抗纤灵颗粒剂改善慢性肾衰竭肾纤维化的研究

抗纤灵颗粒剂改善慢性肾衰竭肾纤维化的研究

王　怡1,　何立群2,　高建东2

(1.岳阳中西医结合医院肾内科,上海200437;2.曙光医院肾内科,上海200021)

收稿日期:2002211208

基金项目:教育部骨干教师资助计划项目(项目编号:200035)

作者简介:王　怡,(1971～),女,上海市人,博士,副主任医师,研究方向:中医药防治慢性肾衰竭、慢性肾炎及慢性尿路感染,电话:0212

65161782X3233或2118。

关键词:抗纤灵颗粒剂;慢性肾衰竭;肾纤维化

摘要:目的:研究抗纤灵颗粒剂(丹参、制大黄、牛膝等)对慢性肾衰竭肾纤维化、肾功能的作用。方法:与蒙诺相对照,观察抗纤灵颗粒剂对慢性肾衰竭患者及5/6肾切除制作的慢性肾衰实验大鼠的肾功能指标即血清肌酐(Scr )、尿素氮

(BUN )和纤维化指标即血浆层粘连蛋白(LN )、纤维联结蛋白(FN )、Ⅲ型前胶原(PC 2Ⅲ)、Ⅳ型胶原(C 2Ⅳ

)的影响,并应用免疫组化技术观察抗纤灵颗粒剂及其拆方对实验大鼠残余肾组织细胞外基质FN 、C 2Ⅳ的作用。结果:抗纤灵颗粒剂有明显的降低慢性肾衰竭患者及实验大鼠的血清Scr 、BUN 、LN 、PC 2Ⅲ、C 2Ⅳ和升高FN 的作用,并有降低CRF 大鼠肾小球硬化指数和肾组织FN 、C 2Ⅳ的表达,具有统计学意义。结论:抗纤灵颗粒剂能减轻肾纤维化、延缓慢性肾衰竭的进程。中图分类号:R285.6 文献标识码:A 文章编号:100121528(2003)1020820204

E ffect of K angqianling G ranules on renal f ibrosis in chronic renal failure

WAN G Y i 1,　HE Li 2qun 2,　G AO Jian 2dong 2

(1.Y ueyang Hospital A f f iliated to S hanghai U niversity of TCM ,S hanghai 200437,Chi na ; 2.S huguang Hospital A f f iliated to S hanghai U ni 2versity of TCM ,S hanghai 200021,Chi na )

K ey w ords :Kangqianling Granules ,chronic renal failure ,renal fibrosis

Abstract :Objective :To observe the effect of Kangqianling Granules (Radix Salviae miltiorrhizae ,Radix et Rhi 2zoma Rhei ,Radix Achyranthis Bidentatae ,etc.)on renal function and renal fibrosis in chronic renal faiure (CRF ).Methods :Effect of Kangqianling Granules on Serum Creatinine (SCR ),Blood Urea Nitrogen (BUN ),

Laminin (LN ),Fibronectin (FN ),Precollagen Ⅲ(PC 2Ⅲ

)and Collagen Ⅳ(C 2Ⅳ)were observed in CRF pa 2tients and rats with 5/6nephrectomy.The expression of FN and C 2Ⅳin remnent renal tissue of model rats were determined by immunhistochemistry.R esults :Kangqianling Granules decreased significently serum volume for Scr ,BUN ,LN ,PC 2Ⅲ,C 2Ⅳand elevated FN considerably in CRF patients and rats.Kangqianling Granules inhibited the expressions of FN and C 2Ⅳprotein in remnant renal tissue of model rats.Conclusion :Kangqianling Granules could relieve renal fibrosis and delay process of CRF.

各种肾脏病变不论其始发因素的种类是否持续存在,进展至慢性肾衰竭阶段都有共同的病理特征,即肾小球硬化、系膜基质增多和肾小管间质纤维化。因此,治疗慢性肾功能衰竭、改善肾功能,其实质是减轻肾脏的纤维化。因此,我们观察了抗纤灵颗粒剂及其组方对慢性肾衰竭肾纤维化的影响。1　临床部分1.1　病例选择

病例选择标准:血肌酐(Scr )为1332442umol/L ,

临床诊断为慢性肾衰竭(CRF )患者60例,并排除了慢性肝病、肝间质纤维化等影响纤维化指标的疾病。随机分组,蒙诺对照组30例,抗纤灵颗粒剂治疗组30例,两组一般情况基本相同。1.2　治疗方法

治疗组用抗纤灵颗粒剂(1包,tid )口服。抗纤灵颗粒剂组成:丹参15g 、制大黄15g 、牛膝10g 、当归10g 、桃仁10g ,由本院中药制剂室加工成颗粒剂,每包10g 。对照组予以蒙诺(成分为福辛普利钠,由

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中美上海施贵宝制药有限公司生产,10mg,qd)口服。各组病人均采用优质低蛋白饮食、控制血压(治疗组避免使用ACEI类及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂降压药)、纠正酸中毒、平衡电解质、抗感染等对症处理。2个月为1疗程,一般观察1～2个疗程。

1.3　观察指标

取血检测:血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、血色素(Hb)、血浆白蛋白(Alb),及血浆层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(C2Ⅳ)、Ⅲ型前胶原(PC2Ⅲ)。EL ISA法检测LN、C2Ⅳ,LN其试剂盒由上海海景医学研究所提供,正常参考值为50～80ng・mL-1;C2Ⅳ的试剂盒由中美合资上海华泰生物工程公司提供,正常参考值为<140ng・mL-1;放射免疫法(RIA)检测PC2Ⅲ,其试剂盒由重庆市肿瘤研究所研制、上海核技术开发公司生产提供,正常参考值为<120ng・mL-1。

1.4　统计方法

数据用均数±标准差表示。同组治疗前后用t 检验。

1.5　结果

1.5.1　60例CRF患者治疗前后肾功能情况　见表1。

表1　抗纤灵颗粒剂及蒙诺治疗CRF患者肾功能指标变化( x±s)

组别例数Scr(umol・L-1)BUN(mmol・L-1)Hb(g・L-1)Alb(g・L-1)对照组30治疗前 257.80±82.84 11.66±4.62 93.92±21.76 39.05±5.63 30治疗后236.67±111.3111.24±4.8191.23±16.5539.72±6.05治疗组30治疗前272.27±84.4014.03±4.6791.14±26.1940.03±5.41 30治疗后216.97±106.141)11.12±4.711)96.71±14.9439.50±5.35 与本组治疗前对照1)P<0.05(后表同)。

1.5.2　60例CRF患者治疗前后血清纤维化指标的比较　见表2。

表2　抗纤灵颗粒剂和蒙诺治疗CRF患者血清纤维化指标变化( x±s)

组别例数LN(ng・mL-1)PC2Ⅲ(ng・mL-1)C2Ⅳ(ng・mL-1)

对照组30治疗前152.38±82.66139.67±97.05108.00±90.85 30治疗后146.06±74.32110.22±107.1464.31±75.471)

治疗组30治疗前181.11±58.52204.50±103.54145.35±112.65 30治疗后141.94±66.531)153.19±76.921)85.00±64.561)

2　实验部分

2.1　实验动物

成年♂SD大鼠80只,6～8周龄,体重(180±10)g。

2.2　模型制作

大鼠适应1周后,其中70只采用Platt法5/6肾切除制作大鼠慢性肾衰模型。假手术组5只同期手术,仅背部切口分两次剥离左右肾包膜,保留肾上腺。

2.3　分组给药

80只大鼠均自由饮水,普通饲料喂养。其中70只肾切除大鼠根据手术两周后断尾采血所测血肌酐平均分组:模型组、蒙诺组、复方组、丹参组、大黄组。每组14只,组间无统计学差异。根据人鼠剂量1∶20换算予以给药。蒙诺组予以蒙诺溶液ig。复方组予以抗纤灵颗粒剂配成溶液ig。丹参组予以丹参水煎剂ig。大黄组予以制大黄水煎剂ig。模型组、假手术组和正常组(未进行手术),同时开始每天蒸馏水ig1次。ig2月后结束。2.4　观测指标

2.4.1　腹主动脉无菌采血5～8mL备测。检测血BUN、Scr、Hb,及血浆纤维联结蛋白(FN)、C2Ⅳ、PC2Ⅲ等指标。免疫比浊法检测FN(上海生物制品所),EL ISA法检测C2Ⅳ(上海海军医学研究所); PC2Ⅲ前胶原(重庆肿瘤研究所)。

2.4.2　并取出肾脏,切取部分,做石蜡切片,HE和PAS染色,光镜观察。另取一条肾组织做电镜观察。

2.4.3　肾小球硬化指数:每例切片肾小球硬化指数根据Raij法(1),分0～4级,硬化达到肾小球总数25%为1级,依次类推,达到75%～100%为4级。

2.4.4　肾脏石蜡切片,FN、C2Ⅳ免疫组化染色。采用ABC法,单克隆大鼠抗人和大鼠小鼠纤维联结蛋白(FN)抗体,多克隆兔抗人和大鼠Ⅳ胶原(C2Ⅳ)抗体由上海医科大学病理免疫室提供,生物素化标记的Ig G抗体及ABC试剂盒由华美生物工程公司提供,显色物为DAB(上海中达医学公司)。用PBS代替一抗作阴性对照片。半定量法,应用真彩色医学

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