第二章 血液分析仪检验

一、电阻抗检测原理
（三）白细胞分群原理
稀释后的血液经溶血素处理后，红细胞 迅速溶解，白细胞膜通透性改变使胞质经细 胞膜渗出、脱水，胞膜紧裹在细胞核或颗粒 周围。脱水后的白细胞体积与其自然体积无 关，取决于脱水后白细胞内有形物质的多少。
一、电阻抗检测原理
（三）白细胞分群原理 根据电阻抗原理，不同体积的白细胞通过
一、电阻抗检测原理
（三）白细胞分群原理
电阻抗法白细胞三分群示意图
二、光（化）学检测原理
（一）激光散射法
将细胞悬液注入鞘液流中央，单个细胞沿 着悬液和鞘液流两股液流整齐排列，以恒定流 速定向通过石英毛细管。当细胞通过激光束被 照射时，可阻挡或改变激光束的方向，产生与 其特征相应的各种角度的散射光。放置在石英 毛细管周围不同角度的信号检测器可接收特征 各异的散射光。
1．白细胞分类通道（DIFF通道）
2．白细胞/嗜碱性粒细胞（WBC/BASO）通道 3．未成熟髓细胞信息（IMI）通道
三、联合检测原理
（四）电阻抗、射频、流式细胞术与核酸荧光染色法
三、联合检测原理
（五）双鞘流技术和细胞化学染色法
在流式通道中有2个鞘流装置，细胞经第1 束鞘流后通过阻抗微孔测定细胞的真实体积， 然后经第2束鞘流后到达光窗，测定细胞的光 吸收，分析细胞内部结构。
二、光（化）学检测原理
（一）激光散射法
二、光（化）学检测原理
（二）分光光度法 主要用于血红蛋白测定。
红细胞经溶血剂溶解释放出血红蛋白,并 与溶血剂有关成分形成血红蛋白衍生物，在 540nm特定波长下比色，吸光度与血红蛋白含 量成正比，可直接反映血红蛋白浓度。
三、联合检测原理
现代血液分析仪主要综合应用了电学和 光学两大原理，用以测定血液有形成分（细 胞）和无形成分（血红蛋白）。
•检测器维护 •液路维护 •机械传动
部分维护
第四节 血细胞分析仪校准、性能评价及比对
校准
1．校准条件 2．校准品定值 3．建立仪器校准 和校准验证程序 4．保证试剂质量
性能 评价
总体评价 性能评价
比对
应对同一实验室 不同血液分析仪 测定结果进行比 对，相关性良好 后，定期校准一 台性能较好的血 细胞分析仪，将 它作为参比仪器
2005年，国际实验室血液学学会提出了显 微镜复查的41条建议性标准。但由于各临床检 验室使用的仪器不同，服务的患者人群也有差 异，“41条建议性标准”尚处于实践检验中， 目前还没有被公认的复查标准。各实验室可根 据ISLH建议的41条复检规则，并结合具体情况 来制订切合实际、可操作的复查标准。
四、血细胞分析仪检测结果显微镜复查规则
二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用
（四）散点图的临床应用 1.白细胞散点图
二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用
（四）散点图的临床应用 2.红细胞散点图
三、血细胞分析仪常见报警和干扰因素
报警
三种形式
•图形 •符号 •文字
常见的干扰因素
Text
标本自身 检测环境
Text
四、血细胞分析仪检测结果显微镜复查规则
血涂片显微镜检查阳性:发现异常类型细 胞 原始细胞:≥1个
晚幼粒细胞:＞2个
中幼粒/早幼粒细胞:≥1个 非典型淋巴细胞:＞5个 有核红细胞:≥1个 浆细胞:≥1个
第三节 血细胞分析仪安装、使用、保养和维护
安装
使用
保养
维护
•工作环境 •工作电压 •仪器安装 •仪器摆放
检测原理 操作程序
•日保养 •周保养 •月保养
三、联合检测原理
（一）体积、电导和光散射（VCS）法
三、联合检测原理
（二）光散射与细胞化学法
当细胞被激光束照射时，细胞因体积大小、 细胞成分、细胞核形状、染色情况等各种特性 的不同，可阻挡或改变激光束的方向，产生与 细胞特征相应的各种角度的散射光。检测不同 角度的散射光信号，可分辨出各类细胞。
三、联合检测原理
（一）红细胞参数及临床应用
⑴红细胞体积分布宽度（RDW）
RDW是反映红细胞体积大小异质性的参数， 以标准差或变异系数来表示（CV%），有助于贫 血的诊断与鉴别诊断。
MCV 减低
RDW 正常 增高
正常 增高
正常
增高 正常 增高
分类
意义
小细胞均一性 轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血
小细胞不均一性 缺铁性贫血
血细胞分析仪检测结果手工涂片复查真阳性标准
血涂片显微镜检查阳性:发现异常形态细 胞 红细胞形态异常:2+/中等量或更多；或发 现疟原虫 血小板形态异常（巨大血小板）:2+/中等 量或更多 血小板凝块:偶见或时而可见
Döhle小体:2+/中等量或更多 中毒颗粒:2+/中等量或更多
空泡:2+/中等量或更多
二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用
（二）白细胞直方图的临床应用
35f1—90பைடு நூலகம்1
90f1～160f1
160fl以上
二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用
（二）白细胞直方图的临床应用
二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用
（三）血小板直方图的临床应用 正常血小板直方图呈左偏态分布，主要
集中在2fl～30fl范围内，主峰在7.6fl～ 13.1fl之间。
临床检验基础
5/31/2020
第二章 血细胞分析仪检验
本章目录
1 第一节 血细胞分析仪检测原理 2 第二节 仪器分析临床应用 3 第三节 仪器安装、使用、保养 4 第四节 校准、性能评价及比对 5 第五节 检验结果的质量保证
• 血液分析仪（hematology analyzer, HA）： 临床血液一般检查最常用仪器。
一、电阻抗检测原理
细胞计数池中，小孔内外两个电极和稀释液构成一个电流回路， 在负压作用下，细胞通过小孔，电极能感应到一个瞬间的电阻变化， 并将其转换成脉冲，脉冲的数量代表细胞数量，脉冲大小反映细胞 体积大小。
一、电阻抗检测原理
(一)血细胞计数原理
一、电阻抗检测原理
（二）血红蛋白测定原理
在被稀释的血液中加入溶血剂后，使红细 胞释放出血红蛋白，后者与溶血剂结合形成血 红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统，在特 定波长（一般在530nm～550nm）下比色，根据 吸光度的变化仪器便可显示血红蛋白浓度。
正细胞均一性
慢性病性贫血、再生障碍性贫血、 白血病
正细胞不均一性 骨髓纤维化
大细胞均一性 MDS、再生障碍性贫血
大细胞不均一性 巨幼细胞贫血
贫血的RDW和MCV分类
一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用
（一）红细胞参数及临床应用 （2）红细胞血红蛋白分布宽度（HDW） HDW是反映红细胞内Hb含量异质性的参数， 用单个红细胞Hb含量的标准差表示。
•1953年美国Coulter申请了“粒子计数法” 的技术专利，并成功研发了世界上第一台电 阻抗式血细胞计数仪。
第一节 血细胞分析仪检测原理
两大功能
血细胞 计数功能
白细胞 分类功能
一、电阻抗检测原理
血细胞具有相对非导电性质，悬浮在电 解质溶液中的血细胞通过计数小孔时，可引 起小孔内、外电流或电压的变化，形成与血 细胞数量相当、体积大小相应的脉冲信号， 从而对血细胞进行计数，并根据体积大小间 接区分出细胞群。此原理又称为库尔特原理 （Coulter principle）。
二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用
（三）血小板直方图的临床应用 % 呈偏态，峰顶5fl~10fl
10
20
30(fl)
二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用
（四）散点图的临床应用
不同的检测原理，坐标上的散点所在象限 平面图上的位置，如上下（高低）、左右、前 后（可重叠）或散点群的疏密，均与相应类别 的细胞形态、体积、内部结构、胞核、胞质及 胞质颗粒数量等特性密切相关。
三、联合检测原理
（一）体积、电导和光散射（VCS）法
体积(volume,V)
•应用电阻抗 原理测量 细胞体积
电导(conductivity,C)
• 采用高频电磁 探针测量细胞 内部结构，如 细胞核、细胞 内颗粒
光散射(scatter,S)
• 采用激光源单色光直 接扫描细胞，产生不 同角度散射光，提供 细胞形态及胞核结构 等光散射信息，以此 鉴别粒细胞。
第五节 血细胞分析仪检验结果的质量保证
检验人员的要求 合适的检测环境
合格的血液分析仪
配套试剂 合格的检测标本
分析前质量控制
第五节 血细胞分析仪检验结果的质量保证
-仪器启动 -标本检测
-室内质控
分析中 质量控制
-仪器清洁
第五节 血细胞分析仪检验结果的质量保证
检验结果审核
标本的保存
检验结果解释
分析后 质量控制
二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用
（一）红细胞直方图的临床应用 正常红细胞直方图几乎为两侧对称、较
狭窄的正态分布曲线，主要分布在50fl～ 200fl区域。
二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用
（一）红细胞直方图的临床应用 % 正态分布,峰顶在82fl~96fl
100 200 300 400 (fl)
小孔时产生的脉冲大小有明显的差异。依据脉 冲的大小，电阻抗法血细胞分析仪可对白细胞 进行分群。
一、电阻抗检测原理
（三）白细胞分群原理
三分群法的第一群为小细胞区，体积为 35fl～90fl，主要为淋巴细胞；第二群为中间 细胞区也称单个核细胞区，体积90fl～160fl， 包括幼稚细胞、单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱 性细胞；第三群为大细胞区，体积160fl以上， 主要为中性粒细胞。
仪器维护和保养
建立危急值通知程序
定期征求意见
谢 谢！
（二）光散射与细胞化学法
1．过氧化物酶染色通 道
2．嗜碱性粒细胞/核分叶通道
三、联合检测原理
（三）多角度偏振光散射法 应用固体激光流式细胞荧光技术，多角度检测
白细胞和分类。
三、联合检测原理
（四）电阻抗、射频、流式细胞术与核酸荧光染色法 采用半导体激光流式细胞技术结合核酸荧光
染色技术进行白细胞计数和分类。
第五节 血细胞分析仪检验结果的质量保证
分析前
分析中
分析后
1.检验人员的要求 2.合适的检测环境 3.合格的血液分析仪 4.配套试剂 5.合格的检测标本
1.仪器启动 2.室内质控 3.标本检测 4.仪器清洁
1.检验结果审核 2.检验结果解释 3.建立危急值通知 4.标本的保存 5.仪器维护和保养 6.定期征求意见
一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用
（二）白细胞参数
血细胞分析仪白细胞系列检测参数
一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用
（三）血小板参数
血细胞分析仪血小板系列检测参数
二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用
血细胞直方图
以测定的细胞体积（大小）为横坐标， 细胞出现的相对频率（数量）为纵坐标，可 绘制的血细胞直方图，主要包括白细胞、红 细胞和血小板三种直方图。
二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用
（一）红细胞直方图的临床应用
不同类型贫血红细胞直方图的变化和常见原因
二、血细胞分析仪细胞分布图及临床应用
（二）白细胞直方图的临床应用
电阻抗型血细胞分析仪白细胞直方图为具 有3个峰的光滑曲线，从左至右分别为：为淋 巴细胞（小细胞群）、单个核细胞（中间细胞 群）和中性粒细胞（大细胞群）或相当大小的 细胞。
第二节 血细胞分析仪分析临床应用
一 血细胞分析仪各项检测参数及临床应用 二 血细胞分析仪细胞分布图及临床应用 三 血细胞分析仪常见报警和干扰因素 四 血细胞分析仪检测结果显微镜复查规则
一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用
（一）红细胞参数及临床应用
血细胞分析仪红细胞系列检测参数
一、血细胞分析仪各项检测参数及临床应用