与氮素同化相关酶及测定方法
硝酸还原酶(NR)检测
硝酸还原酶（NR）检测
硝酸还原酶（Nitrate reductase, NR）属于氧化还原酶，是植物氮素同化过程中的关键酶，分布于细胞质内或细胞膜外，可催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，并与亚硝酸还原酶以偶联调节的形式对氮代谢进行调节，在初级氮同化的控制中起着重要作用。
测定原理：硝酸还原酶可催化硝酸盐还原为亚硝酸盐，NO3-+NADH+H+→ NO2-+NAD++H2O，NADH在340nm处有特征吸收峰，通过340nm处吸光度的变化即可表征硝酸还原酶活力。
迪信泰检测平台采用生化法，可高效、精准的检测硝酸还原酶活性变化。
此外，我们还提供其他氮代谢类检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定硝酸还原酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关参数（中英文）
3. 图片
4. 原始数据
5. 硝酸还原酶活性信息。
硝酸还原酶的测定
硝酸还原酶的测定一、实验目的和要求掌握体内法测定植物组织中硝酸还原酶的原理和方法，阐明诱导酶的含义。
2、实验内容与原则硝酸还原酶（nr）是植物氮素同化的关键酶，与作物吸收和利用氮肥有关。
它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐：--产生的NO2可以从组织渗透到外部溶液中，并在溶液中累积。
NO2含量的增加表明酶的活性增加。
装no2含量的测定用磺胺比色法。
在酸性溶液中产生的亚硝酸盐与对c氨基苯磺酸（或对c氨基苯磺酰-订线（胺）反应生成重氮，然后与αC萘胺（或萘基乙二胺）反应生成紫红色偶氮化合物。
生成的红色偶氮化合物在540nm波长处有最大吸收峰，可通过分光光度法测定。
溶液中NO2-的含量可用标准曲线测定。
3、主要仪器设备1、实验仪器分光光度计，真空泵，温箱，天平，2个烧杯，移液管若干，试管3支，剪刀。
2、实验试剂0.1mol/lph7.5的磷酸缓冲液，对-氨基苯磺酸溶液，α-萘胺溶液，亚硝酸钠标准液3.两组大麦幼苗在15-25℃的蒸馏水中培养一周。
一组用硝酸钾治疗，另一组用氯化铵治疗。
四、操作方法和实验步骤1.切两组新鲜叶片。
一组为0.51g处理苗，另一组为0.50g对照苗。
将叶片分别切成0.5~1cm的碎片并压实。
2、两组中各加入15ml的酶促反应液。
3.真空提取10min，充分交换细胞内外液。
4.盖上盖子，在30℃的培养箱中保存20分钟。
5、去除材料，用移液管取4ml反应液，加入2ml磺胺，加入2ml苯基，放置15min。
6、比色：在540nm的波长下分光光度测定亚硝酸的od值。
7.空白管：4ml H2O+2ml磺酰胺溶液+2ml萘乙二胺溶液？在室温下放置15分钟后，在540nm处用分光光度法测定亚硝酸的OD值。
五、实验数据记录和处理称重：处理过的幼苗0.51g；对照苗0.50god值：处理苗0.513a；对照苗0.050aNO2含量标准曲线：y=257.29x-4.8262（x=OD值；y=NO2含量（nmol））。
植物硝酸还原酶(NR)活力测定(活体法)
植物硝酸还原酶（NR）活力测定（活体法）一、原理硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐,产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰胺）及α–萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。
其反应如下：生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收峰，可用分光光度法测定。
硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。
一般以Nμg·g-1·h-1为单位。
NR的测定可分为活体法和离体法。
活体法步骤简单，适合快速、多组测定。
离体法复杂，但重复性较好二、仪器与用具分光光度计；真空抽气泵（或20ml注射器筒）；天平；单面刀片；保温箱（或恒温水浴）；刻度试管（15ml）；移液管（5ml×2，2ml×8，1ml×2）。
三、试剂1. 亚硝酸钠标准液称取分析纯NaNO2 0.1000g水溶后定容至100ml，吸取5ml用水稀释定容至1000ml，即为每ml含NaNO2 5μg（亚硝态氮近似1μg/ml）的标准液。
2. 0.1mol/L pH7.5的磷酸缓冲液：K2HPO4 19.24g，KH2PO4 2.2g，加水溶解后定容至1000ml。
3. 1%（W/V）对-氨基苯磺酸溶液：称取10.0g加入250ml浓HCl中，用蒸馏水定容至1000ml。
4. 0.2%（W/V）α-萘胺溶液：称取2.0gα-萘胺溶于250ml冰醋酸中，用蒸馏水定容至1000ml。
5. 30%三氯乙酸溶液：75.0g三氯乙酸水溶后定容250ml。
6. KNO3（0.1mol/L）、异丙醇（1% V/V）、磷酸缓冲液（0.1mol/L）混合液：称10.10g KNO3溶于1000ml 0.1mol/L的磷酸缓冲液中，再加10ml异丙醇混匀。
四、方法1. 标准曲线制作取7支洁净烘干的15ml刻度试管按表13-1顺序加试剂，即配成0-2.0μg的系列标准亚硝态氮溶液。
实验三预习报告硝酸还原酶和谷氨酰胺合成酶活性的测定
实验三预习报告硝酸还原酶和谷氨酰胺合成酶活性的测定实验三、硝酸还原酶和谷氨酰胺合成酶活性的测定一、硝酸还原酶的测定[原理]:硝酸还原酶(NR)是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐，产生的亚硝酸盐与对-氨基苯磺酸(或对-氨基苯磺酰胺)及α-萘胺(或萘基乙烯胺)在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。
生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰，可用分光光度法测定。
硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。
一般以每克鲜重含氮量表示，即以-1-1ug.g.h为单位。
NR的测定可分为活体法和离体法。
活体法步骤简单，适合快速、多组测定。
离体法复杂，但重复性较好。
[试剂]1(亚硝酸钠标准溶液:准确称取分析纯NaNO0.9857g溶于去离子水后定容至1 2-1000ml，然后再吸取5ml定容至1000ml，即为含亚硝态氮1ug.ml的标准液; 2(0.1molpH7.5的磷酸缓冲液:NaHPO.12HO30.0905g与NaHPO.2HO 2422422.4965g加去离子水溶解后定容至1 000ml;-13(1%(W/V)溶液:1.0g 对氨基苯磺酸溶于100ml 3 mol.LHCL中(25ml浓-1盐酸加水定容至100ml 即为 3 mol.LHCL);(0.02%(W/V)萘基乙烯胺溶液:0.020g萘基乙烯胺溶于100ml 去离子水中，4贮于棕色瓶中;-1-15(0.1mol.LKNO溶液:2.5275g KNO溶于250Ml 0.1mol.LPh7.5的磷酸缓冲33液中; -16(0.025mol.LPh 8.7 的磷酸缓冲液:8.864 0g NaHPO12HO，0.0570g 24.2KHOP.3HO，溶于1 000ml去离子水中; 2427( 30%三氯乙酸溶液:30g三氯乙酸。
水溶后定容至100ml。
[方法];1. 标准曲线制作:管号 1 2 3 4 5 6 7亚硝酸钠标准液 0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 试剂蒸馏水 2.0 1.8 1.6 1.2 0.8 0.4 0.0 (ml) 1%磺胺 4 4 4 4 4 4 40.02%萘基乙烯胺 4 4 4 4 4 4 4每管含亚硝态氮(ug) 0 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0摇匀后在25度下保温30min，然后在540nm下比色测定。
硝酸还原酶活性测定方法
硝酸还原酶活性的测定一．试验原理：硝酸还原酶是植物氮素代谢作用中的关键酶，与作物吸收和利用硝态氮的能力相关。
它催化NO3－还原为NO2－的反应：NO3－+NADH+H+→NO2－+NAD++H2O反应产生的NO2－可从组织内渗透到外界溶液中，定时测定一定的反应溶液中NO2－含量的变化情况则可了解此酶的活性大小。
NO2－的定量测定是用磺胺比色法。
此法简单易行而又非常灵敏，可测出0.5微克/ml NaNO2含量的变化。
二．试剂：磷酸缓冲液（Na2HPO4.12H2O NaH2PO4.2H2O） KNO3溶液磺胺试剂α－萘胺试剂 NaNO2标准溶液1. 0.1molpH7.5的磷酸缓冲液：Na2HPO4.12H2O 30.0905g与NaH2PO4.2H2O2.4965g加去离子水溶解后定容至1000ml；2. 0.2 mol/L KNO3：称取 KNO3 20.22 g，用蒸馏水溶解，移入100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。
3.磺胺（对氨基苯磺酸胺）试剂：1克磺胺溶于25毫升浓盐酸后再用蒸馏水稀释至100 ml 。
4.α－萘胺试剂：0.2克α萘胺溶于25 ml 浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100 ml 。
5.NaNO2标准溶液：1克NaNO2溶于1000ml 蒸馏水中配成NaNO2母液。
实验时按处理稀释成要求浓度。
如1微克/ ml ：取母液1ml ，用蒸馏水稀释成1000 ml 。
三．仪器721型分光光度计真空泵保温箱天平真空干燥器打孔器三角瓶移液管烧杯四．试验步骤1．将新鲜取回的材料叶片用水清洗后用吸水纸吸干水份。
用打孔器取下直径为1厘米的圆片，再用蒸馏水洗2－3次，将蒸馏水吸干。
在天平上称取等重的叶子园片两份：每份0.4克左右（或每份取50个圆片）。
将两份圆片分别置于下列两种溶液中，容器使用50ml 三角瓶。
（1）0.1 M 磷酸缓冲液5 ml +蒸馏水5 ml 。
（2）0.1 M 磷酸缓冲液5 ml +0.2 M KNO3溶液5 ml 。
硝酸还原酶的测定方法
硝酸还原酶的测定方法硝酸还原酶活性的测定原理硝酸还原酶是植物氮素代谢作用中关键性酶，与作物吸收和利用氮简单易行，在一般条件下都能做到。
红色的偶氮染料。
反应液的酸度大则增加重氮化作用的速度，但降低偶联作用的速度，颜色比较稳定。
增加温度可以增加反应速度，但降低重氮盐的稳定度，所以反应需要在相同条件下进行。
这种方法非常灵敏，能测定每ml含0.5μg的NaNO2。
仪器药品721型分光光度计真空泵（或注射器）保温箱天平真空干燥器钻孔器三角烧瓶移液管烧杯0.1mol/L磷酸缓冲液，pH7.5（见附表2）。
0.2mol/L KNO3：溶解20.22g KNO3于1000ml 蒸馏水器中。
磺胺试剂：1g磺胺加25ml浓盐酸，用蒸馏水器稀释至100ml。
α—萘胺试剂：0.2gα—萘胺溶于含1ml浓盐酸的蒸馏水器中，稀释至100ml。
NaNO2标准溶液：1g NaNO2用蒸馏水器溶解成1000ml。
然后吸取5ml，再加稀释成1000ml，此溶液每ml含有NaNO2 5μg，用时稀释之。
操作步骤 1. ．将新鲜取回的叶片（蓖麻、烟草、向日葵、油菜、小麦、棉花等均可）水洗，用吸水纸吸干，然后用钻孔器钻成直径约1cm的圆片，用洗涤2梍3次，吸干水分，然后于台天平上称取等重的叶子圆片两份，每份约0.3—0.4g（或每份取50个圆片），分别置于含有下列溶液的50ml三角烧瓶中：(1)0.1mol/L磷酸缓冲溶液(pH7.5)5ml 5ml；(2)0.1mol/L磷酸缓冲溶液(pH7.5)5ml 0.2mol/L KNO3 5ml。
然后将三角烧瓶置于真空干燥器中，接上真空泵抽气，放气后，圆片即沉于溶液中（如果没有真空泵，也可以用20ml注射器代替，将反应液及叶子圆片一起倒入注射器中，用手指堵住注射器出口小孔，然后用力拉注射器使真空，如此抽气放气反复进行多次，即可使圆片中的空气抽去而沉于溶液中）。
将三角烧瓶置于30℃温箱中，使不见光，保温作用30分钟，然后分别吸注意取样前叶子要进行一段时间的光合作用，以积累碳水化合物，如果组织中的碳水化合物含量低，会使得酶的活性降低，此时则可于反应溶液中加入30μg3—磷酸甘油醛或1，6—二磷酸果糖，能显著增加保温30分钟结束时，吸取反应溶液1ml于一试管中，加入磺胺试剂2ml及α—萘胺试剂2ml，混合摇匀，静置30分钟，用比色计进行比色测 3. ．绘制标准曲线与重氮化作用及偶联作用的速度有关，温度、酸浓度等都影响显色速度，同时也影响灵敏度，但如果标准与样品的测定都在相同条件下进行，则显色速度相同，彼此可以比较。
植物生理学实验考试试题 (1)
植物生理学实验考试试题一、名词解释：1、标准曲线：用标准溶液制成的曲线。
先配制一系列不同浓度的标准溶液, 在溶液吸收最大波长下, 逐一测定吸光度,然后用坐标纸以溶液浓度为横坐标, 吸光度为纵坐标作图, 若被测物质对光的吸收符合光的吸收定律, 必然得到一条通过原点的直线, 即标准曲线。
4、氮素代谢：氮素及含氮的活体物质的同化异化和排泄，总称为氮素代谢。
5、淀粉酶：是水解淀粉和糖原的酶类总称。
6、真空渗入：指将叶片打孔放入注射器中，加水浸没，排出空气后用手指堵住前端小孔，同时把活塞向外抽拉，即可造成减压而排出组织中的空气，轻放活塞，水液即进入组织的方法。
7、离心技术：是根据物质颗粒在一个离心场中的沉降行为而发展起来的。
它是分离细胞器和生物分子大分子物质必备的手段之一，也是测定某些纯品物质的部分性质的一种方法。
8、电泳：各种生物大分子在一定pH 条件下，可以解离成带电荷的颗粒，这种带电颗粒在电场的作用下向相反电极移动的现象称为电泳。
9、同工酶：凡能催化同一种化学反应但其分子结构和带电性质不同的一组酶称为同工酶10、迁移率：指带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度。
11、聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位，由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。
20、超氧化物歧化酶（SOD）：普遍存在动植物体内的一种清除超氧阴离子自由基Ｏ2 的酶。
21、硝酸还原还原酶：是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸。
22、诱导酶：又称适应酶，指植物体内本来不含有，但在特定外来物质的诱导下诱导生成的酶。
如硝酸还原酶可为NO3-所诱导生成。
二、填空：1、测定植物可溶性蛋白质含量时，绘制标准曲线是标准蛋白质浓度为横坐标，以吸光值为纵坐标。
2、常用的测定植物可溶性蛋白质含量的方法有：Folin-酚试剂法(Lowry 法) 、双缩脲法、考马斯亮蓝法和紫外吸收法。
硝酸还原酶活性的测定.
硝酸还原酶活性的测定一、原理硝酸还原酶是植物氮素作用中的关键性酶，与作物吸收和利用N肥有关的不同品种，年龄、器官组织以及环境条件对硝酸还原活性都有影响，硝酸还原酶作用于NO3使还原为NO2NO3⎯+NADH+H→NO2⎯+NAD+H2O产生的NO2⎯可以从组织内渗到外界溶液中，并积累在溶液中因此测定反应溶液中NO2⎯的含量的增加，即表明酶活性的大小。
NO2⎯含量的测定用对氨基苯磺酸化比色法，亚硝酸对氨基苯磺酸和α-萘胺在酸性条件下生成红色化合物，颜色在2-3小时稳定，可用比色法定量，该法非常灵敏，能测定每毫升0.5微克的Na NO2。
二、仪器和药品721型分光光度计（或其他型号比色计），剪刀，真空泵（或注射器），小天平，温箱，烧杯，移液管，小烧杯（50ml）0.2MKNO3：将20、22克KNO3溶于100ml蒸馏水中。
0.1M磷酸缓冲液（PH=7.5）：将85.2%ml 1/15M磷酸氢二钠与14.8ml 1/15M磷酸二氢钾混合均匀。
1/15MNa2HPO4溶液：1000ml中含Na2HPO4•2H2O11.878克。
1/15M溶液：1000ml中含KH2PO49.078克。
对氨基苯磺酸试剂：1克对氨基苯硝酸加加25ml浓HCl，用蒸馏稀释至100ml.。
α–萘胺试剂，0.2克α–萘胺加25ml浓HCl，用蒸馏稀释至100ml。
NaNO2标准溶液：1克NaNO2用蒸馏水溶解至1000ml，然后吸取5ml，再加蒸馏水稀释成1000ml，该溶液每毫升含有NaNO2 5微克，用时稀释之。
三、实验步骤：1、将新鲜叶片（蓖麻、向日葵、小麦、棉花等），用水冲洗净，并用吸水纸吸干，用剪刀剪成小块(注意块小为宜)，然后在小天平上称取等重的两份叶片，每份约0.5克。
分别置于含有下列溶液的小烧杯中。
（1）1M磷酸缓冲溶液5ml+蒸馏水5ml（2）0.1M磷酸缓冲溶液5ml+0.2M KNO35ml然后将小烧杯置于真空干燥器中，接上真空泵抽气，放气后叶片便沉于底部（如没有真空泵，也可以20ml注射器代替，将反应液及叶片一起倒入注射器使之真空，如此进行抽气、放气反复多次，溶液即可渗入叶组织内取代了叶片内的空气，叶片便沉于溶液底部），取出小烧杯置于30℃温箱中，使不见光保温作用30分钟。
第三章：氮肥中氮的测定
蒸馏
准确吸取50 ml待测液
吸收瓶
滴液漏斗中加入 450g/L的NaOH
蒸馏瓶
350ml水
80ml水
5滴混合 指示剂
通过滴液漏斗往蒸馏瓶 中加入NaOH20ml
几粒防
准确吸取50 ml0.5mol/L
爆沸石
连接装置H，2SO4标液
并确保密封
打开冷凝水
加热蒸馏至吸收液达 250-300ml(约45min)
如样品中含有硝酸盐的水不溶性产品
称取2.000-5.000g样品 （国家标准是5.000g）
500ml容 量瓶
静止至释放 出CO2为止
300ml 20℃ H2O
50ml水
50ml2.5% （V/V）乙酸
振荡30min
定容
混匀
干过滤于三角瓶（弃去最初50ml滤液）
2、沉淀的形成 吸取Vml滤液（含NO3—N11～23mg， 最好是17mg）于250ml烧杯
加水稀释 至100ml
1:3H2SO410 ～12滴 使pH1.0 ～1.5
迅速加热至沸点， 但不允许沸腾
立即移开热源，并检查是否有CaSO4沉 淀（若有，加几滴H2SO4使之溶解）
10-12ml 硝酸灵
置于冰水浴上 搅拌2min
冰水浴中放置2小时陈化
3、沉淀洗涤、过滤、干燥、称重
预先烘干至恒重的4号玻璃 坩埚（孔径4-10um）
操作步骤
称取肥料样 品1.000g
250ml三 角瓶
100-120ml 水溶解
1滴甲基 红指示剂
0.1mol/L的NaOH 调至金黄色
25%HCHO溶 液15ml
3-4滴 酚酞
混匀
放置15min
植物体内硝酸还原酶活力的测定
实验 6 植物体内硝酸还原酶活力的测定硝酸还原酶（ nitrate reductase,NR ），是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐（ NO 3 ˉ +NADH+H ＋→ NO 2 ˉ +NAD ＋ +H 2 O ）。
产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰胺）及α - 萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。
其反应如下：生成的红色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰，可用分光光度法测定。
硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。
一般单位鲜重以 N μg ／（ g · h ）为单位。
NR 的测定可分为活体法和离体法。
活体法步骤简单，适合快速、多组测定。
离体法复杂，但重复性较好。
Ⅰ离体法二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料水稻、小麦叶片、幼穗等。
（二）试剂1 ．亚硝酸钠标准溶液：准确称取分析纯 NaNO2 0.9857 g 溶于无离子水后定容至 1000 mL ，然后再吸取 5 mL 定容至 1000 mL ，即为含亚硝态氮的 1 μg ／ mL 的标准液。
2 ． 0.1 mol/L pH 7.5 的磷酸缓冲液： Na 2 HPO 4 · 12H 2 O 30.0905 g 与 NaH 2 PO 4 · 2H2 O 2.4965 g 加无离子水溶解后定容至 1000 mL 。
3 ． 1 ％磺胺溶液： 1.0 g 磺胺溶于 100 mL 3mol/L HCl 中（ 25 mL 浓盐酸加水定容至 100 mL 即为 3 mol/L HCl ）。
4 ． 0.02 ％萘基乙烯胺溶液： 0.0200 g 萘基乙烯胺溶于 100 mL 无离子水中，贮于棕色瓶中。
5 ． 0.1 mol/L KNO 3 溶液： 2.5275 g KNO 3 溶于 250 mL 0.1 mol/L pH7.5 的磷酸缓冲液。
6 ． 0.025 mol/L pH8.7 的磷酸缓冲液： 8.8640 g Na 2 HPO 4 · 12H 2 O ， 0.0570 g K 2 HPO 4 · 3H 2 O 溶于 1000 mL 无离子水中。
植物对硝态氮的吸收、同化及其含量测定
植物对硝态氮的吸收、同化及其含量测定硝态氮是高等植物可直接利用的最重要的氮素形态之一，硝态氮和铵态氮是高等植物根系吸收无机氮的主要形态，在通气良好的旱地土壤上，即使施用的是铵态或酰铵态氮肥，NH4+在土壤中也能容易地被微生物经硝化作用很快转化为硝态氮，因此，硝酸盐对旱生植物来说尤其重要，Marschner认为植物氮素营养中硝酸盐的还原和同化与光合作用中CO2的还原和同化对植物生长发育具有同样的重要性。
植物体内硝态氮的含量往往能在一定程度上反映土壤中硝态氮的供应情况，通过测定植物体内硝态氮含量，对了解氮代谢机制及其土壤中无机氮素的丰缺有重要意义。
1 植物对NO3--N的吸收和同化1.1 植物对NO3--N的吸收根系对NO3-的吸收和运输是大多数植物氮素营养代谢的第一步。
基于H+/NO3-共运机制，即植物吸收一分子NO3-进入细胞质的同时协同吸收2个H+，维持H+梯度的ATP主要由线粒体呼吸作用提供。
对不同高等植物如玉米，大麦，烟草等的吸收动力学分析表明，不同植物中存在着两种NO3-转运系统：①高亲和吸收转运系统，这类植物在低NO3-浓度的营养介质中能保持生长。
②低亲和吸收转运系统，这类植物在较高NO3-浓度的营养介质中才能保持高的氮素吸收。
NO3-浓度对植物吸收硝态氮能力有重要影响：外界NO3-浓度较低时,植物对硝酸盐的吸收符合米切里希动力学方程，此时通过细胞膜载体上的NO3-/H+共运和NO3-/OH-逆运系统完成；当外界NO-3浓度较高时,吸收速率随浓度变化的趋势呈直线型，此时主要通过依赖于硝酸盐的专一性离子通道进行的逆电化势的运输系统完成。
植物对硝态氮的吸收与温度和pH密切联系，低温能降低植物对NO3-的吸收。
主要是由于低温影响根系呼吸和能量供给，以及细胞膜的透性减弱导致NO3-吸收缓慢。
根部介质的pH也显著影响植物对NO3-的吸收，pH值低时NO3-吸收较快。
随着pH值的升高，NO3-的吸收减少。
硝酸还原酶测定 (2)
实验5 硝酸还原酶活性的测定【实验目的】掌握硝酸还原酶活性测定的两种方法，加深对硝酸还原酶在植物体氮素代谢中作用的理解。
【实验原理】硝酸还原酶（nitrate reductase,NR）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐，（NO3-+NADH + H+→NO2-+NAD ++H2O）。
产生的亚硝酸盐与对-氨基苯磺酸（or 对-氨基苯磺酰胺）及α-萘胺（or 萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。
其反应如下：生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰，可用分光光度法测定。
硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。
一般单位鲜重以Nμg/（g﹒h）为单位。
NR的测定可分为活体法和离体法。
活体法步骤简单，适合快速、多组测定。
离体法复杂，但重复性较好。
Ⅰ离体法【材料设备】（三）试剂1、NaNO2标准溶液：准确称取分析纯NaNO20.1g溶于无离子水后定容至100ml，然后再吸取1ml用蒸馏水稀释成1000ml，该溶液每毫升含有NaNO21μg，用时稀释之。
2、0.1mol/L PH7.5的磷酸缓冲液，Na2HPO4·12H2O 30.0905g与NaH2PO4·2H2O 2.4965g加去离子水溶解后定容至1000mL。
3、1%（m/V）对氨基苯磺酸（磺胺酸）溶液：1.0g 对氨基苯磺酸溶于100ml 3 mol/L的HCL中（25ml浓盐酸加水定容至100ml 即为 3 mol/LHCL）。
4、0.02%（m/V）萘基乙烯胺溶液：0.0200g萘基乙烯胺溶于100mL 去离子水中，贮于棕色瓶中。
5、0.1mol/L KNO3溶液：2.5275g KNO3溶于250mL 0.1mol/L Ph7.5的磷酸缓冲液中.6、0.025mol/L Ph 8.7 的磷酸缓冲液：8.8640g Na2HPO4·12H2O，0.0570g KH2PO4.3H2O，溶于1 000ml去离子水中。
植物氮素测定指标以及方法
一、测定与计算指标1、测定单株分蘖数、单株有效穗数、株高、穗长、小穗数、穗粒数、小穗粒数、千粒重、单穗穗粒重；再按茎叶、籽粒等器官分开，分别测定茎叶与籽粒的干物重与含N量；2、通过测定的指标计算：穗粒重（穗粒数×千粒重/1000）、植株吸氮量（不同部位干物重与其含氮量（%）之积的总和）、植株含氮量（%）（植株吸氮量占整株干物质量的百分比）、氮素干物质生产效率（单位氮素生产的干物质量）、氮素籽粒生产效率（成熟期植株单位氮素生产的籽粒产量）、氮素收获指数（籽粒氮积累总量/植株氮素积累总量）、植株N利用效率（籽粒产量/地上部N 素积累量）；二、总的指标分类汇总（一株小麦实际上指的是由一粒种子长出的一丛）（一）与产量相关的形状指标（田间进行）1、单株分蘖数：单株总茎数；地面以下或接近地面处所发生的分枝（田间进行，每行选择3个处理也就是3丛，分别测出再求平均）。
2、单株有效穗数：单株有效成穗的个数；其中有效穗表示每穗实粒数多于5粒者为有效穗(白穗算有效穗)。
（田间进行，每行选择3个处理也就是3丛，同上）。
3、株高：（小麦根部至顶部之间的距离，不包括芒长，其中芒长是指穗上面尖尖的芒刺），用卷尺测量。
（田间进行，测选定的4株外加1株求平均）。
（在材料收回来之后，先选择我们所需的4株另外再加1株，共5株，将穗长与小穗数测定了，再用自来水将材料（主要是茎叶部分）冲洗三遍，再用去离子水冲洗三遍；然后用吸水纸吸取残留水分，然后将材料然后放2天，等材料稍微干燥后，将之前的5株进行人工脱粒，测定每穗的穗粒数，根据它和小穗数计算出小穗粒数，在此步骤之后便可将我们所需的4株植株分为茎叶与籽粒部分，进行杀青烘干测定干物重与含N量了。
其余的材料再放置几天，脱粒之后测定千粒重）4、穗长：每行取5穗进行穗长的测定，平均值为该株系的穗长。
5、小穗数：每穗上面长得对称的就是小穗数；6、穗粒数：平均每穗粒数，一般的小麦在30粒左右。
硝酸还原酶活性的测定
实验二、硝酸还原酶活性的测定-活体法[原理]：硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐，产生的亚硝酸盐与对-氨基苯磺酸（或对-氨基苯磺酰胺）及α-萘胺（或萘基乙烯胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。
生成的红色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰，可用分光光度法测定。
硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。
一般以每克鲜重含氮量表示，即以ug.g-1.h-1为单位。
NR 的测定可分为活体法和离体法。
活体法步骤简单，适合快速、多组测定。
离体法复杂，但重复性较好。
[试剂]1．亚硝酸钠标准溶液：准确称取分析纯NaNO20.9857g溶于去离子水后定容至1 000ml，然后再吸取5ml定容至1000ml，即为含亚硝态氮1ug.ml-1的标准液；2．0.1molpH7.5的磷酸缓冲液：Na2HPO4.12H2O30.0905g与NaH2PO4.2H2O 2.4965g加去离子水溶解后定容至1 000ml；3．1%（W/V）溶液：1.0g 对氨基苯磺酸溶于100ml 3 mol.L-1HCL中（25ml浓盐酸加水定容至100ml 即为 3 mol.L-1HCL）；4．0.02%（W/V）萘基乙烯胺溶液：0.020g萘基乙烯胺溶于100ml 去离子水中，贮于棕色瓶中；5．0.1mol.L-1KNO3溶液：2.5275g KNO3溶于250Ml 0.1mol.L-1Ph7.5的磷酸缓冲液中；6．0.025mol.L-1Ph 8.7 的磷酸缓冲液：8.864 0g Na2HPO4.12H2O，0.0570g KH2OP4.3H2O，溶于1 000ml去离子水中；7．30%三氯乙酸溶液：30g三氯乙酸。
水溶后定容至100ml。
[方法]摇匀后在25度下保温30min，然后在540nm下比色测定。
以亚硝态氮（ug）为横坐标（X），吸光值为纵坐标（Y）建立回归方程。
2.样品中硝酸还原酶活力测定1.在取材的前一天加50mmol/L KNO3或NaNO3到培养苗的水中就可以诱导酶的产生。
第五讲 植物体氮的同化
第五讲
植物体内氮的同化
自 然 界 中 N 素 循 环
一. 硝酸盐还原
1、硝酸盐还原为亚硝酸盐 这一过程是在细胞质中进行的，催化这一反应的硝酸还原 酶为钼黄素蛋白，含有FAD、Cytb和Mo，还原力为NADH+H+，
硝酸还原酶是一种诱导酶，亦叫适应酶。所谓 诱导酶或适应酶是指植物本来不含某种酶，但 在特定的外来物质(如底物)的影响下，可以生 成这种酶。 2、亚硝酸盐还原为氨 NO3-还原为NO2-后，NO2-被迅速运进质体即根中 的前质体或叶中的叶绿体，并进一步被亚硝酸 还原酶（NiR）还原为NH3或NH4+。
第四节合理施肥的生理基础
一、作物的需肥特点 1、不同作物需肥不同 禾谷类作物需要氮肥较多，同时又要供给 足够的P、K，以使籽粒饱满；豆科能固空气 中的N，需P、K多，叶菜类多施N。 2、同一作物不同生育时期需肥不同
二、合理施肥的指标 、合理施肥增产的原因 满足了作物的需肥要求
图3-20在叶 中的硝酸还 原 DT. 双 羧 酸 运 转 器 ； FNR.Fd NADP 还 原 酶 ； MDH: 苹果酸脱氢 酶 ； FRS.Fd 还原系统
图3-21在根中的硝酸还原 NT.硝酸运转器
二、氨的同化
①谷氨酰胺合酶；②谷氨酸合酶；③天冬酰胺合酶；④转氨酶； ⑤PEP羧化酶
三、酰胺的生理功能 谷酰胺和天冬酰胺是植物体内两种重要的酰胺。 谷酰胺的存在是植物健康的标志，天冬酰胺的存 在是植物不健康的象征。 两种酰胺的主要功能是氮素运输、氨的解毒与贮 藏，以及含氮物质合成进行氮素供应。天冬酰胺 常常与蛋白质分解代谢反应有关，而谷酰胺则常 常与合成代谢和生长有关。
氮素相关测定方法(精)
二.亚硝态氮、硝态氮、铵态氮、尿素测定1.硝态氮测定（紫外分光光度校正因数法）1.约测：吸取水样（土壤浸提液）注入1cm光径石英比色杯中，以浸提剂为参比，在210nm波长处约测吸收值。
根据约测结果，测定浸出液应予稀释的倍数，使吸收溶液吸收值在0.1~0.8之间。
2.测定：水样（浸出液）稀释一定倍数后，吸取25ml放入50ml三角瓶中，加入1.00ml 1：9硫酸溶液，摇匀。
装入1cm光径石英比色杯在紫外分光光度计上分别于210nm和275nm处测定吸光度A210和A275，以同样稀释酸化后的饱和硫酸钙溶液为参比溶液，调节仪器的零点。
3.工作曲线绘制：吸取10mg/LNO3—N标准溶液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00ml于50ml容量瓶中，（加一定体积浸提剂）定容。
即得0.00、0.20、0.40、0.80、1.20、1.60mg/LNO3—N标准溶液。
各取25.00mL于50ml三角瓶中，加1.00ml1：9硫酸溶液，摇匀。
装入1cm光径石英比色杯在紫外分光光度计上分别于210nm和275nm处测定吸光度A210和A275。
4.结果计算：ΔA= A210-A275f其中f为校正因数，在土壤有机质含量小于50g/kg时，f可取2.2，若大于土壤有机质含量大于50g/kg，需重新测定。
硝态氮含量（mg/kg）=c*V*D/m其中c为溶液中硝态氮浓度（mg/L），V为浸提液体积（mL），m为烘干土样质量（g），D为浸出液稀释倍数，不稀释时为1。
2.亚硝酸根的测定（重氮化耦合分光光度法）吸取50mL水样于100mL容量瓶中，加4mL对氨基苯磺酸显色剂及4mLa-萘胺显色剂，加蒸馏水至刻度摇匀。
放置20min后在分光光度计上用530nm波长进行比色，读取透光度。
绘制标准曲线：吸取亚硝酸盐标准溶液0、0.5、1、3、5mL，分别放入100mL容量瓶中，此标准系列含亚硝酸根分别为0、0.05、0.1、0.3、0.5mg/L，与待测水样同样条件进行比色，绘制标准曲线。
植物氮转化途径中酶的功能与特性研究
植物氮转化途径中酶的功能与特性研究氮素是植物生长所必需的营养元素之一，它存在于植物体内的各种有机和无机物中。
然而，大多数植物不能直接利用空气中的氮气，因为氮气分子非常稳定，植物无法直接将其转化为有机形式。
因此，植物通过植物固氮或吸收土壤中的氮源来获得氮元素。
在土壤中，氨氮、硝酸盐和有机氮是最常见的氮源，也是植物能够利用的主要氮源。
在植物氮代谢中，酶是非常重要的催化剂。
植物体内有很多种转化氮素的酶，其中最重要的是一些含有铁和硫的光合色素蛋白，如谷胱甘肽硫基还原酶和硝酸还原酶。
这些酶是植物固氮和硝化过程中关键的酶催化剂。
植物固氮和硝化是植物体内的两个主要氮转化途径。
植物固氮是将氮气还原为氨，此过程由植物瘤菌和一些自由生活的氮固氮菌完成。
而硝化则是先将氨氮和有机氮转化为亚硝酸和亚硝氧化酶进一步氧化为硝酸盐。
这一过程不仅由土壤中各种氨氧化细菌完成，而且也是植物内部氨氧化的过程。
关于植物氮素代谢中酶的功能与特性的研究，我们可以从以下几个方面来展开：1. 植物固氮酶的研究植物固氮主要通过植物和氮固氮菌之间的共生关系来完成。
通过研究这种共生关系中双方的代谢途径和机制，可以深入了解植物体内铁蛋白对氮气还原的催化作用以及这种铁蛋白的结构与功能关系。
目前，已经有许多关于植物铁蛋白的研究，这种铁蛋白存在于向日葵、豆科植物、青草属等植物中，它们的结构和功能也存在差异。
2. 植物硝酸还原酶的研究植物体内的硝酸还原酶是将硝酸盐还原为亚硝酸和氮气的关键酶。
通过研究植物体内硝酸还原酶的基因、结构和功能，可以深入了解硝酸还原酶的催化机制和与其他酶的相互作用关系，这对进一步应用硝酸还原酶生物技术具有重要意义。
3. 植物内部氨氧化酶的研究植物内部氨氧化是硝化过程中不可或缺的步骤，这一过程有可能通过植物内部细菌完成。
氨氧化酶是植物内部氨氧化过程中的关键酶，它们催化氨的氧化为亚硝酸并进一步氧化为硝酸盐。
通过亚硝酸和硝酸盐的测定和氨氧化酶活性的检测，可以深入了解植物中氨氧化酶的催化属性、与其他酶的作用关系以及植物内部细菌的分类和代谢特性等方面的知识。
氮素化合物的测定
氮素化合物的测定六、氮素化合物的测定Nitrogen Compound（一）水中的氮及其测定意义水中有机物包括C（carbon）、H（hydrogen）、O（oxygen）、N（nitrogen）、S（sulphur）、P（phosphorus）等化合物，其中以氮素化合物*不稳定，它们*初进入水体时，多以有机氮的形式存在，但受微生物作用后，渐渐变成简单化合物，如：有机N不断，而无机N ,在缺氧（anaerobicaddition）情况下,NH3是有机氮分解的*终产物；在有氧（aerobic addition）情况下：此时，有机氮素化合物已完成了无机化的作用。
水质分析中，测定各类氮素化合物，对于了解水源被污染的情况及目前分解的情况有很大帮忙。
河流的自净作用包括：（organic nitrogen, ammonia nitrogen,nitrite nitrogen, nitrate nitrogen）随着这个变化的进行，水中致病**渐渐削减，所以了解氮素化合物在水中的含量，有助于了解水体自净的情况。
在好氧条件下，水中N的各种形式的变化规律：**阶段（初始阶段）：新进入水体中的N是有机—N，渐渐被微生物分解为NH3—N，因而随时间的上升，有机—N，NH3—N；**阶段（中心阶段）：NH3—N上升到肯定的含量，又开始被好氧菌分解为NO2——N， NO2——N，而NH3—N上升到一个顶峰后开始下降，下降的原因不仅是NO2——N上升，更紧要的是此时NO2——N又开始转化为NO3——N，促进了NH3—N的转化；第三阶段（末期阶段）：NH3—N，NO2——N，NO3——N。
对于氮素化合物进行监测，可以①了解水域的自净情况及水体的自净本领。
取不同河段的水样测定所含氮素的形态，若发觉上游排污地段有机氮含量较高，而下游有机氮含量低，NO3——N含量上升，则说明水域自净本领强。
②了解污染情形及污染趋势：若水中含有有机N和NH3—N，此水体刚受污染，有严重的不安全；若水中含有NO3——N，污染已久，基本得到净化，无太大影响；若水中含有NO2——N，表示有机物的分解尚未完全，若水中NO3——N，NH3—N，此时有少量NO2——N，无关紧要，若水中NO3——N少，NH3—N，此时发觉NO2——N则要警惕，由于此时已提示NO2——N 的污染即将达到峰值。
甜菜谷氨酸合成酶(GOGAT)酶学特性及氮素对其酶活性的调控
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NADH
COOH │ CHNH2 │ CH2 │ CH2 │ CONH2
铁氧还蛋白 COOH
│ C=O │ CH2 │ CH2 │ COOH
2H+，2e—
NH3
NADH
谷氨酰胺 合成酶Biblioteka 谷 氨 酰 胺谷氨酸合成酶
谷氨酸 脱氢酶 COOH │ CHNH2 │ CH2 │ CH2 转氨基 │ 含氮化 COOH
②谷草转氨基作用
谷丙转氨酶 CH 3 （ GPT） 磷酸吡 哆醛
COOH CH2 + CH C=O 2 H-C-NH2 COOH COOH
COOH COOH CH2 CH2 H-C-NH2 + CH2 C=O COOH COOH
谷草转氨酶 COOH （ GOT） CH 2 磷酸吡 C=O 哆醛 COOH
粗酶液制备 取1g水稻根/叶，置于冰浴的研钵中，加入少量石 英砂和3ml提取缓冲液（100mmol/L TrisHCl(pH7.6)含1.0mmol/L EDTA， 1.0mmol/LMgCl2· 6H2O，10mmol/L β-琉基乙醇）于 4℃研磨成匀浆。混合均匀后于高速冷冻离心机4℃ 、20,000g离心20min（13，000g 30min），收集上 清，即为粗酶提取液，置于-80℃冰箱中冻存，待 测。粗酶液用于Gs、NADH-GOGATH的活力测定 。
工作曲线 即可查得丙酮酸体积 (ml),若查得的丙酮酸体积超过 0.2ml时应将酶粗制液稀释 后再进行测定 , 测定结果乘以稀释倍数即得丙酮酸体积 V(ml) 。工作曲线绘制 : 取 10ml 试管 6 支 , 各管加 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 0.1ml, 分别加 GPT 底物液 0.5 、 0.45 、 0.40 、 0.35 、 0.30 、 0.25ml, 丙酮酸标准液 0( 对照管 ) 、 0.05 、 0.10 、 0.15 、 0.20 、 0.25ml。置37℃水浴中 5min,各管加2,4-二硝基苯肼溶液0.5ml,混匀, 再置37℃水浴 中 20min, 取出后各管加 0.4mol/L 氢氧化钠溶液 5ml, 混匀 ,10min 后同上比色 , 读取各 管吸光度。各管吸光度分别减去对照管吸光度 ,以各管丙酮酸体积为横座标 ,以相 应的吸光度差值为纵座标绘制工作曲线。 (四)结果计算 转氨酶活度以每克植物鲜样在30min内反应生成的丙酮酸微摩尔(μmol)表示。 GOT活度,μmol/g·30min=(C×V×20)/(m×2) GPT活度,μmol/g·30min=(C×V×20)/(m×2) 式中 ,C— 丙酮酸标准溶液的浓度 (μmol/ml);V— 由工作曲线查得的丙酮酸体积 (ml);20— 稀释倍数 ;2— 反应时间换算系数 ,GOT 实际反应时间为 1h, 按习惯本法酶 活性以30min计算〔4〕,故应除以2;m—植物鲜重(g)
无机态： NO3-－N、NH4+－N （主要） 吸收的形态 有机态：NH2 －N、氨基酸、 核酸等 （少量）
（一）植物对硝态氮的吸收与同化
1. 吸收：旱地作物吸收NO3-－N为主，主动吸收
2. 同化
(1) NO3-－N的还原作用(nitrate reduction)
过程：
NO3-
NR，Mo
根、叶细胞质
第二类，尿素 < AA效果 < 硫酸铵：如天门冬氨酸等
第三类，效果 < 尿素：如脯氨酸、缬氨酸等
第四类，有抑制作用：如蛋氨酸
植物转氨酶(GOT和GPT)活度比色测定方法及其应及GOGAT酶活 性的测定 主要试剂 (1)0.05mol/L Tris-HCL缓冲液(pH7.2):0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷 (24.2g三羟甲基氨基甲烷用蒸馏水溶解并定容至200ml)50ml和 0.2mol/L HCl44.2ml,用蒸馏水稀释至200ml。 (2)0.1mol/L磷酸盐缓冲液:称取磷酸氢二钠 (AR)11.928g,磷酸二氢钾 (AR)2.176g,加少量蒸馏水溶解并定容至1000ml。 (3)2,4-二硝基苯肼溶液:称取2,4-二硝基苯肼19.8mg,用10mol/L HCL10ml溶解后,加蒸馏水至100ml,保存于棕色瓶中备用,此液可保存 3个月。 (4)0.4mol/L氢氧化钠溶液:16g氢氧化钠(AR)加蒸馏水溶解并定容至 1000ml。
2谷氨酸
谷氨酸＋17酮酸
17种氨基酸
合成
蛋白质
转氨基作用（transamination）
（1）定义：是指一种α -氨基酸和α -酮酸在转氨酶的作 用下生成相应的α-酮酸和新的氨基酸的过程。
谷丙转氨基作用 （2）生物体内两种重要的转氨基作用 谷草转氨基作用
①谷丙转氨基作用
COOH CH3 CH2 H C NH2 + CH2 C=O COOH COOH
1· 酶粗制剂的提取 将 新 鲜 植 物 材 料 剪 碎 , 取 鲜 重 0.2g 左 右 放 入 研 钵 , 加 0.05mol/LTris-HCl 缓冲液 (pH7.2)2.0ml, 在冰浴中研磨 , 得到 的匀浆用高速离心机 20000×g离心20min,上清液供测酶活 度用。 2· 谷草转氨酶(GOT)活度测定 取 10ml 试管 2 支 , 一支作测定管 , 分别加酶粗制剂 0.1ml 和 GOT底物液0.5ml,另一支作对照管,仅加酶粗制剂0.1ml。将 二管同时置 37℃水浴 ,60min 后取出 , 各管加 2,4 二硝基苯肼 液0.5ml终止反应,对照管再加GOT底物液0.5ml。将二管再 置37℃水浴中20min,取出后各管加0.4mol/L NaOH 5.0ml,混 匀 ,10min 后用分光光度计比色 , 波长 500nm, 蒸馏水调零点 , 读取吸光度。将测定管吸光度减去对照管吸光度 , 得吸光 度差值,查工作曲线即可查得丙酮酸体积(ml)。若查得的丙 酮酸体积超过 0.2ml 时应将酶粗制液稀释后再进行测定 ,测 定结果乘以稀释倍数即得丙酮酸体积V(ml)。
NO2-
NiR，Fe、Mn
根、叶绿体
NH3
NR：硝酸还原酶(nitrate reductase) NiR：亚硝酸还原酶(nitrite reductase)
氨的同化
植物吸收铵盐以后，或当植物所吸收的硝酸盐被 还原成氨后，氨必须立即被同化成氨基酸，否则就会 毒害植物。因为氨可能抑制呼吸过程中的电子传递系 统。 氨的同化方式为：进入谷氨酸合成酶循环。
(1) 吸收：根、叶均能直接吸收
(2) 同化：
脲酶 水解
①脲酶途径：尿素
NH3
瓜氨酸
氨基酸
②非脲酶途径：直接同化 尿素 氨甲酰磷酸 精氨酸
尿素的毒害：当介质中尿素浓度过高时，植物 会出现受害症状
2. 氨基态氮(amino nitrogen)
可直接吸收，效果因种类而异
第一类 效果 > 硫酸铵：如甘氨酸、天门冬酰胺等
提取液配置：（Tris，121.14；EDTA，372.24；MgCl2· 6H2O，203.3 ；β-琉基乙醇原液14.4mol/L） 1L提取液的配置：12.114g Tris+0.3722g EDTA+0.2033g MgCl2· 6H2O 用900ml水溶解，+0.7mlβ-琉基乙醇原液后，用1mmol/L HCl调pH值 至7.6，然后定容至1L。 500ml提取液的配置：6.057g Tris+0.1861g EDTA+0.1016g MgCl2· 6H2O用450ml水溶解，+0.35ml β-琉基乙醇原液后，用 1mmol/L HCl（原液稀释12000倍,83ul定容至100ml）调pH值至7.6 ，然后定容至500ml。
ATP
NH3 NH4+吸收 NO3—还原 N2固定 光呼吸
COOH │ CHNH 2 │ CH2 │ CH2 │ COOH 谷氨酸
合物 作用 谷氨酸
图1 氨的同化途径的模式
反应式：
NH3＋谷氨酸＋ATP
谷氨酰胺合成酶
谷氨酰胺＋ADP＋Pi
谷氨酸合成酶
谷氨酰胺＋α -酮戊二酸＋2e－＋2H＋ 转氨酶
与氮素同化相关酶及测定方法
自 然 界 中 N 素 循 环
一、植物体内氮的含量与分布
含量：占植物干重的0.3～5％。
植物种类：豆科植物>非豆科植物 品种：高产品种>低产品种 器官：种子>叶>根>茎秆
二、氮的生理功能
1. 氮是蛋白质的重要成分（蛋白质含氮16～18％）
2. 氮是核酸和核蛋白的成分（核酸中的氮约占植 株全氮的7％） 3. 氮是酶的成分
4.氮是叶绿素（叶绿素a:C55H72O5N4Mg)的成分 （叶绿体含蛋白质45～60％）
5. 氮是多种维生素的成分:如维生素B1 (C12H17ON3S)、B2 (C17H18O6N4 )、B6(C6H11O3N)
6. 氮是一些植物激素的成分（如IAA、CTK） 7. 氮也是生物碱的组分（如烟碱、茶碱、可可 碱、咖啡碱、胆碱－－卵磷脂(磷脂酰胆碱）
(5)1mol/L氢氧化钠溶液:40g氢氧化钠(AR)加蒸馏水溶解并定容至 1000ml。 (6)丙酮酸标准液(2μmol/ml):精确称取纯丙酮酸钠22.0mg于100ml容 量瓶中,加0.1mol/L磷酸盐缓冲液至刻度。此液应新鲜配制。 (7)GOT底物液(DL-门冬氨酸200mmol/L,α-酮戊二酸2mmol/L): 称取α-酮戊二酸29.2mg和DL-门冬氨酸2.66g置于一小烧杯中,加入 1mol/L氢氧化钠20.5ml使溶解,并校正pH至7.4,然后将溶液移入100ml 容量瓶内,用0.1mol/L磷酸盐缓冲液定容至刻度。放置冰箱内保存。 (8)GPT底物液:(DL-丙氨酸200mmol/L,α-酮戊二酸2mmol/L): 称取α-酮戊二酸29.2mg和DL-丙氨酸1.79g置于一小烧杯中,加入 0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)约80ml煮沸溶解后,待冷,用1mol/L氢氧 化钠调pH至7.4(约加0.5ml),再加0.1mol/L磷酸盐缓冲液至100ml混匀, 加氯仿数滴防腐,贮于冰箱内。