实验四 细胞显微操作技术

• 显微注射
（1）使针尖对准细胞的待注射部位（细胞与针尖在同一焦面上），旋转 推进旋钮，针刺入细胞内（卵膜、细胞膜、核膜）； （2）旋转加样旋钮，将样本加入，并离开细胞。
注射
作
业
• 简述细胞显微注射过程以及注意事项
• 显微拍照注射前后的胚胎 • 请于9月14日下午5点前提交报告 http://222.195.234.199/OpenClass
胚胎细胞或体外培养的细胞）中，研究供体物的功能或者获得转基因动
物的技术。
外源基因导入（基因沉默、过表达、转基因动物）
利用显微操作系统将外源目的基因（DNA或RNA）直接注入 到受体细胞或受精卵的核中，使外源基因整合到受体细胞 的基因组内，培养/筛选，获得转基因动物/性状分析； 显微注射是目前转基因效率较好的一种转基因方法，可直接 用不含有原核载体DNA片段的外源基因进行转移；外源基 因的长度不受限制, 可达100 kb；实验周期相对比较短。它 的不足之处是：需要昂贵精密的设备；显微注射操作复杂； 导入外源基因整合位点和拷贝数无法控制；常导致插入位 点附近宿主DNA 片段缺失、重组等突变，可造成动物严 重的生理缺陷。
实验四 细胞显微操作技术
一、目的要求
• 练习针刺细胞（未受精卵、去核卵、早期胚胎细胞或体外培养细胞）； • 学习微吸管制备； • 了解显微移植技术（细胞核、外源基因）
二、原理
• 采用显微操作系统（倒置显微镜 / 体视显微镜 + 显微操作器）将供体物 （基因、细胞核或细胞其他成分）直接注入宿主细胞（去核卵母细胞、
三、实验材料
斑马鱼 Danio sp.胚胎
2-cell
4-cell
8-ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱell
主要仪器和用具 倒置显微镜；显微操作仪；拉针仪 主要试剂 酚红/曙红
显 微 操 作 仪
四、显微注射操作过程
• 注射针制备 • 注射针内装液
使用无菌的微量加样器从微注射针的后部加入待注射样品；
• 注射针安装和定位
（1）将装液后的针头游离端安在连接器上，然后旋紧连接器以固定针头， 再将其固定到微操作仪的托针管上； （2）把载有待注射样本的培养皿放在显微镜载物台上，用低倍物镜对准 细胞调焦； （3）显微镜下使用微操作仪移动注射针，直到针头的阴影在视野的中心 上方； （4）使用工作用放大倍数，调准焦距，找到细胞和针尖。