壁保护。
微生物细胞形态
细菌为单细胞微生物，形态各 异，如球菌、杆菌、螺旋菌等 。
细胞器结构与功能介绍
01
02
03
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
04
线粒体
细胞内的“动力工厂”，负责 提供能量，参与细胞呼吸作用 。
细胞间连接
记录细胞间通过黏附分子、连接蛋 白等形成的连接结构，如紧密连接 、锚定连接等。
细胞间竞争与合作
观察细胞间在资源获取、空间占据 等方面的竞争现象，以及细胞间通 过协作共同完成某些生理功能的过 程。
04
不同类型细胞观察实例分析
动物细胞观察实例
上皮细胞
扁平或立方形状，紧密排列形成 组织表面，具有保护、吸收和分
样品制备与染色方法
脱水
用梯度酒精脱水，去除样品中的水分。
透明
用透明剂使样品透明，便于观察。
样品制备与染色方法
80%
简单染色法
用单一染料对样品进行染色，如 甲基绿染色法。
100%
复杂染色法
用多种染料对样品进行染色，如 革兰氏染色法、瑞氏染色法等。
显微操作技术(全面)
二、注射针
将外径lmm,内径0.8mm的毛细玻管固定在拉针器上。调好拉力强度
和电热丝温度，即可拉针。再将拉好的针在磨针器上磨出一45°斜口。
也可用单面刀片在橡皮垫上切成带斜面的针尖，然后在显微工具制作
器(microforge)上加工针尖部，使其锐利、光滑，便于刺入细胞。用 于细胞注射的针口直径为10～13微米。 DNA注射者的口径不足l微米, 显微镜下观察不到是否开口，只有试注射才可确定是否适用。一般DNA 注射针拉制后直接使用，不需再处理，因为在磨针器上加工会造成较 大的口径而不易控制注射量。且每次注射后，因压力降低、产生回流， 使DNA浓度降低。
.下2
.
优势(意义)
• 充分发挥雌性个体的繁 殖潜力 • 缩短供体本身的繁殖周 期 • 保持供体优良特性 • 大规模繁殖 • 节约成本\费用 • 可用于保护珍稀动物 • ……
. .
在20世纪60年代以来，对家畜胚胎的采取、 保存、移植等技术环节进行了大量的试验研究工 作，取得不少进展。 20世纪70年代以后，胚胎的移植技术可以说 发展到在畜牧生产中实际应用的阶段。
显微操作技术
显微操作技术(micromanipulation technique)是指在高倍复式显微镜下．利用显 微操作器(micrcmanipulator)进行细胞或早期
胚胎操作的一种方法．
显微操作器用以控制显微注射针或吸管（固定针管）在 显微镜视野内移动的、精确的机械装置。一般装在显微 镜载物台的两侧．也可装在显微镜的前面或一侧。
一、 胚胎分割
胚胎分割（embryo splitting）是运用 显微操作系统将哺乳动物附植前胚胎分成若干 个具有继续发育潜力部分的生物技术，运用胚 胎分割可获得同卵孪生后代。
生物显微镜技术6-显微操作技
第二节 几种显微操作技术简介
一、细胞核移植
细胞核移植（nuclear transplantation）就是将供体细 胞核移入除去核的卵母细胞中，使后者不经过精子穿 透等有性过程而经过无性繁殖即可被激活、分裂并发 育成新个体，使得核供体的基因得到完全复制。
就是将一个细胞核用显微注射的方法放进另一个细胞 里去。前者为供体，可以是胚胎的干细胞核，也可以 是体细胞的核。受体大多是动物的卵子。因卵子的体 积较大，操作容易，而且通过发育，可以把特征表现 出来
体 细 胞 核 移 植 过 程 流 程 图
去核 ？？ 体细胞 供体细胞导入 去核的卵 母细胞
重组细胞 物理、化学 方法激活 重组胚胎 移入受体子宫
？？
个体
动物克隆是一种通过核移植过程进行无性繁 殖的技术。生产遗传结构与细胞核供体相同 动物个体。 怎样获得克隆动物？ ⑴原理：细胞核全能性 ⑵技术支持：动物体细胞核移植技术 ⑶应用：①加速家畜遗传改良进程，促进优 良畜群繁育。②保护濒危物种。③生产医用 蛋白。④作为异种移植的细胞、组织或器官 供体。⑤用于组织器官的移植 ⑷、尚存问题：克隆动物存在遗传和生理缺 陷。如体重较大、异常肥胖、发育困难、脏 器缺陷、免疫失调等
此法已成功运用于包括小鼠、鱼、大鼠、 兔子及许多大型家畜，如牛、羊、猪等基 因转殖动物。 供体：某些微量物质（如外源基因片段）， 受体：胚胎或细胞。
大致过程 1、采集受精卵：（1）超数排卵 。（2）取 受精卵 。 2、向受精卵雄性原核注入DNA溶液 3、将2细胞的受精卵移植到假妊娠雌性小 鼠的输卵管中 4、导入基因的鉴定
细胞生物学实验手册：细胞中的微丝染色及微丝与细胞形态的实验观察
实验四细胞中的微丝染色及微丝与细胞形态的实验观察【实验目的】掌握微丝的染色方法，了解光学显微镜和电子显微镜下微丝的基本形态结构。
【实验用品】一、材料和标本盖片培养的成纤维细胞三片。
二、器材和仪器光学显微镜一台、镊子一把、小平皿六个、载片三个、吸水纸、37℃恒温箱。
三、试剂 PBS(pH7.2)、2％Triton X—100液、M—缓冲液、3％戊二醛固定液、0.2％考马斯亮兰染液、100μg／ml的细胞松驰素B、DMEM培养液。
【实验内容】一、成纤维细胞微丝的染色及其对细胞松驰素B的反应(一)原理微丝普遍存在于多种细胞，对细胞的形状和运动有一定作用。
细胞松驰素B 可与微丝的亚单位肌动蛋白结合，从而破坏微丝，改变细胞的形状。
(二)细胞松驰素B处理成纤维细胞与染色观察1．在平皿中有三张成纤维细胞贴壁生长的盖片，在超净工作台内将一张盖片移入另一皿中继续培养，用作对照。
2．在有两片的平皿内加100μg／ml的细胞松弛素B 4滴继续培养半小时。
3. 将用细胞松弛素B处理过的两张盖片取一张做染色处理，另一张用培养液洗五次（在平皿内换五次培养液，每次都要摇动），继续培养、观察。
两小时后细胞形状恢复，接近正常。
4．对恢复的盖片与第一张没用药的盖片一同做染色处理。
5．染色处理①将需染色的盖片放入盛有PBS的平皿内用吸管轻轻吹洗盖片，换液三次，每次3分钟，洗去培养液。
②将盖片移入2％Triton X一100液，置37℃恒温箱内处理20～30分钟，以提取骨架以外的蛋白质，使骨架图像清晰。
③立刻将盖片移入M一缓冲液，换洗三次，每次3分钟。
M一缓冲液有稳定细胞骨架的作用。
④将盖片移入3％戊二醛固定15分钟。
⑤将盖片移入0.2％考马斯亮兰染液中，染色15分钟。
然后小心地用自来水冲洗，空气干燥。
(三)结果光镜观察，微丝聚集成的张力纤维束被染成蓝色。
在没用药的标本上，成纤维细胞多数有突起，微丝沿突起规则排列；用细胞松驰素B处理的标本，由于微丝被破坏突起缩回，多数细胞形状变圆；用药处理后又洗去药的标本，由于解除了药的作用，肌动蛋白重新聚台形成微丝，细胞形状恢复正常。
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胚胎细胞或体外培养的细胞）中，研究供体物的功能或者获得转基因动
物的技术。
外源基因导入（基因沉默、过表达、转基因动物）
利用显微操作系统将外源目的基因（DNA或RNA）直接注入 到受体细胞或受精卵的核中，使外源基因整合到受体细胞 的基因组内，培养/筛选，获得转基因动物/性状分析； 显微注射是目前转基因效率较好的一种转基因方法，可直接 用不含有原核载体DNA片段的外源基因进行转移；外源基 因的长度不受限制, 可达100 kb；实验周期相对比较短。它 的不足之处是：需要昂贵精密的设备；显微注射操作复杂； 导入外源基因整合位点和拷贝数无法控制；常导致插入位 点附近宿主DNA 片段缺失、重组等突变，可造成动物严 重的生理缺陷。
三、实验材料
斑马鱼 Danio sp.胚胎
2-cell
4-cell
8-cell
主要仪器和用具 倒置显微镜；显微操作仪；拉针仪 主要试剂 酚红/曙红
显 微 操 作 仪
四、显微注射操作过程
• 注射针制备 • 注射针Fra bibliotek装液使用无菌的微量加样器从微注射针的后部加入待注射样品；
• 注射针安装和定位
（1）将装液后的针头游离端安在连接器上，然后旋紧连接器以固定针头， 再将其固定到微操作仪的托针管上； （2）把载有待注射样本的培养皿放在显微镜载物台上，用低倍物镜对准 细胞调焦； （3）显微镜下使用微操作仪移动注射针，直到针头的阴影在视野的中心 上方； （4）使用工作用放大倍数，调准焦距，找到细胞和针尖。
实验四 细胞显微操作技术
一、目的要求
• 练习针刺细胞（未受精卵、去核卵、早期胚胎细胞或体外培养细胞）； • 学习微吸管制备； • 了解显微移植技术（细胞核、外源基因）
二、原理
• 采用显微操作系统（倒置显微镜 / 体视显微镜 + 显微操作器）将供体物 （基因、细胞核或细胞其他成分）直接注入宿主细胞（去核卵母细胞、
• 显微注射
（1）使针尖对准细胞的待注射部位（细胞与针尖在同一焦面上），旋转 推进旋钮，针刺入细胞内（卵膜、细胞膜、核膜）； （2）旋转加样旋钮，将样本加入，并离开细胞。
注射
作
业
• 简述细胞显微注射过程以及注意事项
• 显微拍照注射前后的胚胎 • 请于9月14日下午5点前提交报告 http://222.195.234.199/OpenClass