蛙类斯氏离体心脏灌流---文本资料
生理学实验报告-蛙心灌流
实验名称：之答禄夫天创作蛙类离体心脏灌流课程名称：生理学实验指导教师：龙天澄张碧鱼陈笑霞实验人：叶永锋 08344031学院：海洋学院实验时间：2009年12月09日一、【目的要求】1、学习斯氏离体蛙心灌流法。
2、了解心肌的生理特性。
3、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh)等对离体心脏活动的影响。
二、【原理】将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）坚持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够坚持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。
心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。
血钾浓度过高时（高于7.9mmol/L），心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，表示为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。
血钙浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。
血钙浓度降低，心肌收缩力减弱。
血中钠离子浓度的轻微变更，对心肌影响不明显，只有发生明显变更时，才会影响心肌的生理特性。
肾上腺素可使心率加快、传导加快及心肌收缩力增强，乙酰胆碱则与肾上腺素的作用相反。
三、【实验仪器】青蛙、经常使用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机收集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液。
蛙心套管(斯氏套管或八木氏套管)、套管夹、0．65％NaCl、5％NaCI、2％CaCl2、1％KCl、1：5 000肾上腺素、1：10 000乙酰肌碱、300U／mL肝素。
四、【方法与步调】1、斯氏蛙心插管法（1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法流露心脏。
仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。
在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。
品课程 实验 24 蛙类离体心脏灌流
2.
《基础生物学实验》精品课程 基础生物学实验》
此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而上下移动， 表明操作成功(否则需遣回并重新插入)。 用滴管吸去套管中的血液， 更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉 连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)，再将结线固定在套管的小玻 璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静 脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏 的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余 血，使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致 (1.5—2cm)，即可进行实验。
2％CaCl2
对照 给药 恢复
1％KCl
对照 给药 恢复
Adr
对照 给药 恢复
ACh
对照 给药 恢复
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五.思考题
1．本实验说明心肌的哪些生理特性? 2．用实验说明内环境相对恒定的重要意义。 3．试分析任氏液中适量的钠离子、钙离子与钾离于对心肌的作用。 4．为何强调实验中保持灌流液面的恒定?灌流量对心脏活动会有什么影 响? 5．试想，活的机体在心交感神经兴奋或心迷走神经兴奋时对心脏会有 什么影响?
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3．将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部 肌肉(不可夹得过多，以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上的系线 绕过一个滑轮与张力传感器相连。注意：勿使灌流液滴到传感器上。 调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。
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动物与器材蛙或蟾蜍蛙心套管斯氏套管或八木氏套管套管夹支架双凹夹滑轮烧杯常用手术器械蛙板或蜡盘蛙心夹计算机采集系统张力传感器滴管培养皿或小烧杯污物缸纱布棉线橡皮泥任氏液0
生理实验斯氏离体蛙心灌流
实验八蛙心灌流一、实验目的1、学习斯氏离体蛙心灌流法2、了解心肌的生理特性。
3、观察、、及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（ACh）对离体心脏活动的影响。
二、实验原理维持心脏正常收缩的节律和强度，需要有一个适当的理化环境（离子的浓度、比例、溶液的酸碱度、环境温度等），这种环境条件稍有改变，便可影响心脏的正常活动。
心脏的正常节律性活动必须在适宜的理化环境里才能维持，一旦适宜的理化环境被干扰或破坏，心脏活动就会受到影响。
心脏受植物性神经的双重支配，交感神经兴奋时，其未梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导增快，心率加快；而迷走神经兴奋时，其未梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心率减慢。
把离体蟾蜍心脏，即失去了神经支配的蟾蜍心脏保持在适宜的环境中，在一定时间内其仍能产生节律性兴奋和收缩活动。
这是由于蟾蜍的静脉窦能够自动按照一定的节律产生兴奋，并传导到其他心肌细胞，从而引起整个心脏有节律地兴奋和收缩。
离体心脏灌流，是在有控制的条件下研究体液因素以及药物对心肌作用机制的重要实验方法。
两栖类动物心脏无冠状循环，心肌的血液供应直接来自心室腔，故灌流时套管插入心室腔内，但灌流哺乳动物心脏时则须通过冠状血管。
本实验是将蛙心离体后，用人工配制理化特性近似蛙血浆的任氏溶液灌流，在一定时间内，可保持节律性收缩和舒张，如改变任氏液的组成成分或浓度，心脏活动的强度和频率将受到影响。
三、动物与器材实验动物：蟾蜍4只/组。
实验器材：蟾蜍解剖器械、生物/桥式前置、刺激/记录电极、蛙心插管、万向轮、蛙心夹、线、滴管、培养皿、支架、木夹、蛙针。
实验试剂：任氏液（含肝素）、0.65%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1∶5000去甲肾上腺素溶液、1∶10000乙酰胆碱溶液、**品溶液、1％乳酸、2.5％NaHCO3。
四、方法与步骤一）离体蛙心制备用刺蛙针捣毁蛙的脑和脊髓，将蛙仰卧固定于蛙板上。
打开胸腔，剪开心包膜，暴露心脏。
离体蛙心灌流实验
目的原理观察内环境理化因素相对稳定对维持心脏正常节律性活动的重要作用，了解肾上腺素、乙酰胆碱等激素、神经递质对心脏活动的调节意义。
实验对象与用品大蛙或蟾蜍。
斯氏蛙心套管、蛙心夹、蛙板、蛙类手术器械、二道仪、任氏液、长滴管、铁支架等(试剂见实验项目)。
方法步骤(一)实验准备操作对蛙行双刺毁，仰卧固定于蛙板上，用铁剪刀剪去胸壁，再用眼科剪小心地剪开心包膜，暴露心脏，识别心脏动脉球、静脉窦(背面)等结构(图17-1A、B、C)。
用蛙心夹夹住蛙心尖部，蛙心夹用线固定在蛙板上，松紧以动脉、心房、心室拉直呈水平位为合适。
于主动脉分支下预埋一条棉线做一虚结备用。
把主动脉左支上端结扎，在近动脉球处剪一向心斜切口(注意要剪破血管内膜，每次心缩时有血自切口涌出，但不要把血管剪断。
剪口位置视套管尖端长度与心脏大小而定)，左手用眼科镊提起切口缘，右手将注有任氏液的斯氏套管插入动脉干内，然后走手持左侧血管分支上的结扎线向外拉，右手将蛙心套管送入动脉球；把蛙心夹上的连线从固定物上取下，提起心尖，使心室与动脉球约呈100°-200°的钝角，然后当心室缩紧时把套管平直往心室方向推进。
当感觉套管进入心室后再把心尖放平，随即将套管稍向心室推进，调整合适位置，可见套管内液面随心跳而升降。
即将已作虚结之丝线把血管和套管固定起来，余线则扎于套管的玻璃小钩上，以免心脏滑脱。
提起套管，剪断与心脏相连的血管和组织(注意勿损伤静脉窦及两心房)，摘出心脏。
用任氏液洗去心内外的余血后，注入新鲜任氏液备用。
可在套管的下1/3处结一线作为标志，每次换任氏液时使液面与此线相平。
接好二道生理仪和机械－电换能器(图17-2)选用适当参数，待记录。
(二)实验项目1.描记正常心跳曲线并分析其疏密、规律性、幅度、顶点及基线的含义。
2.温度的影响：把套管内换成4℃任氏液，同时作好标记，观察曲线变化，待效应明显后，即换入室温任氏液。
待曲线恢复正常后，再进行下一项目。
生理学实验报告蛙心灌流
生理学实验报告-蛙心灌流————————————————————————————————作者: ————————————————————————————————日期:ﻩ蛙类离体心脏灌流一、【目的要求】1、学习离体蛙心灌流法。
2、观察Nａ＋,K+,Ｃa2+及肾上腺素(Adｒ),乙酰胆碱（ＡCｈ)，乳酸对离体心脏活动的影响。
二、【原理】将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩,心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分,观察其对心脏活动的作用。
心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。
外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。
三、【实验仪器】青蛙、常用手术器械、蛙板（或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。
套管夹、0．６5％ＮaＣl、２％ＣａＣl2、1%KCl、１：1０000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。
四、【方法与步骤】１、斯氏蛙心插管法(１)一只青蛙,双毁髓后背位置于蜡盘中,按前面的方法暴露心脏。
仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。
在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时,结扎位置可靠上些)。
再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。
左手提起主动脉上的结扎线,右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。
选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。
当套管尖端到达动脉圆锥基部时,应将套管稍稍后退,使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进,经主动脉瓣插入心室腔内（于心室收缩时插入,但不可插得过深,以免心室壁堵住套管下口)。
生理学实验报告_蛙心灌流_(2)
蛙类离体心脏灌流一、【目的要求】1、学习离体蛙心灌流法。
2、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh),乳酸对离体心脏活动的影响。
二、【原理】将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。
心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。
外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。
三、【实验仪器】青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。
套管夹、0．65％NaCl、2％CaCl2、1％KCl、1：10000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。
四、【方法与步骤】1、斯氏蛙心插管法（1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。
仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。
在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。
再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。
左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。
选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。
当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。
此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。
用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。
实验4 离体蛙心灌流
【作业】
1.计算加入2滴2%KCl后的灌流液中KCl的摩 尔浓度。（其中KCl的摩尔质量为 74.5g/mol，假设2滴的体积相当于50ul， 灌流液的体积为5ml) 2.有兴趣的同学可查阅资料讨论高血钾症 时动物的心电图如何变化以及如何救治。
肾上腺素作用机制：
心脏，肾上腺素与β 肾上腺素能受体结合产生正性变 时、变力和变传导作用，导致心率加快，传导速度加 快，使心输出量增加，心肌收缩力增强。激活心肌细胞 膜上的腺苷酸还化酶，使细胞内 cAMP浓度增加，cAMP 能激活心肌细胞膜上的钙通道，使心肌动作电位平台期 的内流增加，心肌收缩力增强。
【仪器与设备】
蟾蜍， 蛙用手术器械，蛙心套管，蛙心夹，张 力换能器， RM6240 ， 任 氏 液 ， 2%CaCl2 ， 2%KCl ， 0.01%肾上腺素，0.01%乙酰胆碱。
三、实验内容与操作步骤
（一）离体蛙心灌流制作
1.破坏蟾蜍脑和脊髓，暴露心脏，剪除 心包膜和肝系膜（不要损伤血管） 2.第1次结扎：双结扎右主动脉
实验项目 心收缩张力 （克） 心输出量 （滴/min） 心率 （次/min）
对照 1-2滴 2%CaCl2 1-2滴2%KCl 1-2滴10-4肾 上腺素 1-2滴10-4乙 酰胆碱
Ca2+作用机制：
1.使慢反应自率细胞0期去极化加强，传导性加 强。 2.慢反应自率细胞4期自动去极化速度加快，自 率性加强。 3.快反应工作肌细胞进入细胞内Ca2+多，心肌收 缩力加强。
Байду номын сангаас
【注意事项】
每次换液时液面应保持一定的高度。 每次换液或滴加试剂时应打标记。 每个试剂瓶的滴管不能混淆，以免沾污 试剂，影响结果。 心脏表面随时滴加任氏液，以免干燥。 待心跳恢复正常后进行下一项实验。
实验4-4 蛙类离体心脏灌流
实验4-4 蛙类离体心脏灌流引言离体心脏灌流实验是生理学中常用的方法之一。
不同种类的动物可以通过体表切口或开放胸骨来取出其心脏进行灌流。
而离体心脏灌流实验可以帮助研究者了解心脏的解剖学和生理学特征。
本实验将讲解如何进行蛙类离体心脏灌流实验。
实验器材和试剂1.蛙类（建议使用大型蛙类）。
2.离体心脏灌流系统，包括：- 离体心脏灌流装置（含灌流缓冲液、温度控制器等）。
- 稳压泵。
3.灌流缓冲液，常用的为Tyrode's盐溶液。
实验步骤1. 先将离体心脏灌流系统检查一遍，保证各项设备均运转正常。
2. 杀死一只蛙类，立即进行解剖，取出心脏，并将其迅速转移到灌流装置中。
在移植心脏时应注意不损伤其血管和肌肉组织。
在灌流系统中，除了心脏，不能有其他生物组织残留。
3. 确认灌流系统中的灌流缓冲液温度为20~25℃。
在开始灌流之前，要先排除灌流管路中的空气。
4. 打开灌流泵，根据所选择的灌流缓冲液flow rate控制注入速度，一般建议在3~8ml/min。
确保满足心脏需求的氧气和营养物质可以通过灌流液输送到心脏内部。
5. 注入灌流缓冲液的同时，对心脏进行观察，确认心脏速率、收缩波幅度等生理特征。
6. 加入适当的药物来研究心脏对药物的反应性。
此时应读取每个添加药物后的心脏特征和响应（如速率、波幅等）。
7. 在实验结束时，切断灌流管路和心脏连接，灌流系统中的灌流液应该被排除并清洁。
结果和分析离体心脏灌流实验可以观察心脏的生理学特征和对不同药物的反应，这有助于研究者了解心脏的生理学机制。
在进行本实验时，需要注意不仅仅是心脏的特征，还要关注灌流流量和药物导致的生理反应。
在实验的过程中，如果发现心脏节律不齐或收缩波幅度明显下降，这可能是灌流流量不足造成的。
而添加不同的药物，可以帮助研究者了解心脏的调控机制，同时也可以评估药物的疗效。
需要注意的是，不同种类的动物其心脏组织的特征也是不同的，因此需要根据具体的实验目的选择合适的动物进行实验。
生理学实验报告-蛙心灌流 (2)
蛙类离体心脏灌流一、【目的要求】1、学习离体蛙心灌流法。
2、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh),乳酸对离体心脏活动的影响。
二、【原理】将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。
心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。
外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。
三、【实验仪器】青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。
套管夹、0．65％NaCl、2％CaCl2、1％KCl、1：10000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。
四、【方法与步骤】1、斯氏蛙心插管法（1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。
仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。
在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。
再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。
左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。
选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。
当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。
此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。
用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。
蛙心灌流呈报
蛙类离体心脏灌流院系：生命科学学院实验人：张优 13941202 邓晓娟 13941201（本次实验报告由张优执笔）1、实验目的1、学习斯氏离体蛙心灌流法。
2、了解心肌的生理特性。
3、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素,乙酰胆碱对离体心脏活动的影响。
2、实验原理（1）两栖类动物无冠状循环两栖类动物无冠状循环，心肌直接从流经心腔的血流中获取营养。
即心室肌直接从心室腔中获得营养。
故用任氏液置换心室中的血液后，心室插管中的灌流液便成为心室肌的细胞外液。
（2）心肌对细胞外离子浓度和体液因数敏感（3）钾、钙和钠离子对心肌特性的影响1.血钾浓度过高时（高于7.9mmol/L），心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。
2.血钙浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。
血钙浓度降低，心肌收缩力减弱。
3.钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。
肾上腺素可使心率加快、传导加快及心肌收缩力增强，乙酰胆碱则与肾上腺素的作用相反。
3、实验材料青蛙、常用手术器械、蜡盘、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、滴管、小烧杯、纱布、棉线、任氏液、蛙心套管、套管夹、0．65％NaCl、5％NaCI、2％CaCl2、1％KCl、1：5 000肾上腺素、1：10 000乙酰肌碱、300U／mL肝素。
4、实验步骤（1）蛙心的解剖1.毁脑毁脊髓2.打开胸腔3.剪开心包膜、暴露心脏（二）斯氏蛙心插管法1.结扎左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎。
左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。
2.插管左主动脉结扎处下方用眼科剪剪一小切口，将盛有任氏液＋少量肝素的蛙心插管由此口插入主动脉，至动脉圆锥时约“向后向下向前”试插，当心室收缩时容易经主动脉瓣插入心室腔内。
3.心脏离体稳定套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧，将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。
离体蛙心灌流
实验一离体蛙心灌流（八木氏）一、目的在维持离体心脏循环的条件下，观察不同的阳离子（Na+、K+、Ca2+）；酸、碱及肾上腺素，乙酰胆碱等神经递质对心脏活动的影响，同时记录心输出量与心率的变化。
二、原理心脏离体后，如用人工灌流法保持其新陈代谢的顺利进行，则心脏仍能有节律地自动收缩和舒张，且可维持较长的时间。
离体心脏活动所需的灌流液。
应同动物内环境一致改变灌流液的成分，则可引起心脏活动的改变。
三、实验用品蛙（蟾蜍）、蛙心夹、蛙板、蛙心套管、常规手术器械（蛙）、试管夹、双凹夹、铁支架、小烧杯、滴管、张力换能器。
D-95生理记录系统、任氏液、5%NaCl、l%KCl、1%CaCl2、0.01%肾上腺素、0.01%乙酰胆碱、3%乳酸、2.5%NaHCO3、滴管、棉球、棉线等。
四、方法与步骤（一）离体蛙心的制备1、暴露心脏取青蛙（或蟾蜍）一只，用蛙针从枕骨大孔插入破坏延髓后，仰卧固定于蛙板上，依次剪开胸前区皮肤和肌肉。
开胸暴露心脏。
然后用镊子提起心包膜，再用虹膜剪刀将其剪破，使心脏完全暴露出来。
2、蛙心插管用蛙心夹在心舒张期夹住心室尖。
将心脏轻轻提起，辨认与心脏相连的诸血管。
出入蛙心脏的血管共有九条（左主动脉、右主动脉、左、右前腔静脉、后腔静脉，左、右肺静脉，左、右肝静脉）然后将蛙心夹之连线用胶泥（或胶布）固定在蛙板上，以便操作。
用虹膜剪将连在左肝静脉上的心包膜剪去（注意：不要损伤静脉窦）。
用镊子将已浸湿任氏液的一条线穿过左肝静脉的下方，用另一条线穿过左主动脉下面，尽量向远端结扎，并结扎除左主动脉及左肝静脉外的全部血管。
左主动脉做输出管（动脉插管）。
左肝静脉做输入管（静脉管）插管。
首先用小镊子提起左肝静脉，用虹膜剪刀朝向心端剪一“V”型切口，把盛有任氏液的蛙心静脉从此插入，注意勿损伤静脉窦。
用线结扎固定。
冲洗心脏，洗净余血。
再翻正心脏，在左主动脉上离动脉圆锥1厘米处，朝向心端剪一“V”形切口，将蛙心动脉插管插入，用线结扎固定。
实验六 蛙类离体心脏灌流
五、注意事项
1. 向套管中加入药物之前，套管中应保留 少量的任氏液； 2．吸去的药液和清洗的任氏液应滴入废液 缸，切记不能污染新鲜的任氏液和其他 药液； 3. 实验记录要完整，即有头有尾，要记得 作标记。
六、结果和目标
观察并记录各灌流成分对心搏的影响。
七、思考题 1． 此实验说明心肌有哪些生理特性？ 2. 以本实验为例说明内环境相对恒定 的重要意义。
四、实验内容 （步骤）
看示范和录像） （一）离体蛙心的制备 （看示范和录像） （二）暴露心脏 （三）连接实验装置 （四）记录心搏曲线
（五）向套管内加2-6滴5%NaCl溶液，加液时 按一下“enter”键作标记记录的曲线出现变化 时，立即吸套管中的灌流液（作好冲洗标记）， 用新鲜任氏液清洗2-3次，待心搏恢复正常。 （2）向套管内加入1滴2%Cacl2溶液观察心搏 曲线的变化（方法同上）。 （3）向套管中加1-2滴1%Kcl溶液观察心转曲 线的变化（方法同上）。 （4）向套管中加入1-2液1:100,000肾上腺素 溶液，观察心搏曲线的变化（方法同上）。 （5）向套管中加入1-2滴1:1000,000乙酰胆碱 溶液，观察心搏曲线变化（方法同上）。
动物生理实验模块
实验六
蛙类离体心脏灌流
一、实验目的 1#43;、Ca2+、肾 上腺素、乙酰胆碱等对离体心 脏活动的影响。
二.原理
心肌具有自动节律性，可用人工灌流的方 法研究心脏活动的体液调节。
三、试剂与器材
蛙、微机、生物信号处理系统、解剖针、 手术剪、眼科剪、尖头手术镊、蛙心套 管、圆头手术镊、蛙板、张力换能器、 蛙心夹、棉花、棉线、任氏液、长胶头 滴管、5%NaCl溶液、2%CaCl溶液， 1%Kcl溶液、1:100,000肾上腺素溶液、 1:1000,000乙酰胆碱溶液、烧杯
蛙类斯氏离体心脏灌流及对其节律性 收缩的影响因素
中央民族大学生命与环境科学学院 生理学实验报告-中央民族大学生命与环境科学学院生理学实验报告蛙类斯氏离体心脏灌流及对其节律性收缩的影响因素2011年10月22日蛙类斯氏离体心脏灌流及对其节律性 收缩的影响因素一、实验目的1.学习蛙斯氏离体心脏灌流法。
2. 了解心肌的生理特性。
3.观察Na+、K+、Ca2+离子及肾上腺素、乙酰胆碱等对离体心脏的影响。
4.观察心脏在收缩活动的不同时期对额外刺激的反应，了解心肌收缩的生理特性。
二、实验原理两栖类动物的心脏为两心房、一心室，心脏的起搏点是静脉窦。
静脉窦的节律最高，心房次之，心室最低。
正常情况下，心脏的活动节律服从静脉窦的节律，其活动顺序为：静脉窦、心房、心室。
这种有节律的活动可以能过张力传感器在生理信号采集系统中记录下来，称为心搏曲线。
心脏收缩的机械活动，与心脏兴奋的产生、传导和恢复过程中的生物电变化，是两个不同的生理过程。
心脏收缩的机械活动可以能过心搏曲线记录下来，而心脏的生物电变化可以能过心电图表现了来。
同时记录心脏的机械活动与电变化，可以清梦地观察到两个生理过程之间对应关系。
心肌的机能特性之一是具有较长的不应期，整个收缩期都处于有效不应期内。
在心室收缩期给以刺激，心室都不发生反应，在心室舒张中后期给以单个阈上刺激，则产生一次正常节律以外的收缩反应，即期前收缩。
当静脉窦传来的节律性兴奋图1.蛙的心脏插管恰好落在期外收缩的收缩期时，心室不再发生反应，须静脉窦传来下一个兴奋才会收缩。
因此在期外收缩之后，就会出现一个较长时间的舒张间歇期，即代偿间歇。
心肌具有自动节律性收缩的特性，其调节受植物性神经的支配及某些体液因素的调节和药物作用的影响。
因此，在灌流液中，滴加肾上腺素、乙酰胆碱及其相应的受体阻断剂心得安和阿托品等药品，可间接观察神经体液因素对心脏活动的影响。
图2.心脏插管及换能装置三、实验材料及试剂蟾蜍，常用手术器械，蛙板，蛙心夹，实验信号采集系统，张力传感器，支架，双凹夹，滑轮，两个针形插入电极，双针形露丝刺激电极，秒表，滴管，培养皿，纱布，橡皮泥，任氏液，蛙心套管，套管夹，0.65%和5%的NaCl溶液，2%的CaCl2溶液，！%的KCl溶液，1:5000肾上腺素溶液，1:10000的乙酰胆碱溶液。
蛙类系列实验报告(3篇)
第1篇摘要：本实验报告针对蛙类动物进行了一系列生理学实验，包括离体蛙心灌流实验和坐骨神经-腓肠肌标本制备实验。
通过这些实验，我们学习了蛙类动物的生理学特性，掌握了相关实验操作技术，并观察了不同刺激对蛙类心脏和肌肉的影响。
关键词：蛙类；生理学实验；离体蛙心灌流；坐骨神经-腓肠肌标本；刺激反应一、引言蛙类动物因其结构简单、生理功能明确、实验操作方便等特点，常被用作生理学实验的模型。
通过观察和分析蛙类动物的生理现象，我们可以深入了解人体生理功能及其调控机制。
本实验报告主要介绍了蛙类系列实验的过程、结果及分析。
二、离体蛙心灌流实验1. 实验目的- 学习离体蛙心灌流法。
- 观察Na+、K+、Ca2+及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（ACh）、乳酸对离体心脏活动的影响。
2. 实验原理离体蛙心灌流实验是通过改变灌流液的成分，观察其对心脏活动的影响，从而了解心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性。
实验中，我们使用斯氏蛙心插管法，将离体蛙心置于适宜的环境中，通过改变灌流液的成分，观察心脏活动的变化。
3. 实验仪器青蛙、常用手术器械、蛙板（或蜡盘）、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿（或小烧杯）、棉线、任氏液、0.65%NaCl、2%CaCl2、1%KCl、1:10000肾上腺素、1:10000乙酰胆碱、3%乳酸。
4. 实验方法与步骤（1）斯氏蛙心插管法：暴露心脏，识别心脏周围的大血管，穿一线于动脉圆锥下方，插入灌流管。
（2）灌流实验：将离体蛙心置于任氏液中，通过灌流管向心脏灌流，观察心脏活动。
（3）改变灌流液成分：分别加入不同浓度的Na+、K+、Ca2+、肾上腺素、乙酰胆碱、乳酸，观察心脏活动变化。
5. 实验结果与分析（1）Na+对心脏活动的影响：降低Na+浓度，心脏活动减弱；升高Na+浓度，心脏活动增强。
（2）K+对心脏活动的影响：降低K+浓度，心脏活动增强；升高K+浓度，心脏活动减弱。
生理学实验报告-蛙心灌流
真验称呼：之阳早格格创做蛙类离体心净灌流课程称呼：死理教真验指挥西席：龙天澄弛碧鱼陈笑霞真验人：叶永锋08344031教院：海洋教院真验时间：2009年12月09日一、【脚段央供】1、教习斯氏离体蛙心灌流法.2、相识心肌的死理个性.3、瞅察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh)等对于离体心净活动的效率.二、【本理】将离体蛙心（得去神经支配的蛙心）脆持正在相宜的环境中，正在一定的时间内仍旧不妨脆持节律性中断，心净仄常的节律性活动需要一个相宜的理化环境，离体心净也是如许，离体心净摆脱了肌体的神经支配战齐身体液果素的间接效率，不妨通过改变灌流液的某些身分，瞅察其对于心净活动的效率.心肌细胞的自律性、镇静性、传导性及中断性，皆与钠、钾及钙等离子有闭.血钾浓度过下时（下于7.9mmol/L），心净镇静性、自律性、传导性及中断性皆下落，表示为中断力减强、心动过缓战传导阻滞，宽沉时心净可停搏于舒弛期.血钙浓度降下时，心净中断力巩固，过下可使心室停搏于中断期.血钙浓度落矮，心肌中断力减强.血中钠离子浓度的沉微变更，对于心肌效率不明隐，惟有爆收明隐变更时，才会效率心肌的死理个性.肾上腺素可使心率加快、传导加快及心肌中断力巩固，乙酰胆碱则与肾上腺素的效率好异.三、【真验仪器】青蛙、时常使用脚术器械、蛙板(大概蜡盘)、蛙心夹、估计机支集系统、弛力传感器、支架、单凸夹、单针形露丝刺激电极、滴管、培植皿(大概小烧杯)、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液.蛙心套管(斯氏套管大概八木氏套管)、套管夹、0．65％NaCl、5％NaCI、2％CaCl2、1％KCl、1：5 000肾上腺素、1：10 000乙酰肌碱、300U／mL肝素.四、【要领与步调】1、斯氏蛙心插管法（1）一只青蛙，单毁髓后背位子于蜡盘中，按前里的要领表露心净.小心辨别心净周围的大血管(睹左图).正在左主动脉下圆脱一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位子稳当上些).再从安排二主动脉下圆脱一线，并挨一活结备用.左脚提起主动脉上的结扎线，左脚用眼科剪正在结扎线下圆、沿背心目标将动脉上壁剪一斜心.采用大小相宜的蛙心套管，而后将衰有少量(套管内2～3 cm下度)任氏液(内加进一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山启心处拔出动脉圆锥(睹左图).当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍退却，使尖端背动脉圆锥的背部后下圆及心尖目标促成，经主动脉瓣拔出心室腔内(于心室中断时拔出，然而不可插得过深，免得心室壁堵住套管下心).此时可睹套管中血液冲人套管，并使液里随心净搏动而亡下移动，标明支配乐成(可则需退回偏偏沉新拔出).用滴管吸去套管中的血液，调换新陈任氏液.宁静住套管后，沉沉提起备用线，将左、左主动脉连共拔出的套管用单结扎紧(不得漏液)，再将结线牢固正在套管的小玻璃钩上，而后剪断结扎线上圆的血管.沉沉提起套管战心净，瞅浑静脉窦的位子，于静脉窦下圆剪断有牵连的构制，仅死存静脉窦与心净的通联，使心净离体(切勿益伤静脉窦).用任氏液反复浑洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液.脆持套管内液里下度普遍(1.5～2 cm)，即可举止真验.（2）将插佳离体心净的套管牢固正在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉(不可夹得过多，免得果夹破心室而漏液).再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与弛力传感器贯串（如左图）.注意：勿使灌流液滴到传感器上.安排隐现器上心净中断直线的幅度适中.2、真验瞅察(1)记录仄常心搏直线(2)改用0．65％NaCI溶液灌流，并做佳加药标记表记标帜，瞅察心搏变更.待直线氏插管拆置出现明隐变更时，坐时吸去套管中的灌流液，共时干佳浑洗标记表记标帜，并用新陈任氏液荡涤2—3次，待心搏回复仄常.注意：换液时切勿碰套管，免得效率描记直线的基线，共时脆持灌流液里普遍(以下共).瞅察可得，NaCI溶液会阻拦心净搏动.(3)背套管内加2～6滴5％NaCI(较细的套管需少加)溶液，做佳加药暗号，瞅察心搏直线的频次及振幅变更.当直线出现明隐变更时，应坐时吸去套管中的灌流液，并干佳浑洗标※记，赶快用新陈任氏液荡涤2～3次，待心搏回复仄常.(4)共法背套管内加进1～3滴2％CaCI：溶液，瞅察并记录心搏直线的变更.当出现明隐变更时，坐时调换任氏液，待心搏回复仄常(如果回复早缓，可多次浑洗).(5)背套管中加1—2滴1％KCl溶液，记录心搏直线的变更.当心搏直线变更时，共法调换灌流液，待心搏回复仄常.(6)共法记录套管中加进l～2滴的肾上腺素溶液(1：10 000)后心搏直线的变更.(7)共法记录套管中加进1—2滴乙酰胆碱溶液(1：10 000)后心搏直线的变更.3、真验截止与分解将记录到的各段心搏直线附正在真验报告中，估计给药前后直线的频次、振幅战基线变更.丈量截止挖进表中.五、【真验截止】1、仄常博打直线图2、滴加0.65%NaCl溶液图分解：滴加0.65%NaCl溶液后，心跳减强，那是由于用0.65%NaCl溶液灌注蛙心时，由于灌注液中缺累Ca2+，以致心肌细胞动做电位2期内流Ca2+缩小，细胞量Ca2+浓度缩小，心肌的中断活动也随之减强.3、滴加5%NaCl溶液分解：由于细胞中液中钠浓度好梯度的变更普遍对于心肌活动效率不明隐.果此上图的心率变更与图2滴加0.65%NaCl 溶液里变更本去不是很大，二个分歧浓度的相共溶液效率机理是一般的，正在此一不做过多相共分解.然而如果真验中滴加溶液程序纷歧样，若先滴加5%NaCl.再滴加0.65%NaCl溶液，所得的心搏变更便不如图3那样明隐了，中断力仅出现很微小的变更.4、滴加2%CaCl溶液分解：细胞中Ca2＋正在细胞膜上对于Na＋内流有比赛性压制效率，称为膜屏障效率.[Ca2＋] 0删下时，Na＋内流受压制，细胞0期除极速度与幅度减小，使镇静性及传导性均落矮.[Ca2＋] 0删下使Ca2＋内流删加，果此缓反应细胞0期去极化加快加强，传导性删下，而快反应细胞仄台期支缩，灵验不该期支缩，复极加速.Ca2＋内流删加，使心肌中断本领巩固.[Ca2＋] 0落矮时，所引起的变更与下钙时好异.果此加进CaCl2后，心率缩小、振幅缩小，基线上移.5、滴加1%KCl溶液分解：滴加1％KCl后的心搏直线创制，直线的频次渐渐减小，愈去愈疏，幅度渐渐下落，终尾停止正在基线处，即心净停博于舒弛状态.果为当细胞K+浓度删下时，K+与Ca2+有比赛性拮抗效率，K+压制细胞膜对于Ca2+的转运，使加进细胞内Ca2+缩小，心肌的镇静—中断奇联历程减强，心肌中断力落矮.所以心搏直线振幅减小.6、滴加1：10000肾上腺素溶液分解：滴加肾上腺素后，蛙心中断巩固，心净舒弛真足，描记的心搏直线幅度明隐删大.其效率机理是，肾上腺素可与心肌细胞膜上的B受体分离，普及心肌细胞战肌浆网膜Ca2+通透性，引导肌浆中Ca2+浓度删下，使心肌中断巩固.其余，肾上腺素另有落矮肌钙蛋黑与Ca2+亲战力，督促肌钙蛋黑对于Ca2+的释搁速率减少，普及肌浆网膜摄与Ca2+的速度，刺激Na+与Ca2+接换，使复极期背细胞中排出Ca2+的效率加速，那样，将使心肌舒弛速度删快，所有舒弛历程明隐巩固.7、滴加1：10000乙酰胆碱溶液分解：上图可示，蛙心支紧缩强，心率减缓，终尾出现蛙心停止舒弛阶段.其机理为：乙酰胆碱与心肌细胞膜M受体分离，一圆里普及心肌细胞膜K+通讲的通透性，督促K+中流，将引起：1）窦房强细胞复极时K+中流删加，最大复极电位千万于值删大；Ik衰减历程减强，自动除极速度减缓.那二圆里果素引导窦房自律性落矮，心率减缓.2）复极历程中K+中流减少，动做电位2、3期支缩，Ca2+加进细胞内缩小，使心肌支紧缩强；另一圆里乙酰胆碱可间接压制Ca2+通讲，缩小Ca2+内流，从而使心肌支紧缩强.表一：各丈量截止比较表1改变灌流身分对于蛙离体心净活动的效率六、1. 制备蛙心标本时，勿伤及静脉窦.2 .上述各真验名目，一朝出现效率应坐时用仄常任氏液换洗，免得心肌受益，而且必须待心搏回复仄常后圆能举止下一步真验.3. 复习心肌死物电的爆收体制及百般离子对于心净活动的效率.4. 尽管采用结实、体大的雄性蟾蜍，脚术历程中注意呵护心净，预防益伤.5. 真验中即时用任氏液浑洗心净，待直线回复稳固后再举止下一步支配.6. 屡屡调换任氏液皆必须脆持灌流液液里下度恒定，免得果灌流量变更而效率截止.7. 庄重统制屡屡药品加进量，先加一滴，效验不明隐再加一滴.8. 滴加药品战换与仄常任氏液，须即时标记表记标帜，以便瞅察分解.9. 吸滴瓶中的任氏液战吸蛙心套管内溶液的吸管应区别博用，不可殽杂使用，免得效率真验截止.【思索题】1. 离体蛙心制备佳后，奇尔间馆内的液里上下移动很不明隐，是何本果？怎么样处理？问：离体蛙心制备佳后，蛙心插管内的液体应随蛙心室的中断战舒弛活动而上下移动.本去量是：正在心室中断时，心室容积缩小，室内压降下，将心室内的液体压进插管内，管内液里降下；正在心室舒弛的时间，心室容积删大，心室内压缩小，将插管内液体吸进心室，管内液里下落.然而是奇尔间蛙心插管内液里动摇不明隐，其主要本果是：⑴插管内尖端出现血凝块.插管内液体不克不迭顺畅的出进心室腔内.办理要领为用少吸管将血凝块吸出，正在吸出血凝块后，应坐时用新陈任氏液换洗插管内液体频频，直至蛙心颜色变浓，插管内无血液战小血块为止.⑵插管尖端不正在心室腔内，而是正在心房大概者脉间结缔构制等场合.办理要领为将插管沉新拔出心室，决定无误后，再结扎牢固.⑶插管加进心室腔内过深，以致尖端抵住了心室壁.办理要领为将插管稍稍中提，使插管心正佳处于心室腔内，且启心正对于着液体喷射的轴流目标.⑷蛙心由于少久心肌得血，引导活力下落.办理要领为背插管内滴加少许肾上腺素大概者对于其举止中加力使其起搏，使其活动巩固.⑸房室传导阻滞.正在插管的支配中，由于支配错误，对于心净制成的益伤过大，终尾引导房室传导阻滞.由于那种伤害是不可顺转的，所以必须改换蛙心沉干真验.2. 真验历程中，为什么必须脆持蛙心插管内液里下度的恒定？液里过下大概过矮会爆收何如的效率？问：正在真验历程中，蛙心插管内液里下度爆收变更，心净中断直线会相映爆收变更.心肌支缩幅度战速度受到前背荷战后背荷的效率.插管液里下度所爆收的压力，正在心室舒弛期终期相称于心肌的前背荷，心室启初中断的时间，此液体所爆收的压力又成为心肌中断时的后背荷.故下度的改变，从而引起的前后背荷的改变将改变心肌中断的幅度战频次.当液里过下时.心缩直线幅度将落矮.果为过下的液里，将使心室前背荷超出了最适前背荷，将引导细细肌丝过于疏近，而引导中断的后劲缩小，心肌中断不再减少大概下落.而类似的，过下的后背荷，也使心肌中断的幅度战速度大大下落.而当液里过矮时，心室中断的幅度也会缩小.果为前背荷过小，将引导细细肌丝过于靠近，而引导中断的后劲缩小，本量上，此时由于前背荷的缩小引导心室中断的效力的缩小比前背荷减少而引导的另有明隐.类似的，后背荷相映的缩小也会引导心室中断的减强.所以，正在真验中脆持最适的液里下度.是博得较佳真验截止的前提.3．百般离子身分改变蛙心中断的本理是什么？问：由于心肌细胞死物电活动战中断历程与离子稀切相闭，果此，细胞中液中离子浓度降下大概落矮均会效率到心肌的电死理个性战中断性.（1）钾离子的效率K＋与静息电位的产死有闭.细胞中液K ＋浓度[K＋]0变更对于心肌死理个性的效率较为搀纯.下钾：[K＋]0沉度大概中度删下时，膜内、中K＋浓度好减小，静息电位千万于值减小，与阈电位好异支缩，果此，镇静性删下. [K＋]0隐著降下时，由于静息电位千万于值减小过多（膜内达-55mV安排），Na＋通讲得活，果而镇静性落矮以至消得.其余，还使0期去极化速度战幅度减小，传导性落矮，引导镇静传导减缓，以至传导阻滞.别的，[K＋]0删下还可普及膜对于K＋的通透性，加速K＋中流，动做电位仄台期支缩，果此，不该期支缩.别的由于仄台期支缩，缩小了Ca2＋的内流，加上细胞中K＋与Ca2＋正在膜上有比赛性压制效率，引导心肌中断功能减强；（2）钙离子的效率细胞中Ca2＋正在细胞膜上对于Na＋内流有比赛性压制效率，称为膜屏障效率.[Ca2＋] 0删下时，Na＋内流受压制，细胞0期除极速度与幅度减小，使镇静性及传导性均落矮.[Ca2＋] 0删下使Ca2＋内流删加，果此缓反应细胞0期去极化加快加强，传导性删下，而快反应细胞仄台期支缩，灵验不该期支缩，复极加速.Ca2＋内流删加，使心肌中断本领巩固.[Ca2＋] 0落矮时，所引起的变更与下钙时好异.（3）钠离子的效率细胞中液中钠浓度好梯度的变更普遍对于心肌活动效率不明隐.惟有当[Na＋] 0明隐删下时，膜内中钠的浓度好梯度删大，果此，快反应细胞Na＋内流加快，0期去极速度战幅度均减少，引导传导性战自律性删下.共时，Na＋内流的删加促进细胞内Ca2＋的中运使细胞内Ca2＋浓度落矮，果此，心肌中断本领减强.反之，当[Na＋] 0落矮，使心肌传导性战自律性落矮，心肌中断本领巩固.八、【参照文件】【1】项辉,龙天澄等. 死理教真验指北[M]. 科教出版社, 2008 : 21- 38.【2】墨大年.死理教[M].群众卫死出版社，2008：6-8.。
蛙类斯氏离体心脏灌流
姓名*** 系年级********* 学号***********科目动物生理学实验同组者***、*** 日期***********蛙类斯氏离体心脏灌流【实验目的】1. 学习斯氏离体蛙心灌流法；2. 了解心肌的生理特性；3. 观察Na+、K+、Ca2+离子等对离体心脏活动的影响。
【实验原理】心肌具有自动节律性（autorhythmicity）收缩的特性，可以用人工灌流的方法，研究心脏活动的规律及特点；还可以观察灌流液成分的改变对离体心脏活动的影响。
【实验材料】1.材料：蟾蜍。
2.器具：常用手术器械，解剖盘，蛙板（木质），毁髓针，玻璃分针，手术剪，手术镊，铁钉，蛙心套管，套管夹，双凹夹，滑轮，蛙心夹，支架，双针形露丝刺激电极，滴管，小烧杯，棉线，张力传感器，生理信号采集系统。
3.试剂：任氏液，5％NaCl溶液，1％KCl溶液，2％CaCl2溶液。
【实验步骤】1. 暴露动物心脏取一只蟾蜍，双毁髓后背位置于蛙板上，一手持手术镊提起胸骨后方的皮肤，另一只手持手术剪剪开一个小口，然后将剪刀由开口处伸向皮下，向左、右两侧下颌角方向剪开皮肤。
将皮肤掀向头端，再用手术镊提起胸骨后方的腹肌，在腹肌上剪一口，将金冠剪紧贴体壁向前伸入（勿伤及心脏和血管），并沿皮肤切口方向剪开体壁，剪断左右乌喙骨和锁骨，使创口呈一倒三角形。
一手持眼科镊，提起心包膜，另一手用眼科剪剪开心包膜，暴露心脏。
2. 斯氏蛙心插管仔细识别心脏周围的大血管。
在左主动脉下方穿一线，并打一活结备用。
左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉壁上剪一斜口。
选择大小适宜的蛙心套管，然后将成盛有少量（套管内2~3cm高度）任氏液（内含葡萄糖）的斯氏蛙心套管，由开口处插入动脉圆锥。
当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内（于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管口）。
蛙心灌流报告
蛙心灌流报告生理学实验报告蛙类离体心脏灌流院系：生命科学学院实验人：张优 13941202 邓晓娟 13941201 （本次实验报告由张优执笔）一、实验目的1、学习斯氏离体蛙心灌流法。
2、了解心肌的生理特性。
3、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素,乙酰胆碱对离体心脏活动的影响。
二、实验原理（一）两栖类动物无冠状循环两栖类动物无冠状循环，心肌直接从流经心腔的血流中获取营养。
即心室肌直接从心室腔中获得营养。
故用任氏液置换心室中的血液后，心室插管中的灌流液便成为心室肌的细胞外液。
（二）心肌对细胞外离子浓度和体液因数敏感（三）钾、钙和钠离子对心肌特性的影响 1.血钾浓度过高时（高于7.9mmol/L），心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期。
2.血钙浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。
血钙浓度降低，心肌收缩力减弱。
3.钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。
肾上腺素可使心率加快、传导加快及心肌收缩力增强，乙酰胆碱则与肾上腺素的作用相反。
三、实验材料青蛙、常用手术器械、蜡盘、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、滴管、小烧杯、纱布、棉线、任氏液、蛙心套管、套管夹、0．65％NaCl、5％NaCI、2％CaCl2、1％KCl、1：5 000肾上腺素、1：10 000乙酰肌碱、300U／mL肝素。
四、实验步骤（一）蛙心的解剖 1.毁脑毁脊髓 2.打开胸腔3.剪开心包膜、暴露心脏（二）斯氏蛙心插管法 1.结扎左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎。
左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。
2.插管左主动脉结扎处下方用眼科剪剪一小切口，将盛有任氏液＋少量肝素的蛙心插管1生理学实验报告由此口插入主动脉，至动脉圆锥时约“向后向下向前”试插，当心室收缩时容易经主动脉瓣插入心室腔内。
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姓名*** 系年级********* 学号***********科目动物生理学实验同组者***、*** 日期***********蛙类斯氏离体心脏灌流【实验目的】1. 学习斯氏离体蛙心灌流法；2. 了解心肌的生理特性；3. 观察Na+、K+、Ca2+离子等对离体心脏活动的影响。
【实验原理】心肌具有自动节律性（autorhythmicity）收缩的特性，可以用人工灌流的方法，研究心脏活动的规律及特点；还可以观察灌流液成分的改变对离体心脏活动的影响。
【实验材料】1.材料：蟾蜍。
2.器具：常用手术器械，解剖盘，蛙板（木质），毁髓针，玻璃分针，手术剪，手术镊，铁钉，蛙心套管，套管夹，双凹夹，滑轮，蛙心夹，支架，双针形露丝刺激电极，滴管，小烧杯，棉线，张力传感器，生理信号采集系统。
3.试剂：任氏液，5％NaCl溶液，1％KCl溶液，2％CaCl2溶液。
【实验步骤】1. 暴露动物心脏取一只蟾蜍，双毁髓后背位置于蛙板上，一手持手术镊提起胸骨后方的皮肤，另一只手持手术剪剪开一个小口，然后将剪刀由开口处伸向皮下，向左、右两侧下颌角方向剪开皮肤。
将皮肤掀向头端，再用手术镊提起胸骨后方的腹肌，在腹肌上剪一口，将金冠剪紧贴体壁向前伸入（勿伤及心脏和血管），并沿皮肤切口方向剪开体壁，剪断左右乌喙骨和锁骨，使创口呈一倒三角形。
一手持眼科镊，提起心包膜，另一手用眼科剪剪开心包膜，暴露心脏。
2. 斯氏蛙心插管仔细识别心脏周围的大血管。
在左主动脉下方穿一线，并打一活结备用。
左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉壁上剪一斜口。
选择大小适宜的蛙心套管，然后将成盛有少量（套管内2~3cm高度）任氏液（内含葡萄糖）的斯氏蛙心套管，由开口处插入动脉圆锥。
当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内（于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管口）。
此时可见血液冲入套管，并使液面随心脏搏动而上下移动，表明操作成功（否则需退回并重新插入）。
用滴管吸取套管中的血液，更换新鲜任氏液。
稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双线紧紧扎紧（不得漏夜），再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。
轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体。
（切勿损伤静脉窦）。
用任氏液反复冲洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液。
保持套管内液面高度一致（1.5~2cm），即可进行实验。
图1 斯氏蛙心插管法3. 连接实验装置将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部的肌肉（不可夹得过多，以免因夹破心室而漏液）。
在将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连。
注意：勿使灌流液滴到传感器上。
打开生理信号采集系统，接通张力传感器输入通道。
调节系线的拉力，使心脏的收缩活动在显示屏上出现。
调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。
调整扫描速度，使心搏曲线的幅度与宽度适中。
图2 实验装置示意图4. 实验观察（1）记录正常心搏曲线。
（2）向套管内滴加2-3滴5％NaCl溶液，做好加药记号，观察心搏曲线的频率及振幅变化当曲线出现明显变化时，应立即吸去套管中的灌流液，并做好冲洗标记，迅速用新鲜任氏液清洗，待心搏恢复正常。
（3）同法向套管内加入1-3滴2％CaCl2溶液，观察并记录心搏曲线的变化。
当出现明显变化时，立即更换任氏液，待心搏恢复正常（如果恢复迟缓，可多次冲洗）。
（4）向套管中加入1-2滴1％KCl溶液，记录心搏曲线的变化。
【实验结果及分析】背景知识：心肌细胞动作电位和主要离子活动（以心室肌细胞为例）。
心室肌细胞的动作电位由除极化过程和复极化过程所组成，共分为五个时期：图3 心室肌细胞动作电位和主要离子活动1. 除极化过程（0期）：当心肌细胞接受一个阈上刺激时，膜内电位由静息状态时的-90mV 去极化并反极化到+20mV~+30mV，构成动作电位的上升相，称为0期。
历时仅1~2ms。
其正电位部分称为超射。
形成机制：当心室肌细胞受到刺激产生兴奋时，首先引起Na+离子通道（快Na+通道）的部分开放和少量Na+离子内流，膜局部去极化。
当去极化到阈电位水平（-65mV）时，大大增加膜上Na+离子通道开放的数量，出现再生性Na+离子内流，使膜进一步去极化，最终使膜内外电位发生反转，趋近于Na+离子的平衡电位。
2. 复极化过程：当心室肌细胞去极化达到顶峰后，开始复极化过程。
根据膜电位变化曲线的形状及其形成的离子机制不同，可将其可分为4个时期：（1）快速复极化初期（1期）：膜电位由+30mV迅速下降至0mV左右，历时约10ms。
与0期去极化组成了锋电位。
形成机制：Na+离子通道失活，Na+离子内流停止。
同时K+离子通道被激活后形成K+离子瞬时外流，引起膜电位初期的快速复极化。
（2）平台期（2期）：表现为膜电位变化较小，电位接近于0mV水平，持续100~150ms。
此期为心室肌细胞区别于神经或骨骼细胞动作电位的主要特征。
形成机制：在早期平台期，Ca2+离子的内流和K+离子的外流所负载的跨膜电荷量几乎等，膜电位稳定于1期复极化所达到的零电位水平。
随后，慢钙通道逐渐失活，而K+离子外流逐渐增加，出膜的正电荷量逐渐增加，结果膜内电位逐渐下降，形成晚期平台期。
（3）快速复极化末期（3期）：继平台期之后，细胞膜复极化速度加快，膜内电位由0mV 逐渐下降到-90mV的静息电位水平。
历时100~150ms。
形成机制：外向K+离子流逐渐增强，超过内流的Ca2+离子。
（4）静息期（4期）：膜复极化完毕，膜电位恢复并稳定在-90mV的静息电位水平。
形成机制：由于此期膜内、外各种正离子浓度的相对比例尚未恢复，细胞膜的离子转运机制加强，通过Na+- K+泵的活动和Na+- Ca2+交换作用，将内流的Na+离子和Ca2+离子排出膜外，将外流的K+离子转运入膜内，使细胞内外离子分布恢复到静息状态水平，从而保持心肌细胞正常的兴奋性。
实验结果：1. 正常心搏曲线图4 蟾蜍离体心脏正常心搏曲线2. 5％NaCl溶液对蟾蜍离体心脏活动的影响实验结果：滴加5％NaCl溶液，蟾蜍离体心脏收缩力显著减弱，洗去NaCl溶液，蟾蜍心脏收缩力逐渐恢复正常。
图5 5％NaCl溶液对蟾蜍离体心脏活动的影响结果分析：心肌细胞的收缩对细胞外Ca2+的浓度有很高的依赖性。
在任氏液中滴加NaCl溶液，Na+与Ca2+内流的竞争性抑制导致Ca2+内流减少，心肌的收缩活动也随之减弱。
3. 2％CaCl2溶液对蟾蜍离体心脏活动的影响实验结果：滴加2％CaCl2溶液，蟾蜍离体心脏收缩力显著增强，洗去CaCl2溶液，蟾蜍心脏收缩力逐渐恢复正常。
图6 2％CaCl2溶液对蟾蜍离体心脏活动的影响结果分析：向任氏液中滴加CaCl2溶液，细胞外Ca2+浓度上升，内流增加，肌质网Ca2+的储存量和释放量增加，心肌收缩力增强。
当肌浆中的Ca2+浓度不断升高，Ca2+与肌钙蛋白结合数量不断增加，甚至达到只结合不解离的程度，心肌将会处于持续收缩状态，称为“钙僵”。
4. 1％KCl溶液对蟾蜍离体心脏活动的影响实验结果：滴加1％KCl溶液，蟾蜍离体心脏收缩力显著减弱，洗去NaCl溶液，蟾蜍心脏收缩力逐渐恢复正常。
洗涤过程中动作过于剧烈，对心搏曲线造成了影响图7 1％KCl溶液对蟾蜍离体心脏活动的影响结果分析：向任氏液中滴加KCl溶液，细胞外K+离子浓度升高，而K+与Ca2+有竞争性拮抗作用，K+可抑制细胞膜对Ca2+的转运，使进人细胞的Ca2+减少，心肌的“兴奋--收缩耦联”过程减弱，心肌收缩力降低。
细胞外K+浓度较高时，膜内外K+浓度梯度减小，静息电位的绝对值减小，Na+通道失活，心肌的兴奋性丧失，心肌不能兴奋和收缩，停止于舒张状态，此时，仅由Ca2+来构成动作电位，钙通道激活慢，去极化上升幅度小而缓慢，因此兴奋传导性降低。
【思考题选作】1. 本实验说明心肌的哪些生理特性？答：（1）自动节律性；（2）兴奋性；（3）传导性；（4）收缩性。
2. 用本实验说明内环境相对恒定的重要意义。
答：多细胞动物机体内，全部细胞的新陈代谢，都必须通过内环境才能进行。
内环境中各种理化因素维持在相对恒定的状态，即使外坏境有强烈的变化，机体的内环境仍可以保持相对恒定。
当内环境的相对恒定被破坏时，机体的生命过程就会遭到损坏，包括心脏的节律性跳动，等。
3. 试分析任氏液中适量的钠、钙与钾离子对心肌的作用。
答：略。
4. 为何强调实验中保持灌流液面的恒定？灌流量对心肌活动有什么影响？答：保持灌流液面恒定，是为了保证对心脏的压力保持恒定，否则，不能说明心搏曲线的变化是由药物引起还是由压力的变化引起。
灌流量大，对心肌的压力大，心脏所承受的负荷大，心肌活动能力会略微减弱；反之，心肌活动能力会略有加强。
【注意事项】1. 暴露心脏的过程中要小心，不要将血管剪断；2. 用棉线结扎血管时要扎紧，避免漏液；3. 插管时，不要插得过深，以免心室壁堵住套管口；4. 将左、右主动脉连同插入的套管用双线紧紧扎紧，避免漏夜，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，避免脱落；5. 于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体时，切勿损伤静脉窦。
6. 用蛙心夹夹心尖部肌肉时要小心，不要损坏心肌组织；7. 向套管内加药和更换任氏液时，动作不要太剧烈，以免对心搏曲线造成大的影响；8. 在实验过程中，要不断用任氏液湿润心肌组织，避免干燥。
参考文献[1]解景田，刘燕强，崔庚寅.蛙类斯氏或八木氏离体心脏灌流.生理学实验，79-83。