医学细胞生物学实验培训课件
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医学细胞生物学实验
徐志浩 遗传与基因工程教研室
院系楼西侧一楼 2016年
精
1
医学细胞生物学实验
实验目的
1. 掌握细胞冻存与复苏的原理。
2. 熟悉细胞冻存复苏的一般操作过程。
3. 掌握细胞计数的一般方法。
实验原理
细胞冻存的必要性 冻存温度 冻存操作对细胞的损伤：冰晶损伤、溶液损伤 冻存保护剂 冻存复苏的原则：慢冻速融
细胞浓度；
冻存管做好标记。
梯度降温（慢冻）；
精
3
医学细胞生物学实验
2、细胞复苏与计数
取出冻存管→ 37℃水浴1min融化→转入离心管→ 加至5ml培养液→混匀→ 1500rpm离心5min→弃 上清→加1ml培养液→混匀→取0.5ml →加入等体 积台盼蓝→染色1min →计数 → 计算细胞活力和 细胞浓度。
1mm 1mm
0.1mm3 10-4ml
5
医学细胞生物学实验
四大格总细胞数
细胞浓度(个/ml)=
4
×104 ×N(稀释倍数)
四大格活细胞数 细胞活力(率)= 四大格总细胞数×100%
复苏细胞活力影响因素
冻存复苏操作。 染色时间。 计数时间。
精
6
医学细胞生物学实验
作业
1. 列出细胞冻存与复苏的主要操作步骤。 2. 计算细胞浓度和细胞活力，并分析影响细胞
细胞活力（率）：活细胞所占的比率。
如何区别死细胞和活细胞？
精
4
3、细胞计数板的使用
7.5cm
3.5cm
0.1mm
计数之前熟悉计数板构造并熟练掌握计 数方法。 使用计数板前用酒精棉球轻轻擦拭干净。 先盖盖玻片，再滴细胞悬液。 压线细胞：计上不计下、计左不计右。 计数方向：按一精定顺序。
医学细胞生物学实验
活力的原因。
精
7
精
2
பைடு நூலகம்
医学细胞生物学实验
1、细胞冻存
1ml鸡血+1ml生理盐水→1500rpm离心5min(配 平)→弃上清→加2ml冻存液→混匀 (空气吹打法) →分装至1ml的冻存管→标记→液氮罐口（-60~70 ℃ ）10min →液氮中冻存10min （-196℃ ）。
无菌操作;
防止冻伤；
保护剂；
防爆；
徐志浩 遗传与基因工程教研室
院系楼西侧一楼 2016年
精
1
医学细胞生物学实验
实验目的
1. 掌握细胞冻存与复苏的原理。
2. 熟悉细胞冻存复苏的一般操作过程。
3. 掌握细胞计数的一般方法。
实验原理
细胞冻存的必要性 冻存温度 冻存操作对细胞的损伤：冰晶损伤、溶液损伤 冻存保护剂 冻存复苏的原则：慢冻速融
细胞浓度；
冻存管做好标记。
梯度降温（慢冻）；
精
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医学细胞生物学实验
2、细胞复苏与计数
取出冻存管→ 37℃水浴1min融化→转入离心管→ 加至5ml培养液→混匀→ 1500rpm离心5min→弃 上清→加1ml培养液→混匀→取0.5ml →加入等体 积台盼蓝→染色1min →计数 → 计算细胞活力和 细胞浓度。
1mm 1mm
0.1mm3 10-4ml
5
医学细胞生物学实验
四大格总细胞数
细胞浓度(个/ml)=
4
×104 ×N(稀释倍数)
四大格活细胞数 细胞活力(率)= 四大格总细胞数×100%
复苏细胞活力影响因素
冻存复苏操作。 染色时间。 计数时间。
精
6
医学细胞生物学实验
作业
1. 列出细胞冻存与复苏的主要操作步骤。 2. 计算细胞浓度和细胞活力，并分析影响细胞
细胞活力（率）：活细胞所占的比率。
如何区别死细胞和活细胞？
精
4
3、细胞计数板的使用
7.5cm
3.5cm
0.1mm
计数之前熟悉计数板构造并熟练掌握计 数方法。 使用计数板前用酒精棉球轻轻擦拭干净。 先盖盖玻片，再滴细胞悬液。 压线细胞：计上不计下、计左不计右。 计数方向：按一精定顺序。
医学细胞生物学实验
活力的原因。
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2
பைடு நூலகம்
医学细胞生物学实验
1、细胞冻存
1ml鸡血+1ml生理盐水→1500rpm离心5min(配 平)→弃上清→加2ml冻存液→混匀 (空气吹打法) →分装至1ml的冻存管→标记→液氮罐口（-60~70 ℃ ）10min →液氮中冻存10min （-196℃ ）。
无菌操作;
防止冻伤；
保护剂；
防爆；