分子生物学常用溶液的配制

分子生物学常用溶液的配制（1）在配制溶液前，请先计算所配试剂中各成分的用量。

注意：①LB液体培养基常用于大肠杆菌增殖培养；②在LB培养基中，酵母提取物提供维生素和矿物质，蛋白胨提供碳源、氮源及能量，NaCl提供适当的渗透压；③不必定容，可直接加入200mL蒸馏水；④氨苄青霉素等抗生素受热易分解，必须在培养基经高压蒸汽灭菌、且温度降至50℃以下时加入。

（3）LB固体培养基的配制：清洗250mL三角瓶，称取适量的酵母提取物、胰蛋白胨、NaCl，并称取3g琼脂粉，加入200mL蒸馏水，铝箔纸包扎封口后，待高压蒸汽灭菌。

注意：①LB固体培养基常用于大肠杆菌的纯化培养；②琼脂粉起固化的作用；不必定容，可直接加入200mL蒸馏水；③氨苄青霉素等抗生素受热易分解，必须在培养基经高压蒸汽灭菌、且温度降至50℃以下时加入。

（3）溶液I、II、III的配制：清洗适当容积的试剂瓶，称取适量粉末状的葡萄糖，选择适当量程的微量移液器，移取所需体积的母液。溶液I、III需要在最后用100mL量筒定容，待高压蒸汽灭菌。溶液II现用现配，室温下放置。

注意：①溶液I、II、III用于质粒的制备；②正确使用微量移液器。

（4）配制TE（pH8.0）溶液，待高压蒸汽灭菌。

注意：①TE溶液用于溶解各类DNA；②由于Tris-HCl和EDTA溶液为常用试剂，故常常先配制高浓度的储存液，4℃冰箱中保存备用；③由于0.5M Tris-HCl（pH8.0）和0.5M EDTA（pH8.0）均已调好pH值，配制pH8.0的TE溶液时不必再调节pH值；④正确使用微量移液器。

（5）配制10×TAE电泳缓冲液，待高压蒸汽灭菌。

注意：10×TAE电泳缓冲液为高浓度的储存液，使用时稀释10倍作为1×TAE工作液，电泳槽中添加电泳缓冲液和配制琼脂糖凝胶所用的电泳缓冲液浓度应一致，都使用1×TAE 工作液。

（6）配制6×上样缓冲液，待高压蒸汽灭菌。

注意：电泳上样前，取适量6×上样缓冲液与DNA样品（如质粒溶液、PCR产物、酶切产物等）混合，使上样缓冲液在混合物中的终浓度约为1×。

（7）配制EB储存液（10mg/mL），室温下保存。

注意：①在自来水中加入数滴EB储存液即可用于琼脂糖凝胶的染色；②由于EB有致癌嫌疑，操作时必须戴一次性塑料手套，禁止戴着塑料手套接触非EB区，操作完毕手套扔在指定的纸篓。