加强临床流式细胞免疫表型分析的质量控制
流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制流式细胞术是一种在液流中快速检测和分析细胞特性的技术,广泛应用于医学、生物技术、免疫学等领域。
然而,要确保实验结果的准确性和可靠性,必须实施严格的质量控制措施。
本文将探讨流式细胞术的质量控制。
1、样本制备的质量控制样本制备是流式细胞术的关键步骤之一,包括细胞样本的收集、处理和标记。
在此过程中,应遵循标准化操作流程,并注意以下几点:(1)样本的收集和保存:应尽可能缩短样本采集到分析的时间,避免细胞状态的改变。
对于血液样本,应使用肝素抗凝,避免细胞聚集。
(2)细胞的分离和洗涤:应根据实验需求,采用合适的分离方法(如密度梯度离心法、贴壁培养法等)对细胞进行分离。
在洗涤过程中,应使用无菌、无内毒素的缓冲液洗涤细胞,去除杂质和死细胞。
(3)抗体标记:选择高质量的抗体,并遵循制造商的建议进行标记。
应避免抗体非特异性结合,确保标记的特异性和敏感性。
2、仪器设备的质量控制流式细胞仪是流式细胞术的核心设备。
为确保实验结果的准确性,应对仪器进行定期校准和维护。
具体措施包括:(1)校准激光功率:定期使用标准样本对激光功率进行校准,确保光路准直,提高光散射数据的准确性。
(2)清洗流动室:定期清洗流动室,防止样品残留物堵塞喷嘴,影响流速稳定性。
(3)校准光电倍增管:使用标准样本校准光电倍增管,确保光电倍增管输出的线性范围。
3、数据分析的质量控制数据分析是流式细胞术的关键步骤之一,包括数据的获取、处理和解析。
在此过程中,应遵循标准化操作流程,并注意以下几点:(1)数据获取:设置合适的参数和门控,确保获取最佳的数据。
(2)数据预处理:去除噪声和无效数据,进行数据归一化处理,提高数据质量。
(3)数据分析:选择合适的数据分析方法(如聚类分析、主成分分析等),对数据进行深入挖掘。
同时,应使用多个对照样本,评估实验结果的可靠性和稳定性。
4、实验室环境的质量控制实验室环境对流式细胞术的结果也有重要影响。
为确保实验结果的准确性,应采取以下措施:(1)温度控制:保持实验室温度稳定,避免温度波动对细胞状态的影响。
流式检测上机前细胞处理流程与注意事项
流式检测上机前细胞处理流程与注意事项流式细胞检测是一种常见的细胞学技术,用于研究和分析细胞的表型特征。
流式细胞检测通常包括细胞样品的处理、染色和分析等步骤。
下面将介绍流式检测上机前的细胞处理流程及注意事项。
流式细胞检测的基本流程包括:细胞样品制备、细胞染色、样本处理与检测。
在上机前的细胞处理阶段,需要进行以下步骤:1.细胞培养和扩增:首先,选择所需的细胞系进行培养和扩增。
细胞应该在适当的培养基和培养条件下生长,并保持细胞的活性和稳定性。
2.细胞收获:当细胞达到适当的生长状态后,使用适当的方法(例如胰蛋白酶消化、细胞刮取等)将细胞从培养瓶中收获。
3.细胞计数和离心:将收获的细胞进行计数,以确定要投入到流式细胞仪中的细胞数量。
通常使用血球计数板或自动细胞计数仪进行计数。
然后,用适当的速度进行离心,以收集和清洗细胞。
4.细胞固定和渗透化:对细胞进行固定和渗透化处理,以保持细胞在染色过程中的形态和结构。
常用的方法包括用乙醇固定和洗涤溶液进行渗透化处理。
5.抗体染色:根据研究的目的和需要,选择适当的标记抗体对细胞样品进行染色。
可以选择直接染色或间接染色方法,通过荧光标记的抗体对特定的细胞表面标记物或细胞内标记物进行检测。
6.控制样品的制备:在流式细胞检测中,为了进行质量控制和校准,需要准备确定性阳性和阴性对照样品。
阳性对照样品含有已知的标记物,用于评估流式细胞仪的性能和染色的品质。
注意事项:1.选择适当的细胞培养条件:细胞培养的条件对于细胞的生长和功能非常重要。
细胞应在适当的培养基和培养条件下生长,并定期检查细胞的健康状态。
2.加入适量的细胞:投入到流式细胞仪中的细胞数量应根据实验需要和仪器的要求来确定,过多或过少的细胞都会对结果产生影响。
3.使用合适的固定和渗透化方法:细胞固定和渗透化处理要严格按照方法的要求进行,以确保细胞在染色过程中保持完整和稳定。
4.选择适当的抗体和染色方案:根据研究的目的和需要选择合适的抗体和染色方案。
流式细胞分选技术的质量控制
理论与方法252 2015年24期流式细胞分选技术的质量控制汪艳胡锐刘伟乔志仙李婷婷中国科学院水生生物研究所,湖北武汉 430072摘要:越来越多科研者利用流式分选技术进行分选染色体、纯化细胞株、单细胞克隆、分选干细胞等稀有细胞或细胞富集,将获取细胞主要用于细胞基因、蛋白、功能水平的研究,为了保证分选的细胞直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR 扩增或原位杂交等后续实验,我们有必要考虑分选细胞的生物学活性、回收率、纯度等相关分选指标。
实际上,流式细胞仪在分选细胞过程中,通常受到细胞本身状态、仪器性能、操作者等多种因素的干扰,无法获取流式细胞仪理想的分选参数值,即高速、高纯度、高活性、高得率,这些参数往往是相互制约,不能同时满足,需要考虑和平衡实验目的侧重选择。
我们将从流式分选术影响因素来阐述分选的质控。
关键词:流式细胞仪;细胞分选;质量控制中图分类号:TN24 文献标识码:A 文章编号:1671-5780(2015)24-0252-02流式细胞术(flow cytometer)利用流式细胞仪对快速流动的状态的单个细胞或生物颗粒进行多参数、高通量、高速分析和分选的一门技术[1]。
随着单克隆抗体和流式细胞仪研制整体水平的发展,分选型流式细胞仪的性能逐步完善,特别是分选功能智能化、高速化、高精度,流式细胞分选技术真正实现自动监控技术,复杂的分选技术简单化[2,3]。
因而,许多科研者利用流式分选技术进行深层次单细胞水平研究,如分选染色体、纯化细胞株、单细胞克隆、分选干细胞等稀有细胞或细胞富集等[4,5,6]。
实际上,流式细胞仪在分选细胞过程中,通常受到细胞本身状态、仪器性能、操作者等多种因素的干扰,无法获取流式细胞仪理想的分选参数值,即高速、高纯度、高活性、高得率,这些参数往往是相互制约,不能同时满足,需要考虑和平衡实验目的侧重选择。
我们将从流式分选术影响因素来阐述分选的质控。
1 样本质控流式细胞仪分析和分选样本必须制备成单细胞悬液,来源不同的样本如细胞、组织、外周血、骨髓等,必须经过一系列消化、离心、染色等步骤进行前处理,在一定程度上影响细胞的活性状态,其中染色过程对细胞活性有极大的损伤[7,8]。
2023年流式细胞分析的规范化和标准化
2023 流式细胞分析的标准化和标准化〔全文〕流式细胞分析的临床应用日趋广泛,主要应用有淋巴细胞亚群、造血干细胞计数、白血病免疫表型、阵发性睡眠性血红蛋白尿症诊断、血小板自身抗体及膜糖蛋白检测等,为机体免疫功能评估、血液与淋巴组织肿瘤的诊断、分型、鉴别诊断和预后等供给依据。
随着相关技术的进步和开展,临床使用的流式细胞仪从最初的单激光3 色,已经开展为3 激光10 12 色, 甚至5 激光18 色,一些型流式细胞仪如光谱流式细胞仪更是可以供给至少24 色。
毫无疑问,更多参数流式细胞仪的应用给使用者供给了更多的数据信息,有助于提高疾病的诊疗效率。
流式细胞分析具有强大的用户自定义功能,即不同用户〔试验室〕可依据自己试验目的建立检测流程,从某种程度上讲,流式细胞分析属于试验室自建方法〔laboratory designed test, LDT 〕范畴。
因此,各个试验室操作步骤如染色过程、抗体组合、数据分析等方面都不尽一样。
另一方面, 不同类型的流式细胞仪在激光光源、荧光素种类、抗体克隆、分析软件等的设置也不尽一样。
此外,目前尚未研发出相关工程的标准品。
以上诸多因素导致了流式细胞分析的结果存在较大差异,结果可比性有待提高。
行业内也面临标准化、标准化多参数流式细胞分析这一巨大挑战。
_、标准操作过程流式细胞分析的首要操作是标本处理,这个环节直接影响检测结果全都性和可比性,是标准化至关重要的一环。
具体步骤有标本采集、接收、标本处理。
前 2 个因素的标准化要求在临床试验室标准化协会等多个文件中均已说明。
标本处理通常分为染色和离心2 个步骤,标准地进展标本染色和离心可以确保结果全都性。
(-)标本染色标准化临床实际工作中,标本染色程序依据试验目的进展选择和确认。
选择: 前向散射光(forward scatter, FSC )和侧向散射光(side scatter, SSC ) 的变异系数(coefficient of variation , CV )低;标本中主要细胞亚群的FSC 和SSC 平均通道数要有明显差异细胞损失最小荧光强度保持最高;不影响偶联荧光染料的稳定性;背景染色低;室内误差最小;操作简便快速。
流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制流式细胞术的质量控制介绍:流式细胞术是一种广泛应用于生物学研究中的实验技术。
它利用机器读取细胞表面或细胞内的特定标记以获得细胞的详细信息。
在进行流式细胞术之前,需要进行一系列的质量控制步骤来确保实验结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍流式细胞术中的质量控制步骤。
⒈样本制备和处理⑴样本收集和保存●确保样本采集时的准确性和一致性,尽量避免引起细胞损伤或死亡的因素。
●根据所选择的荧光探针或抗体,选择合适的保存液保存样本,并按照推荐的存储温度和时间进行保存。
⑵细胞处理●避免细胞在处理过程中受到机械或酶的损伤。
选择适当的细胞处理方法(如胶凝、裂解或染色)。
⒉样本质量控制⑴细胞数目和浓度●使用细胞计数仪或显微镜对观察区域内的细胞进行计数,并计算细胞的浓度。
⑵细胞活性●使用细胞活性染料(如细胞渗透性染料)检测细胞的活性。
确保细胞在实验过程中保持完整和活跃。
⑶细胞纯度●利用细胞表面标记物或细胞核染色物进行细胞表型分析,以检测细胞样品中的污染物。
⑷细胞均一性●对样本进行混合和搅拌,确保细胞在整个样本中均匀分布。
⒊仪器校准和控制⑴流式细胞仪校准●使用流式细胞仪提供的校准粒子进行仪器校准,包括流速、散射光校准和荧光信号校准等。
⑵仪器控制●使用流式细胞仪的软件设置合适的参数,如触发门、荧光通道选择和数据采集速率。
⒋数据分析和解释⑴数据收集●使用流式细胞仪采集样本数据,并确保数据的完整性和正确性。
⑵数据分析●使用专业的数据分析软件对采集到的数据进行分析和解释。
⑶数据报告●根据实验需求和要求,使用适当的图形、表格和文本来呈现数据结果。
附件:⒈样本收集和保存记录表⒉样本质量控制记录表⒊仪器校准记录表法律名词及注释:⒈样本:指用于流式细胞术的生物样本,如细胞悬液或洗涤液。
⒉流式细胞仪:一种用于分析和计数细胞的仪器,透过仪器对细胞进行流式测量。
⒊标记物:用于识别和分析特定细胞类型或分子的抗体或染料。
⒋数据分析软件:用于处理流式细胞术数据并图形和数据表的计算机程序。
干细胞移植中的干细胞质量控制与鉴定方法
干细胞移植中的干细胞质量控制与鉴定方法干细胞移植作为一种创新的治疗方法,被广泛应用于各种疾病的治疗和组织再生。
然而,干细胞的质量控制与鉴定成为了干细胞移植领域中的关键问题。
本文将探讨干细胞移植中干细胞的质量控制与鉴定方法。
干细胞是具有自我复制和分化能力的细胞,可以修复和再生受损组织。
在干细胞移植过程中,干细胞的质量非常重要,因为良好的干细胞质量能够确保移植的有效性、安全性和长期效果。
为了控制和鉴定干细胞的质量,研究人员开发出了多种方法。
首先,鉴定干细胞的表型特征是一种常用的方法。
干细胞通常表现出特定的表型特征,如特定的表面标记物和功能蛋白的表达。
通过细胞表面标记物的分析,可以鉴定干细胞的身份,并确定其纯度。
例如,在人类胚胎干细胞中,SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81是常用的表面标记物。
而在间充质干细胞中,CD105、CD73和CD90是常用的表面标记物。
此外,干细胞通常会表达特定的功能蛋白,如Nanog、Oct-4和Sox-2等。
这些特征可以通过流式细胞术、免疫组织化学和实时定量聚合酶链反应等方法来检测和鉴定。
其次,干细胞的增殖和分化能力也是衡量其质量的重要指标。
干细胞应具备自我复制能力,能够不断增殖并保持其天然状态。
此外,干细胞还应具备分化为多种细胞类型的潜力,如可以分化为神经细胞、心肌细胞和血液细胞等。
为了鉴定干细胞的增殖和分化能力,可以进行体外培养和分化实验。
体外培养可以评估干细胞的增殖能力,而分化实验可以评估干细胞的分化潜力。
此外,可以利用基因表达分析和细胞功能实验来评估干细胞的增殖和分化能力。
第三,干细胞的基因组稳定性和遗传特征也是干细胞质量控制的重要方面。
干细胞应具有稳定的基因组,避免异常染色体和基因突变的发生。
为了鉴定干细胞的基因组稳定性,可以使用染色体分析、单核苷酸多态性分析和基因组测序等方法。
这些技术可以检测干细胞的染色体异常、突变和遗传特征,从而评估其基因组稳定性。
临床免疫学检验质量控制流程
临床免疫学检验质量控制流程临床免疫学检验质量控制流程一、引言免疫学检验在临床诊断中起着至关重要的作用,保证免疫学检验的准确性和可靠性是保障患者诊疗安全的关键。
本文档旨在介绍临床免疫学检验质量控制流程,帮助实验室准确评估质量控制,并采取相应措施以确保检验结果的准确性。
二、质量控制计划1.确定质量控制目标:根据实验室的具体要求,制定合理的质量控制目标,如准确度、精密度等。
2.制定质量控制方案:根据目标确定质控品的选择和使用频率,制定各项质控的具体要求和措施。
三、质量控制样本管理1.样本采集与保存:采集质控样本时,应按照标准程序进行,确保样本的保存时间、温度和方法与实际临床样本一致。
2.质量控制样本分类:根据不同的检验项目和方法,将质控样本进行分类并标识,方便管理和追溯。
3.保密性和安全性:质控样本的管理应注意保密性和安全性,防止误用或泄露。
四、质量控制数据分析1.数据收集和记录:对每次质控样本的检验结果进行收集和记录,包括样本标识、检验人员、检验时间、仪器型号和检验结果等信息。
2.数据分析和比对:将质控数据进行统计和分析,与预设的质控目标进行比对,评估实验室的检验准确性和稳定性。
五、异常结果处理1.异常结果的判定:根据质控数据分析,确定是否存在异常结果,并进行进一步的确认和验证。
2.异常结果的处理:对于异常结果,及时采取措施进行排查和纠正,包括检查仪器的运行状态、操作人员的技术水平等。
六、质量改进措施1.定期评估:对质量控制的流程和结果进行定期评估,确保其持续有效。
2.问题解决与改进:针对实验室内存在的问题和不足,制定相应的改进措施,推动实验室质量的不断提升。
附件:1.质量控制记录表格2.质量控制样本分类及标识指南法律名词及注释:1.《医疗机构管理条例》:国家卫生健康委员会制定的对医疗机构进行管理的法规文件。
2.《临床实验室质量管理规范》:卫生健康部制定的对临床实验室进行质量管理的规范性文件。
流式细胞术质量控制
流式细胞术质量控制流式细胞术(flow cytometry,FCM)越来越广泛的应用在临床检验中。
由于临床检验本身的性质,它要求临床检验的管理者和操作人员必须把好常规操作已经结果分析的质量关。
同时还必须懂得如何判断分是在控还是失控。
作为临床检验工作,其工作的质量标准就是使检验的结果最佳地符合病人有无病变的实际情况。
在临床检验中分为分析前、分析中、分析后的质量控制。
分析前的质量控制主要内容是标本采集、保存和传送等;分析中的质量控制即实验操作过程的控制;分析后的质量控制主要是对数据结果的处理,对检验结果的可信度评价和及时将报告送给临床并听取反馈意见。
为此,从临床医师开出化验单,,直至拿到检验报告的整个过程都在质量控制的范畴之中,即所谓全程质量控制。
它包括质量保证、质量控制和质量评估。
质量保证,指围绕所有的步骤,监测和评估实验室规章制度与操作流程的效力。
主要利用质量控制和质量评估。
质量控制指建立一套完善的实验室监控方法,保证结果的可靠性,提高准确度、精密度、重复性和室间结果的可比性。
对于一个实验,应建立一套包括各种可变因素(仪器设备、样本处理、试剂、操作过程、数据分析等)的操作规程。
质量评估是由一个区域性的、国家的或国际性的机构,组织通过一系列的方法来比较实验室内或不同实验室之间的结果而建立的一套评价系统。
其主要目的是建立室间和仪器设备之间的可比性。
当一个标准品或参考标准存在时,质量评估通常被称为熟练度测试。
因此,严格的质量控制是先进的临床检验分析技术真正发挥作用的保证。
FCM作为一项先进的检测技术,对质量控制自然也不例外。
目前,FCM应用于临床检验的项目主要集中在几个方面:1,免疫表型分析,包括外周血淋巴细胞表型分析、白血病/淋巴瘤免疫分型、血小板膜糖蛋白分析、HLA-B27检测、阵发性血红蛋白尿(PNH)的检测等等。
2,细胞DNA、RNA检测及细胞周期分析,包括DNA倍体检测、细胞周期分析、网织红细胞检测、网织血小板检测等等。
流式细胞术 注意事项
流式细胞术注意事项流式细胞术是一种广泛应用于生命科学研究和临床诊断的重要技术。
它可以用来分离和鉴定细胞群体,并分析其形态学、表型、生理学和功能特性。
然而,在进行流式细胞术时,需要注意以下几个方面。
首先,样本的准备至关重要。
样本的质量直接决定了流式细胞术结果的准确性和可靠性。
因此,在进行流式细胞术前,必须采取适当的方法收集和处理样本。
一般来说,样本应该保持单一细胞悬浮状态,以便通过流式细胞仪进行准确的细胞计数和鉴定。
同时,应该避免细胞团或聚集物的存在,以防止对细胞计数和鉴定造成影响。
其次,合适的抗体选择是十分重要的。
在进行流式细胞术时,抗体是用来鉴定不同细胞亚群和分析细胞表面标记物的重要工具。
因此,选择合适的抗体对于获取准确的结果是至关重要的。
在选择抗体时,应该考虑到其特异性、亲和力和背景噪音等因素。
此外,还要注意抗体的适宜浓度和孵育时间,以确保得到稳定的试验结果。
第三,流式细胞术过程中,仪器的性能和维护也是需要注意的。
流式细胞仪是流式细胞术的核心设备,其性能直接关系到结果的质量。
因此,在使用流式细胞仪前,需要进行适当的校准和质控操作。
例如,校正仪器的光源和光探测器,检查流速和压力,以及进行仪器的清洁和消毒等。
同时,还需要定期检查和更换仪器的关键零部件,以保证仪器的正常运行和准确度。
此外,流式细胞术的分析结果需要妥善解读。
流式细胞仪可以同时获得大量的数据,包括细胞数目、细胞表面标记物表达水平和细胞分布情况等。
因此,在分析结果时,需要借助适当的软件和统计方法进行数据处理和解读。
同时,应该对结果进行合理的验证和再现,以确保结果的可靠性和可重复性。
最后,安全操作也是进行流式细胞术时需要注意的事项之一。
流式细胞术涉及到使用一些潜在的有害物质和生物样本,如细胞染色剂、细胞培养液和细胞悬液等。
因此,在操作过程中,需要正确佩戴个人防护设备,如实验服、手套和面罩等。
同时,应该遵守实验室的安全操作规程,如避免直接接触有害物质、正确处理和处置废液和废弃物等。
流式细胞仪在临床检验中的应用
流式细胞仪在临床检验中的应用流式细胞仪是一种先进的生物医学仪器,能够对细胞进行高速、高分辨率的检测和分析。
它可以用于各种临床检验,有助于提高疾病的诊断和治疗的准确性和效果。
本文将探讨流式细胞仪在临床检验中的应用。
首先,流式细胞仪可以用于白血细胞计数和分类。
传统的白细胞计数方法需要进行显微镜检查,耗时且不准确。
而流式细胞仪通过分析细胞的体积和形状特征,可以快速、准确地计算出不同类型的白血细胞数量,并能够进一步对白细胞进行分类,如淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等。
这些信息对于炎症、感染和肿瘤等疾病的诊断和治疗非常重要。
其次,流式细胞仪还可以用于免疫细胞表型分析。
免疫细胞表型分析是研究细胞表面分子的一种方法,可以确定细胞的类型和功能。
流式细胞仪通过与特定的抗体结合,可以测量不同细胞表面的抗原表达水平,从而确定细胞的免疫表型。
这对于免疫系统相关疾病的诊断和治疗具有重要意义,如白血病、自身免疫疾病等。
此外,流式细胞仪还可以用于检测细胞内的信号分子和功能,可以评估细胞的活力和功能状态。
流式细胞仪在肿瘤学研究中也有广泛的应用。
它可以检测和分离肿瘤细胞,通过测量肿瘤细胞的大小、形状和表面标记物的表达水平,可以评估肿瘤的类型、分级和预后。
此外,流式细胞仪还可以用于检测循环肿瘤细胞(CTC)和肿瘤间质细胞(TIC),这些细胞在肿瘤的转移和预后中起到重要的作用。
除了疾病诊断和治疗外,流式细胞仪还可以应用于药物研发和治疗监测。
通过对细胞的特征和功能进行分析,可以评估药物对细胞的影响和效果,从而指导药物的选择和使用。
此外,流式细胞仪还可以通过检测细胞的凋亡、增殖和细胞周期等指标,评估治疗的疗效和耐药性。
在临床检验中,流式细胞仪的应用广泛且日益重要。
它具有高通量、高分辨率和多参数分析的优势,可以提供丰富的静态和动态细胞信息,有助于提高疾病的早期诊断和治疗效果评估的准确性和效率。
随着流式细胞仪技术的不断发展和优化,相信它将在临床检验中发挥越来越大的作用,为人类健康事业作出更大的贡献。
免疫细胞表型检测的方法
免疫细胞表型检测的方法
免疫细胞表型检测的方法主要包括流式细胞术、免疫组化、免疫印迹、免疫荧光等技术。
其中,流式细胞术是最常用的技术之一。
它通过标记不同的抗原,使不同种类的免疫细胞在荧光染色后产生不同的信号,再通过流式细胞仪对这些信号进行检测和分析。
流式细胞术具有高通量、高灵敏度、高分辨率等优点,能够同时分析多个细胞表面分子的表达情况,可用于分析免疫细胞亚群的分布、测定细胞表面分子的表达量和分子结构等。
但是,其结果受到样本制备、实验条件等多种因素的影响,需要严格控制实验条件,保证结果的准确性和可重复性。
免疫细胞表型检测的方法在免疫学研究、疫苗开发、临床诊断和治疗等方面具有广泛应用。
例如,在肿瘤治疗中,流式细胞术可用于鉴定和分离肿瘤免疫细胞,评估肿瘤免疫监视功能,指导肿瘤免疫治疗策略的选择和调整。
在感染性疾病的诊断中,免疫组化、免疫印迹等技术可用于检测病原体的抗原或抗体,加强病原体的鉴别和定量分析。
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临床免疫检验的质量控制措施
临床免疫检验的质量控制措施摘要】目的:探究临床免疫检验的质量控制措施。
方法:选取300例在我院2014年1月—2015年1月期间进行临床免疫检验的患者的血液标本作为研究对象,随机将其分成参照组和观察组。
实施临床免疫检验的质量控制措施之前的患者为参照组,实施之后的患者为观察组。
对比两组患者的临床疗效。
结果:参照组的总有效率为41.3%,阳性检出率为52.7%,观察组的总有效率为78.7%,阳性检出率为83.3%。
且两组比较存在p<0.05,为差异有统计学意义。
结论:临床免疫检验时,实施质量控制措施可以明显提高阳性检测率,从而有利于准确的诊断出疾病类型,然后采取及时并有效的治疗手段。
使临床疗效更佳,值得将其在临床上推广应用。
【关键词】临床免疫检验;质量控制;措施【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2015)29-0148-02临床免疫检验主要是指利用抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种技术[1]。
临床免疫检验作为医疗过程中疾病诊断和选择治疗手段的主要依据,其数据的准确度必须高,否则将会直接影响到疾病诊断的准确性与治疗的有效性[2]。
因此,采取质量控制措施十分必要。
本文为了探究临床免疫检验的质量控制措施,选取300例在我院进行临床免疫检验的患者的血液标本作为研究对象,现总结报告如下:1.资料与方法1.1 一般资料本次研究选取2014年1月—2015年1月期间在我院进行临床免疫检验的300例患者的血液标本进行研究,使用随机方法分成参照组和观察组,实施临床免疫检验的质量控制措施之前的患者为参照组,实施临床免疫检验的质量控制措施之后的患者为观察组,每组有150例患者。
参照组资料:男性患者76例,女性患者74例;年龄范围(32~68)岁,平均年龄(43.2±10.3)岁;观察组资料:男性患者75例,女性患者75例;年龄范围(34~70)岁,平均年龄(44.5±10.1)岁。
肿瘤医院的临床实验室
肿瘤医院的临床实验室临床实验室在肿瘤医院中扮演着重要的角色。
它是一支精通实验技术和熟悉实验操作流程的团队,为临床医生提供准确的实验结果和可靠的数据支持。
本文将重点介绍肿瘤医院的临床实验室的工作职能、技术应用以及质量管理体系。
一、工作职能肿瘤医院的临床实验室主要负责对患者进行临床化验,包括血液、尿液、体液等的检测。
临床化验的目的是为了帮助医生明确诊断、判断疗效以及监测患者的治疗进展。
临床实验室的工作职能主要包括以下几个方面:1.标本采集与处理:临床实验室负责接收患者的标本,并按照标准操作程序进行处理,包括分离血清、血浆,制备细胞悬液等。
2.实验操作与检测:临床实验室根据医嘱要求进行各项实验操作,如血常规、生化分析、肿瘤标志物检测等。
实验操作需要采用严格的实验流程和仪器设备。
3.结果分析与报告:临床实验室对实验结果进行分析和解读,并及时生成实验报告,用于医生的诊断和治疗决策。
二、技术应用随着科技的不断进步,各种先进的实验技术被应用于肿瘤医院的临床实验室,为患者的诊断和治疗提供可靠的数据支持。
1.分子生物学技术:实时荧光定量PCR、扩增子测序和基因芯片等技术已成为临床实验室中常见的技术手段,可以检测肿瘤基因突变、融合基因等,对于肿瘤的分型和预后判断有重要意义。
2.流式细胞术:通过采用特定的抗体标记细胞表面分子,结合流式细胞仪技术,可以进行免疫细胞表型和细胞周期分析,帮助医生评估肿瘤的浸润程度和预后。
3.组织病理学技术:包括常规病理切片、免疫组化、原位杂交等技术,可以对肿瘤进行形态学和分子学的分析,为肿瘤的诊断和分期提供重要依据。
三、质量管理体系肿瘤医院的临床实验室必须建立健全的质量管理体系,确保实验操作和实验结果的准确性和可靠性。
以下是肿瘤医院临床实验室的质量管理措施:1.标本质量控制:临床实验室对标本的采集、运输和保存要求严格,确保样本的完整性和稳定性。
2.仪器设备维护:临床实验室定期对仪器设备进行校准和维护,保证仪器的正常运行和准确性。
免疫细胞疗法质量控制
生产流程的规范与优化
▪ 质量控制标准
1.**标准化检测方法**:为确保免疫细胞疗法的质量,建立了 一系列标准化检测方法,包括细胞计数、活力测定、表型和功 能分析等。 2.**质量追踪系统**:采用条形码或RFID技术,对免疫细胞的 生产过程进行全程跟踪,确保每一步骤都符合质量要求。 3.**实时监控技术**:实时监控技术在免疫细胞疗法生产中的 应用,如在线细胞计数和监测仪器,有助于及时发现生产过程 中的问题并进行调整。
生产流程的规范与优化
▪ 存储与运输
1.**低温存储技术**:免疫细胞疗法产品需要在低温条件下储 存和运输,以确保其活性和稳定性。现代的低温存储技术,如 液氮存储和自动控温冰箱,为免疫细胞提供了更优的保存条件 。 2.**运输过程控制**:在运输过程中,严格的温度控制和监测 是保证免疫细胞活性的关键。使用专用的运输箱和温度跟踪设 备,可以实时监控运输过程中的温度变化。 3.**冷链管理系统**:建立完善的冷链管理系统,从生产到患 者使用的全过程进行温度监控和管理,确保产品在整个供应链 中的质量和安全性。
质量控制的标准与方法
免疫细胞的扩增与培养
1.培养基选择与优化:选择合适的培养基并对其成分进行调整,以满足免疫细胞生长和分化的需求 。 2.扩增效率与质量控制:采用实时监测技术如流式细胞术跟踪细胞数量和质量的变化,确保扩增过 程的高效性和可控性。 3.规模化生产技术:探索大规模培养技术,如生物反应器的使用,以提高免疫细胞的生产效率和降 低成本。
▪ 免疫细胞的发育与成熟
1.免疫细胞的发育是一个复杂的过程,涉及多个阶段的细胞分裂和分化。 2.例如,T细胞从骨髓中的前体细胞迁移到胸腺,经过阳性选择和阴性选择后,成 熟的T细胞进入外周血液。 3.近年来,关于免疫细胞发育的分子机制研究取得了重要进展,如转录因子、信号 通路等在免疫细胞分化中的调控作用。
成人肾病综合征并发急性肾功能衰竭临床及病理研究
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A s atO jcv T vsgt tecnclpt l i l et e n rgoi o dlptn ehoesnr e bt c: bet e r i oi eta h l i , a o g a rsadpons f u aet o npr ydo n i e i a h oc f u a s a t i sf i f m
( 稿 日期 : o — r一l ) 收 2 8 0 0 7 1
文章编号 :(7 27 20 )2 22 —0 l )—48 (090 —0 9 3 X
成人 肾病综 合 征并 发 急 性 肾功 能 衰竭 临床及 病 理研究
顾 华, 吴 曼, 罗 萍 , 刘树 军
( 吉林大学第 二医院 肾病科 , 吉林 长春 104 ) 30 1 摘要: 目的 结果 探讨成人 肾病综合征 ( S 并发急性 肾功 能衰竭 ( R ) N) A F 临床 、 理特点及转 归。方法 病 把8 4例成人
Me ,0 11 ( )8 3 d 20 ,9 6 :2 . 4
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[ ] 3 / a M Z a K e a.ei o l gli c 4 c 8 xr — 3 0 7 , n ,ho , Rc r a r u tn f D / D p s -W t1 p c ao o e e e s b i y WI S Fl e A m l e[ ]N t e20 , 1 (84 : ∞ S / N -k Fc p x J . a r, 24 8 69 ) i B o es u O
流式细胞术的质量控制
流式细胞术的质量控制流式细胞术的质量控制一、引言流式细胞术是一种重要的细胞分析技术,可以用于细胞计数、细胞表型分析和细胞排序等。
在进行流式细胞术之前,进行质量控制是非常重要的,以确保实验的准确性和可靠性。
本文将详细介绍流式细胞术的质量控制方法。
二、仪器校准1-流式细胞仪校准●清洁流式细胞仪的样品室,并检查激光器和光路系统是否正常工作。
●使用粒子标准物质检查细胞仪的散射、荧光和时间参数的准确性。
●清洗和校准流式细胞仪的液体系统,确保流速和样本量的准确控制。
2-样品准备●均匀悬浮细胞样本,避免细胞团聚和沉积。
可通过离心和重新悬浮样本来实现。
●使用质量可靠的细胞染色方法,确保染色的准确性和一致性。
●调整样本的浓度,以避免过度聚焦和细胞过于稀疏而损失信号。
三、质量控制指标1-样本纯度的质量控制●使用合适的负对照和正对照来评估染色的纯度。
例如,使用未染色细胞作为负对照,使用已知阳性标记的细胞作为正对照。
●定期检查染色结果的一致性,确保负对照细胞没有阳性标记,正对照细胞有预期的阳性标记。
2-流式细胞仪性能的质量控制●定期检查流式细胞仪的性能参数,包括散射灵敏度、荧光检测灵敏度和时间分辨率。
●使用校准颗粒检验流速的准确性和一致性。
●根据实验需要,使用合适的质检颗粒进行分辨率和强度的调整。
四、数据分析和结果解释1-数据质量控制●检查数据文件的完整性,确保数据文件包含所有需要的参数和样本。
●清除实验过程中的噪声信号和非特异性染色的细胞。
●根据预设的阈值和门控策略进行数据清洗和筛选。
2-数据解释和结果报告●根据实验的目的和结果,选择合适的数据可视化方法,如频率直方图、散点图或密度图等。
●在报告中注明样本总数、阳性细胞比例、细胞亚群的比例等相关指标。
●提供结果的解释和分析,例如细胞表型的变化趋势、不同实验组间的比较等。
五、附件附件1、样本染色方案附件2、流式细胞仪校准记录表附件3、数据分析结果表格六、法律名词及注释1-IRB:Institutional Review Board,即伦理审查委员会,负责审查人体试验和研究项目的合法性和伦理性问题。
临床免疫学检验的质量控制
2.2.2.5 分析中质量控制|异常结果复检
1 检验仪器提示结果异常时需要复检 2 检验结果超出线性范围时需要复检 3 检测过程中,仪器出现故障,所检出结果需要复检 4 胶体金法、ELISA,超过判读时间后判读的结果需要复检 5 前后两次检测结果相差较大 6 特殊检测指标(如HIV抗原抗体等)
2.2.2.5 分析中质量控制|异常结果复检
失控:SI上限值和SI下限值中任一数值>n3s对应数值
2.2.2.3 分析中质量控制|失控处理
质控物——仪器——试剂
由易到难
2.2.2.3 分析中质量控制|失控处理
建议性
1阴、阳性对照正常,弱阳性和阴性质控在控,且没有出现“花板”的情况下认 为该检测批有效,但仍需对“灰区”结果、弱阳性结果及少见模式结果进行复查, 避免偶然因素及孔间差对结果造成影响;
移液器的年度校准
1)移液器和酶标仪的年度校准 可联系厂商对移液器和酶标仪进行年度校准,每年至少进行1次。
酶标仪的年度校准
2)水浴箱的日常校准 日常使用水浴箱时,应使用温度计检测温度是否在控。
水浴箱的日常校准
3)水平旋转仪的日常校准 日常使用水平旋转仪时,应检测转速是否能达到设定的转速。
水平旋转仪的日常校准
3 化学发光法 配合自动化分析仪,方法简便,标准化程度高,干扰因素较少,但成本高。
4 免疫印记法 敏感度高,干扰因素多,适用于部分确证性试验。
1.2 免疫学检验的特点|结果类型的多样性
1)定性结果 阴性、可疑、弱阳性、阳性等报告形式,如胶体金法检测项目。
2 半定量结果 滴度(稀释度)报告结果,如RPR滴度、TRUST滴度等。
2.3 室间质量评价或比对|室间质量评价
室内质量控制(IQC)是检验实验室做 得 稳不稳——精密度
临床流式细胞术在免疫学中的应用
临床流式细胞术在免疫学中的应用免疫学作为一门研究机体免疫系统的学科,在医学领域中具有重要的地位。
而临床流式细胞术作为一种用于分析和鉴定细胞的工具,已经广泛应用于免疫学研究中。
本文将重点探讨临床流式细胞术在免疫学中的应用。
一、流式细胞术的基本原理流式细胞术是一种基于流式细胞仪的细胞分析方法,利用荧光标记的抗体与细胞表面和胞内分子相互作用,通过光散射和荧光信号来鉴定和分析细胞。
它广泛应用于免疫表型分析、免疫功能检测、细胞分选和细胞生物学研究中。
二、流式细胞术在免疫表型分析中的应用免疫表型分析是通过检测细胞表面和胞内标志物的表达水平来研究细胞类型和状态的方法。
流式细胞术通过标记不同的抗体来检测细胞表面和内部蛋白的表达,进而可以快速、准确地确定细胞的免疫表型。
三、流式细胞术在免疫功能检测中的应用免疫功能检测是通过评估细胞的功能状态来研究免疫系统功能。
流式细胞术可以通过检测细胞的分泌物、细胞因子的表达和细胞内信号通路活性等指标,来评估细胞的功能状态,从而帮助医生诊断疾病和制定治疗方案。
四、流式细胞术在细胞分选中的应用细胞分选是将混合细胞群中的特定亚群细胞分离出来的方法。
流式细胞术通过标记特定蛋白或标志物的抗体,结合流式细胞仪和细胞排序设备,可以实现快速、高效地分离出目标细胞,用于进一步的实验研究。
五、流式细胞术在细胞免疫学研究中的应用细胞免疫学研究主要研究细胞的免疫应答和免疫调节机制。
流式细胞术可以用于研究细胞的增殖、凋亡、细胞周期和细胞死亡等生物学过程,帮助深入了解免疫系统的功能和调控机制。
六、流式细胞术的发展和应用前景随着科技的不断进步,流式细胞术在免疫学中的应用也在不断扩展。
高维度流式分析、多参数细胞分选和新一代流式仪器的发展,有望为免疫学研究提供更为精细和全面的数据,加速疾病的诊断和治疗进展。
总结:临床流式细胞术作为一种流行于免疫学中的细胞分析方法,广泛应用于免疫表型分析、免疫功能检测、细胞分选和细胞免疫学研究中。
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中华检验医学杂志 ’((% 年 J 月第 ’N 卷-5,U61V64< ’((%,:"; ’N,W"& J
度依赖于 !"#$ 的滴度、 合适的仪器设置和校准等。应了解每一种 !"#$ 的灵敏度。 !"#$ 与细胞的比例、 用 !"#$ 检测单一样本, 重复测定 ’( 次以上。正常外周血、 骨髓、 培养细胞系和质控物 (如美 %& 精密度: 国 )* 公司的 +* +,-. 等) 可用于精密度测定。对每一种 !"#$ 应测定其均数和标准差, 作为 !"#$ 每次应用 时的参考。 商品化的 !"#$ 一般都标明其适用范围。按用途可分为 % 类: 体外诊断 ( 01 2034" 50671"808, /& 适用范围: 试剂、 分析特异性试剂 ( 616;<3-=8>-?0@0? 4-67-138,#AB) 和仅供研究用 ( "1;< 4-8-64?,) 试剂。作为临床应用 9:*) 的 !"#$, 建议尽可能使用 9:* 和 #AB 试剂, 尤其是对临床具有诊断或治疗意义的试验, 如白血病与淋巴瘤 的免疫分型、 血液淋巴细胞免疫表型分析与免疫细胞亚群绝对计数、 外周血造血干 C 祖细胞计数、 淋巴细胞 DE#=)’F 定量分析等。 三、 免疫荧光染色方法 依据分析目的不同选用, 间接免疫荧光染色已较少, 直接免疫荧光染色包括单色 G 四色分析, 二色以上 分析较为常用; 现已可达十色分析, 但临床尚未应用。单色免疫荧光多用于 !"#$ 特异性较高、 单一细胞群 的抗原检测, 如红细胞膜 +*HH 或 +*HI 测定。血液淋巴细胞免疫表型至少应用双色分析, 白血病与淋巴瘤 的免疫分型、 淋巴细胞免疫亚群绝对计数、 造血干 C 祖细胞计数等复杂免疫表型宜采用三色或四色分析。在 多色免疫表型分析的荧光素标记 !"#$ 组合时, 应注意不同 !"#$ 彼此间有无干扰, 最好采用同一品牌的试 剂, 因为不同品牌的荧光素标记 !"#$ 的生产工艺和标记的荧光色素等有差异, 可干扰免疫反应和影响流式 细胞仪测定时的颜色补偿, 产生假阳性或假阴性结果。组合的多色标记 !"#$ 可以从厂商购买, 也可由本实 验室制备, 但组合的多色标记 !"#$ 的荧光信噪比、 对靶细胞的结合强度应该与未组合时相同。 血液或骨髓免疫荧光染色后的溶血处理, 溶血免洗一般用于细胞绝对计数, 其他的免疫表型分析应尽可 能溶血后洗涤 J 次, 减少红细胞碎片的干扰。 四、 对照设置 流式细胞 术 分 析 免 疫 表 型 必 须 设 置 各 种 对 照 ( ?"134";8 ) , 包括阳性对照 ( >"80302- ?"134"; ) 、 阴性对照 ( 1-76302- ?"134";) 、 正常对照 ( 1"4K6; ?"134";) 、 同型对照 ( 08"3<>- ?"134";) 、 空白对照 ( $;61L ?"134";) 等。对照的目的 是避免各种因素可能造成的假阳性或假阴性反应。 是检查已知阳性标本能否用所测条件与方法确定为阳性, 如 +*% 的 !"#$ 检测正常人血液 J& 阳性对照: 若明显低于此值, 则有可能是 !"#$ 的质量与浓度、 荧光染色条 M 淋巴细胞的阳性率一般应大于 N(O 以上, 件、 流式细胞仪的状况等存在问题。阳性对照达不到要求时不能进行临床试验。 是指与 !"#$ 相同的、 未免疫小鼠的免疫球蛋白亚类, 若使用直接免疫荧光染色法, 同型对 ’& 同型对照: 照也应标记荧光色素, 如 97PJ=Q9M+、 97P’6=RS 等。主要考虑了细胞的自发荧光、 Q+ 受体介导的抗体结合和 非特异性抗体结合等影响因素。此外, 同型对照与 !"#$ 所标记的荧光色素、 浓度、 (标记的荧光色 Q: R 比值 素与免疫球蛋白分子的比值) 应该相同为最佳, 这对准确设定阴性与阳性细胞的界标有重要意义, 切忌使用 与 !"#$ 不相匹配的同型对照, 最好为同一实验室、 采用相同工艺或方法制备 (如同一品牌) 的产品。 仅以缓冲溶液, 如 R)A、 其余条件与阳性或同型对照 %& 空白对照: DSRSA 缓冲液等替代 !"#$ 进行试验, 相同。空白对照主要用于观察细胞和缓冲液中所含物质的自发荧光。由于一般标本细胞的自发荧光极弱, 又已做同型对照, 免疫表型分析时可以免做空白对照。 用健康人、 近期无感染、 未使用任何药物的标本 (如血液) 作为对照。对一种新的 !"#$ (如 /& 正常对照: , 在使用前进行对照试验, 可了解其性质、 效价等特性是否符合实验要求。在临床试验时, 为了避 +*JI=Q9M+) 免一些不定因素可能造成对实验结果的的影响, 以及与患者测定结果比较, 常常需要正常对照。例如, 正常 对照血小板 +*/J 阳性百分比应至少 T IHO 以上, 平均荧光强度 (!Q9) 比同型对照强 H G J( 倍以上, 若正常对 照出现异常结果, 则不能出实验报告。 是指用已知不表达某种抗原的细胞作为样本检测, 应出现阴性结果的对照试验。阴性对 H& 阴性对照: 照试验可以避免 !"#$ 的纯度不够或特异性差等因素造成的假阳性结果。如血小板无力症 ( 9 型) 患者, 由于 万方数据 其血小板缺乏 可作为最好的阴性对照。测定血小板膜 +*/J 时, 方法同正常对照, 只是将正常 +*/J 和 +*NJ,
中华检验医学杂志 /""# 年 ! 月第 /3 卷第 ! 期
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述评・ ・
加强临床流式细胞免疫表型分析的质量控制
王建中 流式细胞术 ( %&’) 的应用越来越广泛, 流式细胞免疫表型分析已经成为最常用的检查项目。 %&’ 可以 通过多参数分析异质性细胞群的免疫表型, 从双参数分析外周血细胞到参数以上分析骨髓细胞膜、 细胞浆和 细胞核等多种抗原成分, 涉及临床多种疾病的诊断、 治疗与预后等诸方面。白血病和淋巴瘤的免疫表型分 析、 微小残留白血病细胞的免疫检测是血液肿瘤的形态学诊断与监测的重要补充和深化; 血液淋巴细胞免疫 表型分析与免疫细胞亚群绝对计数是评价机体免疫功能、 诊断与监测免疫性疾病的重要手段; 精确计数外周 血造血干 ( 祖细胞的数量, 是判断最佳采集时机、 成功进行造血干细胞移植的关键; 血小板免疫表型分析和免 疫性血小板计数对出血与血栓性疾病的诊断与治疗有决定性作用; 血液中 ) 淋巴细胞膜 *+,-./0 表达的精 确定量是诊断强直性脊柱炎的重要指标。然而, 免疫表型分析结果存在多种影响因素, 包括样本与试剂准 备、 单克隆抗体 (’1,2) 、 免疫荧光染色方法、 对照设置、 流式细胞仪校准、 流式细胞数据的获取与分析等。只 有充分了解这些影响因素并做好严格的质量控制, 才能保证其试验结果的准确、 可靠, 且具有临床应用价值。 一、 样本与试剂准备 免疫表型分析的样本如血液、 骨髓、 体液等必须当天采集, 特殊试验, 如循环 3 4 之内进行免疫荧光染色; 活化血小板检测应在采血后立即染色与固定。所使用的抗凝剂、 缓冲液、 溶血剂、 固定剂等必须符合标准, 如 血液、 骨髓的抗凝采集管, 最好使用 56),-7/ 或枸橼酸钠真空采血管。用于稀释、 洗涤细胞的缓冲液应经 8 并含有 "9!; 的牛血清白蛋白, 减少颗粒的干扰和对单克隆抗体的非特异性吸附。 "9/ ! : 孔径的滤膜过滤, 组织样本应去除聚集并过滤、 制备单细胞悬液, 不应用进行酶消化和乙醇固定, 避免破坏或改变抗原结 构, 可采用机械法去聚集, 目前广泛使用的单细胞制备仪 (:<=>:?@4>A<) 最适合组织细胞的去聚集。 , 因 红细胞溶解液 (溶血剂) 最好使用在国内外广泛应用的试剂 (如美国 .6 公司的 %,&B +CD>AE D1FGH>1A) 为经不同种类的溶血剂作用的白细胞对 ’1,2 的结合及光散射特性有显著差别, 对免疫细胞亚群 (如淋巴细 胞亚群) 计数的参考范围也不同。 细胞过多或抗体浓度过低、 过高都可影响免疫表型分析。 ’1,2 与细胞的结合依赖于两者合适的比例, 分析血液细胞免疫表型时, 应计数血液白细胞数量。当 I.& 8 ! """ (! 用 /"" ! 加溶血剂 $ :F F 时, F 血标本、 (%,&B +CD>AE B1FGH>1A) 、 ( ; 用 !"" ! 加溶血剂 / :F、 ’1,2 /" ! F .6 ’1,2) I.& 在 ! """ J !" """ (! F, F 血标本、 用 K" ! 加溶血剂 ! :F、 血液应 ’1,2 /" ! F; I.& 在 !" """ J /" """ (! F, F 血标本、 ’1,2 /" ! F; I.& L /" """ (! F, 用磷酸盐缓冲液稀释至! """ J !" """ (! 用稀释血 !"" ! 加溶血剂 ! :F、 F, F、 ’1,2 /" ! F。 二、 单克隆抗体 !9 特异性: ’1,2 的特异性应该通过识别正确的靶抗原进行定义。’1,2 的特异性多是由制造商在其产 品说明书上列出, 但应注意所列 ’1,2 的细胞克隆是否为国际白细胞分化抗原鉴定会议通过。对于白血病 和淋巴瘤的免疫分型、 结果的解释应与形态学的 “金标准” 和临床表现比较, 每个实验室应该建立所用 ’1,2 的流式细胞术分析偏差的期望值, 一般 8 K; 。然而, “自制” 试剂, 随着每个实验室的方法不同可 ’1,2 属于 能存在正常或异常细胞诊断特异性方面的差异。临床血液病学检查的标本几乎总是正常细胞伴随着异常细 胞, 因此在 ! 份标本中能够同时评价两类细胞, 只有正常细胞的免疫表型正确时, 异常细胞的免疫表型结果 才是可靠的。 是指与非特异性或阴性对照染色相比, 能够被流式细胞仪检出的最低荧光染色强度。灵敏 /9 灵敏度: