球菌和肠道杆菌病原学检测

生化反应鉴定
3. 甘露醇发酵试验 【原理】致病性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶类，能发 酵甘露醇产酸，培养基由紫色变为黄色。 【操作】细菌分别接种甘露醇单糖发酵管，经37℃孵育 18-24h观察结果。 【结果】金黄色葡萄球菌为阳性，表皮葡萄球菌为阴性
血浆凝固酶试验和甘露醇发酵试验可区分致病性 和非致病性葡萄球菌
生化反应
金黄色 葡萄球菌
β溶血环 金黄
表面 葡萄球菌
无溶血环 白色
乙型 链球菌
β 溶血环 灰白色
甲型 链球菌
α溶血环 草绿
肺炎 链球菌
α溶血环 草绿
G+ ,球型 G+ ,球形 G+，球型 G+ ，球型 G+ ,球型 葡萄状排列 葡萄状排列 长链状排列 短链状排列 成双,矛头相对
触酶 血浆凝固酶
甘露醇发酵试验 菊糖发酵试验
接种细菌 37℃，24 h + 胆盐（0.1 ml） 37℃，0.5 h
【结果】液体由混浊变透明为阳性，肺炎链球菌为阳性， 甲型链球菌为阴性。 【意义】
胆汁溶菌试验可用以区分甲型链球菌和 肺炎链球菌
生化反应鉴定
6.抗链球菌溶血素“O”（ASO）试验（快速胶乳法）
示教
【原理】本试剂胶乳液是由溶血素O和羟化聚苯乙烯胶乳共价交联而成 的抗原胶乳。 ASO 胶乳的灵敏度调整到 200IU/ml ，超过上述滴度即 出现肉眼可见凝集颗粒，产生清晰凝集，为阳性；无凝集，为阴性。 【操作】试剂预温至室温，并轻轻摇匀。 在反应板各格子上分别滴加1滴(约50μl)阴性、阳性和待测血清，再 各滴加ASO胶乳试剂1滴，轻轻摇匀，2min后观察结果。 【结果】有清晰凝聚者为阳性（ASO≥200 IU/ml） 不出现凝聚者为阴性（ASO＜200 IU/ml）
【意义】1.抗体滴度 ＞200IU/ml以上，新近有可能反复感染过乙型溶 血型链球菌 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ.作为风湿活动期、风湿性关节炎、风心病、急性肾小 球肾炎、的辅助诊断。
生化反应鉴定
【注意事项】

无菌操作
挑取细菌培养平板上的单个菌落进行生化鉴定。
致病性球菌的主要生物学性状
鉴别要点
菌落特征 溶血 颜色 革兰染色
【意义】
血浆凝固酶试验可区分致 病性和非致病性葡萄球菌
生化反应鉴定
2.触酶试验 【原理】 H2O2
过氧化氢酶
示教
H2O + O2
【操作】取洁净玻片一张，取生理盐水各1滴分别滴于 载玻片上，以接种环分别取待检细菌培养物少许， 滴加3％ H202一滴（立刻），在H202中磨匀，立即 观察结果。 【结果】阳性为半分种内产生大量气泡。葡萄球菌为 阳性，链球菌为阴性。 【意义】 触酶试验可区分葡萄球菌和链球菌。
淋病奈瑟菌
奈瑟菌染色特点：肾形或豆形，成双排列、 凹面相对的革兰阴性球菌
葡萄球菌在血平板上菌落
•菌落可出现金黄色、白
色
或柠檬色等色素 •血平板上，金黄色葡萄球菌 可形成-溶血环
表皮葡萄球菌呈白色菌落
链球菌属（Streptococcus）
链球菌在血平板有 三种溶血现象 （1）甲型溶血 （2）乙型溶血 （3）丙型溶血
生化反应鉴定
4.菊糖发酵试验 【原理】大多数肺炎链球菌可以分解菊糖，菊糖发酵产酸， 指示剂呈酸性反应，发酵管由黄色变为紫红色。 【操作】细菌分别接种菊糖发酵管，经37℃孵育18-24h观 察结果。 【结果】用以区分肺炎链球菌和甲型链球菌，肺炎链球菌 为阳性，甲型链球菌为阴性。
生化反应鉴定
5.胆汁溶菌试验 【原理】肺炎链球菌可产生一种自溶酶，胆盐能活化自溶酶， 加速自溶过程，引起细胞自溶。 【操作】
实验四 （二）肠道杆菌的病原学的检测
乳糖发酵试验 原理：肠道杆菌能分解乳糖产酸， 指示剂溴甲酚紫(pH5．2为黄 色，pH6．8为紫色)，当发酵 产酸时，使培养基由紫色变为 黄色 结果：致病菌多为阴性， 非致病菌多为阳性。 用途： 鉴别致病性与非致病性肠道杆菌
问题与讨论
1.如何鉴别致病性葡萄球菌与非致病性葡萄 球菌？ 2.如何鉴别肺炎球菌与甲型链球菌？ 3.什么是抗“O”试验，说明其临床意义？ 4.怎样鉴别致病性与非致病性肠道杆菌？
本次实验课结束
交作业，值日同学留下 下周再见！
2
1
3
链球菌菌落形态
血平板：灰白色圆形凸起
的细小菌落，不同菌株溶 血不一。
化脓性链球菌
草绿色链球菌
肺炎链球菌菌落
生化反应鉴定
1. 血浆凝固酶试验
示教
【原理】致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，使血浆中纤维蛋 白原变为不溶性纤维蛋白，附于细胞表面生成凝块。 【操作】取生理盐水各1滴分别滴于载玻片上，用接种环挑取 细菌，混合后观察有无自凝现象。取1滴兔血浆混匀分别滴 于载玻片上,观察有凝固现象（3-5s）。 【结果】金黄色葡萄球菌为阳性，表皮葡萄球菌为阴性
实验四 （一）球菌病原学的检测
实验内容
1 2 3 4 球菌形态观察 血浆凝固酶试验 抗“O”试验 触酶试验试验
实验目的
1 掌握葡萄球菌，链球菌，淋球菌形态特征 2 熟悉血浆凝固酶实验的原理，方法及临床意义。 3 掌握抗“O”实验的原理，意义及方法。
球菌的检验程序
标本
直接检查
（涂片、染色、镜检）
分离培养
第 一 次
可疑菌落 形态、色素、溶血 菌落特点 血浆凝固酶、触酶、菊糖发酵、 甘露醇发酵、胆汁溶菌、 小白鼠毒力试验 鉴定试验
第 二 次
生化结果观察
第三次
荚膜染色
结果讨论与分析
常见致病性球菌染色特点
葡萄球菌 革兰阳性 不规则成堆排列
链球菌
双球菌
革兰阳性
链状排列
革兰阳性
矛头状成双排列
革兰阴性球菌
脑膜炎奈瑟球菌
+ + +
— —
+
— —
— — — — —
—
—
— — — —
— —
胆汁溶菌试验
— —
+ +
实验四 （二）肠道杆菌的病原学的检测
常见肠道杆菌在伊红美兰琼脂平板（EMB）及SS培 养基上的菌落特点


1. 大肠杆菌菌落：较大、圆形、光滑、不透明， 在EMB上形成深紫兰色菌落（因分解乳糖产酸， 与伊红美兰结合之故），在SS琼脂平板上形成 红色菌落(因分解乳糖产酸，中性红指示剂变 红)。 2. 伤寒杆菌和痢疾杆菌菌落：中等大、圆形、 光滑、半透明、在EMB上无色（因不分解乳糖）， 在SS上无色或淡黄色。